JUAN ANBAL CUBAS LEN

Facultad de Medicina Humana Hiplito Unanue Escuela de Medicina Universidad Nacional Federico Villa Real

Ao de la Integracin Nacional y el Reconocimiento de Nuestra Diversidad

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

Facultad de Medicina Hipolito Unanue Escuela de Medicina

CLULAS MADRE
Trabajo presentado por

JUAN ANBAL CUBAS LEN

Como asignacin para el curso de

Gentica Humana
bajo la direccin de la Dra. Ismena Gamboa

Lima Per

Julio de 2012

CONTENIDO
PRESENTACIN INTRODUCCIN v vii

Captulo 0.

Introduccin

1. Definicin .......................................................................................................................................... 2 2. Caractersticas Biolgicas ........................................................................................................... 3 3. Propiedades ...................................................................................................................................... 4

Captulo 1.

Mtodos de obtencin de clulas madre

1. Embriones crioconservados: ..................................................................................................... 5 2. Blastmeros individuales............................................................................................................ 5 3. Activacin de ovocitos por transferencia nuclear somtica .......................................... 5 4. Partenognesis ................................................................................................................................ 6

Captulo 2.

Tipos de clulas madre

1. De acuerdo al tejido que originan ............................................................................................ 7 2. De acuerdo al tejido de donde se pueden obtener ............................................................ 9

iii

Captulo 3.

Usos
Captulo 4.

17

Aplicaciones en medicina humana

19

1. Clulas Madre en la reparacin de Tejido Miocrdico posteriormente a un infarto. ............................................................................................................... 21 2. Ejemplos de Aplicacin de Clulas Madre .......................................................................... 23 3. Investigaciones Realizadas ....................................................................................................... 24

Captulo 5.

ltimos avances

29

1. Clulas madre derivados del Amnios: en busca de las aplicaciones clnicas ...................................................................................................................................... 29 2. Las clulas madre mesenquimales y el tratamiento del lupus eritematoso sistmico: ............................................................................................................... 29 3. Terapia celular con troncales mesenquimales para la atenuacin de la formacin de cicatrices durante la cicatrizacin de la herida ................................................................................................................................................ 30 4. Generacin de clulas pluripotentes inducidas en enfermedades especficas de pacientes con cariotipos diferentes del sndrome de Down ............................................................................................................................. 30

REFERENCIAS

33

iv

PRESENTACIN
De qu muri la ovejita Dolly? Fue feliz? Bueno, esto nunca lo sabremos Por qu y para qu elegir una clula de ubre para crear una oveja? Qu son las clulas madre de las que todo el mundo habla ltimamente sin demasiada precisin que digamos? Por qu tanta polmica? Por qu los gobiernos europeos estn siendo tan reticentes a dar luz verde a la investigacin con clulas embrionarias humanas, aunque sean de sobrantes inviables para reproduccin? Ya est bien de tantas preguntas! El presente informe no pretende dar las respuestas, sino un trabajo ms que ayudara a cada uno a optar un criterio y opinin sobre la manipulacin de clulas madre. Entonces sigamos con las preguntas: Qu son las clulas madre? Para qu sirven? Por qu tanta polmica sobre su uso? El estudio de las clulas madre es la consecuencia del conocimiento sobre cmo un organismo se desarrolla desde el huevo recin fecundado hasta el individuo adulto. Nos encontramos en una de las reas ms fascinantes de la biologa actual que, como toda buena investigacin, a cada respuesta hallada le surgen nuevos retos y misterios por develar. Pocos debates estn despertando tantas pasiones y polmicas entre la comunidad cientfica, diferentes grupos sociales y gobiernos como el uso de clulas embrionarias.

Juan Anbal Cubas Len Lima, 2012

INTRODUCCIN
Desde el siglo XIX, es sabido que todo organismo viviente se desarrolla a partir de otros organismos vivientes y todas las clulas, que son los elementos estructurales de tales organismos, proceden de otras clulas, clulas preexistentes. Estos conceptos son principios fundamentales de la teora celular, los cuales (en coherencia con la teora mendeliana de la herencia y la teora de la evolucin de las especies de Darwin) son eje fundamental del desarrollo de la medicina moderna. El cuerpo humano est formado por un nmero elevadsimo de clulas que puede llegar a un nmero de 14 cifras, es decir unos 100 billones de clulas. Todas estas clulas se desarrollan a partir de las clulas madre totipotenciales, pluripotenciales y multipotenciales que proceden, todas ellas, del vulo fecundado y que forman el inicio de la gestacin del embrin.

vii

Captulo 0.

Introduccin
Durante las ltimas dos dcadas se han producido grandes descubrimientos y avances notables en el conocimiento de la biologa celular y molecular de las clulas madre (CM), esto ha conllevado al desarrollo de potenciales usos teraputicos y el desarrollo de la ingeniera de tejidos, sin mencionar los invaluables datos biolgicos obtenidos. Ya desde 1916 Danchakoff describe la presencia de una clula como precursora de otras en la mdula sea, lo que fue propuesto nuevamente aos ms tarde por Sabin y Maximow (1924). A principios de los sesentas, un elegante experimento de Till and McCulloch (1961) demostr que un tipo celular de la mdula sea, era capaz de ser inducida a diferenciarse en todos los tipos celulares de estirpe hematolgica; es as que por primera vez se identifica a las CM hematopoyticas. Ms tarde, en 1981, los cientficos descubrieron la manera de derivar clulas madre embrionarias de embriones tempranos de ratn. El estudio detallado de la biologa de las clulas madre de ratones condujo al descubrimiento por parte de Thomson y su equipo, en 1998, de un mtodo para obtener clulas madre de embriones (blastocistos) humanos y hacer crecer las clulas en el laboratorio. Estas clulas se llaman clulas madre embrionarias humanas. Los embriones utilizados en estos estudios fueron creados con fines reproductivos a travs de los procedimientos de fertilizacin in vitro. Cuando ya no eran necesarios para tal fin, fueron donados para la investigacin con el consentimiento informado del donante. En 2006, los investigadores hicieron otro gran avance al identificar las condiciones que permitiran a algunas clulas adultas especializadas para "reprogramar" genticamente para asumir una de las clulas madre-como estado. Este nuevo tipo de clulas madre, llamadas clulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs). Las clulas madre son tpicamente definidas como clulas indiferenciadas que tienen la habilidad de perpetuarse a travs de la autorrenovacin con el potencial de generar clulas maduras (especializadas) diferencindose hacia tejidos especficos. Este tipo de clulas pueden hallarse desde el embrin hasta en tejidos adultos. Gracias a los adelantos en mtodos de fenotipificacin, ha sido posible caracterizarlas fenotpicamente, de este modo se han podido aislarlas las clu1

las madre de complejas poblaciones celulares heterogneas. En la actualidad est muy difundido el uso clnico de clulas madre adultas y actualmente se est apuntando al empleo de clulas madre embrionarias, debido a que sus caractersticas biolgicas la hacen un mejor candidato para la terapia celular. A pesar del enorme potencial del uso teraputico de las clulas madre embrionarias, hay cuestiones ticas por resolver, pues debe plantearse la interrogante de que si vale la pena sacrificar embriones para producir clulas madre para reparar rganos y tejidos defectuosos en adultos, con la finalidad de poder curar enfermedades como la esclerosis mltiple, el Alzheimer o el cncer. Nos enfrentamos al dilema de sacrificar una vida para salvar otra, pero cundo empieza en s la vida de un ser humano?, es que acaso podra considerarse a un cigoto como un ser humano, o slo debemos considerarlo como un potencial ser humano, carente de conciencia, sentimientos o alma. Esta discusin permanecer latente por muchos aos.

1.

Definicin

Las clulas madre (CM) son clsicamente definidas por su capacidad para generar clulas diferenciadas, por una parte de su capacidad de autorrenovacin, por otro lado, con el fin de preservar la integridad y la funcin del tejido al que pertenecen. El concepto de clulas madre, implica el concepto de divisiones asimtricas cuyos mecanismos estn empezando a ser dilucidados. Despus de una divisin asimtrica, las clulas madre deben dar lugar a una clula idntica a s misma y para generar al mismo tiempo una clula cuyo destino es la diferenciacin. Los factores que regulan este fenmeno complejo se han identificado en algunos sistemas celulares bajo condiciones experimentales.

Figura 1: Divisin celular y diferenciacin de clulas madre.

2.

