INTRODUCCIN ALA BIOTECNOLOGA.

MAESTRA: MARA IRENE SANCHEZ CERVANTES TEMAS

1.- SINTESIS DE PROTEINAS LAB. VIRTUALES 2.-EXTRACCIN DE ADN. 3.- PCR REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA 4.- ELECTROFORESIS EN GEL

ALUMNO: GUZMN RUIZ JOS LUIS. No. DE CONTROL: 08070861

SITESIS DE PROTEINAS.

EXTRACCIN DE ADN.
ADN se extrae de las clulas humanas para una variedad de razones. Con una muestra pura de ADN puede probar un recin nacido de una enfermedad gentica, analizar las pruebas forenses, o estudiar un gen implicado en el cncer. Pruebe este laboratorio virtual para realizar un hisopo de la mejilla y extraer el ADN de las clulas humanas. Extraccin de ADN Laboratorio virtual

TEORIA: En este experimento es necesario aislar una muestra de ADN de un ser humano sujeto de la prueba. por qu, se preguntar usted, es necesario el ADN humano? Cientficamente aislar el ADN tiene una variedad de razones, algunas de los cuales incluyen: *las pruebas genticas *identificacin de los cuerpos *anlisis de las pruebas forenses La extraccin de ADN es normalmente el primer paso en un proceso de laboratorio ms largo. La extraccin de ADN es una parte importante de ese proceso, porque el ADN primeronecesita ser purificado lejos de protenas y otros contaminantes celulares. tenemos las clulas, porque es all donde el ADN es. el interior de casi todas las clulasen nuestros cuerpos es un ncleo. as que por dnde empezamos? primero que necesitamos para recoger algunas clulas de nuestro sujeto de la prueba. La piel en el interior de la boca pierde miles de clulas cada da. estas son las clulasque estamos buscando Vamos a empezar los pasos que deber seguir para purificar el ADN de un hisopo de la mejilla se muestra a continuacin. 1.-Recolectar clulas de la mejilla 2.-Clulas explosin abre para liberar el ADN 3.-ADN separado de las protenas y los escombros 4.-Aislar el ADN concentrado

MATERIAL: bao maria microcentrfuga centrfuga hisopo bucal micropipetas tubos de muestra REACTIVOS: solucin lisys solucin de sal concentrada resuspensin de amortiguacin etanol alcohol isoproplico PROCEDIMIENTO: 1 -. Arrastre el bastoncillo sobre el interior de la boca del sujeto del ensayo para recoger una muestra 2.- Siguiente, va a colocar el hisopo en un tubo eppendorf. mirar de cerca el hisopo. tenga en cuenta que est cubierto con cientos de pequeas clulas de la mejilla. dentro de cada clula de la mejilla es un ncleo, y dentro del ncleo es el ADN 3.- El extremo del hisopo debe ser cortado por lo que ser capaz de cerrar el tubo. utilizando la micropipeta, aadir un poco de solucin de lisis en el tubo. lisis es una palabra griega que significa separar. 4.- Colocar el tubo en el bao de agua caliente 5.- La solucin de lisis que acaba de agregar contiene dos ingredientes importantes: detergente y una enzima llamada proteinasa K. el detergente rompe la membrana celular y la envoltura nuclear, que las clulas se abri de golpe y libera su ADN. El ADN est todava envuelto apretadamente alrededor de protenas llamadas histonas,y la proteinasa K corta distancia de las histonas para liberar el ADN 6.- Las clulas se ha hospedado en el bao de agua caliente lo suficiente para que el ADN que ha liberado de las clulas, y hemos eliminado el hisopo del tubo. Aadir un poco de solucin salina concentrada que su tubo. La sal hace que las protenas y otros residuos celulares se agrupen 7.-Colocar el tubo en la centrfuga . Con el fin de equilibrar la centrfuga, un tubo que contiene agua se coloca el tubo apropiado. Se cierra la centrfuga 8.- Dentro de la centrfuga, los tubos giran alrededor a alta velocidad. Los grupos pesados de la protena y los restos celulares de la piel se van a la parte inferior deltubo, mientras que las hebras de ADN permanecen distribuidos a travs del lquido.

