TRABAJO : Grupo del SM1 (GOD2204), formado por: Francesca Papasdero---552299 (diapositivas 1-4) Alejandra Lpez---------550223 (diapositivas 5-8)

Thierry Zitoun-----------552300 (diapositivas 9-12) Mario Romeo------------555184 (diapositivas 13-16) Raffaella Arena----------550287 (diapositivas 17-20) Ftima Lozano-----------550263 (diapositivas 21-23)

TEMA 10 : LISOSOMAS Y PROTEASOMA

Diapositiva 2: Como se puede ver en la imgen, se trata de una clula animal en la que se pueden distinguir todas las organelas que la componen. RE: laberinto irregular. Es el lugar donde se fabrican la mayora de los componentes de la membrana celular. Complejo de Golgi: pilas de sacos aplanados. Recibe y modifica con frecuencia las molculas producidas en el RE y despus las enva al exterior de la clula o a diversas localizaciones internas. LISOSOMAS: orgnulos pequeos de forma irregular en los que tiene lugar la digestin intracelular, con liberacin de nutrientes de partculas alimentarias y degradacin de molculas no deseadas para su reciclado o excrecin. Peroxisomas: proporcionan un medio contenido para reacciones que generan o degradan perxido de hidrgeno. Vesculas: participan en el transporte de sustancias entre un orgnulo rodeado de membrana y otro. Mitocondria: generan energa qumica para la clula. Obtienen la energa de la oxidacin de las molculas de alimentos, produciendo ATP. Diapositiva 3: En esa tabla hay una representacin grfica de los volmenes totales, medidos en percentual, de los componentes bsicos de una clula heptica y la cantidad de estos componentes presentes en el hepatocito. Diapositiva 4: El espacio extracelular y cada compartimiento delimitado por una membrana se comunican entre s por

medio de vesculas de transporte. En la va secretora externa las molculas proteicas son transportadas desde el RE, a travs del Complejo de Golgi, hacia la membrana plasmtica o, gracias a los endosomas tardos, hacia los lisosomas. En la va endoctica interna, vesculas derivadas de la membrana plasmtica ingieren molculas extracelulares y las envan a los endosomas tempranos y luego, por medio de los endosomas tardos, a los lisosomas. Las vesculas que se destacan de las membranas estn envueltas por unas cubiertas proteicas compuestas sobre todo por la protena clatrina. Estas vesculas emergen del complejo de Golgi en su va secretora hacia el exterior y a partir de la membrana plasmtica en su camino endoctico hacia el interior. Un segundo tipo de complejo proteico de revestimiento (coat complex protein) que contiene siete protenas (coatamer) es llamado COP I. Las vesculas revestidas con este complejo se forman a partir del compartimiento intermedio RE-Golgi y de las diferentes cisternas del aparato de Golgi, funcionando en los mecanismos de recuperacin que retienen a las protenas residentes del aparato de Golgi y el RE. Median el movimiento retrgrado de protenas residentes en el RE, desde la red cis Golgi de regreso de nuevo al RE. Otro tipo de complejo de protenas de revestimiento es llamado COP II y forma las "vesculas revestidas por COP II". Estas son vesculas de transporte que actan segn un transporte antergrado (hacia adelante en la va secretora) entre el RE, donde se forman, y la cara cis Golgi que las recibe. Diapositivas 5-8: En todas las clulas eucariontes existe una corriente constante de vesculas que brotan de la red trans de golgi y se fusionan con la membrana plasmtica. Hay dos tipos de vas: 1. Va exocitosis constitutiva: aporta lpidos y protenas recin elaborados a la membrana plasmtica. Es la va por la cual la membrana plasmtica crece cuando las clulas se agrandan antes de dividirse, tambin lleva protenas a la superficie celular que se liberan al exterior, proceso llamado secrecin. Estas protenas que son liberadas al exterior tienen tres caminos: a)Adherirse a la superficie celular, donde se convierten en protenas perifricas. b)Incorporarse a la matriz extracelular. c)Difundirse en el lquido extracelular donde nutren o sealizan otras clulas. 2. Va de exocitosis regulada: funciona solo en las clulas especializadas en la secrecin. Esta va produce grandes cantidades de productos particulares como hormonas, moco o enzimas digestivas que se almacenan en las vesculas secretoras para su liberacin posterior. Las protenas destinadas a la secrecin regulada se distribuyen y se empaquetan en la red trans de golgi, estas protenas tienen protenas especiales de superficie que las hacen agregarse entre s en condiciones inicas que prevalecen en la red trans. Una vez empaquetadas esperan una seal que las instruye para

