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COMO AVALIAR OS EFEITOS DO USO DE PREBITICOS, PROBITICOS E FLORA DE EXCLUSO COMPETITIVA

Renato Luis Furlan, Marcos Macari e Brenda Carla Luquetti
UNESP Universidade Estadual Paulista Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias Campus de Jaboticabal SP, Brasil Email: rlfurlan@fcav.unesp.br

Introduo As tcnicas de manejo, para melhoria do desempenho, esto na dependncia do entendimento do funcionamento dos sistemas orgnicos, pois atravs da manuteno da homeostase, o custo energtico de mantena pode ser reduzido, e como conseqncia, aumentar a produtividade do frango. difcil priorizar um sistema orgnico, pois os mesmos trabalham de forma harmnica e integrada, no sentido de promover o crescimento da ave. Grande parte dos sistemas tem seu desenvolvimento determinado na vida embrionria, em especial, no que se refere ao processo de hiperplasia (aumento do nmero de clulas); outros apresentam apenas processos hipertrficos na vida ps-natal. Assim, o aumento do nmero ou tamanho de clulas nos tecidos so os fatores determinantes do crescimento na vida ps-ecloso do frango. Dentre os tecidos que apresentam desenvolvimento ps-ecloso encontrase o trato digestrio, pois os mecanismos indutores do desenvolvimento da mucosa no trato gastrointestinal (TGI) esto na dependncia de fatores intrnsecos e extrnsecos. A mucosa intestinal tem crescimento contnuo, sendo afetada tanto pelos nutrientes da dieta (caractersticas fsicas e qumicas), como pelos nveis de hormnios circulantes (insulina, tiroxina, triiodotironina, IGF-I, CCK, entre outros). Atualmente, a cincia tem mostrado que o desenvolvimento de funes secretoras e absortivas no TGI esto na dependncia da interao entre nutrientes e expresso de genes. Assim, todo mecanismo de secreo de enzimas (que so protenas), transportadores de membrana, esto na dependncia de estmulos que ativam a transcrio de genes, os quais pelo processo de traduo sintetizam as protenas que tero funes relevantes na digesto e absoro de nutrientes. A busca pela mxima eficincia alimentar na avicultura um ponto crtico a ser considerado nas criaes comerciais. Muitos aditivos, dentre eles os antibiticos, so rotineiramente utilizados em raes para controlar agentes prejudiciais ao processo digestivo, promovendo melhora nos ndices zootcnicos e maximizando a produo. No entanto, fato crescente a restrio, em todo o mundo, ao uso de antibiticos em doses subteraputicas como aditivos na nutrio animal devido a possibilidade do desenvolvimento de resistncia bacteriana. Neste contexto, ingredientes de origem microbiana como probiticos e prebiticos tem merecido especial ateno como uma alternativa ao uso dos tradicionais antibiticos. Embora haja necessidade de mais pesquisas, a utilizao de probiticos e prebiticos representam um avano tecnolgico, aplicando os efeitos benficos propiciados pela natureza s criaes industriais.

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Estas informaes so altamente relevantes, pois atravs do entendimento da regulao do crescimento, e funcionamento da mucosa intestinal, bem como da utilizao de agentes microbianos que tcnicas de manejo sero adotadas, tanto para crescimento, manuteno e reparo da mucosa, frente a diferentes dietas, ou leses induzidas por agentes patgenos, com efeito direto sobre a produtividade da avicultura. Maturao funcional do trato gastrintestinal A organizao morfo-funcional do trato digestivo do frango tem recebido pouca ateno dos pesquisadores, talvez devido ao fato de que o frango seja abatido precocemente. No entanto, considerando que o acelerado crescimento do frango e as necessidades de digerir e absorver nutrientes, bem como a manuteno de estado sanitrio para estes fins, melhor ateno deve ser dada a este sistema funcional da ave. O trato digestrio sofre um processo de maturao na fase ps-ecloso, semelhana do que ocorre com os sistemas termorregulador e imunolgico. Sendo o pinto submetido dieta slida na fase ps-ecloso, h necessidade de um bom entendimento dos processos de desenvolvimento morfo-funcional durante as duas primeiras semanas de vida da ave perodo este que representa nada menos do que 30% do tempo de vida do frango. Assim, Nitsan et al (1991) mostraram que o crescimento alomtrico do pncreas e intestino delgado era 04 vezes maior do que o da carcaa total da ave, durante os 23 primeiros dias de idade. J, o crescimento alomtrico do fgado era ao redor de 02 vezes. Os mesmos autores mostraram que a atividade de enzimas digestivas, no pncreas como contedo intestinal, aumentavam com a idade do frango, com nveis mximos ao redor de 10 dias de idade. O intestino delgado (duodeno, jejuno e leo) tem funo primordial nos processo de digesto, e principalmente na absoro de nutrientes. Grande parte da funo digestiva devida a ao das enzimas (protenas) pancreticas: tripsina, quimiotripsina, amilase, lipase. Neste sentido, nos primeiros dias de vida do frango, a atividade pancretica parece ser determinante em digerir substratos no lmen intestinal. Recentemente, Noy & Skalan (1998) relataram existir pequeno desenvolvimento alomtrico do pncreas nos 12 primeiros dias de idade dos pintos, quando comparado com o desenvolvimento dos segmentos intestinais (duodeno, jejuno e leo), os quais atingiram pico de crescimento entre 6 a 8 dias de idade. Os processos de absoro so totalmente dependentes dos mecanismos que ocorrem na mucosa intestinal. sabido que os carboidratos so aborvidos sob a forma de monmeros, glicose, cujo processo sdio dependente e ocorre atravs de transportadores de membrana. J, os lipdeos absorvidos sob a forma de cidos graxos livres, tambm depende da atividade de transportadores de membrana. O mesmo ocorre com relao aos aminocidos. Assim, a integridade das clulas que compem a mucosa intestinal de fundamental importncia para a absoro dos nutrientes. A mucosa intestinal constituda pr clulas denominadas de entercitos, as quais desenvolvem a capacidade de transportar monmeros para o interior clula e da para a corrente sangnea, atravs da membrana basolateral. A maturao

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dos entercitos ocorre durante o processo de migrao da cripta para a ponta do vilo, e dependente de estmulos para a sua diferenciao. O nmero e tamanho dos vilos depende do nmero de clulas que o compem. Assim, quando maior o nmero de clulas, maior o tamanho do vilo, e pr conseqncia, maior a rea de absoro de nutrientes. Dessa forma, a absoro somente se efetivar quando houver integridade funcional das clulas dos vilos, tanto na membrana luminal quanto na membrana basolateral. Outro fator muito relevante para a absoro dos nutrientes na membrana luminal a quantidade de microvilos existentes nos entercitos. O nmero de microvilos atua como uma amplificador de rea para a absoro dos nutrientes. Yamauchi & Isshiki (1991) mostraram que a densidade de vilos/rea era reduzida com o aumento da idade dos frangos; contudo, este resultado somente evidencia que com o aumento da idade do frango ocorre aumento do tamanho do vilo (Tabela 1). Os dados de Ferrer et al (1991) mostram o fator de amplificao de rea devido a presena dos microvilos (Tabela 2).
Tabela 1 Nmero de vilos/segmento no intestino delgado de frangos (valores aproximados). Cada resultado representa valores obtidos em 830 micrometros quadrados. (Dados de YAMAUCHI & ISSHIKI, 1991) Idade (dias) Duodeno Jejuno leo 1 130 140 235 10 38 38 67 20 25 40 53 30 15 23 40

Sell (1996) compilaram de diferentes autores, o perfil de desenvolvimento de diferentes segmentos no TGI dos frangos (Tabela 3). O pico de desenvolvimento do intestino delgado mostrou ser entre 5 a 7 dias ps-ecloso. Este achado, fortalece a premissa de que a adequada alimentao na primeira semana de idade do pinto tem papel relevante no desempenho do frango.
Tabela 2 Fator de amplificao de rea de diferentes segmentos do intestino delgado e ceco, em funo da densidade de microvilos nos entercitos. (FERRER et al. 1991). Localizao Ceco Jejuno Proximal Mdio Distal Ponta do vilo 24 13 14 33 Meio do vilo 18 30 Cripta 09 11 09 15