Caractersticas Biolgicas
Capacidad de autorrenovacin

Las clulas madre se caracterizan por:

Es la capacidad que tienen las CM para replicarse sin alterar sus propiedades biolgicas ni su programacin gentica heredada de una clula progenitora. Se ha reportado que la autorenovacin es dependiente de citoquinas especficas; un tpico ejemplo es la autorrenovacin de las clulas madre de ratn, que necesitan al factor inhibidor de leucemia (Lif), para mantener su estado indiferenciado, pues en ausencia de esta citoquina, las CM comienzan a diferenciarse la contraparte humana de esta citoquina es la activina y el factor de crecimiento de fibroblastos. La capacidad de auto renovacin de las CM humanas est regulada por una serie de vas moleculares en las que se destacan: WNT, Sonic Hedgehog (SHH) , Notch, PTEN, BMI1.

Replicacin ilimitada / Inmortalidad

Las clulas madre persisten a lo largo de la vida de un individuo, las CM tienen la capacidad de replicarse ilimitadamente, gracias a su elevada tasa de expresin de los genes TERT y TERC, que codifican la enzima telomerasa. La actividad de la enzima telomerasa previene el acortamiento de los telomeros, lo que constituye un punto crtico para el envejecimiento celular. Esta caracterstica biolgica promueve la acumulacin de mutaciones durante toda la existencia de las CM que podran causar daos en genes especficos y provocar incremento en la tasa de proliferacin celular conllevando a neoplasias.

Expresin de marcadores primitivos

Una CM tiene un perfil de expresin de genes diferentes a las clulas adultas; conforme las CM van diferencindose, la expresin de estos genes disminuye, y por el contrario, empiezan a expresarse genes de linajes celulares especficos; por lo tanto es posible identificar marcadores que se expresan solo en CM, la identificacin de estos marcadores ha sido usado ampliamente para identificar clulas madre a partir de poblaciones celulares mixtas. Un marcador ampliamente conocido es OCT4 que se expresa citoplasmticamente en todas las CM y cuya expresin se pierde a medida que las clulas madre se diferencian. Un marcador de la superficie celular es CD34 que se expresa en CM hematopoyticas y CD133 en CM neurales (Singh y col 2003). Otros marcadores identificados mediante perfiles genmicos son LIN28, NANOG, DNMT3B, TGIF, TDGF1.
3

 Plasticidad

Es una de las caractersticas biolgicas ms importantes de las clulas madre, por su implicancia en usos teraputicos. La plasticidad se define como la propiedad de las CM adul tas para diferenciarse en tejidos completamente distintos (de diferentes linajes) al que se originaron estas clulas. Las CM reprograman sus caractersticas biolgicas, y adoptan las caractersticas de las clulas del tejido hospedero y la expresin de sus marcadores especficos. Un ejemplo de plasticidad, son las clulas madre hematopoyticas, que se diferencian a tipos maduros de clulas sanguneas, adems estas mismas clulas son capaces de diferenciarse en clulas de tejido neural, el cual es normalmente derivado de clulas del ectodermo embrinico; del mismo modo las clulas madre neurales pueden diferenciarse hacia clulas hematopoyticas gracias a su plasticidad.

3.

Propiedades
Su capacidad para proliferar y dar lugar a los tipos celulares diferenciados de un tejido in vivo. Su capacidad de autorrenovacin con formacin de otras clulas progenitoras

Cabe resaltar que las clulas madre estn definidas por dos propiedades:

Captulo 1.

Mtodos de obtencin de clulas madre

Existen diferentes tcnicas para la obtencin directa de clulas madre embrionarias, y tcnicas basadas en la reprogramacin celular:

1.

Embriones crioconservados:

La criopreservacin o crioconservacin es un mtodo que utiliza nitrgeno lquido (-196 C) para detener todas las funciones celulares y as poderlas conservar durante aos. Estos embriones son procedentes de los tratamientos de reproduccin humana asistida, que cuando se fecundan ms de los necesarios pueden ser donados por los pacientes que se someten a este tratamiento. Estos embriones criopreservados en fase de blastocisto pueden conservarse durante cinco aos, segn lo reglamenta el R.D. 413/1996.

2.

Blastmeros individuales

Con esta tcnica, probada primero en ratones y despus en humanos, se consigue no destruir el embrin. Se utilizaron vulos fecundados de ratn que se dejaron crecer hasta que tuviesen de 8 a 10 clulas. Una de estas clulas se extrae y se cultiva. Con esta tcnica se ha logrado obtener dos lneas celulares estables que mostraban un cariotipo normal y presentaban marcadores caractersticos de pluripotencialidad. El embrin del que se obtiene esta clula es completamente viable por lo que se puede implantar en un tero y seguir un desarrollo normal.

3.

Activacin de ovocitos por transferencia nuclear somtica

Consiste en extraer un ncleo de un vulo no fertilizado y sustituirlos por el ncleo de una clula somtica adulta. Al encontrarse en un ambiente propicio, el citoplasma del vulo, este ncleo es capaz de reprogramarse. Una ventaja de esta tc5

nica es obtener clulas madre que contengan la misma dotacin gentica que el paciente y evitar as problemas de rechazo. Esta tcnica slo se ha realizado en animales, no en humanos. Las mutaciones producidas en el ADN de estas clulas adultas hacen que se produzcan problemas durante la diferenciacin.

4.

Partenognesis

Este proceso reproductivo no se da en mamferos. Sin embargo, la partenognesis puede ser inducida en mamferos mediante mtodos qumicos o fsicos in vitro. Como resultado de esta activacin, se obtiene una masa celular denominada partenote de las que se pueden aislar clulas pluripotenciales. Esta tcnica slo es aplicable en mujeres.

Captulo 2.

Tipos de clulas madre

1. De acuerdo al tejido que originan
Totipotentes

De acuerdo al tipo de tejido que originan, existen cuatro tipos de clulas madre

El trmino totipotencial (del latn totus, que significa completo) hace referencia al potencial que tienen estas clulas de generar un embrin completo (tejido embrionario y extraembrionario).

Figura 2: Clasificacin y evolucin de clulas madre

Pluripotentes

El trmino Pluri (del latn plures, que significa muchos o varios) es utilizado para describir las clulas madre pluripotentes que pueden dar origen a progenitores que forman cualquiera de las tres capas germinales embrionarias: mesodermo, endodermo y ectodermo. Es importante destacar que para que una clula madre pueda considerarse como pluripotente tiene que cumplir las siguientes condiciones: en primer lugar, una nica clula debe ser capaz de diferenciarse a progenitores especializados procedentes de cualquier capa embrionaria; en segundo lugar, demostrar la funcionalidad in vitro e in
7

vivo de las clulas en las que se ha diferenciado, y, finalmente, que se produzca un asentamiento claro y persistente de stas en el tejido blanco, tanto en presencia como en ausencia de dao en los tejidos en los cuales se injerta Han sido aisladas de tres lneas celulares: clulas cancerosas embrionarias, clulas embrionarias pluripotentes, y clulas embrionarias germinales. Estas clulas pluripotentes poseen varias caractersticas en comn, entre ellas, algunos marcadores moleculares como la isoenzima de la fosfatasa alcalina, un dominio del factor de transcripcin Oct4, alta actividad de la telomerasa, y varios marcadores de membrana reconocidos por anticuerpos monoclonales.

Multipotentes

Las clulas madre multipotenciales son aquellas que pueden dar origen a precursores relacionados solamente con una de las tres capas embrionarias; por ejemplo, clulas madre que dan origen a tejidos derivados exclusivamente del endodermo como tejido pancretico o pulmonar.

Unipotentes.

La ltima categora corresponde a las clulas madre unipotenciales, que corresponden a las clulas que solo pueden generar clulas hijas que se diferencian a lo largo de una sola lnea celular, tal como su nombre lo refiere (del latn unus: uno). Hasta hace algunos aos, se consideraba a las clulas madre hematopoyticas de mdula sea en esta categora, ya que se relacionaban solamente con la generacin de clulas sanguneas.

Figura 3: Diferenciacin de clulas madre.

2.

De acuerdo al tejido de donde se pueden obtener

De acuerdo al tipo de tejido donde se pueden obtener, existen tres tipos de clulas madre
Clulas Madre Embrionarias

Son las clulas se derivan de la masa celular interna del embrin temprano en la etapa de blastocisto, entre el 5 y 6 da de la embriognesis en la fase de preimplantacin.

Figura 4: Embrin humano en el da 5, obtenida despus de la fecundacin in vitro. Tenga en cuenta que las clulas escamosas del trofoblasto, dentro de la cavidad (el blastocele), pegado a las clulas del trofoblasto, es la masa celular interna que forma el feto. En esta etapa, el blastocisto est rodeado por la zona pelcida, una membrana gruesa translcida compuesta de glicoprotenas.

