REAGENT RED BLOOD CELLS PANOCELL

For Identification of Unexpected Antibodies

REAGENT RED BLOOD CELLS PANOCELL

For Identification of Unexpected Antibodies

DO NOT FREEZE

Discard if markedly hemolyzed

2-4% Suspension No US standard of potency Preservatives: chloramphenicol (0.25 mg/mL) neomycin sulfate (0.1 mg/mL) gentamycin sulfate (0.05 mg/mL)
CAUTION: ALL BLOOD PRODUCTS SHOULD BE TREATED AS POTENTIALLY INFECTIOUS. THE PACKAGING OF THIS PRODUCT (DROPPER BULBS) CONTAINS DRY NATURAL RUBBER.
Immucor, Inc. Norcross, GA 30071 USA US LICENSE 886 ImmucorGamma Benelux 6220 Charleroi BELGIUM

316-12
Buffered Red Cell Diluent Diluyente de Hemates Tamponado Para Control de Autoaglutininas Hemates Reactivo For Autoagglutinin Control

Uso:
Reagent Cells Red Blood

For Identification of Unexpected Antibodies

Para Identificacin Anticuerpos Irregulares

El reactivo Panocell est preparado para utilizarse en la deteccin de anticuerpos irregulares anti-hemates.

El equipo Panocell-10 es un set de 12 viales conteniendo 11 viales con hemates de donantes nicos seleccionados y un vial de diluyente conservante tamponado que puede ser utilizado en lugar de salino para la preparacin de un auto-control. Panocell-16 y Panocell-20, son paneles ms extensos de reactivos, contiene 16 viales de hemates o 20 viales, respectivamente, provenientes de donantes nicos seleccionados. A este reactivo se ha aadido Chloramfenicol (0.25 mg/mL), sulfato de neomicina (0.1 mg/mL), y sulfato de gentamicina (0.05mg/mL) como conservantes.

Sumario:

Los anticuerpos irregulares se encuentran muy frecuentemente en muestras de pacientes que fueron expuestos a antgenos hemticos ajenos a travs de transfusin o embarazo (aproximadamente un 1% de todas las muestras de pacientes). Menos frecuentemente se encuentran anticuerpos irregulares anti-hemates en muestras de donantes.1-3 Algunos anticuerpos tienen importancia clnica pues pueden causar disminucin de la supervivencia de los hemates como resultado de una reaccin transfusional hemoltica, reaccin hemoltica en el recin nacido o anemia hemoltica autoinmune. El test de deteccin "in vitro" de anticuerpos se emplea para identificar la presencia de dichos anticuerpos en el suero de pacientes o donantes con el objeto de preparar o seleccionar unidades de sangre para su transfusin. La identificacin de anticuerpos puede tambin colaborar en el diagnstico y tratamiento de la enfermedad hemoltica del recin nacido o de la anemia hemoltica autoinmune.4 El reactivo Panoscreen se fabrica en formato de equipo de 10 y 16 donantes del grupo O seleccionados para la utilizacin en procedimientos de identificacin de anticuerpos. Los antgenos para los cuales los donantes han sido tipados se indican en la Tabla de Trabajo "Panocell Master List" que se acompaa con cada equipo. Con el equipo Panocell-10 se suministra un onceavo vial, llamado Techcell, que contiene hemates con fenotipo de grupo sanguneo poco comn.

Precauciones:

Para uso diagnstico in vitro. No existe estndar de potencia en EEUU. Antes de utilizarlas resuspender los hemates, invirtiendo repetidas veces cada vial. Los hemates reactivo Panocell deben lavarse con solucin salina previamente a su utilizacin en procedimientos que empleen enzimas o en tcnicas que utilizan soluciones de baja fuerza inica (LISS) si as es especificado por el fabricante del LISS. Conservar a 1-10 C cuando no se utilice. No congelar o exponer a altas temperaturas. DO NOT FREEZE NO CONGELAR Evitar la contaminacin del reactivo durante su uso. La contaminacin afectar adversamente al funcionamiento del producto durante su vida til. No utilizar reactivos contaminados. No utilizar ms all de la fecha de caducidad. No utilizar viales que gotean. No utilizar viales no etiquetados. Discard if markedly hemolyzed No utilizar si presenta hemlisis evidente

