MANUAL DE PRACTICAS DE FISIOLOGIA VEGETAL

Facultad de Ciencias Agropecuarias - UNER

Autores: Lallana, Vctor H.; Lallana Mara del C. (2001)

GERMINACION Y LATENCIA

Contenido:

A. Materiales de reserva en las semillas y su movilizacin A.1. Cambios en la actividad de la - amilasa durante la Germinacin. A.2. Control hormonal de la sntesis de - amilasa B. Factores ambientales que afectan la germinacin B.1. Efecto de la luz sobre la germinacin.

C. Latencia C.1. Interrupcin de la latencia en yemas C.2. Inhibicin de la brotacin

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GERMINACION La germinacin es la aparicin y desarrollo a partir del embrin, de aquellas estructuras esenciales que, para un cierto tipo de semilla, indican la capacidad de producir plantas normales en condiciones ambientales favorables. El proceso de germinacin se puede dividir en las siguientes etapas: 1) imbibicin 2) hidratacin de enzimas hidrolticas y sintticas 3) divisin y alargamiento celulares 4) presin de la radcula (o de la plmula) sobre el tegumento y emergencia a travs de ste. El inicio de cada fase no tiene necesariamente este orden, ni inhibe la ocurrencia de la anterior, sino que pueden ser simultneas. Necesariamente la semilla seca debe absorber agua para poder germinar. El ritmo de absorcin depende de la temperatura y la permeabilidad de los tegumentos, tamao de la semilla y composicin qumica de las reservas. En general cesa cuando el contenido de humedad es del 40 al 60 % de su peso fresco inicial. El metabolismo de una semilla germinante es catablico y anablico, a la vez. Los productos de la hidrlisis de las sustancias almacenadas son utilizados como fuente de energa y como elementos constitutivos de enzimas y protenas estructurales, necesarios para el desarrollo del embrin. A. MATERIALES DE RESERVA EN LAS SEMILLAS Y SU MOVILIZACION Introduccin: Durante la formacin de las semillas, se acumulan cantidades relativamente grandes de materiales de reserva que son los que permitirn el crecimiento y desarrollo de la plntula, hasta que sta pueda establecerse como una unidad fotosintetizadora y comenzar su vida auttrofa independiente. Estas sustancias de reserva pueden ser almacenadas en el embrin (en los cotiledones), en tejidos extraembrionarios (endosperma ms raramente perisperma) o en ambos, e incluye lpidos, carbohidratos, protenas., fosfato orgnico y varios componentes inorgnicos. Durante la germinacin, estas sustancias son hidrolizadas y transportadas al eje embrinico en crecimiento, lo que lleva aparejado un cambio en las estructuras que las contienen. El carbohidrato de reserva mas importante es el almidn, que se encuentra en forma de granos en el citoplasma. Los lpidos, constituidos principalmente por grasas neutras estn acumulados en los esferosomas, organoides provistos de una membrana. Las protenas de reserva, denominadas de este modo por creerse que no desempean funcin metablica o estructural alguna, estn acumuladas en cuerpos especficos, los denominados cuerpos proteicos, que se encuentran distribuidos al azar en el citoplasma. En ocasiones es posible distinguir dos componentes, el cristaloide (cristal de protena) y el globoide (lugar de deposicin de fitinas, sales de potasio, magnesio y calcio del cido ftico).

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Durante la germinacin, los cuerpos proteicos sufren un proceso de vacuolizacin, aumentando de tamao y coalesciendo, al mismo tiempo que desaparecen las protenas, de reserva merced a la accin de las enzimas proteolticas que se localizan en su interior. El grano de cebada es un fruto indehiscente (cariopse) envuelto por las glumas que en la mayor parte de las variedades, estn unidas firmemente al fruto. En la base del mismo se encuentra el embrin (2~5 % del peso seco del grano), en el que se pueden distinguir dos partes funcionales diferentes, el eje embrionario y el escutelo (Figura 1).

Figura1. Diagrama idealizado de un grano de cebada (Adaptado de Briggs, 1973) Referencias: Ee, epitelio escutelar; Es, escutelo; Co, coleoptilo; R, radcula; Rm regin micropilar; Col. Coleorriza; E, endospermo amilceo; A, capa de aleurona; T, testa; P, pericarpio; L, lema; P, plea; C, casacarilla.

