Universidad Nacional

JORGE BASADRE GROHMANN

Facultad de Ciencias de la Salud (FACS) Escuela Acadmico Profesional de Farmacia y Bioqumica (ESFB) MICROBIOLOGA: BACILOSCOPIA Y DIAGNOSTICO DE BK

Curso Docente Alumno Cdigo Ao

: : : : :

Anlisis Clnicos II Q. F. Nelly Trelles de Nquira Juvenal Edwin Cachicatari Torres 07 - 30911 5 Tacna PERU 2012
PRACTICA N 7

Practica de laboratorio: Analisis Clnicos II

Baciloscopa y Diagnostico BK

MICROBIOLOGA: BACILOSCOPIA Y DIAGNOSTICO DE BK I. INTRODUCCIN: El diagnostico bacteriolgico de la tuberculosis (TB) depende del examen directo del esputo, en bsqueda de bacilos acido-alcohol resistente (BAAR) y/o del aislamiento de Mycobacterium tuberculosis (MTB) en el cultivo. La baciloscopia es la herramienta primaria para el diagnostico de la TB pulmonar activa, y constituye la piedra angular en la bsqueda de los casos infecciosos y es til para evaluar la respuesta al tratamiento y las tasas de curacin. La baciloscopia consiste en pedir 3 muestras de esputo de buena calidad, de primera hora de la maana, en das distintos. Para detectar al bacilo en las tinciones se estima que son necesarios 5.000 a 10.000 bacilos/ml. Positiva en un 65% de los casos cuando se procesan tres esputos (95% formas cavitarias) frente a un 30% con una muestra aislada. La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (por ejemplo, el acido mi clico) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-acido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Los medios de cultivo pueden ser: Lowestein-jensen, kirchen, middlebrook (7H9, 7H10 y 7H11), OgawaKudoh (OK), Stonebrink modificado por Giraldo (STG).

II.

OBJETIVOS: 1. Aprender las pautas de una baciloscopa 2. Realizar las tcnicas bacteriolgicas para el diagnstico de BK.

III.

MARCO TERICO: Pgina 2

Q.F. Nelly Trelles de Nquira

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Descripcin:

Baciloscopa y Diagnostico BK

Enfermedad infecciosa bacteriana crnica. La infeccin inicial suele ser asintomtica, lasmanifestaciones clnicas dependen del rgano comprometido. El asiento inicial ms frecuente es el tejido pulmonardesde donde se disemina va hemolinftica a otras estructuras del organismo, sea, meninges, riones e intestino,entre otras. Agente: Bacilo Mycobacterium tuberculosis. Modo de transmisin: Respiratoria, a travs de la inhalacin del bacilo por gotitas procedentes de secrecionesbronquiales de personas con tuberculosis pulmonar al toser o al estornudar. La tuberculosis bovina se puede transmitir por ingesta de productos lcteos no pasteurizados. Reservorio: Principalmente el hombre. En algunas regiones el ganado vacuno enfermo. Perodo de incubacin: Desde el momento de la infeccin hasta que aparece la lesin primaria, entre cuatro ydoce semanas. Perodo de transmisibilidad: Mientras el paciente expulse en el esputo bacilos tuberculosos viables. Distribucin: Mundial, enfermedad endmica con tendencia al aumento. La OMS declar en 1993 que la Tuberculosis haba adquirido carcter de urgencia mundial debido principalmente a la falta de atencin a laenfermedad por parte de muchos gobiernos, con programas de control mal administrados. Entre otras de lasrazones que pueden explicar el aumento de casos de tuberculosis en el mundo, la ms importante es la presenciade la infeccin por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Las tasas de morbilidad y mortalidad aumentancon la edad. Las muertes por tuberculosis corresponden al 25% de la mortalidad evitable en pases en desarrollo. Se desconoce el comportamiento de la tuberculosis extrapulmonar que aporta la mayor frecuencia de secuelas y deletalidad, las localizaciones ms comunes son las genitourinarias, menngeas, peritoneales, pleurales, seas ymiliar. Como complicaciones ms frecuentes se reportan la tuberculosis pulmonar crnica, pleuresa con derrame,meningitis, tuberculosis del sistema esqueltico, de ganglios linfticos, de vas urinarias, tuberculomas entre otras.