Principio:

Sistemticamente debe testarse el suero o plasma contra el Reactivo Panocell. La aglutinacin de uno o ms de las clulas Panocell en cualquier fase del test, o la hemlisis en fase salina o en fase con potenciador, constituye un test positivo y es el resultado de la reaccin entre un antgeno y su respectivo anticuerpo. La falta de aglutinacin o hemlisis indican tanto la ausencia de anticuerpos, asumiendo que las clulas poseen los correspondientes antgenos, o que el anticuerpo, si est presente, se encuentra en concentraciones demasiado bajas para ser detectado por las tcnicas serolgicas empleadas. El patrn de reactividad con estas clulas se compara con los perfiles antignicos en la Tabla de Trabajo Master List para determinar la especificidad(es) del(de los) anticuerpo(s) presentes.

Los reactivos compuestos por hemates no deben utilizarse si las clulas oscurecen, aglutinan espontneamente o si se observa una hemlisis evidente. Con el tiempo puede aparecer una ligera hemlisis. En este caso, los hemates pueden ser lavados y resuspendidos en salino previamente a su uso. Manejar y desechar los reactivos como si fueran potencialmente infectivos.
CAUTION: ALL BLOOD PRODUCTS SHOULD BE TREATED AS POTENTIALLY INFECTIOUS. THE PACKAGING OF THIS PRODUCT (DROPPER BULBS) CONTAINS DRY NATURAL RUBBER. PRECAUCION: TODOS LOS PRODUCTOS SANGUINEOS DEBEN SER TRATADOS COMO POTENCIALMENTE INFECTIVOS. EL EMBALAJE DE ESTE PRODUCTO (GOTEROS) CONTIENE CAUCHO NATURAL SECO.

Reactivo:
El reactivo Panocell, se fabrican en formato de equipo de 12 y 16 viales de reactivos. Los viales de hemates contienen cada uno de ellos una suspensin al 2-4% de hemates obtenidos de donantes nicos del grupo O, preparados en una solucin conservante que contiene adenina y adenosina para retardar la hemlisis y/o la prdida de antigenicidad durante el perodo de validez. El diluyente no interfiere con la hemlisis inducida por complemento. Los hemates del donante utilizados en cada equipo estn seleccionados para que contengan los antgenos hereditarios de mayor frecuencia. La Tabla de Trabajo "Panocell Master List" suministrada con cada equipo indica el cdigo del donante y la composicin antignica de los hemates de cada donante del reactivo. Key: Underline = Addition or significant change; = Deletion of text

EL MATERIAL A PARTIR DEL CUAL SE DERIVA ESTE PRODUCTO FUE ENCONTRADO NEGATIVO CUANDO SE CHEQUEO EN CONFORMIDAD CON LOS TEST REQUERIDOS POR LA FDA. NINGUN TEST CONOCIDO PUEDE OFRECER LA SEGURIDAD QUE UN PRODUCTO DERIVADO DE SANGRE HUMANA NO TRANSMITA AGENTES INFECCIOSOS. El formato de la fecha de caducidad se expresa como AAAA-MM-DD (ao-mes-da)

Recoleccin y Preparacin de muestras:

En los procedimientos de identificacin de anticuerpos irregulares se puede utilizar suero o plasma. Los anticoagulantes del plasma puede interferir en la deteccin de

anticuerpos ligados al complemento.4, 7 Pueden desarrollarse tambin cogulos de fibrina e interferir en los test que emplean plasma. Extraer una muestra de sangre utilizando una tcnica de sangra adecuada. Los test deben ser realizados tan pronto como sea posible para minimizar la posibilidad de obtener resultados falsamente positivos o negativos debido a contaminacin o inadecuado almacenamiento de la muestra. Las muestras que no puedan ser testadas inmediatamente deben almacenarse a 1-10 C. Alternativamente, el suero o plasma puede ser separado de los hemates y ser congelado para su conservacin. Anticuerpos de reaccin dbil pueden deteriorarse y hacerse indetectables al ser testados utilizando muestras almacenadas a temperatura ambiente durante varios das o en muestras almacenadas por un largo periodo a 1-10C. No utilizar muestras extradas en tubos con gel separador neutro. Con dichas muestras pueden aparecer resultados falsamente positivos.