fusionarse con la membrana plasmtica. La agregacin adems tiene otra funcin: permite que las protenas secretoras sean empaquetadas en vesculas a concentraciones mucho mayores que las de la otra va. Este aumento de concentracin puede llegar hasta 200 veces. Endocitosis Muchas partculas y molculas extracelulares terminan en los lisosomas: Sacos membranosos con enzimas hidrolticas que llevan a cabo la digestin intracelular. Contiene cerca de 40 tipos de enzimas hidrolticas, todas ellas tienen su punto ptimo de accin en las condiciones cidas (ph-5) que se encuentra dentro de los lisosomas, la membrana del lisosoma mantiene estas enzimas destructivas fuera del citosol (cuyo ph es de 7,2) pero la dependencia cida de las enzimas protege al contenido del citosol de cualquier dao si se produjera alguna fuga. Los lisosomas contienen una nica membrana, que es la que contiene protenas de transporte que permite que los productor finales de la digestin sean transferidos hacia el citosol, donde la clula pueda excretarlos o utilizarlos. Adems la membrana contiene tambin una bomba de H+ impulsada por ATP que bombea protones hacia el lisosoma y de esta manera mantiene su contenido en un pH cido. Las enzimas digestivas especializadas y las protenas de membrana del lisosoma se sintetizan en el RE se transportan a travs del complejo de golgi hacia la red trans. En el RE y la regin cis las enzimas estn marcadas con un azcar fosforilado especfico (manosa 6fosfato) de modo que cuando llegan a la red trans pueden ser reconocidas por un receptor adecuado, el receptor de la manosa 6-fosfato. Esta marcacin permite distribuir y empaquetar a las enzimas en vesculas de transporte. Los materiales siguen vas diferentes hacia los lisosomas: -Las partculas extracelulares son captadas dentro de los fagosomas, que se fusionan con los lisosomas. -Las macromolculas son captadas en vesculas endocticas, que envan su contenido a los lisosomas a travs de los endosomas. Pero adems las clulas cuentan con una va adicional para proveer materiales a los lisosomas, esta va es conocida como autofagia, degrada partes obsoletas de la clula en s. Al parecer el proceso comienza con una membrana doble que circunda al orgnulo, al crear un autofagosoma, que luego se fusiona con los lisosomas. Diapositiva 9: transporte de los precursores de las hidrolasas lisosomales Ya estamos en la situacin de que el precursor de la hidrolasa ha llegado en la red del Golgi-Cis (desde el retculo endoplamtico), y vamos a ver los pasos siguientes: 1) Adicin del grupo fosfato: A la glucoprotena (la hidrolasa) se le aade un fosfato mediante un enlace O-glucosdico con el C6 de la manosa (detalles en las diapositivas 11 y 12). Este proceso occure en la cisterna Cis.

2) Unin al receptor M6P (transmembrana): En el Trans-Golgi, se asocia especficamente a su receptor correspondiente: el receptor de la manosa-6fosfato. Por lo tanto, podemos decir que la M6P de la protena lisosomal es una seal especfica para el lisosoma. Una vez el complejo ReceptorM6P-hidrolasa formado, se activa la vesicularizacin con la formacin del revestimiento de clatrina. 3) Transporte dependiente del receptor-M6P: Por fn con la vescula de transporte ya formada, se quita el revestimiento. Va circulando (cargada) en el citosol con el complejo receptorM6P-protena lisosomal. 4) Recuperacin de los receptores: Otras vesculas de transporte (que vienen del lisosoma) participan en la recuperacin de los receptores del M6P: fusionan con la membrana del Trans-Golgi. Los receptores pueden de esta manera recibir otras seales M6P posteriormente. Diapositiva 10: llegada y maduracin las hidrolasas lisosomales 1) Disociacin a pH cido: La vescula una vez fusionada con el endosoma tardo (que despus evoluciona en lisosoma), su contenido se desprende en el lumen (prdida de unin con el receptor). La disociacin se realiza gracias al pH 5 que tiene que mantener el lisosoma, por la actividad ATP-asa de la bomba activa de protones, que hace entrar y concentrar los H+ dentro del compartimiento. 2) Remocin del fosfato: As obtenemos la hidrolasa lisosomal madura, que ahorra en este medio tiene su poder de hidrlisis ("digestin") potente. "Trabaja mejor a pH 5". 3) Formacin de las vesculas de recuperacin con el receptor del M6P: por gemacin. Diapositiva 11: La N-acetil-glucosamina fosfotransferasa del cis-Golgi reconoce la regin seal de la hidrolasa, para hacer el primer paso de formacin de M6P (ver diapositiva 12) Antes de nada, hay que situar el contexto: queremos aadir un fosfato a (por lo menos) una manosa del oligosacrido para obtener el grupo M6P, la seal que tiene que llevar la hidrolasa para llegar a su destinacin final (el lisosoma). Esa adicin est catalizada por 2 enzimas que actan de manera secuencial: la GlcNAc fosfotransferasa (que aade GlcNAc-P) y la GlcNac fosfoglucosidasa (que remueve la GlcNAc para quedarnos con la M6P). La fosfotransferasa tiene 2 sitios: 1) Un lugar de reconocimiento: unin especfica a la parte proteica de la hidrolasa (afinidad) 2) Un lugar cataltico: para catalizar la adicin de N-acetil-glucosamina-FOSFATO Importante: la seal reconocida por el lugar de reconocimiento no es un pptido seal sino una regin