Definiciones operativas

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Baciloscopa y Diagnostico BK

Caso sospechoso: Todo sintomtico respiratorio, es decir, paciente que presenta tos o expectoracin de ms de15 das de evolucin. Adems pacientes que presentan por primera vez, laringitis crnica con disfona persistente,laringotraquetis crnica, bronquitis crnica, bronconeumona, neumona, enfisema o asma (excepto crisis asmtica). Todo paciente positivo para VIH debe considerarse sospechoso para TBC. Caso probable: Paciente sintomtico respiratorio con astenia, adinamia, prdida de peso y anorexia no explicablespor otra causa. En algunas ocasiones tambin hay fiebre, hepatoesplenomegalia, hemoptisis, dolor torcico y a laauscultacin, sibilancias, crpitos o soplo tubrico. Caso confirmado: Caso probable que cumple con uno de los siguientes criterios: Baciloscopia positiva: cuando la muestra de esputo revela la presencia de bacilos cido alcohol resistentes(BAAR). Cultivo positivo: cuando en el cultivo de Ogawa-Kudok se asla Mycobacterium tuberculosis u otro tipo deMycobacteria. Placa de rayos X con anomalas compatibles con tuberculosis: se consideran imgenes sospechosas detuberculosis: ndulo regional, linfangitis, bronconeumona intersticial, aumento marcado de ganglios hiliares oparatraqueales, consolidaciones neumnicas, derrame pleural, lesiones cavitarias, infiltrados miliares,cifoescoliosis y destruccin vertebral anterior, periostitis, calcificaciones y lesiones fibrosas y calcificacionesintracerebrales. Reaccin tuberculnica positiva: slo es utilizado en nios menores de 10 aos sin cicatriz de BCG que soncontactos de un caso confirmado. Histopatologa compatible Asociacin epidemiolgica: contacto de riesgo en los ltimos tres meses con un caso confirmado porlaboratorio. Caso compatible: caso probable sin confirmacin por laboratorio o sin asociacin epidemiolgica demostrada.

IV.

EQUIPOS Y MATERIALES: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Microscopio Laminas portaobjetos Asa de kolle Mechero de alcohol Azul de metileno Fucsina- fenicada Solucin de acido alcohol Muestra: esputo

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V. PROCEDIMIENTO:

Baciloscopa y Diagnostico BK

Tincin de cido-alcohol resistencia (Ziehl-Neelsen) a) Prepara un frotis bacteriano, con la muestra de esputo. Haciendo un delgado entendido del material para su estudio y permitir que se seque al aire. b) Fijar el frotis con calor, evitar que hierva c) Cubrir la preparacin con fuscina fenicada d) Calentar la preparacin en un mechero Bunsen durante 5 min. No debe hervir. Si se evapora, se aade msfuscina fenicada para que no se seque en ningn momento. e) Lavar con agua el resto de colorante f) Decolorar con la mezcla acido-alcohol. Hasta que solo permanezca un tenue color rosa. g) Lavar con agua para que no prosiga la decoloracin. h) Teir con azul de metileno 1min. i) Lavar con agua el resto de colorante j) Secar la preparacin. k) Examinar al microscopio. Con objetivo de inmersin por 100X (aceite) Informe de resultados de baciloscopia 0 BAAR/100 campos 1 - 9 BAAR/100 campos 10 - 99 BAAR/100 campos 1 - 10 BAAR/campo/50 campos > 10 BAAR/campo/20 campos VI. RESULTADOS: a) Prepara un frotis bacteriano, con la muestra de esputo. Haciendo un delgado entendido del material para su estudio y permitir que se seque al aire. : : : : : negativo nmero exacto de BAAR 1+ 2+ 3+

b) Fijar el frotis con calor, evitar que hierva

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c) Cubrir la preparacin con fuscina fenicada

d) Calentar la preparacin en un mechero Bunsen durante 5 min. No debe hervir. Si se evapora, se aade msfuscina fenicada para que no se seque en ningn momento.

e) Lavar con agua el resto de colorante

f)

Decolorar con la mezcla acido-alcohol. Hasta que solo permanezca un tenue color rosa. Pgina 6

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g) Lavar con agua para que no prosiga la decoloracin. h) Teir con azul de metileno 1min.