La superficie interna de este rgano est cubierta por un epitelio columnar, en contacto con el endospermo, tejido parenquimtico con un elevado contenido en almidn constituido por clulas muertas a excepcin de las filas ms externas (una a tres) que constituyen la denominada "capa de aleurona" y que son capaces de sintetizar protenas aunque no presentan en ningn caso divisin ni alargamiento celular (Figura 1). El endospermo amilceo sirve como depsito de reservas (almidn, protenas, fitato, etc.) que permiten el desarrollo del eje embrionario durante la germinacin. La hidrlisis de las reservas est controlada por la actividad del escutelo y la capa de aleurona, y los productos de hidrlisis son absorbidos por el escutelo y transportados al eje embrinico. Movilizacin del almidn durante la germinacin: El almidn constituye el principal azcar de reserva del grano de cebada, comprendido entre el 58 y el 65% del peso seco del mismo y localizndose casi en su totalidad en el endospermo. Durante la germinacin es degradado por una serie de enzimas, que en su conjunto reciben el nombre de "diastasa", y que tiene una accin cooperativa en la hidrlisis del
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almidn. Contribuyen a la actividad enzimatica total las enzimas -amilasa, -amilasa, as como una -glucosidasa capaz de hidrolizar maltosa, isomaltosa y almidn soluble, y al menos dos enzimas desramificadoras. El contenido de la -amilasa en el grano sin germinar es muy bajo, aumentando gradualmente durante la germinacin para alcanzar un valor mximo dependiendo de las condiciones de germinacin, alrededor del sexto da. El aumento en la actividad es debido a una sntesis "de novo" de molculas de enzima, que tiene lugar en el escutelo y fundamentalmente, en la capa de aleurona, de donde son secretadas al endosperma, lugar en el que ejercen la accin. Tanto la sntesis de enzima como su secrecin por la capa de aleurona est controlada por el embrin mediante la secrecin de giberelinas ( AG3 y AG1 fundamentalmente) desde el escutelo , hormonas que estimulan la sntesis de protenas en la capa de aleurona, entre ellas las molculas de -amilasa, proteasa y ribonucleasa. La accin del embrin en la sntesis de enzima puede ser sustituda mediante la adicin de giberelinas exgenas que en el caso del cido giberlico (AG3), provoca las sntesis de -amilasa proporcional al logaritmo de la cantidad de hormona aplicada, hasta menos de 50 mg. de AG3 por grano. Este proceso es inhibido tanto por la accin de inhibidores de la sntesis proteica (puromicina, cicloheximida y otros) como por inhibidores de la sntesis de ARN (actinomicina D). Las giberelinas secretadas a la capa de aleurona se sintetizan en el escutelo a partir de precursores pre-existentes, proceso que es reprimido por la acumulacin de azcares libres. Como el nivel de stos en el escutelo es regulado "in vivo" por la acumulacin de azcares en el eje embrionario, proceso que depende de su crecimiento, existe por lo tanto un control de la movilizacin de almidn, por parte del consumo de azcares del eje embrionario. Este consumo determina el nivel de azcares libres en escutelo, que a su vez, controla la sntesis de giberelinas, hormona que determina la cantidad de -amilasa sintetizada y secretada por la capa de aleurona y, por tanto, la velocidad de hidrlisis del almidn. Estas relaciones se presentan en forma diagramatica en la Figura 2.

Figura 2. Diagrama simplificado de la produccin de -amilasa en el embrin de cebada. (Tomado de Monerri y Guardiola, 1992).

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Dos son los objetivos que se persiguen con este prctico, determinar la variacin que se produce en la actividad de la enzima -amilasa durante la germinacin de la cebada (parte A) y establecer la naturaleza del control ejercido por el embrin (parte B).