seal dependiente de conformacin. Diapositiva 12: Adicin de GlcNac-P en el sitio cataltico y liberacin de la hidrolasa modificada Cuando la hidrolasa est unida, la fosfotransferasa aade grupos GlcNAc-P a una o dos de las manosas de cada cadena de oligosacrido. Entonces la reaccin se realiza gracias a la UDP-GlcNAc, que se transforma entonces en UMP. La mayora de las hidrolasas lisosomales tienen VARIOS OLIGOSACRIDOS, por lo que adquieren MUCHOS RESIDUOS DE M6P, lo cual AMPLIFICA enormemente la seal Diapositivas 13-16: El proceso de la expresion genetica no es acabado cuando el codigo genetico ha sido utilizado para crear una secuencia de aminoacidos que cosntituyen una protena.Para ser utiles a la celula, la cadena polipeptidica tiene que doblarse (folding) en su conformacion tridimensional,pegar los cofactores de la pequea molecula requeridos para su actividad,justamente es modificada por las quinasas (fosforilacin) proteicas o por otros enzimas de modificacion y monta corectamente con las otras unidades secundarias de la proteina con la cual funciona. Con el proceso evolutivo la secuencia aminoacidica de cada proteina ha sido seleccionada no solo para la conformacion que ha adoptado sino tambin por su velocidad de doblarse con rapidez.Los experimentos han demostrado que una vez que un dominio de la proteina en una proteina multi-dominio sale por el ribosoma,forma una estructura compacta que en algunos segundos contiene la mayor parte de la estructura secundaria final(-helice hojas ) alineada aproximadamente en el modo justo.El doblamiento de muchas proteinas es mas eficaz gracias a una clase especial de proteinas llamadas chaperones moleculares.Estas protenas son tiles para las clulas para convertir la forma fundida del glbulo en la formacin compacta final de la proteina.Para muchas protenas algunos de los mediadores formados en la va de llegada las adjuntaran y las llevaran fuera de la via sin la intervencin de un chaperon que adjuste el procedimiento doblante. Cada dominio de una protena recientemente sintetizada llega rapido a un estado de globulo fundido.La dobladura siguiente se realiza ms lentamente y por vas multiples,que comprenden muchas veces la ayuda de un chapern molecular.Algunas molculas no pueden todava doblarse corectamente por lo que vienen reconocidas y degradadas por las proteasas especficas. Cada uno de los proteosomas consta de un cilindo hueco central proteoltico(20S proteosoma)formado por unidades secundarias multiples de la proteina que montan como una pila cilindrica de cuatro anillos heptmeros.Algunas de estas unidades secundarias son proteasas distintas cuyos sitios activos estan en la camara interna del cilindro.Cada extremidad del cilindro esta asociada normalmente a un grande complejo de la proteina(capuche 19S)que contiene 20 polipeptidos distintos. (A)Imagen cilindro central 20S,determinado por cristalografia rayos X con los sitios activos de las