Esse desenvolvimento acentuado na capacidade funcional do trato gastrintestinal, logo aps a ecloso parece ser comum as aves domsticas, ocorrendo pequenas variaes entre as diferentes linhagens. Em poedeiras comerciais, por exemplo, o aumento na altura dos vilos e profundidade de cripta mais intenso no duodeno nos primeiros 6 dias de vida ps-ecloso; e aos 10 dias, no jejuno e leo (Uni et al. 1995, 1996, 1998). Em frangos de corte por sua vez, um aumento mais acentuado na altura dos vilos, no duodeno, comea ainda in ovo do 17 dia de incubao at o 7 dia ps-ecloso

5 Simpsio Tcnico de Incubao, Matrizes de Corte e Nutrio 04, 05 e 06 de outubro de 2004 Balnerio Cambori, SC Tabela 3 Peso relativo dos segmentos do TGI de frangos (SELL, 1996) Segmento TGI % do Peso corporal Pico ps-ecloso Referncias Na ecloso No pico cresc. Dias Proventrculo 0,5-0,9 1,4-1,7 3a5 1,2,3 Moela 3,1-4,0 5,8-6,1 3a4 1,2,3 Int. delgado 1,2-2,6 6,2-6,6 5a7 2,3,4 Pncreas 0,1-0,2 0,5-0,8 8a9 2,3,4 Fgado 2,5-2,8 3,8-4,8 6a8 2,3,4 Referncias: 1. Murakami et al,,1991; 2. Dror et al., 1977; 3. Nitsan et al., 1991; 4. Nir et al., 1993

Porqu manter a mucosa Intestinal ntegra? A resposta a esta questo parece-nos bvia. Contudo, a maioria dos tcnicos no do a devida relevncia no sentido de manter a integridade deste tecido, pois consideram que mecanismos de digesto e absoro de nutrientes so inerentes aos mecanismos fisiolgicos do TGI do frango. Assim, ainda no esto devidamente conscientizados que o monitoramento de lotes no pode se restringir a peso e converso alimentar em funo da idade das aves. J salientamos, que programas de controle de qualidade intestinal so excelentes no sentido de monitoramento da integridade anatomo-funcional da mucosa intestinal das aves. Do ponto de vista da produo de frango, a manuteno da sanidade do lote, em especial, s doenas ou agentes que atual no TGI fundamental, pois esta a via de entrada dos nutrientes para o melhor desenvolvimento da ave. Considerando que a rao representa entre 70 a 80% do custo de produo, a integridade dos mecanismos fisiolgicos de digesto e absoro dos nutrientes, isto , a integridade das clulas epiteliais da mucosa, assegura o bom desempenho e produo. Outro fator relevante neste processo relaciona-se ao tempo de turnover celular, isto , o tempo necessrio para que uma clula originada no processo mittico entre cripta-vilo, demora para migrar para a ponta do vilo e descamar para o lmen intestinal. sabido que este tempo oscila entre 90 a 96 horas, ou seja, aproximadamente 4 dias. Este perodo de tempo parece curto; contudo, considerando o tempo de criao do frango representa nada menos do que 10% do tempo de vida da ave. Assim, se considerarmos uma perca de 10% em nosso sistema de produo devido a distrbios da mucosa intestinal, em um lote de 20 mil aves, teramos uma quebra de nada menos do que 5 toneladas de peso/lote. Agente trfico sobre a mucosa intestinal do frango Agente trfico aquele que estimula o desenvolvimento da mucosa intestinal, ou seja, estimula o processo mittico na regio cripta-vilo, e como conseqncia aumenta o nmero de clulas e tamanho do vilo. Dessa forma, um agente trfico determina um aumento na quantidade de DNA, pois aumenta o nmero de clulas. Hormnios e peptdeos tm ao trfica na mucosa intestinal, e o mesmo ocorre com os nutrientes presentes no lmen intestinal. Vrios agentes parecem ter ao trfica sobre a mucosa intestinal, dentre eles encontram-se: aminas biognicas, amino cidos (como glutamina), MOS (mananoligossacarides) e FOS (frutoligossacarideos), prebiticos, probiticos.

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Muitos destes agentes so indutores de mecanismos de transcrio gnica pela ativao de enzimas importantes no processo mittico na regio cripta-vilo. Pr exemplo, a induo da enzima ODC (ornitina-descarboxilase) que uma enzima importante no processo de proliferao celular parece ocorrer quando da presena de glutamina. Outros tm ao indireta, ou seja, favorecem os mecanismos de proliferao pr permitir maior sanidade na mucosa intestinal atravs de processos denominados de excluso competitiva. A glutamina o aminocido em maior quantidade no tecido muscular e no plasma, tendo sido observado importantes efeitos deste aminocido sobre a reconstituio da mucosa intestinal, pois o principal substrato para os entercitos. Por outro lado, a oxidao da glutamina estimula a troca de sdio/hidrognio (Na+/H+) na membrana luminal do entercito, levando a maior absoro inica (Rhoads et al., 1997). Estudos realizados com ratos, mostraram que quando os mesmos eram alimentados cronicamente pela via parenteral, a adio de glutamina prevenia a hipoplasia da mucosa intestinal; contudo, os mecanismos pelos quais a glutamina estimula a proliferao da mucosa intestinal no bem conhecido, tendo sugerido dois processos: a. aumento da troca inica e aumento da atividade da enzima ornitina descarboxilase (ODC) (Rhoads et al., 1997). Outro pesquisador tem sugerido que a glutamina possa ativar a transcrio de genes pelo aumento da atividade da protena quinase, a qual ativa a mitognese (Blikslager et al., 1997). Estudos em nossos laboratrios mostraram que a adio de 1% de Lglutamina na dieta de frangos, a base de milho e farelo de soja, foi capaz de aumentar o tamanho dos vilos, no duodeno e leo, quando avaliado nos primeiros 07 dias de vida do pinto (Tabela 4).
Tabela 4 Comprimento de vilo, profundidade de cripta e relao vilo/cripta nos segmentos do intestino delgado, em pintos de 07 dias de idade e suplementados com 1% de Lglutamina na rao. Segmento Inst. Regio da Mucosa Tratamentos Controle 1% L-glutamina Duodeno 1060 1139 Vilo (m) 183 123 Cripta(m) 5,8 9,5 Vilo/cripta(m/m) Jejuno 546 595 Vilo (m) 84 96 Cripta(m) 6,5 6,8 Vilo/cripta(m/m) leo 450 505 Vilo (m) 92 92 Cripta(m) 5,0 5,5 Vilo/cripta(m/m)