9.- Utilizar la micropipeta para retirar cuidadosamente el lquido de la parte superior (quecontiene el ADN) y colocarlo en un tubo limpio. las protenas y otros residuos celularesse quedan. 10.-Aadir un poco de alcohol isoproplico al tubo 11.- Invirtiendo el tubo varias veces se mezcla el alcohol isoproplico en la solucin de ADN.porque el ADN no es soluble (no permanece disuelto) en alcohol isoproplico, que sale de la solucin. ahora se puede ver el ADN agrupada a simplevista. 12.- Colocar el tubo en la centrfuga y cerrar y encenderlo un tiempo, despus de los giros las muestras en la centrifugadora, el ADN se hunde hasta elfondo del tubo. 14.- Una vez que el lquido se retira y el ADN se deja secar, se puede volver a disolver en la solucin de su eleccin. se puede almacenar en el congelador durante muchos aos, o puede pasar a su siguiente experimento. que acaba de extraer ADN. Puede probar su mano en la extraccin de ADN utilizando elementos comunes se pueden encontrar en su cocina de su casa.

P.C.R (REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA)

PCR (siglas de Reduccin En Cadena De La Polimerasa) es una herramienta relativamente simple y barato que se puede utilizar para centrarse en un segmento de ADN y copiarlo en miles de millones de veces. La PCR se usa todos los das para diagnosticar enfermedades, identificar bacterias y virus, coincide con criminales con las escenas del crimen, y de muchas otras maneras. TEORIA: Los cebadores son pequeas porciones de ADN que se realizan en un laboratorio. Ya que estn hecha a la medida, los cebos pueden tener cualquier secuencia de nucletidos que le gustara. En un experimento de PCR, dos cebadores estn diseados para que coincida con el segmento de ADN que desea copiar. A travs de apareamiento de bases complementarias, una imprimacin se adhiere a la hebra superior en un extremo de su segmento de inters, y el otro cebador se une a la cadena inferior en el otro extremo. En la mayora de los casos, 2 cebadores que son los nucletidos 20 ms o menos largo se centrar en un solo lugar en todo el genoma. Los cebadores tambin son necesarias debido a la ADN polimerasa no puede fijar en un lugar cualquiera edad y empezar a copiar de inmediato. Slo se puede aadir a una pieza existente de ADN. ADN polimerasa es un complejo de origen natural de las protenas cuya funcin es copiar ADN de una clula antes de que se divide en dos. Cuando un protuberancias polimerasa de ADN molcula en un cebador que es la base-emparejado con un trozo largo de ADN, que se adhiere cerca del extremo del cebador y se inicia la adicin de nucletidos. (En la naturaleza, estos cebadores se hacen por una enzima llamada primasa). La polimerasa de ADN en nuestro cuerpo se descompone a temperaturas muy por debajo de 95 C (203 F) - la temperatura necesaria para separar dos hebras complementarias de ADN en un tubo de ensayo. La ADN polimerasa que se utiliza con mayor frecuencia en la PCR proviene de una cepa de una bacteria llamada Thermus aquaticus que viven en las aguas termales del Parque Nacional Yellowstone. Se puede sobrevivir cerca de la temperatura de ebullicin y funciona bastante bien a 72 C (162 F). Los nucletidos son los bloques de construccin que las molculas de ADN estn hechos. Se agrega una mezcla de cuatro tipos de nucletidos a la reaccin de PCR -

Una es, C, G y de la t. ADN polimerasa agarra nucletidos que estn flotando en el lquido que lo rodea y se adhiere a la final de un cebador Para realizar una reaccin de PCR necesita ADN que ha sido extrado de clulas .porque el propsito de la PCR es para hacer ms copias de ADN, que no es necesario el ADN mucho para iniciar la reaccin. por ejemplo, se podra extraer el ADN de una pequea muestra de sangre, piel, saliva. MATERIAL: *tubos PCR. *pipeta *termociclador PROCEDIMIENTO: 1.- Empezar por mover el ADN extrado en un tubo especial de PCR. PCR funciona calentando y enfriando la solucin y otra para tubos de PCR estn diseados para la distribucin uniforme del calor. 2.- Extraer el ADN y colocarlo en el tubo PCR. 3.- Siguiente suma 1 cebador al tubo de PCR. Los iniciadores se enganchan a versidades en las cadenas de ADN que se encuentran en cada extremo del segmento que desea copiar. que son herramientas poderosas para copiar las secuencias de ADN muy especficos ya que no hay ninguna posibilidad que se centrar en los versidades equivocadas. 4.- Ahora agregue cebador 2, que se agregar al segundo sitio. 5.- Aadir nucletidos a su tubo de PCR. nucletidos son la As de Cs, Gs y Ts de que constituyen el cdigo del ADN. estos bloques de construccin gentica se utiliza para crear miles de millones de copias de ADN. 6.-Por ultimo, vamos a aadir la ADN polimerasa en el tubo de PCR. molculas de ADN polimerasa actan como pequeas mquinas que leen el cdigo de ADN y luego adjuntar nucletidos coincidentes para crear copias de ADN. este ADN polimerasa en particular ha sido especialmente seleccionado para resistir el alto calor de la reaccin de PCR. 7.- Ahora que el tubo de PCR se llena con todos los componentes de la reaccin, se le coloca en un termociclador de ADN. Esta mquina, precisamente, se puede calentar y enfriar el tubo en momentos especficos durante la hora siguiente. estos cambios en la temperatura son cruciales forma para hacer el trabajo de reaccin.