Desde 1981 es posible en ratones aislar y cultivar clulas madre embrionarias de la masa celular interna, estas mantienen su capacidad de pluripotencialidad. En 1998, Thomson y su equipo aislaron por primera vez de las clulas madre embrionarias a partir de blastocistos humanos. Desde entonces, muchos grupos han informado del aislamiento de lneas de clulas madre. La tasa de xito de aislamiento es muy variable y depende del estado de conservacin (fresco o congelado) de los embriones, la calidad y la tecnologa utilizada. Los embriones en una etapa ms temprana o ms tarda (7 - 8 da despus de la fertilizacin) se utiliza tambin con xito. Estas clulas son pequeas (2-3 micras) con alta relacin ncleo-citoplasma, adherentes, forman colonias planas y compactas en cultivo como se observa en la Figura 5.
9

Figura 5: La colonia indiferenciada de clulas madre embrionarias humanas (flecha slida) en apoyo de fibroblastos (flecha punteada) (microscopio ptico x 20 (A) x 50 (B)). Las clulas madre de embriones humanos son clulas pequeas que forman la colonia plana y muy compacta.

Las clulas madres embrionarias se caracterizan in vitro e in vivo por su potencial para dar lugar a tres capas primarias embrionarias: endodermo, ectodermo, mesodermo y los distintos tejidos adultos. Las clulas madre embrionarias se autorrenouevan y son pluripotenciales siendo estas sus principales caractersticas. La pluripotencia est bajo el control de las redes de factores de transcripcin y cambios epigenticos (factores intrnsecos), y bajo el control del entorno celular (factores extrnsecos). El uso de clulas madre embrionarias se asocia con cuestiones ticas y el desajuste inmunolgico, lo que podra afectar a su uso generalizado en la clnica. Las clulas madre pluripontentes inducidas (IPSC) Estas son obtenidas a partir de la tecnologa que permite la generacin de un autlogo de clulas madre pluripotentes sin necesidad de utilizar una fuente de clulas embrionarias. Son reprogramados a partir de clulas somticas con sobreexpresin de los cuatro factores de reprogramacin, Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc. Tanto las clulas madre embrionarias y las clulas iPS son clulas madre pluripotentes con capacidad de autorrenovacin por tiempo indefinido y se pueden diferenciar en casi todos los tipos de clulas del cuerpo, lo que las hace valiosas para el estudio de la biologa del desarrollo temprano, para el modelado y como terapia para las enfermedades humanas. Especficamente, las clulas iPS humanas podra ser utilizada para generar especficos del paciente linajes para una variedad de investigacin traslacional. Las lneas celulares que se han podido obtener a partir de este tipo de clulas pluripotentes son la sangunea, la muscular y existen otras que estn siendo desarrolladas en diversos estudios.

10

Figura 6: La diferenciacin de la sangre derivados de iPSCs in vitro y in vivo . (a) derivados de

la sangre clones IPSC se diferencian espontneamente a travs de la formacin de cuerpos embrioides, y se analizaron por medio de inmunocitoqumica para marcadores de linaje de tres capas germinales embrionarias (endodermo FOXA2, mesodermo CD31 y ectodermo III-tubulina). (b) El trasplante de CMPi en cpsula renal de ratones SCID-beige result en la formacin de teratoma. Histologa de los tejidos de los teratomas demostrado que las clulas de las tres capas germinales, incluyendo muscular, glandular, y neuronales, como los tejidos de roseta. (c) Diagrama esquemtico que describe el protocolo de diferenciacin gradual guiada para la diferenciacin de IPSC en la isla-como las clulas. Acta, activina A, CYC, la ciclopamina, DE, endodermo definitivo, FGF10, el factor de crecimiento de fibroblastos 10, el GLP-1, pptido similar al glucagn-1; HGF1, el factor de crecimiento de hepatocitos-1, IGF, la insulina factor de crecimiento-1; ILV, indolactam V, ISL, los islotes, como las clulas del endodermo, PE, de pncreas, PG, intestino primitivo, Ra, todo trans del cido retinoico, Wnt, Wnt3a. (d) A travs del protocolo de la diferenciacin dirigida, HPC o PBMC derivados de IPSC clones fueron inducidos a endodermo definitivo (da 5), endodermo pancretico (da 10), y productoras de insulina de los islotes como las clulas (da 24). Inmunotincin demostrado la expresin de marcadores especficos de la etapa en la progenie de IPSC en el da 5, y FOXA2 SOX17), el da 10 (NKX6.1 y PDX1), y el da 24 (INS). Las barras de escala indican 50 micras.

11

Clulas madre perinatales Las clulas madre perinatales puedan ser aislados de la placenta que normalmente se desecha despus del parto, son una fuente de clulas ideal en trminos de disponibilidad, el menor nmero de preocupaciones de carcter tico, menos dao en el ADN, y as sucesivamente. Numerosos estudios han demostrado que algunas de las clulas derivadas de la placenta poseen caractersticas de clulas madre pluripotentes, como la capacidad de diferenciacin, en particular en clulas amniticas epiteliales (AE). Hay evidencia creciente de que la placenta humana contiene clulas madre pluripotentes o multipotentes o ambas cosas. Diversas clulas madre pluripotentes se han aislado de diferentes partes de la placenta humana, tales como el amnios, corion, el cordn umbilical, y la sangre fetal. Como la placenta derivados de las clulas, estas clulas madre tienen ventajas comunes.
Clulas madre adultas

Las clulas madre adultas o clulas madre somticas existen en todo el cuerpo despus del desarrollo embrionario y se encuentran dentro de los diferentes tipos de tejido. Estas clulas madre se encuentran en tejidos como el cerebro, la mdula sea, la sangre, los vasos sanguneos, msculos, la piel y el hgado.
Las clulas madre adultas permanecen en un estado de reposo en el que no se dividen durante aos hasta que se finalmente se activan por una enfermedad o una lesin de los tejidos. Las clulas madre adultas pueden dividirse o auto-renovarse indefinidamente, lo que les permite generar una amplia gama de tipos de clulas del rgano de origen, o incluso regenerar el rgano original completo. En general se cree que las clulas madre adultas estn limitadas en su capacidad de regenerarse en funcin a su tejido de origen. No obstante, hay ciertas evidencias que sugieren que se pueden dividir hasta convertirse en otros tipos de clulas. Se cree que una clula madre adulta es una clula indiferenciada que se encuentra entre las clulas diferenciadas en un tejido u rgano que puede renovarse y pueden diferenciarse para producir todos o algunos de los principales tipos de clulas especializadas del tejido u rgano. Las principales funciones de las clulas madre adultas en un organismo vivo son mantener y reparar el tejido en el que se encuentran. Los cientficos tambin usan el trmino de clulas madre somticas. A diferencia de las clulas madre embrionarias, de las cuales ya se conoce su origen, el origen de las clulas madre adultas en algunos tejidos maduros todava est bajo investigacin. Es cada vez ms evidente que el concepto clsico de que slo existen clulas madre en algunos tejidos adultos es incorrecta. La existencia de clulas madre adultas en la mayor parte de los tejidos adultos, incluidos el hematopoytico, neuronal, epidrmico, gastrointestinal, msculo esqueltico, msculo cardaco, hgado, pncreas o pulmn, no admite controversia. A su vez, cada vez es ms evidente que las clulas madre adultas derivadas de estos rganos no slo pueden generar clulas maduras de dicho tejido, sino tambin tejidos derivados de otras capas embrionarias, siendo el 12

caso ms tpico el de las clulas madre hematopoyticas, capaces de diferenciarse a hepatocitos, msculo cardaco, endotelio o a tejidos derivados de las tres capas embrionarias.