A.1. Cambios en la actividad de la enzima - amilasa durante la germinacin Tcnica operatoria La estimacin de la actividad enzimtica se efecta midiendo la desaparicin del almidn en el medio de la incubacin. La concentracin de almidn se determina basndose en su propiedad de formar un color azul con el iodo, siendo la absorbancia proporcional a la concentracin de almidn entre unos valores de aquella entre 0,3 y 1,5 al menos. Se requieren semillas de cebada puesta a germinar durante 12 horas, 2, 3, 4, y 5 das. Preparar una solucin de almidn soluble: pesar 140 mg de almidn y 29 mg de cloruro clcico. Disolver en 100 ml. de agua, hervir durante 1 minuto y dejar enfriar. Preparar inmediatamente antes de usar. Preparar una solucin de iodo-ioduro: disolver 0,6 g de iodo resublimado y 6 g de ioduro potsico en 100 ml de agua destilada. Tomar cinco semillas de cada grupo, de acuerdo con su edad. Separar el coleoptilo y el eje embrionario y conservar solamente el endospermo con sus cubiertas. Triturar cuidadosamente en mortero con pequea cantidad de arena y una solucin tampn acetato 50 mM (pH 4,8). Filtrar a travs de muselina o gasa. Aforar a 25 ml. con la solucin tampn. Colocar en tubos de centrifuga parte del extracto crudo obtenido (equilibrar los tubos) y centrifugar a la mxima velocidad durante 5 minutos. Decantar el sobrenadante y conservarlo en tubos de ensayo. - Pipetear en un tubo de ensayo 1ml de tampn. - Aadir 1 ml de la solucin de almidn. Agitar para mezclar. - Aadir 1 ml de la solucin de extracto enzimtico convenientemente diluda. Agitar y comenzar a contar el tiempo. - Al cabo de 10 minutos medidos exactamente, aadir 1 ml de la solucin de iodoioduro, que detiene la reaccin. Agitar. - Aadir 10 ml de agua destilada y esperar 10 minutos, al menos, antes de leer la absorcin en el espectrofotmetro (ajustado a 620 nm, o fotocolorimetro con filtro azul). - Preparar simultneamente un ensayo en blanco en que la solucin de iodo se aade antes que la enzima, por lo que no se inicia la reaccin. Calcular la actividad enzimtica como descenso en absorbancia por semilla y por minuto ( A) del modo siguiente. Sean N semillas trituradas aforadas a un volumen V. Sea A la absorbancia del blanco y B la de la muestra incubada con la enzima ( B es siempre inferior a A). ( A - B ) x V (ml.) A = ----------------------------N x 10
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Determinar la actividad enzimtica de cada extracto del modo descripto. Representar los resultados en una grfica en que se coloca como ordenadas el descenso en la absorbancia por semilla y por minuto y en abscisas la edad de la planta.

A.2. Control hormonal de la sntesis de -amilasa Tcnica operatoria Tomar semillas de cebada y con un bistur cortar el extremo de la semilla (alrededor de 1/3 de la misma) que tiene el embrin. Preparar al menos 60 semillas. Colocar las semillas as disectadas en una bolsa de gasa y mantener durante 20 minutos en solucin de lejia comercial al 2 %. Este tratamiento basta para mantener al mnimo la contaminacin fungal y bacteriana. Tomar 6 cpsulas de Petri, previamente esterilizadas, con una hoja de papel de filtro en el fondo. En una de ellas colocar 3 ml de agua conteniendo 90 g de estreptomicina y 10 semillas intactas que actuaran como controles. En las cinco cpsulas restantes colocar con la ayuda de unas pinzas, 10 semillas desgerminadas y aadir respectivamente: 3 ml de agua con sulfato de estreptomicina (30 mg/l) 3 ml de la solucin de cido giberlico (0,1 g/ml), conteniendo sulfato de estreptomicina (30 mg/l) 3 ml de la solucin de cido giberlico (0,001 g/ml), conteniendo sulfato de estreptomicina (30 mg/l). 3 ml de la solucin de cido giberlico (0,1 g/ml) + ciclohexmida (10 g/ml), conteniendo sulfato de estreptomicina (30 mg/l). 3 ml de la solucin de cido giberlico (0,1 g/ml) + Actinomicina D (100 g/ml), conteniendo sulfato de estreptomicina (30 mg/l). A los 3 das tomar cinco semillas de cada cpsula Petri y calcular las actividad enzimtica, siguiendo la tcnica operatoria descripta en el apartado A.

Lecturas complementarias - Bewley, J. D. y Blck, M. 1978. Physiology and biochemistry of seeds. Vol. I pp.245-281. Springer-Verlag. Berln. - Black, M. 1972. Control processes in germination and dormancy. Biology Readers N 20. Oxford. - Briggs, D. E. 1973. Hormone and carbohydrate metabolism in germinating cereal grains. En Biosyntesis and its control in plants (B.W. Milborrow, ed.) pp. 219-275. Academic Press. London. - Monerri, C. y J. L. Guardiola. 1992. Manual de prcticas de Fisiologa Vegetal. (p 3-24). Universidad Politcnica de Valencia. Valencia, Espaa. 158 p. - Svori, E.; Montaldi, E. y Caso, O. 1981. Fisiologa Vegetal. Ed. Hemisferio Sur. 681 p.
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B. FACTORES AMBIENTALES QUE AFECTAN LA GERMINACION B.1. EFECTO DE LA LUZ SOBRE LA GERMINACION