Baciloscopa y Diagnostico BK

i)

Lavar con agua el resto de colorante

j)

Secar la preparacin.

Examinar al microscopio. Con objetivo de inmersin por 100X (aceite)

REPORTE DE RESULTADOS: Es importante recordar que en la prctica se emplearon muestras que desde un inicio se presuman negativas, por ello es que se obtuvo un total de 0 (cero) bacterias acido alcohol resistentes (BAAR), dando un resultado que se confirmo como negativo para el Bacilo de Koch (BK). Negativo (-): No se encuentran BAAR en 100 campos observados. Nmero exacto: 0 BAAR en 100, 50 y 20 campos observados. VII. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

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Baciloscopa y Diagnostico BK

La baciloscopa, es la tcnica fundamental en toda investigacin bacteriolgica de la tuberculosis, en la deteccin de casos y control de tratamiento. Con un costo bajo y de rpida ejecucin, es una tcnica que permite identificar al 70-80% de los casos pulmonares positivos. La tuberculosis es una enfermedad infectocontagiosa producida por agentes del grupo Mycobacterium tuberculosis complex, especialmente por el Mycobacterium tuberculosis o bacilo de Koch (BK). Las medidas que se han empleado para la deteccin de la TBC vienen dadas por el anlisis de la muestra de esputo en el microscopio para evaluar la presencia del micobacterium, con la coloracin de ziehlneelsen tambin llamada acido alcohol resistente, para luego hacer el recuento de los bacilos en el extendido y dar a conocer el informe con el nmero total de estos en los campos observados. Se obtuvo un total de 0 (cero) bacterias cido alcohol resistentes (BAAR), dando un resultado que se interpreta como negativo para el Bacilo de Koch (BK). VIII. CUESTIONARIO: 1. Indique el esquema de tratamiento para la TBC Los esquemas de tratamiento antituberculoso que se usaran son:
TRATAMIENTO ESQUEMA UNO 2HREZ/4H2R2 Duracin 6 meses (82 dosis)

Fases

Duracin

Frecuencia

Medicamento y dosis

Total por enfermo

1ra.

2 meses (50 dosis)

Diario, excepto domingos y feriados

Rifampicina x 300 mg. 2 capsulas Isoniacida x 100 mg. 3 tabletas Pirazinamida x 500 mg. 3 tabletas Etambutol x 400 mg. 3 tabletas R x 300 mg. = 164 cap. H x 100 mg. = 1306 tab. Z x 500 mg. = 150 tab. E x 400 mg. = 150 tab.

2da

4 meses

Dos veces por semana

Rifampicina x 300 mg. 2 capsulas

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(32 dosis)

Baciloscopa y Diagnostico BK

Isoniacida x 100 mg. 8 tabletas

Nota: En enfermos con de 50 kg. De peso, tanto adultos como nios, la dosis de medicamentos se administra en relacin al peso del paciente. No usar etambutol en menores de 7 aos por el riesgo de producir neuritis ptica. Utilizar estreptomicina como medicamento alternativo al etambutol en menores de 7 aos con diagnstico de meningoencefalitis TB o tuberculosis generalizada.

TRATAMIENTO ESQUEMA DOS 2HREZS 1HREZ/5H2R2E2 Duracin 8 meses (115 dosis)

Fases

Duracin

Frecuencia

Medicamento y dosis

Total por enfermo

1ra.

2 meses (50 dosis)

Diario, excepto domingos y feriados

Rifampicina x 300 mg. 2 capsulas R x 300 mg. = 230 cap. Isoniacida x 100 mg. 3 tabletas Pirazinamida x 500 mg. 3 tabletas Etambutol x 400 mg. 3 tabletas Estreptomicina x 1 g. H x 100 mg. = 545 tab. Z x 500 mg. = 225 tab. E x 400 mg. = 465 tab. S x 1g. = 50 amp.