Clulas madre de la mdula sea Se han descrito diferentes tipos de clulas madre en la mdula sea: hematopoyticas (HSC), mesenquimales (MSC), las llamadas Side Population Cells (SP) y recientemente las clulas progenitoras adultas multipotenciales o MAPC. Clulas madre hematopoyticas (HSC) han sido identificadas tanto in vitro como in vivo por varios laboratorios y se vienen utilizando clnicamente desde hace ms de 50 aos. El trasplante alognico de progenitores hematopoyticos ha demostrado definitivamente que existen clulas madre multipotenciales hematopoyticas en la mdula sea y en la sangre perifrica. Hay numerosos estudios que han permitido identificar las HSC en modelos murinos, como las clulas que expresan los marcadores Sca-1, Thy-1, c-Kit y no expresan marcadores especficos de linaje (Lin-). Estudios de repoblacin han demostrado que estas clulas contribuyen en un modelo de trasplante a la reconstitucin de todas las lneas celulares hematopoyticas. Tambin se han aislado clulas madre hematopoyticas en humanos a partir de mdula sea, cordn umbilical, sangre perifrica o hgado fetal. En general, la ausencia de expresin de marcadores de lnea (Lin-), CD38-, c-kitlo, Thy-1+ y la expresin de CD34 se ha asociado a poblaciones enriquecidas en HSC, aunque no se ha podido identificar los marcadores especficos de la clula madre hematopoytica multipotencial. Independientemente del potencial hematopoytico, trabajos recientes indican que las HSC pueden ser, en determinadas circunstancias, ms potentes de lo esperado, es decir, diferenciarse hacia tejidos derivados de distintas capas embrionarias. Las clulas madre hematopoyticas de mdula sea y de sangre perifrica son capaces de contribuir a la angiognesis y vasculognesis in vivo, de tal forma que las clulas CD34+ no slo contienen progenitores hematopoyticos sino tambin clulas progenitoras endoteliales. Hoy da hay abundantes pruebas de que existe un progenitor comn endotelial y hematopoytico (hemangioblasto). De igual forma que ocurre con las HSC, las clulas madre endoteliales o angioblastos pueden ser movilizadas a la sangre perifrica mediante factores de crecimiento o situaciones de estrs. Se caracterizan por la expresin de marcadores de superficie como AC133 y VEGFR-2, marcadores que tambin expresan las HSC y que apoyan nuevamente la relacin entre ambos tipos de clulas madre. Tanto las HSC como las clulas madre endoteliales son capaces, en modelos experimentales de isquemia, de contribuir a regenerar las estructuras vasculares daadas, gracias a su capacidad de diferenciarse aclulas endoteliales maduras, favoreciendo la angiognesis y la vasculognesis. En modelos de isquemia perifrica, los progenitores endoteliales son movilizados desde la mdula sea y contribuyen a la neoangiognesis. Asimismo, en un modelo de isque13

mia cardaca en rata, las poblaciones de clulas CD34+, CD117bright, AC133+, VEGFR2+ contribuyen a reparar el miocardio daado gracias a su capacidad de mejorar la vasculognesis. Uno de los aspectos ms controvertidos en cuanto a la potencialidad de las HSC es su capacidad para diferenciarse a clulas musculares cardacas. En un modelo murino de infarto agudo de miocardio, el grupo de Orlic y Anversa demostraron que la inyeccin de clulas de mdula sea Liny c-kit+ (fenotipo de marcadores de superficie tpico de HSC) en el corazn daado daba como resultado la colonizacin de estas clulas en ms de la mitad del rea infartada5. Estas HSC adquirieron un fenotipo caracterstico de clulas de miocardio y endoteliales y contribuyeron a la mejora y supervivencia de los animales. Sin embargo, en estudios posteriores utilizando el mismo modelo, no ha sido posible reproducir estos hallazgos y no se han encontrado pruebas claras de transdiferenciacin. Como en otras ocasiones, es necesario que se realicen nuevos estudios antes de que efectivamente podamos demostrar la existencia o no de esta capacidad por parte de las HSC de transdiferenciarse a clulas musculares cardacas. Otra de las potencialidades atribuidas a las HSC es su capacidad para diferenciarse en hepatocitos. Basndose en que las clulas ovales (clulas madre hepticas) expresan marcadores de superficie tradicionalmente asociados a HSC (c-kit, flt-3, Thy-1 y CD34), se ha sugerido que stas podran diferenciarse a clulas ovales y hepatocitos. El grupo de Lagasse y colaboradores ha demostrado que clulas madre hematopoyticas de mdula sea con el fenotipo Lin, c-kit+, Thy-1, Sca-1 son capaces de regenerar el hgado en un modelo de dao heptico fulminante4, mientras que utilizando modelos de quimerismo en pacientes sometidos a trasplantes de mdula sea o de hgado y aprovechando la posibilidad de utilizar el cromosoma Y como marcador del origen de la clula, tambin se ha podido demostrar que un porcentaje de hepatocitos proviene de clulas madre de origen no heptico. Nuevamente, la capacidad transdiferenciadora de las HSC a hepatocitos ha sido cuestionada por estudios recientes. Estudios en un modelo murino de tirosinemia hereditaria sugieren que la capacidad de las HSC de contribuir a la regeneracin heptica est justificada principalmente por la existencia de fenmenos de fusin celular entre las HSC y los hepatocitos y no realmente por el hecho de que las HSC sean capaces de diferenciarse a hepatocitos. El potencial de las HSC para adquirir caractersticas de msculo esqueltico, neuronas adultas as como clulas de la gla, y de contribuir a otros tejidos como el epitelio pulmonar, gastrointestinal, renal o la piel se han descrito recientemente15. Sin embargo, a pesar de todos estos esfuerzos, ninguno de los estudios publicados hasta el momento demuestra que una nica clula madre hematopoytica contribuya de forma robusta y funcional a la regeneracin de un tejido distinto del hematopoytico y, por tanto, en sentido estricto no cumple los criterios necesarios para hablar de versatilidad. Cada uno de los trabajos mencionados puede ser criticado en este sentido. Sin embargo, si
14

tomamos los estudios de forma conjunta, s que aportan pruebas de la existencia de HSC con estas caractersticas y potencialidades. Las clulas madre mesenquimales (MSC), a veces llamados clulas mesenquimales del estroma se han descrito en muchos tejidos. Bajo condiciones fisiolgicas, estas clulas asumen el papel de apoyo necesario para mantener las clulas del compartimiento especializadas y especficas de tejido, sino tambin en funcin del tejido, proporcionando de clulas madre progenitoras-capaces de proporcionar clulas especializadas en el cuerpo. Este es el caso de las MSCs de la mdula sea capaz de soportar tanto el proceso de la hematopoyesis que pueden diferenciarse en osteoblastos que participan en la resorcin sea. Aparte de un estado estable, estas clulas participan activamente en la cicatrizacin de heridas y la regeneracin de tejidos, sino tambin por su disfuncin puede participar en el proceso del cncer. Todas estas propiedades y otras caractersticas, tales como la inmunosupresin y su plasticidad en respuesta a su entorno, que las principales herramientas teraputicas en el campo de la terapia celular. Despus de describir lo que el CSM, esta revisin se centrar en su participacin en la homeostasis y la regeneracin, sin tener en cuenta sus posibles repercusiones en el proceso del cncer. Las clulas madre mesenquimales (MSC) han sido aislados a partir de una variedad de tejidos, como la mdula sea, msculo esqueltico, la pulpa dental, sea, cordn umbilical y tejido adiposo. Las MSC se utilizan en la medicina regenerativa basada principalmente en su capacidad de diferenciarse en tipos celulares especficos, y tambin como biorreactores de factores solubles que promuevan la regeneracin de los tejidos de los progenitores de tejidos celulares daados. Adems de estas propiedades regenerativas, las MSC tienen una capacidad inmunomoduladora, y provocan efectos inmunosupresores en una serie de situaciones. No slo son clulas inmunoprivilegiadas, debido a la baja expresin de clase II complejo mayor de histocompatibilidad (MHC-II) y molculas co-estimuladoras en su superficie celular, pero tambin interfieren con las diferentes vas de la respuesta inmune por medio de interacciones directas de clula a clula y la secrecin de factor soluble in vitro, las CMM inhibe la proliferacin de clulas T de clulas B ,de clulas NK y las clulas dendrticas (DC), que producen lo que se conoce como la divisin de anergia arresto. Adems, las MSCs puede detener una variedad de funciones celulares inmunes: la secrecin de citoquinas y la citotoxicidad de clulas T y NK; maduracin de clulas B y la secrecin de anticuerpos; maduracin y activacin de citoquinas, as como la presentacin de antgenos. Se cree que las MSCs necesitan ser activado para ejercer sus habilidades de inmunomodulacin. Estudios han sido diseados para probar la eficacia de la terapia de MSC en dos escenarios diferentes inmunes: la prevencin o el tratamiento de los episodios de rechazo del injerto, y la capacidad para suprimir la respuesta inmunolgica anormal en las enfermedades autoinmunes e inflamatorias.
15

16

Captulo 3.