Introduccin La germinacin de las semillas depende de factores: intrnsecos y extrnsecos. Entre los primeros tenemos la viabilidad, que es extremadamente variable, dependiendo de las condiciones de almacenamiento y tipo de semilla, y la longevidad. Entre los factores extrnsecos tenemos: agua, CO2, O2, temperatura y luz. Para cada especie y factor existe un mnimo y un mximo, que definen los lmites dentro de los cuales es posible la germinacin; y un ptimo que es el punto o valor donde se observa el mayor porcentaje de germinacin. Estos valores dependen del tiempo de incubacin. Mediante el conocimiento de estas necesidades se han establecido las Normas Internacionales de Germinacin para las especies cultivadas ms comunes (ISTA,1985). Menor es la informacin disponible sobre especies malezas, cuyo conocimiento en muchos casos ha brindado importantes pautas de manejo. El requerimiento de luz para germinar no es general, hay semillas que germinan bien con luz u oscuridad (ej. los cereales), se llaman semillas "no fotoblsticas". En los casos en que la luz regula la respuesta, si la accin es promotora, se llaman "fotoblsticas positivas"; y si la accin es inhibidora son "fotoblsticas negativas". De la luz interesa la intensidad, duracin y composicin, condiciones que son especficas de cada especie. Se sabe que est involucrado el sistema del fitocromo y de alta energa, en la fotorespuesta de las semillas. Existen varias hiptesis acerca de las consecuencias de la estimulacin por la luz, en la germinacin: a) la activacin del metabolismo de los lpidos; b) el control de la respiracin; c) la activacin gnica y la consiguiente sntesis de enzimas; d) la sntesis de giberelinas y e) los cambios en la permeabilidad de las membranas. De todos stos, el de la sntesis de giberelinas es el que mejor se ha estudiado y conocido. La aplicacin de cido giberlico en algunas semillas fotoblsticas suple la necesidad de luz para la germinacin. Distintas experiencias indicaran que la sntesis de giberelinas est involucrada de alguna manera en el fotocontrol de la germinacin, an cuando aquellla no sea el efecto directo del estmulo luminoso. El objetivo del trabajo ser verificar la necesidad de luz para la germinacin de Eryngium paniculatum ("caraguat") y el efecto de la aplicacin de cido giberlico sobre la misma.

Tcnica operatoria Se tomarn siete grupos de 100 semillas de Eryngium paniculatum (en este caso se trata de frutos) y se prepararn los siguientes tratamientos:

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Tratamiento I: Oscuridad: Humedecer el papel absorbente, colocndolo en el fondo de la bandeja, luego sembrar 100 semillas y ubicar cada bandeja dentro de una bolsa de plstico negro. Mantener as por un lapso de 3 horas y luego llevar a estufa de germinacin. Tratamiento II: Imbibicin + luz blanca: Humedecer el papel absorbente, depositndolo en el fondo de la bandeja, sembrar 100 semillas y cubrir con una bolsa de plstico negro. Mantener en ambiente natural, durante 3 horas; luego aplicar durante 15 minutos, luz blanca (sacar el plstico negro y abrir el papel absorbente para permitir una buena exposicin). Luego volver a cubrir la bandeja con el plstico negro y llevar a estufa de germinacin. Tratamiento III: Imbibicin + luz en estufa: Humedecer el papel absorbente, colocarlo en el fondo de la bandeja, sembrar 100 semillas y cubrir con una bolsa de plstico transparente. Mantener por 3 horas en imbibicin y luego llevar a estufa de germinacin con luz. Tratamiento IV: Semillas secas + luz blanca: Colocar en la bandeja el papel absorbente y depositar all 100 semilas. Aplicar 15 minutos de luz blanca y retirar. Luego humedecer el papel absorbente y colocarlo en el fondo de la bandeja, sembrar las 100 semillas tratadas previamente con luz. Mantenerlas durante 3 horas en imbibicin a temperatura ambiente, cubierta con plstico negro. Transcurrido ese tiempo llevar a estufa de germinacin. Tratamiento V: Proceder como en el Tratamiento 1, slo teniendo en cuenta que el papel absorbente se deber humedecer con una solucin de cido giberlico de 5 ppm. Tratamiento VI: Proceder como en el Tratamiento 1, slo teniendo en cuenta que el papel absorbente se deber humedecer con una solucin de cido giberlico de 10 ppm. Tratamiento VII: Proceder como en el Tratamiento 1, slo teniendo en cuenta que el papel absorbente se deber humedecer con una solucin de cido giberlico de 50 ppm. Observaciones: Humedecer las semillas colocadas en la estufa (con agua o solucin de cido giberlico segn corresponda) cada 3 das, evitando la exposicin a la luz de los tratamientos de oscuridad. A los 7 das hacer la primera observacin (energa germinativa) registrando el porcentaje de semillas germinadas y el porcentaje de semillas atacadas por hongos. Luego hacer recuentos cada 7 das y determinar el porcentaje de germinacin definitivo, a los 30 das, con el siguiente detalle: plntulas normales y anormales, semillas frescas y semillas muertas. La medicin de la germinacin comprender, las determinacin del poder germinativo y la velocidad de germinacin. Calcular mediante las siguiente frmulas: el valor pico (VP), la germinacin media diaria (GMD) y el valor de germinacin (VG): VP = % de germinacin das transcurridos GMD = % de germinacin final 30 das