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Adaptao molecular da mucosa intestinal Aps a perda de grandes reas na mucosa intestinal responsveis pela digesto e absoro de nutrientes, seja resseco de parte do intestino delgado ou pela ao de agentes patognicos, o epitlio remanescente torna-se hiperplsico com maior altura de vilo e profundidade de cripta (Dowling, 1992; Porus, 1965). A produo de clulas na cripta aumento e o mesmo ocorre com o nmero de clulas que compem o vilo, sendo que este processo apresenta velocidade considervel. Assim, devido ao aumento da mucosa intestinal, o intestino como um todo apresenta maior capacidade de absoro de nutrientes e eletrlitos (Dowling, 1992; Dowling & Booth, 1967; Williamson et al., 1978a,b). Apesar do mecanismo proliferativo da mucosa ter sido mostrado j faz algum tempo, o status de diferenciao celular das clulas epiteliais (novos entercitos) tem sido assunto de muitos estudos, e ainda no se encontra elucidado. A capacidade destes novos entercitos em responder de forma aguda, ou seja, apresentarem capacidade absortiva precoce assunto sob investigao. Trabalhos tm sugerido que a proliferao celular na cripta determina o aparecimento de entercitos imaturos que apresentam baixa capacidade absortiva, bem como reduzida atividade das enzimas na bordadura em escova (Buts et al., 1987; Gleeson et al., 1972; Menge & Robinson, 1978). Outros pesquisadores j evidenciaram que a resposta dos novos entercitos resseco ou leso da mucosa mais complexa (Albert & Young, 1992; Chaves et al., 1987; Dowling, 1992). Por exemplo, a atividade de certas enzimas de membrana estariam aumentadas nestas clulas (Dowling, 1992). A forma de elucidar estes mecanismos est sendo possvel atravs de tcnicas que envolvam a expresso de genes responsveis pela sntese de protenas (enzimas) as quais atuam como enzimas digestivas ou transportadores de membrana. Assim, a anlise molecular da resposta enteroctica poder responder de forma confivel aos processos da diferenciao dos entercitos nos diferentes segmentos do intestino delgado ou ceco das aves. Estudos recentes sobre os mecanismos moleculares da adaptao dos entercitos tm sido publicados. Assim, aps a resseco de parte do intestino delgado, Rubin et al (1996) mostraram que 48 horas aps a resseco, a poro remanescente da mucosa intestinal j apresentava no entercitos um aumento de at trs vezes na expresso de genes responsveis pelos mecanismos absortivos da mucosa, ou seja, aumento do mRNA de FABP (proteina carreadora de cidos graxos) e apolipoproteina A-I (Apo A-I). Estes achados moleculares evidenciam que os entercitos so capazes de responder de forma aguda s transformaes no intestino delgado, em especial a reduo da superfcie absortiva, atravs da expresso de genes que codificam a sntese de protenas de transporte de nutrientes. Estudos de nosso laboratrio tm mostrado que a expresso de ODC (ornitina decarboxilase est reduzida durante o jejum alimentar). O trabalho de Adams et al. (1996) evidencia a adaptao molecular da mucosa intestinal quando da afeco com Eimeria acervulina, no que concerne a atividade enzimtica. Estes pesquisadores mostraram que ocorre um aumento da atividade da maltase na bordadura em escova do jejuno e leo de frangos experimentalmente infectados (Tabela 5). A reduo da atividade no duodeno, onde ocorre a leso foi compensada pelo aumento da atividade da enzima no jejuno e leo (regies com ausncia de leso). Este mecanismo compensatrio

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parece ser induzido pela presena do alimento que ativa genes que transcrevem a sntese da enzima.
Tabela 5 Efeito da infeco com E. acervulina sobre a atividade da maltase na bordadura em escova da mucosa intestinal de frangos adaptado de Adams et al. (1996) Atividade da maltase (U/g de protena) o N de oocistos Duodeno Jejuno leo 0 143 211 140 50.000 91 225 225 100.000 87 239 311 200.000 68 296 320 400.000 39 229 295 Obs: Oocisto de E. acervulina. Atividade da enzima expressa em (/g de protena, sendo que uma o unidade (U) a quantidade de enzima capaz de quebrar 1 mol de substrato/min a 37 C. Maltase EC 3.2.1.20

O muco uma glicoprotena insolvel em gua, secretada pelas clulas caliciformes. Quando a mucosa sofre processo de agresso ocorre aumento do nmero de clulas caliciformes na vilosidade intestinal. A espessura da camada de muco varivel de espcie para espcie, mas tem sido relatado espessura entre 160 a 650 micrometros. Sua funo protetora est relacionada, basicamente, contra a ao mecnica, pois devido a grande aderncia superfcie, o muco nunca totalmente removido, mesmo durante a ao de foras mecnicas vigorosas que ocorrem durante a digesto. Pr outro lado, a viscosidade extremamente importante para impedir fraturas na camada de muco, e propiciar o desencadeamento de processos lesivos na mucosa. Tem sido aceito que o muco protege o epitlio quando da passagem de alimento, e tem poder lubrificante sobre alimentos slidos. A camada de muco, tem papel importante, tambm, na proteo contra infeces, pois funciona como barreira protetora que impede o contato de microorganismos com as clulas epiteliais. O muco do intestino delgado, ceco e colon/reto contm uma rica populao de bactrias e protozorios, as quais ligamse s glicoprotenas e no sofrem aderncia mucosa. Os componentes da mucina, funcionam como falsos receptores para os microorganismos, fazendo com que os mesmos sejam envoltos pela camada de muco e no expressando sua capacidade patognica. importante salientar que as clulas caliciformes, produtoras de muco, aumentam suas descargas e depletam-se de secreo durante um processo infeccioso no intestino delgado. Esta atividade aumentada parede ser devido a ao de enterotoxinas que estimulam a atividade secretria das clulas caliciformes. Este mecanismo parece estar associado tentativa das clulas epiteliais em proteger a mucosa dos agentes patognicos. Situaes em que a camada de muco reduzida, como jejum, alteraes de dieta ou uso de antibiticos, podem ocasionar reduo da camada protetora de muco e, propiciar a ao de bactrias e protozorios patognicos que causam leses nas clulas, destruindo a mucosa. Microflora intestinal A microbiota intestinal das aves composta de inmeras espcies de bactrias, formando um sistema complexo e dinmico. Aquelas que colonizam o trato intestinal no incio, tendem a persistir ao longo da vida da ave, passando a

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compor a microbiota intestinal. A formao desta microbiota se d imediatamente aps o nascimento das aves e aumenta durante as primeiras semanas de vida, at se tornar uma populao predominantemente de bactrias anaerbicas. Os principais gneros identificados so: Bacillus, bifidobacterium, clostridium, enterobacter, lactobacillus, fusubacterium, escherichia, enterococcus, streptococcus. No entanto, Apajalahti et al. (2004) utilizando tcnicas de DNA microbiano encontraram que 90% das bactrias encontradas no trato gastrintestinal das aves so desconhecidas. Com relao a densidade, recentes dados mostram que o nmero de bactrias pode alcanar 10 11 e 10 9 por grama de contedo cecal e ileal, respectivamente, durante os primeiros 3 dias pos ecloso, permanecendo relativamente estvel nos prximos 30 dias (Apajalahti et al., 2004). O nmero e composio dos microorganismos da microflora intestinal das aves varia consideravelmente ao longo do TGI. No inglvio existe a predominncia de lactobacilos, que produzindo cido ltico e actico reduzem o pH, impedindo o crescimento de bactrias. O pH no proventrculo e moela extremamente baixo, e poucas bactrias so capazes de tolerar este ambiente. No duodeno, o pH neutro e os microorganismos colonizam este segmento do intestino delgado, bem como o jejuno e leo. O ceco reconhecido como o segmento de maior colonizao de microorganismos, sendo que grande nmero de bactrias Gram positivas e negativas esto presentes neste local. As bactrias no TGI podem encontrar-se, tanto associadas intimamente com o epitlio, ou livres na luz intestinal. As bactrias livres devem multiplicar-se rapidamente para compensar a eliminao pelo peristaltismo intestinal ou ainda agregar-se s demais bactrias que se encontram aderidas na mucosa intestinal. Esta variada composio da microflora intestinal pode ser tanto benfica quanto malfica para o hospedeiro, dependendo da natureza e da quantidade de microorganismos. Os efeitos malficos seriam: diarria, infeces, distrbios hepticos, carcinognese, putrefao intestinal, reduo da digesto e absoro de nutrientes. J, os benefcios estariam vinculados inibio do crescimento de bactrias patognicas, estmulos ao sistema imune, sntese de vitaminas, reduo da produo de gases e melhor digesto e absoro dos nutrientes. A concepo de que o desenvolvimento de microflora poderia levar a prejuzos em lotes de frangos, seja pela concorrncia pelo alimento ou devido a leses provocadas diretamente na mucosa intestinal pelas bactrias patognicas, levou a utilizao de aditivos - os antibiticos, os quais foram erroneamente denominados de promotores de crescimento. Entretanto, com a preocupao de que estes aditivos possam induzir resistncia a patgenos importantes para os seres humanos, muitos pases esto proibindo, ou em fase de proibio, da utilizao dos mesmos em rao para frangos. Assim, algumas alternativas tm sido buscadas para promover o equilbrio na microbiota intestinal dos frangos, a fim de obter um bom desempenho produtivo, sem riscos para a sade humana. Trabalhos tm mostrado que possvel estabelecer um sistema de proteo da mucosa intestinal, com proteo contra microorganismos patognicos, e como conseqncia manuteno da homeostase do TGI dos frangos. Os mecanismos pode-se reduzir ou excluir o crescimento de patgenos so classificados em quatro categorias:

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a) b) c) d)

criao de um ambiente hostil a outras bactrias; eliminao da viabilidade de stios receptores de outras bactrias; produo de secrees que tm ao antimicrobiana; competio por nutrientes na luz do intestino.