Dentro de su ciclo de un tubo de PCR se ha iniciado. el termociclador calienta hasta 95grados centgrados. eso es 203 grados Fahrenheit, que es casi hirviendo a esta temperatura, la doble hlice del ADN se separa, la creacin de dos molculas de cadena simple de ADN.

CICLOS: CICLO #1 Ahora el termociclador se enfra a 50 grados centgrados, alrededor de 122 grados Fahrenheit. a esta temperatura, de cadena sencilla molculas de ADN, naturalmente, tratar de emparejarse. Sin embargo, hay muchas ms secuencias de los cebadores quelas hebras de ADN en el tubo. los cebadores se agolpan en su camino y adherirse a su destino antes de hebras puede volver a unirse. CICLO #2 Los mismos tres pasos suceder en el ciclo de dos. la temperatura se eleva de nuevo para separar las hebras de ADN. La temperatura se reduce por lo que los cebadores se conectan y la temperatura se eleva de nuevo ligeramente para simular la DNA polimerasa para copiar la hebra. haga clic en el botn Siguiente para comenzar el ciclo de tres. CICLO #3 Durante el ciclo tres , los productos que se desean comienzan a aparecer dos lneas que comienzan con un inicio y final con base de dos. se trata de copias de ADN de slo el segmento de ADN que se han dirigido. A pesar de que slo hay dos fragmentos deseados en esta etapa, ya que de continuar con los ciclos, estos productos se convertir rpidamente en la mayora. CICLO#4 Al final del ciclo cuatro que tiene ocho fragmentos que contienen slo la secuencia diana. CICLO #5 Ahora tiene veintids fragmentos que contienen slo la secuencia diana y slo diez copias ms de longitud. CICLO # 6 30 Despus de treinta ciclos hay ms de mil millones de fragmentos que contienen slo la secuencia diana y slo sesenta copias de las molculas de mayor longitud. ahora tienes una solucin de secuencia diana casi puro.

ELECTROFORESIS EN GEL.
Te has preguntado cmo los cientficos trabajar con molculas diminutas que no pueden ver? Aqu est tu oportunidad de probarlo t mismo! Clasificar y medir las hebras de ADN mediante la ejecucin de su propio experimento de electroforesis en gel. uso cientfico de la electroforesis en gel cada vez que necesitan para ordenar las cadenas de ADN de acuerdo a la longitud, esta tcnica es tambin til para la separacin de otros tipos de molculas, como protenas. Cmo funciona esto? el gel es el filtro que ordena las hebras de ADN. es como una esponja hecha de gelatina con muchos agujeros pequeos en ella. TEORIA: La electroforesis es una tcnica habitual en el laboratorio clnico. Permite separar especies qumicas (cidos nucleicos o protenas) a lo largo de un campo elctrico en funcin de su tamao y de su carga elctrica. Los cidos nucleicos, ADN y ARN, tienen por naturaleza carga negativa. Si ponemos fragmentos del ADN extrado de una muestra biolgica sobre un soporte poroso (gel) y aplicamos un campo elctrico, se producir la migracin diferencial de los fragmentos a travs de los poros de la matriz. La tincin del gel con bromuro de etidio, que es una sustancia fluorescente que se intercala en la molcula de ADN, y la exposicin con luz ultravioleta, permite observar el resultado de sta migracin. El tamao de los fragmentos de ADN se puede estimar comparndolos con el patrn de bandas que se obtiene de marcadores comerciales de peso molecular conocido. La electroforesis de ADN es til para comparar patrones de bandas de diferentes muestras biolgicas. As por ejemplo se puede usar para comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo, para la identificacin de cidos nucleicos de agentes infecciosos o para la obtencin de un fragmento determinado de ADN que, una vez localizado en el gel, puede ser extrado para anlisis posteriores. La electroforesis en gel es una tcnica sencilla empleada de forma rutinaria en laboratorio para separar molculas biolgicas especialmente ADN, ARN y protenas. MATERIAL: *polvo de agarosa *amortiguar *matraz *microonda * el molde de gel *el peine de gel PROCEDIMIENTO: 1.- Poner una pequea cantidad de agarosa en el matraz agarosa es un polvo seco similar a la gelatina, pero a partir de algas.