12.

Confirmar la validez de todas las reacciones negativas o dbilmente positivas utilizando hemates control de antiglobulina sensibilizados con IgG. * Tiempo de centrifugacin sugerido: 15-30 segundos a 900-1000 x g o un tiempo apropiados a la centrfuga utilizada, que produzca la mejor reaccin del anticuerpo con los hemates antgeno-positivos y permitiendo la fcil resuspensin de los hemates antgeno-negativos. Estabilidad de la Reaccin: A continuacin de la centrifugacin todos los test deben ser ledos inmediatamente y los resultados interpretados sin demora. Retrasos en la lectura pueden originar disociacin de los complejos antgeno-anticuerpo dando resultados falsamente negativos, o como ms, reacciones dbilmente positivas. Control de Calidad: Adicionalmente a la inspeccin visual en busca de deterioro evidente, la reactividad de los hemates debe ser controlada peridicamente testando antgenos propensos a deteriorados, tales como Lea, frente a anticuerpos de reactividad dbil de la misma especificidad. Si tales hemates aparecen no reactivos, el producto no debe ser usado.

Procedimiento:

Material Suministrado 1. Panocell-10, equipo de 12 viales incluyendo un vial de diluyente conservante tamponado, o Panocell-16, equipo de 16 viales. 2. Tabla de Trabajo Panocell (Panocell Master List) Material Adicional Requerido 1. Plasma o suero de donante o paciente. 2. Tubos de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm y gradilla para tubos. 3. Pipetas de transferencia. 4. Solucin Salina Isotnica o Solucin Salina Isotnica Fosfato Tamponada (aproximadamente 15 mM), pH 6.5-7.5 5. Potenciador (ej. Immucor Bovine Albumin, 22% or 30%; Immucor LISS or ImmuAddTM) (opcional) 6. Inmunoglobulina Anti-Humana conteniendo anti-IgG. 7. Clulas Control Antiglobulina (hemates sensibilizados con IgG) (ej. Immucor Checkcell) 8. Bao Maria a 37C o incubador de aire seco. 9. Centrfuga Serolgica* 10. Cronmetro 11. Rotulador. * Es responsabilidad del usuario validar un accesorio adicional para su uso (tanto listado como no). Los resultados de las validaciones deben mantenerse como parte de los registros del laboratorio para revisin por el sistema de auditoria interna.

Interpretacin de los Resultados:

Test Positivo: La aglutinacin de cualquiera de los hemates Panocell en cualquier fase del test, o hemlisis en la fase salina o con la utilizacin de potenciador, constituye un test positivo. Test Negativo: Ausencia de aglutinacin y hemlisis en cualquier fase del test indica que el suero (o plasma) no contiene anticuerpos detectables frente a ninguno de los antgenos presentes en el reactivo. El siguiente procedimiento sirve como gua para identificar anticuerpos: 1. Comparar la reaccin obtenida con el control autlogo para determinar si el anticuerpo es de naturaleza alo o auto. 2. Marque las reacciones obtenidas en las celdillas correspondientes a cada uno de los pocillos en la "Panocell Master List" y compare el patrn obtenido con cada uno de los antgenos descritos, si no se corresponden haga una marca sobre el antgeno en particular en la parte superior de la lista y siga realizando la comparacin con cada uno de los antgenos. 3. Compare el patrn de clulas aglutinadas con el perfil de antgenos no borrados de la Lista de Trabajo en el paso 2. a. Si solo 1 antgeno no ha sido marcado depuse de eliminar los antigenos noreactivos del panel de hemates, y el patrn del antgeno encaja con el patrn de reactividad obtenido, la especificidad del anticuerpo ha sido positivamente identificada. b. Si permanecen ms de un antgeno sin marcar, se debe proceder a identificar los anticuerpos que puedan estar presente. (Ver pasos 4 y 5). c. Los resultados positivos y negativos que no corresponden con ningn patrn indican la presencia de mltiples anticuerpos, o de anticuerpos contra antgenos inespecficos. 4. Si se sospecha la presencia de mltiples anticuerpos, revisar las fases en las que se produjo la aglutinacin y la fortaleza de las reacciones que se obtuvieron. El patrn de reacciones obtenido en cada fase del test se debe considerar independientemente, debiendo coincidir con el perfil de un antgeno en la "Master List", proporcionndose as una pista para la determinacin de la especificidad de al menos uno de los anticuerpos presentes. Si todas las reacciones ocurren en la misma fase o fases del test, la diferencia de fortaleza de las reacciones deben tomarse como pistas para la determinacin de las especificidades. 5. Testar los hemates del propio paciente buscando los antgenos correspondientes a los posibles anticuerpos presentes. Si los hemates del paciente poseen el antgeno, no es de esperar que el anticuerpo este presente, amenos que aglutinen el control autlogo as como las clulas del panel.