Como as bactrias derem mucosa intestinal Existe ainda um prolongamento polissacardeo do entercito que penetra no lmen intestinal constituindo no chamado glicocalix ou fimbria. Esta estrutura tem funes importantes, sendo uma delas a manuteno da camada aquosa prxima mucosa intestinal, em pH neutro, que permite a ao de enzimas de membrana. Outra funo do glicocalix est associada presena de receptores que so capazes de ligar-se bactrias patognicas e no patognicas(que expressam fimbria ou glicocalix), e neste sentido manter a sanidade da mucosa intestinal. As bactrias tm capacidade de aderir tenazmente superfcies mais estranhas, desde o esmalte dos dentes, pulmes, intestino e at a uma rocha submersa em um rio. Este processo de aderncia feito atravs de polissacardeos - molculas de acares ramificados, que se estendem da parede externa da bactria formando uma estrutura glicocalix ou fimbria, que envolve a clula ou mesmo uma colnia de bactrias. A aderncia das bactrias mediadas pelo glicocalix que determina a localizao das mesmas nos diferentes ambientes, e o maior determinante do incio do processo de progresso das doenas bacterianas. interessante salientar que a demonstrao da presena do glicocalix polissacarideos, nas bactrias somente foi feita em 1969 pelos pesquisadores Ivan L. Roth, na Universidade da Gergia USA e Ian W. Sutherland, da Universidade de Edinburgh Esccia. Desde esta poca, estudo tm mostrado a importncia dos polissacardeos (glicocalix) na aderncia das bactrias aos diferentes sistemas orgnicos e inorgnicos. interessante salientar, ainda, que a natureza qumica do glicocalix pode sofrer alteraes, em funo da composio de acares que compem os polissacardeos. Pesquisadores mostraram, tambm, que os microorganismos quando em meio de cultura no produzem o glicocalix, aparentemente utilizando as reservas para multiplicao, e no aderncia, a qual no necessria nestas circunstncias. Considerando que os entercitos no intestino delgado tambm apresentam seu glicocalix, a colonizao pr bactrias nos diferentes segmentos parece estar na dependncia da aderncia do glicocalix de uma bactria com o glicocalix do entercito. Este mecanismo parece ser aquele que regula todo o processo de colonizao das bactrias no intestino delgado e ceco dos frangos, na fase psecloso. Foi mostrado, que o elo de ligao entre o glicocalix, em muitos casos, pode ser uma protena denominada de lectina, a qual se liga especificamente a um polissacardeo com estrutura molecular peculiar. Pesquisas tm sugerido que o posicionamento do glicocalix no apenas atua como um sistema de aderncia da bactria ao entercito, mas pode armazenas e concentrar as enzimas digestivas produzidas pelas bactrias, enzimas estas que atuam diretamente sobre a mucosa do hospedeiro liberando substratos importantes para a sobrevivncia e multiplicao do microorganismo. Neste sentido, a estrutura do glicocalix funciona como um reservatrio de nutrientes

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para as bactrias. Outra funo relevante do glicocalix a de proteo, pois as bactrias esto sendo constantemente submetidas a estresses, pr exemplo, outras bactrias, virus, ons e molculas deletrias. A aderncia mucosa intestinal parece, portanto, o mecanismo chave da colonizao das bactrias patognicas, e seus efeitos nocivos sobre a sade intestinal. Assim, processos que possam prevenir a aderncia das bactrias so eficazes em reduzir a colonizao pr patgenos, nos segmentos do TGI. Trs procedimentos so propostos para reduzir a aderncia bacteriana: a. promover a quebra dos mecanismos que sintetizam o glicocalix, principalmente pela inibio da polimerase bacteriana que estabelece os elos de ligao dos acares no polissacaride; b. desenvolver compostos que ocupam e bloqueiam o loco ativo de ao da lectina, que liga os glicocalix da bactria com o do entercito; c. estabelecer bloqueio dos receptores nas clulas hospedeiras, evitando assim a ligao do glicocalix bacteriano com o glicocalix do entercito. Dentre as propostas acima, o uso de oligossacardeos (frutoligossarides e mananoligossacarides), que fazem parte dos chamados prebiticos parecem ser efetivos em reduzir colonizao, pois atuam inibindo a aderncia das bactrias ao entercito, atravs da ligao com o glicocalix. A excluso competitiva, assunto que ser discutido em outra palestra deste Simpsio, tambm tem como princpio a aderncia de bactrias no patognicas, a stios de ligao dos entercitos (glicocalix) nos diferentes segmentos do TGI. Probiticos, prebiticos e simbiticos sobre o desempenho de frangos Na avicultura de corte moderna o que se busca atualmente atravs do desenvolvimento de novas tcnicas de manejo, uso de tecnologia moderna, controle sanitrio e constante melhoramento gentico , indubitavelmente a reduo nos custos de produo e o aumento da produtividade. Portanto, por vrios anos o setor avcola lanou mo de algumas ferramentas que foram responsveis pelo maior crescimento e rendimento dos animais, dentre elas, os chamados aditivos que tm sido utilizados em raes com a finalidade de melhorar o processo digestivo e promover melhor desempenho zootcnico das aves. Entre os aditivos mais empregados para promover o crescimento esto os antibiticos, que representam um grupo de compostos com estrutura qumica heterognea e com propriedades fsico-qumicas e espectros de ao diferentes, tendo como nico ponto comum a capacidade antibacteriana. Alm disso, segundo Vassalo et al. (1997), os antibiticos so adicionados s dietas com o intuito de controlar os agentes prejudiciais ao processo digestivo e propiciar os efeitos benficos na absoro de nutrientes. No entanto, o uso indiscriminado dos antibiticos pode resultar no desenvolvimento de populaes bacterianas com possvel resistncia, dificultando assim o seu uso (Fuller, 1989). Alm disso, podem quebrar a simbiose entre a microbiota desejvel e o animal (Mulder, 1991). Podem tambm se acumular nos tecidos animais e estes, ao serem ingeridos, podem causar uma resistncia da microbiota humana ao antibitico utilizado, e ainda causar resistncia cruzada s terapias antibiticas em humanos e outros animais (Kelley et al., 1998). Sensibilizados com os problemas relatados acima, pesquisadores de todas

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as partes do mundo passaram a procurar outras alternativas, pois a pura e simples retirada dos antibiticos, como promotores de crescimento, causaria srios problemas na produo da protena animal, devido queda no desempenho. Uma alternativa seria o uso dos probiticos, no como substitutos dos antibiticos, mas sim, como uma alternativa eficaz e econmica para que os antibiticos sejam utilizados quando realmente necessrios. Entretanto devido a uma srie de fatores que afetam a ao desses produtos, os resultados do experimentos at ento obtidos so contraditrios, necessitando, portanto, de um maior esclarecimento sobre seus reais efeitos no intuito de assegurar futuramente sua utilizao como alternativa aos tradicionais promotores de crescimento. De acordo com Hasler (1998) e Young (1998) o mercado de probiticos mais desenvolvido na Europa, onde um nmero muito grande de produtos esto disponveis, gerando uma renda anual estimada em 2 milhes de dlares. J nos EUA, a curiosidade sobre a bactria probitica ocasionou um rpido crescimento (22%) em torno do mercado desses produtos (Sanders, 1998). A primeira informao sobre leites fermentados (um exemplo de probitico) influenciando a sade foi reconhecida por Metchnikoll (1907), baseado na longevidade dos camponeses da Bulgria, que consumiam grandes quantidades de leite fermentados com Lactobacillus acidophilus. Esta longevidade foi atribuda baixssima incidncia de cncer de clon e a proteo contra infeces gastrintestinais ao consumo de grandes quantidades de leite fermentado por bactrias produtoras de cido lctico. Em 1960, Richard Parker usou pela primeira vez o termo probitico, que significa a favor da vida. A partir da, enfatizou-se os estudos sobre a populao de microrganismos no patognicos presente no trato digestrio, tanto dos animais domsticos como dos seres humanos (Jin et al., 1997). O conceito moderno de probitico foi definido pr Fuller (1989) como sendo um suplemento alimentar constitudo de microorganismos vivos capazes de beneficiar o hospedeiro atravs do equilbrio da microbiota intestinal. Posteriormente, o mesmo autor considerou que para serem considerados como probiticos, os microorganismos deveriam ser produzidos em larga escala, permanecerem estveis e viveis em condies de estocagem, serem capazes de sobreviver no ecossistema intestinal e possibilitar ao organismo os benefcios de sua presena. H probiticos com diferentes composies de microrganismos e, mesmo os que possuem a mesma espcie, as cepas podem ser diferentes. A eficcia do probitico estritamente dependente da quantidade e caractersticas das cepas do microrganismo utilizado na elaborao do aditivo alimentar (Tornut, 1998). A ao benfica dos probiticos de uso em avicultura se faz em duas aes principais: 1- determinando melhores ndices zooeconmicos, maior produtividade, aumento no ganho de peso e melhor converso alimentar e 2reduo da colonizao intestinal por patgenos (Silva, 2000). O mecanismo de ao dos probiticos esto relacionados a competio por stios de ligao ou excluso competitiva, ou seja, as bactrias probiticas ocupam o stio de ligao (receptora ou pontos de ligao) na mucosa intestinal formando uma barreira fsica s bactrias patognicas. Assim, as bactrias seriam excludas por competio de espao. Fmbrias so os elementos de aderncia bacteriana mais conhecidas e estudadas. So estruturas como plos compostos por fosfoglicoprotenas que se projetam do corpo bacteriano. Seus receptores so especficos e se diferem entre espcies de aves e as diferentes