Usos
Hay muchas maneras en las cuales las clulas madre humanas pueden ser utilizadas para la investigacin bsica y clnica.. Sin embargo, hay muchas cuestiones tcnicas complejas para concretar estas aplicaciones de clulas madre, que sern superadas solamente con investigaciones intensas y continuas Los estudios de clulas madre embrionarias humanas pueden brindar informacin sobre los complejos procesos que ocurren durante el desarrollo humano. Una meta fundamental de este trabajo es identificar cmo se diferencian las clulas madre indiferenciadas. Algunas de las condiciones mdicas ms serias, tales como cncer y defectos de nacimiento, se deben a la divisin y a la diferenciacin anormal de clulas. Una mejor comprensin de los controles genticos y moleculares de estos procesos puede brindar informacin sobre cmo tales enfermedades aparecen y a la vez sugerir nuevas estrategias para la terapia. Un problema significativo de las aplicaciones de las clulas madre es que los cientficos no entienden todava completamente las seales que activan genes especficos y su influencia en la diferenciacin de la clula madre. Las clulas madre humanas podran ser tambin utilizadas para probar nuevas drogas. Por ejemplo, las nuevas medicaciones para la cura de enfermedades podran ser probadas en las lneas de clulas madre humanas pluripotentes para obtener una mayor eficacia. Otras clases de clulas se utilizan ya para estos fines. Las lneas celulares de cncer se utilizan, por ejemplo, para probar potenciales drogas antitumorales. Pero, la disponibilidad de clulas madre pluripotentes permitira la prueba de drogas en una gama ms amplia de variedades celulares. Sin embargo, para la experimentacin eficaz de las diversas drogas, las condiciones experimentales deben ser idnticas al comparar las diferentes drogas. Por lo tanto, los cientficos tendrn que controlar exactamente la diferenciacin de las clulas madre y el tipo especfico de clula en la cual las drogas sern probadas. Quizs el uso potencial ms importante de las clulas madre humanas es la generacin de las clulas y de los tejidos que se podran utilizar para las terapias celulares. Hoy en da, los rganos y tejidos donados son utilizados para sustituir el tejido enfermo o destruido, pero la necesidad de tejidos y rganos para ser transplantados supera las fuentes disponibles. Las clulas madre, dirigidas a diferenciarse en tipos especficos de clulas, ofrecen la posibilidad de una fuente renovable de clulas y tejidos de reemplazo en enfermedades incluyendo Parkinson, Alzheimer, le17

siones de la mdula espinal, quemaduras, enfermedades cardacas, diabetes y artritis reumatoide. Para concretar la promesa de las terapias celulares para tales enfermedades de alta incidencia y debilitantes, los cientficos deben ser capaces de manipular y reproducir fcilmente las clulas madre, y stas deben poseer las caractersticas necesarias para su diferenciacin, el trasplante y, el crecimiento y adaptacin apropiados a largo plazo. Lo que sigue es una lista de pasos de tratamientos basados en clulas que los cientficos tendrn que aprender a controlar y manipular perfectamente para trasladar estos tratamientos al paciente. Para ser tiles para los propsitos de trasplante, las clulas madre deben cumplir lo siguiente: Proliferar extensamente y generar suficientes cantidades de tejido. Diferenciarse hacia los tipos deseados de clula. Sobrevivir en el husped despus de trasplante. Integrarse al rgano luego del trasplante. Funcionar apropiadamente para aumentar la sobrevida del husped. Evitar daar el husped. Con el propsito de evitar el problema del rechazo inmune propio de los organismos, los cientficos estn experimentando diversas estrategias de investigacin que les permita generar tejidos que no sean rechazados. El estudio de las terapias con clulas madre es verdaderamente apasionante, pero siguen existiendo problemas tcnicos significativos que slo podrn ser superados con aos de investigacin intensiva.

18

Captulo 4.

Aplicaciones en medicina humana

El estudio de las clulas madre permitir conocer los mecanismos de especializacin celulares. Qu mecanismos hacen que un gen sea activo y haga su trabajo y qu mecanismos inhiben la expresin de ese gen. El cncer, por ejemplo, es un caso de especializacin celular anormal. Las clulas madre pueden servir para probar nuevos medicamentos en todo tipo de tejidos, antes de hacer las pruebas reales en animales o en humanos. Las clulas madre tendrn aplicaciones en terapias celulares, medicina regenerativa o ingeniera tisular. Muchas enfermedades son consecuencia de malfunciones celulares o destruccin de tejidos. Uno de los remedios, en casos muy graves, es el trasplante. Las clulas madre pluripotentes estimuladas a desarrollarse como clulas especializadas, ofrecen frecuentemente la posibilidad de reemplazar clulas y tejidos daados. As se podrn emplear para casos de Parkinson y Alzheimer, lesiones medulares, quemaduras, lesiones de corazn o cerebrales, diabetes, osteoporosis y artritis reumatoide. Los estudios de clulas madre embrionarias humanas pueden brindar informacin sobre los complejos procesos que ocurren durante el desarrollo humano. Algunas de las condiciones mdicas ms serias, tales como cncer y defectos de nacimiento, se deben a la divisin y a la diferenciacin anormal de clulas. Una mejor comprensin de los controles genticos y moleculares de estos procesos puede brindar informacin sobre cmo tales enfermedades aparecen y a la vez sugerir nuevas estrategias para la terapia. Las clulas madre humanas podran ser tambin utilizadas para probar nuevas drogas. Por ejemplo, las nuevas medicaciones para la cura de enfermedades podran ser probadas en las lneas de clulas madre humanas pluripotentes para obtener una mayor eficacia. Otras clases de clulas se utilizan ya para estos fines. Las lneas celulares de cncer se utilizan, por ejemplo, para probar potenciales drogas antitumorales. Pero, la disponibilidad de clulas madre pluripotentes permitira la prueba de dro19

gas en una gama ms amplia de variedades celulares. Sin embargo, para la experimentacin eficaz de las diversas drogas, las condiciones experimentales deben ser idnticas al comparar las diferentes drogas. Por lo tanto, los cientficos tendrn que controlar exactamente la diferenciacin de las clulas madre y el tipo especfico de clula en la cual las drogas sern probadas. Quizs el uso potencial ms importante de las clulas madre humanas es la generacin de las clulas y de los tejidos que se podran utilizar para las terapias celulares. Hoy en da, los rganos y tejidos donados son utilizados para sustituir el tejido enfermo o destruido, pero la necesidad de tejidos y rganos para ser transplantados supera las fuentes disponibles. Las clulas madre, dirigidas a diferenciarse en tipos especficos de clulas, ofrecen la posibilidad de una fuente renovable de clulas y tejidos de reemplazo en enfermedades incluyendo Parkinson, Alzheimer, lesiones de la mdula espinal, quemaduras, enfermedades cardacas, diabetes y artritis reumatoide.

Figura 7: Experimento de cultivo e implante de clulas madre en roedores.

Por ejemplo, puede llegar a ser posible generar clulas sanas del msculo cardaco en el laboratorio y luego trasplantar las clulas en los pacientes con enfermedad cardaca crnica. Las investigaciones preliminares en ratones y otros animales indica que las clulas estromales de mdula sea, trasplantadas en un corazn daado, puede tener efectos beneficiosos. Si estas clulas pueden generar clulas musculares del corazn o estimular el crecimiento de nuevos vasos sanguneos que repoblen el tejido del corazn, o ayudar a travs de algn otro mecanismo de forma activa en la investigacin. Por ejemplo, las clulas inyectadas pueden lograr reparacin mediante la secrecin de factores de crecimiento, en lugar de incorporarlo en el corazn. Prometedores resultados de los estudios en animales han servido como base para un pequeo nmero de estudios exploratorios en los seres humanos. Otros estudios recientes en los sistemas de cultivo de clulas indican que puede ser posible dirigir la diferenciacin de las clulas madre embrionarias o
20

adultas clulas de mdula sea en clulas del msculo cardaco. Para concretar la promesa de las terapias celulares para tales enfermedades de alta incidencia y debilitantes, los cientficos deben ser capaces de manipular y reproducir fcilmente las clulas madre, y stas deben poseer las caractersticas necesarias para su diferenciacin, el trasplante y, el crecimiento y adaptacin apropiados a largo plazo. Lo que sigue es una lista de pasos de tratamientos basados en clulas que los cientficos tendrn que aprender a controlar y manipular perfectamente para trasladar estos tratamientos al paciente. Para ser tiles para los propsitos de trasplante, las clulas madre deben cumplir lo siguiente: Proliferar extensamente y generar suficientes cantidades de tejido. Diferenciarse hacia los tipos deseados de clula. Sobrevivir en el husped despus de trasplante. Integrarse al rgano luego del trasplante. Funcionar apropiadamente para aumentar la sobrevida del husped. Evitar daar el husped.

Con el propsito de evitar el problema del rechazo inmune propio de los organismos, los cientficos estn experimentando diversas estrategias de investigacin que les permita generar tejidos que no sean rechazados. Un problema significativo de las aplicaciones de las clulas madre es que los cientficos no entienden todava completamente las seales que activan genes especficos y su influencia en la diferenciacin de la clula madre.

1.

Clulas Madre en la reparacin de Tejido Miocrdico posteriormente a un infarto.