Mtodo:

El procedimiento detallado a continuacin es la lnea base de procedimiento. Puede ser aconsejable modificar ste para adaptarse a los requerimientos o procedimientos estndar de operacin propios del laboratorio en particular. Si se emplean agentes potenciadores, estos deben ser usados siguiendo las especificaciones indicadas en el protocolo particular de cada uno de ellos. 1. Identificar un tubo por cada vial Panocell, y si se realiza, otro tubo adicional para el control autlogo. 2. Dispensar 2-3 gotas del suero a testar en cada uno de los tubos. 3. Invertir varias veces el vial Panocell hasta conseguir la completa resuspensin de las clulas. 4. Dispensar 1 gota de los hemates Panocell en los tubos correspondientes previamente identificados. Si se realiza en paralelo un control autlogo, aadir 1 gota de una suspensin salina al 2-4% de los hemates autlogos en el tubo correspondiente. Mezclar completamente el contenido de cada tubo. 5. Centrifugar cada tubo.* Examinar el sobrenadante comprobando la existencia de hemlisis. Resuspender el botn de hemates y examinar la presencia de aglutinacin. Registrar los resultados. 6. Aadir potenciador, si se utiliza, en cada tubo en las cantidades indicadas en el protocolo del fabricante. NOTA: Si se desea, cada tubo puede ser incubado a temperatura ambiente (18-30C) durante 5-30 minutos, centrifugado y examinada la presencia de aglutinacin previamente a la adicin del agente potenciador o a la incubacin a 36-38C. 7. Mezclar completamente el contenido de cada tubo. Incubar a 36-38C durante 30-60 minutos. NOTA: Dependiendo del potenciador empleado, los tubos deben ser incubados durante periodos de tiempo inferiores. Consultar el protocolo de trabajo del fabricante para emplear el ptimo periodo de incubacin para el agente potenciador empleado. 8. Centrifugar cada tubo.* Examinar el sobrenadante comprobando la existencia de hemlisis. A continuacin agitar cada tubo para resuspender el botn de clulas y examinar la presencia de aglutinacin. Registrar los resultados. 9. Lavar los hemates un mnimo de 3 veces con solucin salina, teniendo cuidado de decantar completamente despus de cada lavado. 10. Aadir Anti-Globulina Humana en cada tubo en las proporciones indicadas por el fabricante. Mezclar completamente el contenido de cada tubo. 11. Centrifugar cada tubo.* Resuspender cada botn de hemates y examinar la presencia de aglutinacin. Registrar los resultados. Las reacciones negativas deben ser examinadas con ayuda ptica. Key: Underline = Addition or significant change; = Deletion of text

Limitaciones:
Resultados falsamente positivos o negativos pueden aparecer debido a contaminacin bacteriana o qumica de los materiales utilizados, tiempo de incubacin o temperatura inadecuados, centrifugacin incorrecta, lavado insuficiente de los hemates, defectuosas condiciones de almacenamiento u omisin de la antiglobulina o del suero en el test. Se pueden obtener reacciones falsas-negativas si se emplea una proporcin inadecuada de suero-hemates.8 Es importante realizar el test de identificacin de anticuerpos utilizando una ptima relacin de suero/hemates. La cantidad de suero a emplear (nmero de gotas) depender del porcentaje de hemates utilizados en la suspensin, del volumen de una gota del dispensador y del medio empleado como potenciador. Los hemates Panocell estn seleccionados para que posean los antgenos hemticos hereditarios ms comunes. Estos no incorporan todos los determinantes antignicos hemticos conocidos. En ocasiones, es posible que un suero en particular contenga un anticuerpo especfico de un antgeno que no esta presente en estos hemates reactivo.