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pores anatmicas, ao longo do trato intestinal. Algumas bactrias somente se aderem superfcie superior dos entercitos, enquanto que outras residem nas criptas onde so produzidas as novas clulas epiteliais que migram at o topo das vilosidades. (Dobrogosz et al., 1991 e Tornut, 1998). Alm disso, verificou-se a competio por nutrientes as bactrias dos probiticos se nutrem de ingredientes parcialmente degradados pelas enzimas digestivas normais das aves. A competio por nutriente no ocorre entre a ave e a bactria, mas sim entre as bactrias intestinais por seus nutrientes especficos. Tambm foram relatados que os probiticos realizam a produo de substncias antibacterianas (cidos orgnicos e bacteriocinas) e enzimas; como tambm o estmulo ao sistema imune as bactrias probiticas tm capacidade de respostas imunes sistmicas aumentado o nmero e atividade de clulas fagocticas do hospedeiro. As aves possuem acmulos de tecido linftico espalhados ao longo do trato intestinal que so as placas de Peyer, tonsilas cecais, alm da Bolsa de Fabrcius. Esses tecidos captam antgenos disponibilizados no trato digestrio, que estimulam as clulas B precursoras de IgA e, clulas T colaboradoras das placas de Peyer, para desenvolvimento de uma imunidade geral e inespecfica. Pelo estmulo imunolgico da mucosa, ocorre produo de anticorpos tipo IgA, que bloqueiam os receptores e reduzem o nmero de bactrias patognicas na luz intestinal. Alm disso, produzem ativao de macrfagos e proliferao de clulas T (Silva, 2000) As bactrias probiticas tambm protegem os vilos e as superfcies absortivas contra toxinas irritantes produzidas pelos microrganismos patognicos, permitindo, assim, a regenerao da mucosa intestinal lesada (Dobrogosz et al., 1991). O modo de administrao dos probiticos pode ser o mais variado possvel, utilizando-os em curtos perodos ou continuamente, de acordo com a finalidade, como por exemplo reduzir ou limitar a populao de enterobactrias patognicas, permitindo assim uma melhor absoro dos nutrientes e, conseqentemente estimulando o crescimento e a produo das aves (Dale, 1992). Tm-se relatado que a administrao precoce de probiticos para neonatos diminuram os ndices de mortalidade e para aves jovens, melhoraram o seu desempenho (Fox, 1988 e Edens et al., 1997). De acordo com Tibiletti (1993), em casos de diminuio das defesas orgnicas, o uso do probitico pode ser vantajoso pela normalizao da flora intestinal e pelo aumento da resistncia das aves ao estresse. Jin et al. (1998) forneceram na dieta de frangos 0,05, 0,10 ou 0,15% de uma cultura contendo 12 estirpes de quatro espcies de bactrias aderentes (L. acidophilus, L. fermentum, L. crispatus e L. brevis) isoladas de intestinos de aves e contendo 109 clulas/g. Melhora significativa foi encontrada no desempenho com a utilizao de 0,105 de cultura de Lactobacillus sp., sendo esta melhoria atribuda a capacidade de colonizao das bactria, que tinham forte aderncia ao epitlio, sendo resistentes bile e acidez do TGI. Os prebiticos so ingredientes alimentares que no so digeridos na poro proximal do TGI de monogstricos, e que proporcionam efeito benfico hospedeiro pr estimular seletivamente o crescimento e/ou metabolismo de um limitado grupo de bactrias no clon (Gibson & Roberfroid, 1995). Outro aspecto importante que, para ser considerado um prebitico, o ingrediente no pode ser hidrolisado ou absorvido no intestino anterior (intestino delgado), seja um substrato seletivo para um determinado grupo de bactrias comensais benficas, seja capaz de alterar de forma benfica a microbiota intestinal e induza efeitos

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luminais ou sistmicos que sejam benficos ao hospedeiro (Gibson & Roberfroid, 1995). Assim, carboidratos no digerveis como oligossacardeos, alguns peptdeos e lipdeos no digerveis podem ser considerados como prebiticos. Entretanto, as substncias que tm sido mais estudadas como aditivos em alimentao animal so os oligossacardeos, especialmente os frutoligossacardeos (FOS), glucoligossacardeos (GOS) e mananoligossacardeos (MOS). FOS so polmeros ricos em frutose, podendo ser naturais, derivados de plantas (inulina) ou sintticos, resultante da polimerao da frutose (Gibson e Roberfroide,1995). GOS e MOS so obtidos a partir de parede celular de leveduras. A parede celular de leveduras consiste principalmente de protena e carboidrato, a qual contm os dois principais acares (glucose e manose) em propores semelhantes e N-acetilglucosamina. O MOS, usado como aditivo de raes, consiste de fragmentos de parede celular de Saccharomyces cerevisae com uma estrutura complexa de manose fosforilada, glucose e protena (Spring, 1996). A alterao da microbiota intestinal causada pelo uso de prebiticos pode ocorrer de duas maneiras: atravs do fornecimento de nutrientes para as bactrias desejveis ou atravs do reconhecimento, pelas bactrias patognicas, de stios de ligaes nos oligossacardeos como sendo da mucosa intestinal, reduzindo a colonizao intestinal indesejvel, resultando em menor inicidncia de infeces e melhor integridade da mucosa intestinal, tornando esta para exercer suas funes (Iji e Tivey, 1998). Para que as bactrias consigam colonizar o trato intestinal e criar uma condio patolgica, precisam inicialmente aderir-se superfcie epitelial. Esta adeso ocorre atravs de glicoprotenas (lectinas ou fmbrias) que reconhecem determinados acares da superfcie do epitlio intestinal. Portanto, se eles se ligarem a um acar ou oligossacardeo diettico, e no mucosa intestinal, iro passar com a digesta sem causar problemas digestivos para os animais. Desta forma, os mananoligossacardeos so capazes de bloquear a aderncia dos patgenos e evitar a colonizao (Collett, 2000; Close, 2001). Recentes estudos em nossos laboratrios mostraram os efeitos da adio de parede celular de S. cerevisiae, a qual constituida de mananoligossacarde (MOS) sobre o desenvolvimento da mucosa intestinal de frangos (Tabelas 6 e 7). Os resultados mostram que a adio deste prebitico na rao de frangos tem efeito sobre o desenvolvimento das vilosidades intestinais, com aumento significativo (P < 0,05) da altura do vilo, nos 03 segmentos do intestino delgado, sendo este efeito mais acentuado na primeira semana de vida do frango. Contudo, o ganho de peso das aves tratadas com parede celular de S. cerevisiae mostraram-se maior (P < 0,05) aos 42 dias de idade, quando comparada com os frangos no tratados com este prebitico.