proteasas en los puntos rojos.(B)La estructura de un intero proteosoma cuyo cilindro central (amarillo) esta completado por un capuche 19S(azul) en cada extremidad,cuya estructura ha sido determinada por microscopio electronico.La estructura del capuche pega selectivamente las proteinas que van a ser destruidas;luego gracias a la hidrolisis del ATP dobla las cadenas del polipeptido para ponerlas en la camara interna del cilindro 20S para la degradacin en peptidos cortos. Diapositivas 17-20 La ubiquitina es una protena reguladora que dirige el reciclaje de protenas. Puede asociarse a protenas y marcarlas para su destruccin, lo que dirige las protenas al proteosoma,complejo que degrada y recicla protenas innecesarias. La estructura de la ubiquitina contiene 76 aminocidos. El extremo carboxilo de la protena es el punto en el que se agrega la lisina de las cadenas laterales de las protenas. La ubiquitina es preparada para la conjugacin a otras protenas por la enzima ubiquitina-activadora (E1) que es ATP-dependiente,la cual crea una ubiquitina activada que se transfiere a un sistema de conjugacin de ubiquitina (E2). Las enzimas E2 actan conjuntamente con las protenas accesorias (E3). En el complejo E2-E3,llamado ligasa de la ubiquitina,el componente E3 enva seales especificas de degradacin en los substratos de la protena ayudando E2 a formar una cadena del multiubiquitina ligada a una lisina de la protena del substrato.en esta cadena, el residuo del C-terminal de cada ubiquitina se agrega a una lisina especfica de la molcula precedente de la ubiquitina,produciendo una serie lineal de ubiquitinas conjuntas. Es esta cadena de multiubiquitina la que ser reconocida por un receptor especfico en el proteosoma. Las ligasas de la ubiquitina reconocen las distintas seales de degradacin. Se reconocen y se destruyen las protenas desnaturalizadas o las que lleven aminocidos anormales u oxidados. El sistema ubiquitina-proteosoma destruye las protenas que exponen las seales de degradacin en su estado doblado maduro. Otra funcin de los mecanismos proteolticos es conferir semividas cortas a las protenas normales especficas cuyas concentraciones deben cambiar puntualmente con alteraciones en el estado de la clula. Algunas de estas protenas se degradan rpidamente mientras que otras metabolitos inferiores estables bajo algunas condiciones,que pero llegan a ser inestables segn los cambios que occurrer en la clula. Estos mecanismos de degradacin estn regulados,por ejemplo,mediante la actividad de una ligasa de la ubiquitina a travs de una fosforilacin en E3 o por una transicin alostrica en una protena E3 causada por su agregacin a una molcula pequea o grande especfica. La activacin de una molcula especifica E3 crea una nueva ligasa de la ubiquitina. La imagen representa la creacin de una seal expuesta de la degradacin en la protena que tiene que ser degradada. Esta seal agrega una ligasa de la ubiquitina,causando la adicin de una cadena de la multiubiquitina a una lisina prxima de la protena target. Estos caminos son utilizados por las clulas para inducir el movimiento de protenas seleccionadas en el proteosoma.

Diapositiva 21: Formacon de las fibras de amiloides (A) Cambio de conformacin de una protena globular (con hlices ) en protena laminar (hojas ). Es un fenmeno raro. (B) Formacin de un heterodmero con la adicin de otra protena globular. Despus por reacciones en cadena, la subunidad globular tambin se transforma en estructura laminar, y se repite el proceso. Eso explica cmo se obtiene fibras de amiloide por polimerizacin a partir de siembras infecciosas. Diapositiva 22: Ejemplo: cambio de conformacin de la PrP Los priones son protenas pequeas y sencillas. Ellos son infecciosos, e interesantes, ya que son los agentes infecciosos slo se conoce que no contienen material gentico. Los priones son partculas transmisibles que estn desprovistos de cido nucleico y parecen estar compuestos exclusivamente de modificacin protena PrP Sc. Los priones son importantes porque cuando cambian de conformacin, puede que causen problemas. Versiones normales de las protenas prinicas celulares son abundantes en la superficie de las clulas nerviosas del cerebro y se dice que estn involucrados en la funcin sinptica. Estas protenas de priones de tipo salvaje, la PrP C , fueron descubiertas tras una investigacin de la versin enferma que causa las enfermedades neurodegenerativas, la PrP Sc . Las encefalopatas espongiformes transmisibles (EET) son enfermedades degenerativas del cerebro que se producen en muchos mamfero. La protena prin normal (izquierda) tiene muchas hlice-Alfa regiones y es bastante soluble mientras que la protena prinica anormal (derecha) tiene muchos beta-plegadas las regiones de hoja y es insoluble. Diapositiva 23: Digestin celular y endocitosis La LDL ingresa en la clula por medio de la endocitosis mediada por receptores. La LDL se une a los receptores que se encuentran sobre la superficie celular e ingresan en vesculas recubiertas con clatrina. Las vesculas pierden sus cubiertas y luego se fusionan con los endosomas. En el ambiente cido del endosoma, la LDL se disocia de sus receptores. Mientras que la LDL termina en los lisosomas donde se degrada liberando colesterol, los receptores de la LDL vuelven a la membrana plasmtica con las vesculas de transporte y pueden ser utilizados de nuevo. Para mayor simplicidad solo se muestra un receptor LDL al ingresar en la celula y al volver a la membrana plasmtica. Ocupado o no, un receptor LDL suele realizar un viaje solo de ida y vuelta en la clula cada 10 minutos, para alcanzar un total de varios cientos durante su vida de 20 horas.