VG = VP x GMD Con los recuentos peridicos de emergencia de radcula se trazar la curva de Czabator, que permitir obtener el valor de germinacin (VG). Los valores a considerar en la curva son: (T) punto donde la velocidad de germinacin comienza a disminuir y (G) porcentaje final de germinacin. Estos dos valores (G) y (T) dividen a la curva en dos partes, una lenta y otra rpida.
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El valor pico (VP) es el porcentaje de germinacin en (T), divididos los das transcurridos para alcanzar ese punto (T). La germinacin media diaria (GMD) es el cociente entre el porcentaje final de germinacin y el nmero de das de duracin del ensayo. El valor de germinacin (VG) se obtendr del producto entre (VP) y (GMD). Realizar los clculos, graficar, sacar conclusiones y elaborar el informe correspondiente

LATENCIA Introduccin En muchas especies, el crecimiento no es continuo, sino que puede interrumpirse durante perodos ms o menos largos, en distintos momentos del desarrollo y del crecimiento. As por ejemplo, las yemas, los tubrculos y semillas pueden presentar una detencin temporal del crecimiento, an bajo aquellas condiciones del medio en las que, pudiera esperarse su continuacin. Dicha supresin del crecimiento en las plantas, rganos o tejidos sanos que disponen de todos los requisitos qumicos y fsicos considerados necesarios para su desarrollo, recibe el nombre de perodo de reposo, letargo, latencia o dormicin. Esta latencia o dormicin puede tener distintas causas, estructurales o fisiolgicas. En semillas por ejemplo, debido a tegumentos impermeables al agua o al oxgeno (Lotus tenuis, Medicago sativa, Trifolium sp., etc), embriones inmaduros, presencia de inhibidores, etc. Existen mtodos para interrumpir o romper esta dormicin en las semillas. La accin del suelo y los microorganismos, las fluctuaciones de temperatura y humedad, el pasaje a travs del tracto digestivo de aves u otros animales, por las propias labranzas, por fenmenos naturales, vientos fuertes, lluvias copiosas. El efecto de una o varias de estas condiciones, "ablandan" las llamadas semillas "duras". Por mtodos artificiales tambin es posible ablandar los tegumentos, por ejemplo con escarificado mecnico, o tratamientos qumicos con cidos fuertes como el sulfrico, agua caliente, etc. La dormicin de las yemas de rboles o tubrculos, en general se debe a un balance hormonal determinado, inducido por condiciones ambientales especficas. La relacin entre giberelinas y citocininas que disminuyen por un lado y el cido abscsico que aumenta por el otro, determinan la entrada en reposo o dormicin. Obviamente el proceso inverso rompe la latencia o dormicin.

C.1. INTERRUPCION DE LA LATENCIA EN YEMAS En muchos casos es de inters promover el desarrollo de los brotes en los tubrculos, bulbos o ramas de rboles, que estn en estado de latencia. Este estado puede interrumpirse por medio de productos qumicos sintticos del tipo de los derivados halogenados, del etanol y compuestos con azufre entre otros. El objetivo del trabajo ser comprobar la interrupcin del estado de latencia en tubrculos de papa.
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Tcnica operatoria Seleccionar 10 tubrculos de papa de tamao similar. Remojar 5 papas en una solucin acuosa al 2% de tiourea durante 1 hora, luego dejar secar al aire. Remojar los otras 5 papas durante 1 hora en agua destilada, dejando secar luego al aire. Una vez secas ponerlas en sendas bandejas, tapar con un gnero oscuro y llevar al invernculo. Hacer la primera observacin a la semana y la segunda a las 3 semanas. Redacte el correspondiente informe.