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Tabela 6 Altura do vilo (AV), profundidade da cripta (PC) e relao vilo/cripta (V/C) no duodeno, jejuno e leo de frangos tratados e no tratados com prebitico, aos 07 dias de idade. Tratamentos Controle 0,1% Prebitico* 0,2% Prebitico Duodeno b ab a AV (m) 85641 98549 1040111 PC (m) 557 689 613 V/C(m/m) 152 151 172 Jejuno b a a AV (m) 39250 50722 49638 b b a PC (m) 587 554 392 c b a V/C(m/m) 70,3 90,6 130,9 leo b a a AV (m) 32552 41347 42229 PC (m) 424 517 539 V/C(m/m) 80,9 81,4 81,5 *O prebitico utilizado foi parede celular de S. cerevisiae (Pronady 500), da empresa PRODESA S/A. Mdias seguidas de letras diferentes nas linhas, diferem entre si P < 0,05.

Tabela 7 Consumo de rao (CR), ganho de peso (GP) e converso alimentar (CA) de frangos tratados ou no com prebitico na rao at 42 dias de idade. Parmetros Tratamentos Controle 0,1% Prebitico* 0,2% Prebitico Cons. de rao (g) 4.19864 4.27231 4.24429 b ab a Ganho de peso (g) 245012 2.53820 2.5908 Conv. alimentar 1,7120,08 1,6840,06 1,6390,04 *O prebitico utilizado foi parede celular de S. cerevisiae (Pronady 500), da empresa PRODESA S/A. Mdias seguidas de letras diferentes nas linhas, diferem entre si P < 0,05.

O uso de simbiticos, ou seja, associao de prebiticos e probiticos tambm pode ser uma alternativa interessante no sentido de melhorar a sanidade do intestino delgado e ceco dos frangos, atravs dos mecanismos fisiolgicos e microbiolgicos acima discutidos. Assim, em um experimento, recentemente utilizado em uma granja comercial (FRANGO SERTANEJO) foi testada a eficincia de utilizao de simbiticos na rao de frangos. Os resultados so mostrados na Tabela 8, e evidenciam uma melhora no ganho de peso e converso alimentar dos lotes tratados com simbiticos.
Tabela 8 Consumo de rao (CR), peso final (PF), converso alimentar (CA) e converso alimentar corrigida (CAC) nos diferentes tratamentos. Parmetros Tratamentos Controle Prebitico* Simbitico** Cons. Rao (g) 4.849 5.034 5.188 Peso final (g) 2.432 2.531 2.580 Conv. alimentar 1,994 1,989 2,011 Conv. Alim. corrigida 2,249 1,878 1,714 * Prebitico utilizado foi parede celular de S. cerevisiae (PRONADY 500), da empresa PRODESA S.A, sendo adicionado 0,2% do produto na rao ** O probitico utilizado foi B. subtilis (Calsporin) da empresa FATEC, sendo adicionado 0,2% do produto na rao.

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Outros aditivos promotores de crescimento podem serem utilizados para aves como o exemplo dos acidificantes orgnicos ou cidos orgnicos. O termo utilizado para cidos graxos volteis, de cadeia curta, eventualmente chamados de fracos. Os cidos orgnicos mais utilizados como aditivos para frangos de corte so o actico, propinico, butrico, frmico, fumrico e ctrico. A promoo de crescimento determinada pelo uso de cidos orgnicos pode ser devido a um efeito inibidor do desenvolvimento e proliferao de enterobactrias no trato digestrio; reduo do pH na parte superior do intestino delgado; potencializao dos ganhos nutricionais das dietas promovendo um aumento de disponibilidade de nutrientes (Gonzales e Sartori, 2001). O intestino delgado atua como uma interface entre o ambiente interno e o externo dos frangos de corte e a sua mucosa intestinal encontra-se em uma condio dinmica. O processo normal de renovao celular decorrente de dois eventos citolgicos primrios associados: renovao celular (proliferao e diferenciao), resultante das divises mitticas sofridas por clulas totipotentes localizadas na cripta e ao longo dos vilos (Uni et al., 1998) e perda de clulas por descamao, que ocorre naturalmente no pice dos vilos. A manuteno do nmero de clulas e da capacidade funcional do epitlio intestinal assegurada pelo equilbrio entre estes dois processos (perda e proliferao celular). Porm quando o intestino responde a algum agente estimulador, a favor de um deles, deve ocorrer uma modificao na altura dos vilos (Uni et al., 2000). Portanto, se ocorre aumento na taxa de mitose com ausncia, diminuio ou manuteno da taxa de extruso, dever haver um aumento no nmero de clulas e, consequentemente, observa-se maior altura dos vilos com ou sem pregueamento da parede dos mesmos, e aumento na densidade de vilos e microvilos. Se o estmulo levar a uma maior taxa de extruso, havendo manuteno ou reduo na taxa de proliferao, o intestino dever responder com uma reduo na altura dos vilos e, consequentemente, reduo na taxa de digesto e absoro (Macari, 1995). Se o vilo reduz o seu tamanho em decorrncia do aumento da taxa de perda celular, conseqentemente ocorrer um aumento na produo de clulas da cripta e, geralmente, aumento da profundidade da cripta. Em frangos de corte, o tempo necessrio para a renovao celular de 72 a 96 horas. Em comparao ao ciclo de vida atual desta ave, este tempo se torna relativamente longo, aproximadamente 10% (Macari et al., 1994). Alguns trabalhos tm mostrado as vantagens em se utilizar probiticos sobre a integridade do TGI, dentre eles Dobrogosz et al. (1991), onde adicionaram Lactobacillus reuteri na rao de aves observaram maior comprimento e profundidade da cripta, indicando o benefcio da utilizao de probiticos sobre a integridade da mucosa. Loddi (1998)observou que as vilosidades intestinais se mantiveram ntegras apenas com o uso de aditivos na dieta (antibiticos e probiticos), uma vez que o intestino delgado de frangos no suplementados coma aditivos, independente de sua poro, apresentou vilosidades alteradas em sua forma e integridade, principalmente no duodeno. Outros estudos mostraram o efeito da adio de parede celular de Sacharomyces cerevisiae sobre a mucosa intestinal. Os resultados mostram que houve um aumento significativo na altura dos vilos nos trs segmentos do intestino delgado, sendo este efeito mais acentuado na primeira semana de vida (Macari & Maiorka, 2000). Bradley et al. (1994) ao suplementarem a dieta de frangos com 0,02% de Saccharomyces cerevisiae var. boulardii relataram

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mudanas no peso corporal e na morfologia ileal com diminuio das clulas globet e profundidade de cripta. Spring et al. (2000) mostrou que o uso de mananoligossacardeo como aqueles derivados da parede celular de Saccharomyces cerevisiae adicionado na dieta de frangos de corte reduziu a concentrao de Salmonella typhimurium 29E no ceco. Santin et al. (2001) testando diferentes concentraes de parede celular de Saccharomyces cerevisiae (0,0; 0,1 e 0,2%) adicionada rao de frangos de corte, demonstraram aumento do ganho de peso no perodo experimental total (42 dias) e aumento da altura dos vilos no intestino dos frangos aos 7 dias de idade suplementadas com 0,02%. (Tabela 9). Em um outro experimento, os frangos que receberam rao com parede celular de Saccharomyces cerevisiae a 0,2% tambm mostraram aumento do ganho de peso e converso alimentar. Os autores atriburam essa melhora ao efeito trfico desse produto na mucosa intestinal devido ao aumento da altura dois vilos do intestino, principalmente durante os primeiros 7 dias de vida dos pintos.
Tabela 9. Altura de vilo (m) e profundidade de cripta (m) das pores do intestino delgado (duodeno, jejuno e leo) de frangos de corte com diferentes idades, alimentados com parede celular de Saccharomyces cerevisiae. Tratamento* Altura de vilo (m) Profundidade de cripta (m) 7 dias de idade Duodeno Jejuno leo Duodeno Jejuno leo b b b b 0% 856 392 325 55 58 42 ab a a b 0,1 % 985 507 413 68 55 51 a a a a 0,2 % 1.040 496 422 61 39 53 28 dias de idade 0% 1.356 1.124 730 77 62 48 0,1 % 1.356 1.226 789 82 62 47 0,2 5 1.346 1.166 810 80 70 48 42 dias de idade 0% 1.370 1.013 816 89 79 68 0,1 % 1.270 1.092 813 88 76 64 0,2 % 1.271 1.077 813 93 74 64 * Parede celular de Saccharomyces cerevisiae. Adaptado de Santin et al. (2001).