Se obtendrn reacciones negativas si el suero del test contiene anticuerpos presentes en concentraciones demasiado bajas para ser detectados por el mtodo del test empleado. La carga gentica de los donantes de hemates con fenotipos tales como Fy(a+b-), Fy(a-b+), Jk(a+b-), Jk(a-b+), M+N-, M-N+, S+s-, S-s+, etc), no se conoce. Se asume que dichas clulas provienen de individuos genticamente homocigotos, pero de hecho pueden haber sido recolectadas de personan que son genticamente heterocigotas para los genes codificados. No han sido realizados ningn tipo de test serolgico para demostrar que los hemates aparentemente homocigotos utilizados para preparar este reactivo porten doble dosis del correspondiente antgeno. Infrecuentemente pueden aparecer resultados falsos positivos por presencia de anticuerpos dirigidos contra componentes del diluyente de los hemates. Estas reacciones no deseadas pueden ser evitadas utilizando hemates que hayan sido lavados con salino previamente a la realizacin del test. Los hemates Panocell pueden ser pretratados con enzimas proteolticos para incrementar su sensibilidad en la deteccin de algunos anticuerpos de grupos sanguneos. (ej. los de los sistemas Rh, Lewis y Kidd). Sin embargo, algunos antgenos (tales como M, N, S, Fya y Fyb) son destruidos o alterados por los enzimas y anticuerpos contra dichos antgenos deberan fallar en la reaccin hemates premodificados enzimticamente.4-5 La reactividad de los Hemates Reactivo puede disminuir a lo largo del periodo de caducidad. La proporcin en que la reactividad del antgeno (ej. aglutinabilidad) disminuye depende parcialmente de las caractersticas individuales del donante las cuales no pueden ser controladas ni predecidas por el fabricante. Algunos aloanticuerpos de importancia clnica, tales como anti-Jka, enlazan componentes del complemento a la membrana celular. Est reportado que algunas muestras de anti-Jka se detectan mejor en un test srico si se emplea reactivo antiglobulina conteniendo anti-C3, as como anti-IgG. Dichos anticuerpos tambin se detectarn mejor si el suero de las muestras a testar tiene menos de 48 horas desde la extraccin pues algunos componentes del complemento experimentan cambios con el almacenamiento que se traducen en incapacidad para participar en el ciclo de activacin del complemento. Ningn mtodo de test es capaz de detectar todos los anticuerpos irregulares anti hemates. Los hemates utilizados para preparar este reactivo contienen antgenos que pueden no estar especificados por el fabricante. Por consiguiente, es posible obtener con este reactivo reacciones positivas que no correspondan al perfil de ninguna de las reacciones mostradas en la Tabla de Trabajo.

Caractersticas Especficas:

Previamente a la distribucin de cada lote de Immucor Hemates Reactivos, a menos que se indique lo contrario, son testados por dos laboratorios independientes utilizando dos fuentes de anticuerpos (excepto cuando no sea posible debido a la rareza del anticuerpo) para confirmar la presencia o ausencia de todos los antgenos especificados en la Tabla de Trabajo "Master List". El rendimiento de este producto depende del correcto seguimiento de la metodologa recomendada en el protocolo de trabajo. Todas las suspensiones de hemates son verificadas y muestran tener un test directo con antiglobulina negativo utilizando Antiglobulina Humana poliespecfica. Este producto cumple los requerimientos de la FDA para Reactivos compuestos por Hemates Sanguneos. La fecha de caducidad es de 60 das desde la fecha de fabricacin, la cual es la fecha en que la sangre es extrada a al primer donante utilizado como componente del producto. Para informacin adicional o soporte tcnico cosutle con el Servicio Tcnico al 800-492-BLUD (2583) o 770-441-2051.

Bibliografa:
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Key: Underline = Addition or significant change; = Deletion of text