C.2. INHIBICION DE LA BROTACION En otros casos el desarrollo de brotes en las papas es un problema importante, en algunas regiones, en las que comercialmente interesa un almacenamiento largo. La brotacin produce un consumo de sustancias de reserva, prdida de agua, disminucin de peso y volumen y arrugamiento de la epidermis. Estas desventajas se han evitado en parte, por el almacenamiento a bajas temperaturas (por debajo de 5C). Esto, adems de encarecer notablemente el producto, da lugar a un aumento de los azcares, que hacen perder a las papas sus cualidades culinarias. Uno de los productos usados comercialmente es el alfa-naftalenacetato de metilo (N.A.Me.) cuyos vapores inhiben la brotacin de los tubrculos almacenados. Se ha encontrado que el compuesto sinttico fenil carbamato isopropilo o isopropilo fenil carbamato (IPC) es mucho ms prctico que el N.A.Me.. Este compuesto (IPC) al 3%, con un polvo inerte como vehculo, aplicado en la cantidad de 1.100 g por tonelada de papa, inhibe la brotacin de los tubrculos. El objeto del trabajo ser comprobar la eficacia del IPC para evitar la brotacin de papas. Tcnica operatoria Seleccionar 2 Kg de papa de tamao similar. Con un espolvoreador poner en contacto el producto a base de IPC con 1 Kg de papas. Luego colocarlas en un cajn. El kilogramo restante servir como testigo y se pondr en una caja separada. La dosis a aplicar de producto comercial al 3%, es de 1.100 gr/ ton. de papa o sea 33 g del IPC. Si 1.000 Kg de papa ........... 33 g IPC 1 Kg de papa ................. x = 33 / 1.000 = 0,033 g 33 g de IPC en ............ 1.100 g producto comercial 0,033 g de IPC en ....... x = 0,033 g x 1.100 / 33 = 1,1 g de producto comercial. Realice la primera observacin a la semana y la segunda a las 3 semanas.- Interprete y saque conclusiones y redacte el correspondiente informe.

Lecturas complementarias: - Barcelo Coll y otros. 1987. "Fisiologa Vegetal". Cap. XVII. 823. pp. 344-361. Ed. Pirmide. pp

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- Elizalde, J.H. 1993. (Germinacin 2p.). En: Gua de Trabajos Prcticos Fisiologa Vegetal. Fac.Cs. Agropecuarias - UNER. - Flores, A. R.I. 1991. Evaluacin de la germinacin de Eryngium paniculatum Cav. et Domb. ("caraguat") bajo diferentes condiciones de temperaturas. XII Reunin Argentina sobre la maleza y su control. Resumen 1-15. - Gua de Trabajos Prcticos de Fisiologa Vegetal. Fac.Ciencias Agrarias Rosario. UNR. 40 p. - Hartmann, H.T. y D.E. Kester 1967. Propagacin de las plantas. CECSA.Mxico. - International Seed Testing Association. 1985. International Rules for Seed Testing. Seed Sci.& Technol., 13 :299-355. - Lallana, V.H. y Maidana, A. 1992. Evaluacin de las condiciones de germinacin de Eryngium paniculatum Cav. et Domb. ("caraguat"). XIX Reunin Argentina de Fisiologa Vegetal. Huerta Grande, Crdoba. Resumen ampliado. p. 155-156. - Maidana, A. y Lallana, V.H. 1992. Longevidad de semillas de Eryngium paniculatum Cav. et Domb. ("caraguat"). XIX Reunin Argentina de Fisiologa Vegetal. Huerta Grande, Crdoba. Resumen ampliado. p. 153-154. - Montaldi, E. 1995. Principios de Fisiologa Vegetal. Ediciones Sur. 298 p. - Svori, E; Montaldi, E y Caso, O. 1981. Fisiologa Vegetal. Ed. Hemisferio Sur. 681 p. - Villiers, Trevor. 1979. Reposo y supervivencia de las plantas. Ed. Omega. Bercelona. 78 pg.

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