O epitlio intestinal age como uma barreira natural contra bactrias patognicas e substncias txicas no lmem intestinal. Distrbios na microflora normal ou nas clulas epiteliais intestinais, causados por algum tipo de estresse ou patgenos, podem alterar a permeabilidade desta barreira natural, facilitando a invaso de patgenos *e outras substncias nocivas. Diferentes aditivos alimentares podem melhorar o desempenho animal, melhorando a eficincia energtica no intestino (Dobrogosz et al., 1991; Bradley et al., 1994; Spring 1996 e Savage et al., 1997). Loddi (2003) avaliando o efeito da adio de MOS e acidificante orgnico sobre o desempenho e desenvolvimento da mucosa do intestino delgado observou que a suplementao com o MOS melhorou a converso alimentar e aumentou a altura e permetro de vilos e a adio de MOS+acidificante orgnico aumentou a porcentagem de clulas caliciformes no duodeno dos frangos com 21 dias de idade (Tabela 10). No final do perodo experimental (42 dias) tambm foi observado que a adio de qualquer promotor de crescimento no afetou o desempenho e a morfometria intestinal dos frangos de corte.

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Tabela 10. Valores mdios da altura de vilo (AV), profundidade de cripta (PC), permetro do vilo (PV) e porcentagem de clulas caliciformes (CCa) no intestino delgado de frangos de corte aos 21 dias de idade Duodeno 2 Tratamentos AV (m) PC (m) PV (m ) CCa (%) ab a a Controle 960,44 83,86 1785,03 15,25 b b ab MOS 1485,89 87,98 3137,97 17,80 a a b MOS+Acidificante 773,06 87,73 1601,32 30,70 CV (%) 29,68 10,70 28,59 38,45 Jejuno 2 Tratamentos AV (m) PC (m) PV (m ) Cca (%) Controle 901,15 82,04 2118,70 18,45 MOS 961,44 98,02 2121,33 23,90 MOS+Acidificante 734,66 73,37 1705,82 25,40 CV (%) 20,92 14,65 29,29 17,05 leo 2 Tratamentos AV (m) PC (m) PV (m ) CCa (%) Controle 678,41 79,99 1544,64 22,40 MOS 696,12 91,45 1497,48 24,95 MOS+Acidificante 811,03 80,82 1871,87 34,20 CV (%) 16,11 11,09 14,83 20,71 a, b Mdias seguidas de letras diferentes na coluna diferem entre si (P<0,05). Loddi (2003).

Loddi (2003) analisou a densidade dos vilos do intestino delgado e as caractersticas de uniformidade do vilo, integridade da mucosa, organizao dos vilos e presena de muco e bactrias fusiformes na superfcie do epitlio do intestino delgado (Tabelas 11 e 12) de frangos de 21 dias suplementados e observaram que adio de MOS associado ou no a acidificantes orgnicos no influenciou a densidade de vilos em nenhuma poro do intestino delgado. Os autor concluiu que a suplementao de MOS reduziu a presena de muco no duodeno e pode ter ocorrido o mecanismo de excluso competitiva, pela reduo do nmero de bactrias fusiformes no leo e que a adio de mananoligossacardeo associado ou no a acidificantes orgnicos no mostrou uma ao trfica em nenhuma poro do intestino delgado em frangos aos 21 dias.
Tabela 11. Densidade de vilos (nmero de vilo/1.145.306 m ) por segmento de intestino delgado de frangos aos 21 dias de idade submetidos a diferentes tratamentos. Tratamentos Duodeno Jejuno leo Controle * 41,66 55,22 MOS 31,66 62,17 57,33 MOS+Acidificante 38,22 48,56 65, 67 CV (%) 19,21 27,00 33,26 *No foi possvel realizar esta avaliao devido a grande quantidade de muco existente nos vilos. Loddi (2003).
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Tabela 12. Escores das variveis de morfologia intestinal de frangos de corte suplementados com MOS e MOS+acidificante orgnico aos 21 dias de idade, pela tcnica de microscopia eletrnica de varredura. Tratamentos Muco Uniformidade Integridade Organizao Bactria Fusiforme Duodeno b Controle 3,30 1,88 2,42 1,44 1,00 a MOS 1,66 1,52 1,16 1,35 1,00 ab MOS+Acidificante 2,27 1,58 2,00 1,66 1,00 CV (%) 34,44 12,86 58,05 14,70 Jejuno a Controle 1,81 1,67 1,85 1,54 1,04 ab MOS 2,04 1,44 1,08 1,79 1,00 b MOS+Acidificante 3,13 1,33 1,27 1,91 1,02 CV (%) 23,35 17,07 23,39 17,97 5,51 leo b Controle 2,73 1,47 1,31 1,64 2,43 a MOS 1,86 1,55 1,00 1,77 1,30 b MOS+Acidificante 2,00 1,71 1,50 1,50 2,46 CV (%) 22,52 19,79 26,77 20,25 25,12 a, b Mdias seguidas de letras diferentes na coluna diferem entre si (P<0,05). Loddi (2003).

Em um outro estudo, Loddi (2003) avaliou o efeito da incluso de Bacillus subtilis, Lactobacillus johnsonii, L. reuteri, mananoligossacardeo e lactose em dietas de frangos de corte e concluiu que no ocorreu ao isolada ou combinada dos probiticos e prebiticos no desempenho (Tabela 13), rendimento de carcaa e contagem microbiolgica nos frangos de corte. A densidade de vilos do leo aumentou com a adio de mananoligossacardeo e lactose (Tabela 14).
Tabela 13. Desempenho de frangos de corte suplementados com probiticos , prebiticos e a associao destes em diferentes idades de criao. 3 GPM (g) CRM (g) CA (g/g) PMORT RMORT 1 a 21 dias Controle negativo 829 1096 1,322 0,00 1,01 Probiticos 839 1098 1,303 1,56 1,30 Prebiticos 831 1092 1,315 0,78 1,01 Probiticos +prebiticos 857 1126 1,315 0,00 0,71 CV % 1,86 2,05 2,10 203,67 49,06 1 a 42 dias Controle Negativo 2575 4706 1,849 8,59 2,98 Probiticos 2603 4713 1,838 7,03 2,70 Prebiticos 2614 4808 1,874 7,81 2,81 Probiticos+prebiticos 2581 4828 1,898 7,81 2,85 CV % 2,42 2,20 1,14 42,46 20,65 1 Calsporin, Bacillus subtillis, e Finelact , Lactobacillus reuteri e L. johnsonii, FATEC. 2 Simbiotico, 85 % mananoligossacardeo e 15 % lactose, BIOCAMP. 3 0,5 O percentual de mortalidade foi transformada em (x+1/100) antes da ANOVA. Loddi (2003).
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Tabela 14. Densidade de vilos (nmero de vilo/1.145.306 m ) por segmento de intestino delgado de frangos aos 21 dias de idade submetidos a diferentes tratamentos. Tratamentos Duodeno Jejuno leo b Controle Negativo * 41,66 55,22 1 b Probioticos 27,33 54,22 60,00 2 a Prebiticos 41,33 36,22 81,00 b Probiticos+Prebitcos 44,33 38,83 65,78 CV (%) 12,81 21,78 26,67 *No foi possvel realizar esta avaliao devido a grande quantidade de muco existente nos vilos. 1 Calsporin, Bacillus subtillis, e Finelact , Lactobacillus reuteri e L. johnsonii, FATEC. 2 Simbiotico, 85 % mananoligossacardeo e 15 % lactose, BIOCAMP. a, b Mdias seguidas de letras diferentes na coluna diferem entre si (P<0,05). Loddi (2003)