1 mes (25 dosis)

Diario, excepto domingos y feriados

Rifampicina x 300 mg. 2 capsulas Isoniacida x 100 mg. 3 tabletas Pirazinamida x 500 mg. 3 tabletas Etambutol x 400 mg. 3 tabletas

2da.

5 meses (40 dosis)

Dos veces por semana.

Rifampicina x 300 mg. 2 capsulas Isoniacida x 100 mg. 8 tabletas Etambutol x 400 mg. 6 tabletas

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Baciloscopa y Diagnostico BK

Nota: En enfermos con de 50 kg. De peso, tanto adultos como nios, la dosis de medicamentos se administra en relacin al peso del paciente. No usar etambutol en menores de 7 aos por el riesgo de producir neuritis ptica. No usar estreptomicina en embarazadas por su eventual toxicidad sobre el feto. En caso de ser necesario, evaluar su riesgo-beneficio con consentimiento informado de la paciente y su familia. En mayores de 60 aos la dosis diaria de estreptomicina utilizada no deber exceder de 0,75 g.

TRATAMIENTO ESQUEMA TRES 2HRZ/3H2R2 Duracin 5 meses (74 dosis)

Fases Duracin

Frecuencia

Medicamento y dosis

Total por enfermo

1ra.

2 meses (50 dosis)

Diario, excepto domingos y feriados

Rifampicina x 300 mg. 2 capsulas Isoniacida x 100 mg. 3 tabletas Pirazinamida x 500 mg. 3 tabletas

R x 300 mg. = 148 cap. H x 100 mg. = 342 tab. Z x 500 mg. = 150 tab.

2da.

3 meses (24 dosis)

Dos veces por Rifampicina x 300 mg. 2 semana capsulas Isoniacida x 100 mg. 8 tabletas

Nota: En enfermos con de 50 kg. De peso, tanto adultos como nios, la dosis de medicamentos se administra en relacin al peso del paciente.

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ESQUEMA DE RETRATAMIENTO ESTANDARIZADO PARA TUBERCULOSIS MULTIDROGORESISTENTE 4KccEtEZ/14CxEtEZ Duracin 18 meses (450 dosis)

Fases

Duracin

Frecuencia

Medicamento y dosis

Total por enfermo

1ra.

4 meses (100 dosis)

Diario, excepto domingos y feriados

Kanamicina x 1 g. 2 ampolla Ciprofloxacina x 500 mg. 2 comprim Etionamida x 250 mg. 3 tabletas Etambutol x 400 mg. 3 tabletas K x 1 g. = 100 amp. Cx x 500 mg = 900 com Et x 250 mg. = 1350 tab. Z x 500 mg. = 1350 tab. E x 400 mg. = 1350 tab. Etionamida x 250 mg. 3 tabletas Pirazinamida x 500 mg. 3 tabletas Etambutol x 400 mg. 3 tabletas

2da

14 meses (350 dosis)

Diario, excepto domingos y feriados

Ciprofloxacina x 500 mg. 2 comprim

En embarazadas: No utilizar kanamicinaen embarazadas por su eventual toxicidad sobre el feto. En caso de ser necesario, evaluar su riesgo-beneficio con consentimiento informado de la paciente y su familia. No deber utilizarse etionamida debido al riesgo teratognico: tampoco ciprofloxacina ante la posibilidad de producir lesiones en los cartlagos de conjuncin en el feto. En nios: Evaluar el riesgo/beneficio de utilizar etambutol en menores de 7 aos. Evaluar el riesgo/beneficio de utilizar ciprofloxacina en nios en periodos de crecimiento, ya que puede perturbar su desarrollo.

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Nota: En enfermos con de 50 kg. De peso, tanto adultos como nios, la dosis de medicamentos se administra en relacin al peso del paciente.

ESQUEMA DE TRATAMIENTO PARA PACIENTES CON ASOCIACIN VIH/SIDA TBC (NUEVOS) 2RHZE/7R2H2 Duracin 9 meses (106 dosis)

Fases

Duracin

Frecuencia

Medicamento y dosis

Total por enfermo

1ra.