Esta es una de las reas de ms inters actual en la aplicacin de clulas madre. Mltiples trabajos han sido publicados o estn en desarrollo para establecer y mejorar esta terapia. A pesar del entusiasmo y el esfuerzo dedicado todava es un campo incipiente en el que tendremos que esperar a una mayor interaccin entre los hallazgos bsicos y resultados clnicos. Las vallas en su aplicacin en la actualidad son: Determinar el tipo de clula madre a utilizar. Tres son las que se han considerado: clulas madre hematopoyticas, mesenquimticas y miocrdicas. Las dos primeras se han utilizado en clnica por la facilidad de su obtencin y por su potencial de diferenciarse en msculo estriado. Determinar la va de administracin de las clulas madre: movilizacin perifrica, inyeccin intracoronaria o inyeccin intramiocrdica.
21

Esto est directamente relacionado al fenmeno de homing. Si las clulas madre con capacidad de diferenciarse a una clula miocrdica tienen sistemas de anidamiento, anclaje y subsistencia similares a las de los precursores hematopoyticos, entonces podra servir simplemente movilizar estas clulas a la circulacin para que se aniden al pasar por el msculo daado. Los experimentos clnicos basados en este principio han resultado poco efectivos. Muchos estudios estn centrndose en la actualidad en la inyeccin intracoronaria de clulas madre hematopoytica y mesenquimtica. Un estudio randomizado usando precursores hematopoyticos post infarto en humanos demostr un incremento significativo en la fraccin de eyeccin a los seis meses del mismo, pero ese mismo grupo comprob una nula mejora en el anlisis de 18 meses. Adems la mortalidad no fue diferente en ambos grupos. Estos resultados apuntan a que probablemente existen mecanismos de homing para estas clulas, que son capaces de regenerar tejido infartado o producir neovascularizacin, pero los efectos no se mantienen en el tiempo. Nuevamente mucho trabajo en investigacin bsica ser necesaria para explicar el fenmeno e intentar desarrollar condiciones para prolongar el efecto positivo. Estudios con mayor nmero de pacientes sern necesarios para definir si esta aproximacin es efectiva. Pocos han explorado la inyeccin intramiocrdica por el riesgo asociado y la dificultad de definir con precisin la topografa del dao inducido por el infarto. Determinar en qu momento de la evolucin del infarto es necesario aplicarlas; precozmente o despus que el dao ya est establecido pero antes de la cicatrizacin definitiva. Esto tambin guarda relacin con la disponibilidad de clulas madre autlogas en tiempos cortos. Las clulas hematopoyticas son fciles de movilizar y de conseguir en poco tiempo. En teora se podra disponer de un concentrado de estas clulas (CD34) en pocas horas si se necesita. Por el contrario las clulas madre mesenquimticas, que tambin se pueden diferenciar a miocitos al menos en modelos de laboratorio, requieren de un cultivo primario de dos semanas para poder purificar una cantidad suficiente que sea til. Esto es un impedimento para su uso en la fase aguda postinfarto, por lo que habra que plantear la conveniencia de tener estas clulas, autlogas o alognicas, previamente congeladas para usar en este fin. Debido a que las mismas no generan aparentemente una respuesta inmune y por el contrario pueden inducir tolerancia inmune podra ser una ventaja para el uso de clulas alognicas. Conocer los mecanismos de accin del efecto regenerativo potencial de la aplicacin de las clulas, lo que llevara a contestar muchas de las preguntas anteriores. Tres son los mecanismos aducidos tericamente: integracin al msculo cardaco y diferenciacin en miocitos; fusin celular con miocitos presentes en el tejido daado; formacin neovascular. Hay resultados de laboratorio que apoyan en parte a cualquiera de estas tres teoras.
22

Finalmente tampoco se conoce el potencial de dao que la aplicacin de clulas madre en el miocardio pueda tener, ya que no se conocen los mecanismos de homing ni las seales diferenciadoras del tejido miocrdico. El uso de clulas madre mesenquimticas, que tambin poseen la capacidad de diferenciarse a tejido conectivo, hueso o cartlago podra provocar ms dao que bien si por ejemplo induce proliferacin de la ntima de la arteria por donde se inyecta.

2.

Ejemplos de Aplicacin de Clulas Madre

Segn public Science Abril de 2000, a dos bebs que nacieron con un defecto gentico que les ocasionaba severa inmunodeficiencia, les extrajeron clulas madre de mdula sea. Se cultivaron las clulas, se reemplaz el gen defectuoso y se transfirieron de nuevo a los nios. Este experimento, en el que se emplearon clulas madre de los propios bebs, constituy el primer xito de curacin mediante terapia gentica. Un trabajo de la Universidad Johns Hopkins, en Baltimore, presentado durante el encuentro anual de la Sociedad Americana de Neurociencia explicaba que la inyeccin de clulas madre en el lquido cefalorraqudeo de los animales, lograba devolver el movimiento a unos roedores con parlisis. Los expertos introdujeron clulas madre neuronales en los roedores paralizados por un virus que ataca especficamente a las neuronas motoras y comprobaron que el 50 por ciento recuperaba la habilidad de apoyar las plantas de una o de dos de sus patas traseras. Las investigaciones son muy prometedoras y avanzan muy rpidamente, pero queda mucho por hacer para llegar a aplicaciones clnicas reales. Todava falta por conocer los mecanismos que permiten la especializacin de las clulas madre humanas para obtener tejidos especializados vlidos para el trasplante. Recientemente han sido utilizadas las clulas madre encontradas en la sangre del cordn umbilical para tratar pacientes con cncer. Durante la quimioterapia, la mayora de las clulas en crecimiento mueren por los agentes citotxicos. El efecto secundario de la quimioterapia es lo que los trasplantes de clulas madre tratan de revertir; la sustancia que se encuentra sana dentro del hueso del paciente, el tutano, es remplazada por aqullas perdidas en el tratamiento. En todos los actuales tratamientos de clulas madre, obtener clulas madre de un donante con el mismo tipo de sangre es preferible a usar las del paciente mismo. Solo si (siempre como ltimo recurso y si no se encontr un donante con el mismo tipo de sangre) es necesario para el paciente usar su propias clulas madre y si el paciente no tiene guardada su propia coleccin de clulas madre (sangre del cordn umbilical), entonces la sustancia
23

contenedora en los huesos ser obtenida antes de la quimioterapia, y reinyectada despus. El trasplante de clulas madre hematopoyticas se ha usado desde hace 50 aos con xito para tratar mltiples enfermedades: talasemias, anemia falciforme, anemia de Fanconi, errores congnitos del metabolismo, anemia aplsica grave, inmunodeficiencias combinadas graves. Tambin han sido empleadas para el tratamiento de tumores: Leucemias agudas mieloides y linfoides, leucemias crnicas mieloides, mielodisplasias, linfomas, mielomas, tumores slidos de rin, mama, ovario y neuroblastoma. Esto se consigue mediante el trasplante de mdula sea. La mdula sea contiene las clulas madre precursoras de las clulas sanguneas y linfticas. Se sola sacar del hueso de la cadera, pero actualmente se est sacando de la sangre perifrica tras tratamiento con factores estimulantes del crecimiento. El xito del trasplante de mdula, al igual que en cualquier otro trasplante, depende de la compatibilidad HLA. Pero adems de poder producirse rechazo del individuo al tejido trasplantado, el trasplante de mdula sea presenta la particularidad de que tambin puede darse en sentido inverso, rechazo del tejido trasplantado al individuo. Sin embargo el rechazo GVHD puede presentar una ventaja y ser de inters como inmunoterapia, ya que puede reconocer a las clulas malignas con las que compite como extraas y permitir una remisin ms rpida de la leucemia. Tras destruir la mdula por radiacin o quimioterapia se realiza el trasplante. A las dos semanas aparecen nuevas clulas sanguneas, y tras varios meses (autlogos) o ms de un ao se restituye la funcin inmune. Tambin es posible el empleo de clulas madre de cordn con la misma finalidad.

3.