Pelicano (2002) testando probiticos via rao e via gua para frangos de corte mostrou que aos 42 dias de idade os frangos que receberam probiticos apenas na rao apresentaram maior densidade de vilos em todos os segmentos analisados em relao ao grupo que recebeu probitico associado (gua + rao) (Tabela 15). Essa menor contagem de vilo, segundo ao autor foi compensada com uma maior altura de vilo no duodeno (Tabela 16) e um maior permetro de vilo tanto no duodeno quanto no jejuno. Ainda, menores profundidades de cripta foram obtidas com a utilizao do probitico na rao contendo a levedura Sacharomyces cerevisiae.
Tabela 15. Contagem de vilosidade intestinal de frangos de corte alimentados com probiticos na rao e na gua de bebida aos 42 dias de idade Tratamentos Duodeno Jejuno leo Probitico na rao (R) (1) a a a Probitico 1 17 28 38 (2) a a a Probitico 2 14 27 33 (3) a a a Probitico 3 18 27 36 Teste F 1,42 ns 0,05 ns 2,21 ns DMS (5%) 6,33 7,59 7,09 Probitico na gua (A) a a a Sem probitico 20 31 39 (4) b b b Com probitico 14 24 32 Teste F 8,09** 7,53 9,07** DMS (5%) 4,27 5,11 4,78 Testemunha x Fatorial a a a Testemunha 17 20 24 a a a Fatorial 13 22 29 Teste F 2,65 ns 0,36 ns 2,84 ns DMS (5%) 0,87 ns 0,02 ns 2,20 ns CV (%) 29,18 22,37 16,12 10 (1) Probitico adicionado na rao base de Bacillus subtilis (10 UFC/g do produto). 9 (2) Probitico adicionado na rao base de Bacillus subtilis (1,6 x 10 UFC/g do produto) e 9 Bacillus licheniformis (1,6 x 10 UFC/g). 9 (3) Probitico adicionado na rao base da levedura Sacharomyces cerevisiae (8 x 10 UFC/g do produto). 9 (4) (2) Probitico adicionado na rgua de bebida a base de Lactobacillus reuteri (6,6 x 10 UFC/g 9 do produto) e Lactobacillus johnsonii (3,3 x 10 UFC/g). Pelicano (2002).

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Tabela 16. Altura de vilo e profundidade de cripta medida nas vilosidades intestinais de frangos de corte alimentados com probiticos na rao e na gua de bebida aos 42 dia s de idade Tratamentos Duodeno Jejuno leo Probitico na rao (R) (1) a a a a a a Probitico 1 1128,55 165,64 954,79 112,79 732,37 114,95 (2) a a a a a a Probitico 2 1139,40 152,80 957,54 114,03 692,61 100,71 (3) a b a b a b Probitico 3 1061,62 98,85 917,86 82,96 648,54 76,53 Teste F 067 ns 24,22** 0,30 ns 23,47** 1,76 ns 15,65** DMS (5%) 182,95 25,68 143,62 12,95 112,86 17,50 Probitico na gua (A) b a a a a a Sem probitico 1028,25 140,27 898,71 102,67 726,58 98,61 (4) a a a a a a Com probitico 1191,46 137,92 988,08 103,86 655,76 96,18 Teste F 7,59* 0,08 ns 3,69 ns 0,08 ns 3,75 ns 0,18 ns DMS (5%) 123,23 17,30 96,73 8,72 76,02 11,79 Testemunha x Fatorial b a a a a a Testemunha 794,21 122,51 928,20 97,25 616,95 88,38 a a a a a a Fatorial 1109,86 139,10 943,40 103,26 655,76 97,40 Teste F 16,22 ** 2,27 ns 0,06 ns 1,17 ns 2,36 ns 1,45 ns CV (%) 13,63 14,90 12,10 10,03 13,16 14,45 10 (1) Probitico adicionado na rao base de Bacillus subtilis (10 UFC/g do produto). 9 (2) Probitico adicionado na rao base de Bacillus subtilis (1,6 x 10 UFC/g do produto) e 9 Bacillus licheniformis (1,6 x 10 UFC/g). 9 (3) Probitico adicionado na rao base da levedura Sacharomyces cerevisiae (8 x 10 UFC/g do produto). 9 (4) (2) Probitico adicionado na rgua de bebida a base de Lactobacillus reuteri (6,6 x 10 UFC/g 9 do produto) e Lactobacillus johnsonii (3,3 x 10 UFC/g). Pelicano (2002).

O conceito de simbitico alia o fornecimento de microrganismos probiticos juntamente com substncias prebiticas especficas que estimulem seu desenvolvimento e atividade, potencializando o feito de ambos os produtos (Menten, 2001). O efeito da associao de microbiota cecal com FOS em reduzir a quantidade de Salmonella enteritidis no ceco de frangos de 21 dias de idade inoculados experimentalmente foi demostrado por Fukata et al. (1999). Nos trs perodos avaliados o probitico e o prebitico reduziram a infeco, mas a combinao teve efeito sinrgico (Tabela 17). Entretanto, a simples incluso de um nutriente para a microbiota suplementa pode resultar numa associao simbitica. Foi demostrado que 5% de lactose na rao, que individualmente no teve qualquer efeito, aumentou muito a eficcia da microbiota suplementada na preveno da colonizao por Salmonella enteritidis.
Tabela 17. Contagem de Salmonella enteritidis no contedo cecal de frangos 9log/g) recebendo microbiota cecal anaerbia e prebitico (FOS) na rao. Dias aps desafio com Salmonella enteritidis 1 7 14 Controle 4,31 3,47 1,54 Microbiota 4,04 1,83 0,40 FOS 2,45 1,76 0,30 Microbiota + FOS 1,76 0,45 0,00 Fukata et al. (1999).

A maior parte dos relatos cientficos, envolvendo os possveis substitutos aos antibiticos, consideram que os aditivos alternativos sero aceitos pela indstria mesmo com toda a controvrsia observada em seus resultados experimentais. de fundamental importncia o conhecimento do modo de ao

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dos diferentes aditivos para poder planejar suas possveis combinaes, desde que atuem em vias complementares. Tais combinaes podem trazer benefcios, desde que respeitem a relao custo-benefcio sendo que as avaliaes realizadas nas condies da Unio Europia apontam que o custo da incluso de aditivos em raes de frangos de corte correspondem de 0,6 a 1,2 % do custo da rao para os antibiticos, 2,6% para os prebiticos/probiticos e 1,3% para aditivos fitognicos (Menten, 2002). No obstante aos problemas relacionados com a eficcia e o tempo de estocagem dos produtos (Jin et al., 1998; Tournut, 1998) os aditivos alternativos, por serem produtos naturais, tambm se deparam com crticas relacionadas a segurana, havendo necessidade de testes de avaliao e controle de qualidade referentes ao seu uso (McCartney, 2002). Referncias Bibliogrficas Adams C, Vahl HA, Veldman A. Interaction between nutrition and Eimeria acervulina infection in broiler chickens: development of an experimental infection model. British Poultry Science 1996; 75: 867-873. Albert V, Young GP. Differentiation status of rat enterocytes after intestinal adaptation to jejunal bypass. Gut 1992; 1638-1643. Apajalahti, J., Kettunes, A., Graham, H. Characteristics of the gastrointestinal microbial communities, with special reference to the chicken. Worlds Poultry Science Journal, 60:223-232, 2004 Blikslager AT, Roberts C. Mechanisms of intestinal mucosa repair. Journal American Veterinary Medical Association 1997; 9: 1437-1441. Bird AR, Croom Jr WJ, Fan YK, Daniel LR, Black BL, McBride BW, Bull LS, Taylor IL. Jejunal glucose absorption is enhanced by epidermal growth factor in mice. Journal of Nutrition 1994; 124: 231-240. Buts AR, Croom Jr. WJ, Fan YK, Daniel LR, Black BL, McBridge BW, Bull LS, Taylor IL. Jejunal glucose absorption is enhanced by epidermal growth factor in mice. Journal of Nutrition 1994; 124: 231-240. Chaves M, Smith MW, Williamson RC. Increased activity of digestive enzymes in ileal enterocytes adapting to proximal small bowel resection. Gut 1987; 28: 981987. Dowling RH. Cellular and molecular basis of intestinal and pancreatic adaptation. Scandinavian Journal of Gastroenterology 1992; 27 (Suppl. 193): 64-67. Dowling RH, Booth CC. Structural and functional changes following small intestinal resection in the rat. Clinical Science, London, 1967; 32: 139-149. Dror Y, Nir I, Nitzan Z. The relative growth of internal organs in light and heavy breeds. British Poultry Science 1977: 18: 493-496.

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