2.- Aadir algo de lquido regulador al matraz, el liquido regulador es una solucin de agua

salada que le permitir el flujo de cargas elctricas a travs del gel. 3.- Colocamos una envoltura de plstico sobre la parte superior del frasco para evitar que el lquido de Boling se salga. Colocamos el matraz que contena el tampn y la mezcla de agarosa en el interior del horno de microondas, calentar la mezcla hasta que la agarosa se funde en el liquido. 4.- Quitamos el plstico de la parte superior del frasco, vertimos la mezcla de agarosa malteada en el molde nos damos cuenta de que el molde tenga la cinta en cada extremo para sujetar en la agarosa fundida. 5.- Colocamos el peine en el gel en un extremo, las muestras en el molde de gel de mantenerlo en su lugar. dejar el gel y solidificar esto por lo general toma alrededor de media hora, pero vamos a acelerar el reloj para usted como el gel se enfra, pequeos agujeros se forman en ella. 6.- Ahora es el momento de configurar el cuadro de electroforesis tendr el gel que acaba de hacer, y la caja de la electroforesis y la otra botella de tampn colocar el gel todava en el molde en el cuadro de electroforesis. hemos quitado la cinta de los extremos del molde de gel del gel debe ser apenas sumergido en el tampn, el tampn conduce la corriente elctrica desde un extremo de la otra. tambin mantendr el gel se seque durante el experimento. 7.- Es el momento de encender la electricidad y ejecutar el gel de cuando se enciende el poder, el extremo negro va a generar una carga negativa. el extremo rojo va a generar una carga positiva. juntos, se pasar el monedas a travs del gel. El ADN tiene una carga negativa. para mover el ADN a travs del gel, se debe poner el cable negro - la carga negativa - ms cerca de los pozos. 8.- Que gel es fuera de funcionamiento veamos en la caja de gel para ver lo que est sucediendo comprobar si hay pequeas burbujas de aire que salen de los electrodos en ambos extremos de la caja de electroforesis estas burbujas son la prueba de que una corriente se est ejecutando. 9.- Repelidos por la carga negativa, el ADN se mueve a travs del gel hacia la carga positiva en el otro extremo. hebras cortas de ADN se mueven a travs de los orificios en el gel ms rpidamente que hebras largas. con el tiempo, las hebras de ADN ms cortas migrarn ms lejos del punto de partida de las hebras ms largas. en realidad no podemos ver a las bandas de ADN que migran, pero podemos ver que el colorante azul de la memoria intermedia de carga, ya que migra. 10.- Cuando haya terminado de ejecutar el gel. tomamos el molde con el gel en ellafuera de la caja de electroforesis. el tiempo ha llegado para analizar la muestra y calcular la longitud de las cadenas de ADN.

11.- quitar el gel de la solucin de tincin y colocarlo en la caja de luz UV. Activar la casilla de UV, la luz ultravioleta del cuadro puede daar sus ojos si usted hace esto en la vida real, asegrese de usar gafas de proteccin. 12.- Ahora usted puede determinar las longitudes aproximadas de las hebras de ADN en la muestra. compara las bandas de las muestras de ADN con las bandas de longitud de conocimientos de la norma de tamao de ADN. entrar en la duracin estimada en pares de bases, para cada banda en su muestra de ADN. electroforesis no nos puede decir la longitud exacta del ADN de hebras de ADN, slo una buena estimacin. Por lo tanto dar lo mejor de su suposicin basada en los patrones de ADN de tamao.