Investigaciones Realizadas

Las clulas madre extradas del cordn umbilical, pueden ser muy eficaces para tratar leucemias agudas y crnicas, anemia hereditaria, anemia aplstica o adquirida; talasemia (as se llama a la alteracin de la hemoglobina que provoca anemias severas). Diabetes Cientficos llevan tiempo trabajando con la idea de que es posible superar la diabetes mediante un trasplante de clulas madre. Un grupo de cientficos de la Universidad de Harvard, en Estados Unidos ha anunciado que ha encontrado un compuesto qumico capaz de convertir las clulas madre pancreticas en clulas betas generadoras de insulina.
24

 Alzheimer, Enfermedad de Lou Gehrig y Enfermedad de Huntington

Investigadores estn estudiando mecanismos diferentes para aproximarse a estas enfermedades a travs de la terapia celular. En el caso de la Enfermedad de Lou Gehrig, conocida tambin como Esclerosis lateral amiotrfica y la cual se caracteriza por una destruccin progresiva de las funciones motoras que lleva a la parlisis y muerte, los cientficos han usado las clulas madre para restaurar las propiedades naturales a las clulas y as poco a poco el paciente pueda recuperar su movilidad.
Parkinson

El objetivo para tratar este mal es transformar las clulas madre de tal forma que hagan el papel de las neuronas (las clulas tpicas del sistema nervioso), luego que sobrevivan y funcionen como productoras de dopamina.
Lesiones de la espina dorsal

Las clulas madre pueden ayudar a reparar el tejido de la espina daado y reparar las funciones de movilidad. En un estudio publicado en el Journal of Neuroscience, cientficos del Krembil Neuroscience Center en el Toronto Western Research Institute y la University of Toronto concluan esto luego de haber experimentado con ratas. Se transplantaron cellas del cerebro a los animales que luego viajaron a travs de la espina de las ratas, se incorporaron al tejido daado y se desarrollaron como el tipo de clula destruida en el sitio lesionado. All, produjeron mielina. El estudio mostr que las ratas que pudieron restaurar su mielina en la espina lesionada mostraron alguna recuperacin y caminaron con ms coordinacin.
Derrame cerebral

Investigadores estn estudiando si pueden recuperarse las partes daadas provocadas por derrame del cerebro, con clulas madre. Los cientficos intentaron transplantar clulas madre a ratones para tratar la prdida de masa cerebral despus de un ataque cerebral severo. En los estudios, las clulas transplantadas no slo sobrevivieron, sino que migraron a las reas daadas del cerebro confirmando que son atradas por las zonas con enfermedades y su potencial para regenerarlas. Enfermedades del corazn De acuerdo con el National Institutes of Health, las clulas madre tambin se pueden transformar en nuevas clulas del corazn y en clulas vasculares del endotelio, por lo que los cientficos estn explotando esta habilidad con la
25

meta de proveer tejido de reemplazo a un corazn daado. De hecho, los investigadores ya estn pensando en que los pacientes en riesgo de padecer algn infarto donen sus clulas por adelantado, para que stas sean genticamente programadas y usadas cuando las necesiten sin llegar a una emergencia. Artritis Investigadores identificaron clulas madre con capacidad para convertirse en condrocitos, clulas que envuelven los cartlagos, en los huesos de personas incluso mayores de 75 aos. Quemaduras Se estn estudiando tcnicas basadas en la terapia con clulas madre para tratar quemaduras que pueden daar extensas partes de la piel y provocar marcas en el tejido y prdida de funciones, como por ejemplo falta de tacto. Estas clulas madre tienen la propiedad de poder transformarse en keratinocitos, clulas de la piel con funciones especficas que pueden regenerar el tejido. Un ensayo de investigadores de Rice University asegura que la membrana amnitica fetal ha sido probada como un tratamiento efectivo para las crneas qumicamente quemadas. Por otro lado la Internacional Society or Stem Cell Research (ISSCR), asegura que la regeneracin de la retina sera posible con clulas madre aisladas de los ojos, lo cual puede llevar a una posible cura para el dao a la vista. En resumen, las expectativas del uso de las clulas madre en medicina son altas y han estimulado un enorme inters y conseguido grandes recursos para su investigacin. Si bien en reas como el trasplante hematopoytico ya han dado resultados muy positivos permitiendo tratar con xito a muchos pacientes, la mayora de otras aplicaciones potenciales est en una fase preclnica. Es esperable que en un futuro no muy lejano veamos la madurez en reas especficas de la medicina regenerativa y la incorporacin de otras patologas a este campo. El estudio de las terapias con clulas madre es verdaderamente apasionante, pero siguen existiendo problemas tcnicos significativos que slo podrn ser superados con aos de investigacin intensiva.
Controversias en el uso de las Clulas Madre

La controversia sobre las clulas madre es el debate tico sobre las investigaciones de la creacin, uso y destruccin de las clulas madres embrionarias. La oposicin a las investigaciones dice que esta prctica puede llevar a la clonacin y fundamentalmente a la desvalorizacin de la vida humana. Contra26

riamente, las investigaciones mdicas opinan que es necesario proceder con las investigaciones de las clulas madre embrionarias porque las tecnologas resultantes podran tener un gran potencial mdico, y que el exceso embrionario creado por la fertilizacin in vitro puede ser donado para las investigaciones. Esto en cambio, produjo conflictos con el movimiento Pro-Life (Pro-Vida), quienes adjudican la proteccin de embriones humanos. El constante debate ha hecho que autoridades de todo el mundo busquen regularidad en los trabajos y marquen el hecho de que las investigaciones de las clulas madre embrionarias representan un desafo tico y social. De acuerdo con muchas religiones y sistemas ticos, la vida comienza en la fecundacin. Segn sus argumentos, cualquier medida intencional para detener el desarrollo despus de la concepcin se considera como la destruccin de una vida humana. Otros crticos no tienen un problema moral con la investigacin con clulas madre, pero tienen miedo de un precedente para la experimentacin humana. Algunos crticos apoyan la idea de la investigacin, pero quieren que se impongan estrictas normas legales que impidan la experimentacin gentica, como la clonacin y que garanticen que los embriones slo se obtengan a travs de fuentes apropiadas. Prevenir que la investigacin con clulas madre se convierta en una pendiente resbaladiza hacia experimentos genticos humanos es considerado por la mayora de la sociedad un punto importante en la controversia de las clulas madre. Dentro de la comunidad mdica, existen diferentes posturas, entre ellas que los blastocitos o embriones son organismos vivos que dentro de 9 meses sern seres humanos con derechos, por esto, no es tico destruir el blastocito o embrin para obtener las clulas madre, mientras que otros consideran que en la edad temprana de un embrin lo que se tiene es un brote de clulas con su masa interna.

27

28

Captulo 5.

ltimos avances
1. Clulas madre derivados del Amnios: en busca de las aplicaciones clnicas

En el prometedor campo de la medicina regenerativa, las clulas madre perinatales son de gran inters como las clulas madre con potencial de aplicaciones clnicas. Las clulas madre perinatales puedan ser aislados de la placenta humana que normalmente se desecha, que son una fuente de clulas ideal en trminos de disponibilidad, el menor nmero de preocupaciones de carcter tico, menos dao en el ADN, y as sucesivamente. Numerosos estudios han demostrado que algunas de las clulas derivadas de la placenta poseen caractersticas de clulas madre pluripotentes, como la capacidad de diferenciacin, en particular en amniticas epiteliales (AE) clulas. El epitelio amnitico humano contiene un nmero relativamente grande de clulas madre con marcadores positivos clulas como una fuente de clulas madre de adultos. En esta revisin, se introduce un modelo de teora de por qu las clulas AE tantas poseen caractersticas de clulas madre. Tambin describe el trabajo previo sobre las aplicaciones teraputicas y discutir la pluripotencia de las clulas AE y peligros potenciales para el amnios derivados de la investigacin con clulas madre.

2.

Las clulas madre mesenquimales y el tratamiento del lupus eritematoso sistmico:

Los pacientes con lupus eritematoso sistmico (LES) se mantienen en mayor riesgo de muerte prematura, sobre todo entre los adultos jvenes. Hasta el 45% de los casos presentan dao temprano rgano final, relacionado con la actividad persistente o enfermedad renal. La afectacin renal, que ocurre en 40 a 50% de los pacientes en la mayora de series, se asocia con tasas de mortalidad de aproximadamente ocho veces mayor de lo esperado, y se mantiene slo en parte responde a los mejores tratamientos disponibles. De hecho, el tratamiento con ciclofosfamida no ha mejorado la supervivencia del paciente en comparacin con los corticosteroides, y el mayor ensayo controlado comparando el micofenolato mofetilo con
29

ciclofosfamida intravenosa en nefritis lpica alcanzaron la remisin completa en slo el 8,6% y 8,1% de los pacientes, respectivamente. Sin lugar a dudas hay una necesidad de tratamientos ms eficaces y seguros para el LES.

3.

Terapia celular con troncales mesenquimales para la atenuacin de la formacin de cicatrices durante la cicatrizacin de la herida

Las cicatrices son una consecuencia de cicatrizacin de heridas cutneas que pueden ser tanto antiesttico y perjudicial para la funcin del tejido. El tejido cicatricial se genera por deposicin excesiva de tejido de la matriz extracelular por los fibroblastos de curacin de heridas y miofibroblastos, y aunque es inferior a la piel no lesionada, es capaz de restablecer la integridad de la frontera entre el cuerpo y su entorno. La cicatrizacin no es un proceso necesario para reparar los tejidos drmicos. Ms bien, el tejido cicatricial se forma debido a los mecanismos especficos que se producen durante el proceso de cicatrizacin de heridas de adultos y son modulados principalmente por la respuesta inflamatoria en el sitio de la lesin. Clulas madre adultas derivadas de tejido mesenquimal, que participa en el proceso normal de cicatrizacin, son mediadores trficos de la reparacin de tejidos. Estas clulas participan en la atenuacin de la inflamacin en la herida y la reprogramacin de las clulas inmunes residentes de curacin y de la herida para favorecer la regeneracin de tejidos y de inhibir la formacin de tejido fibrtico. Como resultado, estas clulas se han considerado y probado como un posible candidato para una terapia celular para promover la menor cicatrizacin de heridas. Donde se determina que los mecanismos especficos por los cuales las clulas madre mesenquimales pueden limitar la fibrosis de los tejidos y se resumen recientes in vivo estudios en los que estas clulas se han utilizado con xito para limitar la formacin de cicatrices.