2 meses (50 dosis)

Diario, excepto domingos

Etambutol x 400 mg. 3 tabletas Isoniacida x 100 mg. 3 tabletas Rifampicina x 300 mg. 2 capsulas Pirazinamida x 500 mg. 3 tabletas E x 400 mg. = 150 tab. H x 100 mg. = 598 tab. R x 300 mg. = 212 cap. Z x 500 mg. = 150 tab.

2da

7 meses (56 dosis)

Dos veces por semana

Isoniacida x 100 mg. 8 tabletas Rifampicina x 300 mg. 2 capsulas

Nota: En enfermos con de 50 kg. De peso, tanto adultos como nios, la dosis de medicamentos se administra en relacin al peso del paciente. No usar etambutol en menores de 7 aos por el riesgo de producir neuritis ptica. Utilizar estreptomicina como medicamento alternativo al etambutol en menores de 7 aos con diagnostico de meningoencefalitis TB o tuberculosis generalizada.

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2. Describa los ndices de TBC en el Per y en Tacna.

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Hasta el ao 2001 nuestro pas se encontraba en condiciones de superar las metas mundiales del milenio respecto al control de la TB. Desde el segundo semestre del ao 2001 hasta el primer semestre del 2004 se produjo un deterioro sostenido de las actividades de bsqueda de casos, lo que est siendo revertido a la fecha. La tuberculosis es una enfermedad social totalmente curable, que es causa y consecuencia de pobreza y que afecta a la poblacin econmicamente activa, siendo los grupos de edad ms afectados los comprendidos entre los 15 y 54 aos. El ao 2007 las regiones con ms altas tasas de TB son: Lima, Callao, Ica, Tacna, Madre de Dios, Ucayali y Loreto. En el Per en el ao 2007 se han atendido 29 393 casos nuevos de tuberculosis, si lo comparamos con el ao 1992 en que se diagnosticaron 52 549 casos se evidencia una disminucin del 43,7 %, sin disminuir el esfuerzo de bsqueda a travs de la identificacin y posterior examen de los sintomticos respiratorios.

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La Tuberculosis es un importante y serio problema de salud pblica, se handiagnosticado y tratado gratuitamente a 461 personas es decir una tasa de158.32 por 100, 000 habitantes. De ellos 406 corresponden a casos nuevos, loque determina una Tasa de Incidencia de 139.43 por 100,000 hab.evidencindose una disminucin sostenida en relacin a aos anteriores.

Referencia: Situacin de Salud en el Per. Indicadores Bsicos 2003-MINSA-OPS.

3. Qu coloracin se tien las bacterias bacilares en la tincin acido-alcohol-resistente que da como resultado la reaccin positiva? Utilizando una tcnica adecuada (tincin de Ziehl-Neelsen) es posible identificar al bacilo de la tuberculosis en la muestra del enfermo como un bastoncito rojo fucsia o fluorescente sobre una coloracin de fondo que facilita su visualizacin. Esta propiedad no es especfica

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del bacilo de la tuberculosis, sino que la tienen todos los bacilos del gnero Mycobacterium, aun las micobacterias ambientales y otros pocos microorganismos. En la tincin acido-alcohol resistente, las bacterias que resisten la decoloracin son de color rojo (TB) y las que no, se ven de color azul, ya que se utiliza azul de metileno como tincin de contraste. 4. Qu funcin tiene el alcohol en la tcnica de tincin acido alcohol - resistente? La mezcla de acido alcohol forma una solucin decolorante, sta es utilizada en la tcnica de tincin para retirar la coloracin de la Fucsina Fenicada (de color fucsia), la cual es capaz de teir bacilos como los del genero de Mycobacterium tuberculosis. IX. BIBLIOGRAFA: http://asp.mspas.gob.sv/regulacion/pdf/guia/Guia_t%C3%A9cnica_tb_microscop%C3%A Da_directa.pdf http://www.bvsops.org.uy/pdf/laboratorio.pdf http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1728-59172008000300009&script=sci_arttext http://es.scribd.com/doc/8760308/BACILOSCOPIA

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