4.

Generacin de clulas pluripotentes inducidas en enfermedades especficas de pacientes con cariotipos diferentes del sndrome de Down

El sndrome de Down (SD), la principal causa de retraso mental, es causado por la trisoma de todos o algunos de cromosoma 21 humano, e incluye tres cariotipos bsicos: la trisoma 21, la translocacin y mosaicismo. La derivacin de DS especficos de las clulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs) nos proporciona nuevos modelos de DS que se pueden utilizar para determinar el mecanismo de DS y de elaborar enfoques teraputicos para los pacientes con SD.
Mtodos 30

En el presente estudio, los fibroblastos de pacientes con sndrome de Down de diferentes cariotipos fueron reprogramadas en iPSCs a travs de la sobreexpresin de cuatro factores: Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc, mediante el uso de vectores lentivirales. Las capacidades de la IPSC-DS en la autorrenovacin y pluripotencialidad in vitro y in vivo fueron examinados.
Resultados

El IPSC-DS mostraron caractersticas similares a las de clulas madre embrionarias humanas, en particular, la morfologa, el marcador de superficie (SSEA4, TRA-1-60 y TRA-1-81) la expresin, pluripotentes especficas de factores de transcripcin-los niveles de expresin, y la metilacin estado del promotor OCT4. La pluripotencia de IPSC-DS Tambin se ensay in vitro y in vivo . Cuerpos embrionarios se formaron y mostraron la expresin de marcadores diferenciados para tres capas germinales. Por otra parte, IPSC-DS forman teratomas cuando se inyectan en clsicos no obesos diabticos combinada severa inmunodeficientes (NOD-SCID) los ratones.
Conclusiones

iPSCs fueron generados a partir de pacientes con sndrome de Down. Los iPSCs derivados de diferentes tipos de sndrome de Down pueden ser utilizados en el modelado de DS, la optimizacin de la atencin al paciente, el descubrimiento de frmacos, y, finalmente, las terapias de reemplazo celular autlogo.

31

32

REFERENCIAS
1. Bibliografa
BERMDEZ V, CANO C, MEDINA M. et al. Nuevas Opciones en el tratamiento de la Diabetes Mellitus tipo 1: Clulas Madre y Diabetes. 2002; 171-176. CUNNINGHAM, James G. Fisiologa Veterinaria. Pgina 49.

GENOVESE, J., CORTES, M. y CHACHQUES, E. (2007). Cell Based Approaches for Myocardial Regeneration and Artificial Myocardium. Current Stem Cell Research and Therapy Journal.

HERNNDEZ RAMREZ P. Medicina Regenerativa y Clulas Madre. Mecanismos de accin de las clulas madre adultas. Rev. Cubana de hematologa, inmunologa y Med transf. 2009.

LOPEZ GUERRERO, Jose. Clulas madre. La madre de todas las clulas Ao: 2003 Editorial: Hlice

LORENZINI, S. y ANDREONe, P. (2007). Regenerative Medicine and Liver Injury: What Role for Bone Marrow Derived Stem Cells? Current Stem Cell Research and Therapy. 83-88.

MERCE, Luis. Clulas Madre Preguntas y respuestas sobre la donacin y conservacin de sangre del cordn umbilical. Editorial medica Panamericana. (2009)

MORALES, O., Fisiologa celular de las Clulas Madre. (pp.42-58 ). San Jos, Costa Rica.

NOMBELA, Csar (2007). Clulas madre, encrucijadas biolgicas para la Medicina. Madrid

33

NOMURA, T., ASHIHARA, E., Tateishi,K. (2007). Therapeutic Potential of stem progenitor cells in human skeletal muscle for cardiovascular regeneration. Current Stem Cell Research and Theraphy Journal. 293-300.

PEDROSA, Alfonso. En busca de la inmortalidad. Una aproximacin al debate actual sobre las clulas madre Ao: 2006 Editorial: Fundacin Jos Manuel Lara

SADABA, Javier. La vida en nuestras manos. La eterna disyuntiva entre ciencia y tica Ao: 2001 Editorial: Ediciones B

PRSPER F. Trasplante Celular y terapia regenerativa con clulas madre.Nefrologa. 2008;6:71-79.

ZELEDN, F. (2006). Una actualizacin del uso de clulas madre en la teraputica de enfermedades

ZURRIARIN, Roberto Germn (Coord.) (2009). Clulas madre. Ciencia, tica y Derecho EIUNSA. EDICIONES INTERNACIONALES UNIVERSITARIAS, S.A., 2009

RODRGUEZ-PARDO, Viviana Marcela. Clulas Madre: Conceptos Generales y Perspectivas de Investigacin. Universitas Scientiarum Revista de la Facultad de Ciencias Pontificia Universidad Javeriana. Enero- junio 2005. Bogot - Colombia.

FELIPE Prsper. CATHERINE Verfaillie. Clulas madre adultas: fuentes, caractersticas y perspectivas sobre su uso teraputico. Universidad de Navarra. Pamplona (Espaa)

Instituto Nacional de Enfermedades Neoplsicas. Boletn del INEN. Vol. 29. N1. ISS1017-0642. Lima Per. Enero-junio 2007.

2. Webgrafa
S. Tondeur, Assou S, L Nadal, et al. Biologa y el potencial de clulas madre embrionarias humanas. De Annales de Biologie Clinique de mayo-junio de 2008.Vol 66 nmero 3, 241-7. www.jle.com/fr/revues/bio_rech/abc/edocs/00/04/3D/9F/article.md?type=text.html

34

Miguel MP, Fuentes-Julin S , Martnez-Blzquez A , Pascual CY , Aller MA , Arias J , Arnalich-Montiel F . Immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells: advances and applications. De PubMed: Curr Med Mol. 01 de junio 2012; 12 (5):574-91. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22515979

Seiga Ohmine, Allan B Dietz, Michael Deeds et al. Pluripotent stem cells from GMPgrade hematopoietic progenitor cells and mononuclear myeloid cells. Stem Cell Research & Therapy 2011, 2:46 doi: 10.1186/scrt87. http://stemcellres.com/content/2/6/46

Wesley Jackson M. Leon J Nesti. Rocky Tuan S. Mesenchymal stem cell therapy for attenuation of scar formation during wound healing. Stem Cell Research & Therapy 2012, 3:20 doi:10.1186/scrt111. http://stemcellres.com/content/3/3/20/

Xiaoning Mou , Yuanbo Wu et al. Generation of disease-specific induced pluripotent stem cells from patients with different karyotypes of Down syndrome. Stem Cell Research & Therapy 2012, 3:14 doi:10.1186/scrt105 http://stemcellres.com/content/3/2/14

Toshio Miki. Amnion-derived stem cells: in quest of clinical applications. Stem Cell Research & Therapy 2011, 2:25 doi:10.1186/scrt66. Publicado el: 19 de mayo 2011 2011 BioMed Central Ltd http://stemcellres.com/content/2/3/25

Carlos Ribeiro et al. The secretome of stem cells isolated from the adipose tissue and Wharton jelly acts differently on central nervous system derived cell populations. Stem Cell Research & Therapy 2012, 3:18 doi:10.1186/scrt109. Publicado el: 02 de mayo 2012 2012 Ribeiro et al,. BioMed Central http://stemcellres.com/content/3/3/18

3. Otras referencias consultadas

http://www.embrios.org/celulasmadre/medicina_reparadora.htm http://lascelulasmadre.es/tipos

http://www.embrios.org

35

http://www.cryo-cell.com http://www.biotech.bioetica.org http://www.sangredecordon.com http://www.ugr.es/eianez/biotecnologia http://stemcells.nih.gov/info/basics/basics1.asp http://www.vidacel.cl/news/newsletter_oct2.html http://www.nacersano.org/centro/9388_9914.asp http://www.abn.info.ve/go_news5.php?articulo=8038 http://www.encuentros.uma.es/encuentros54/medula.html http://www.elmundosalud.com/elmundosalud/noticia.html? http://www.mipediatra.com/folletos/sangre-cordon-umbilical.htm http://www.diariomedico.com/grandeshist/numero2000/reportaje3.html http://www.websalud.com/articulo.html?xref=20051111salwsdsal_9&type=Tes& anchor=wsdsalntc

36