Biologia Molecular Diagnstica

UNIP Universidade Paulista Prof Carlos William Francischini Curso: Biomedicina 5/ 6 semestre 2 semestre de 2011

Biologia Molecular
A Biologia Molecular o estudo da Biologia em nvel molecular, com especial foco no estudo da estrutura e funo do material gentico e seus produtos de expresso, as protenas. Mais concretamente, a Biologia Molecular investiga as interaes entre os diversos sistemas celulares, incluindo a relao entre DNA, RNA e sntese protica. um campo de estudo abrangente, que abrange outras reas da Biologia e da Qumica, em especial Gentica e Bioqumica.

Dogma da Biologia

Tpicos a serem abordados

Noes bsicas sobre a estrutura de cidos nuclicos; Replicao do DNA; Organizao gnica em procariotos e em eucariotos; Transcrio e processamento de RNA; Cdigo gentico; Sntese de protenas; Noes gerais sobre a reao de polimerizao em cadeia- PCR;

Tpicos a serem abordados

Clivagem de DNA com endonucleases de restrio; Anlise de DNA por eletroforese em gis de agarose; Noes bsicas de clonagem molecular (enzimas e vetores utilizados); Purificao de fragmentos de DNA de gis de agarose; clonagem de fragmento de DNA purificado em vetor plasmidial; Tcnicas de biologia molecular aplicadas ao diagnstico clnicolaboratorial de doenas infecto-parasitrias, malgnas e genticas; Deteco de agentes patognicos no ambiente e em alimentos; Testes de paternidade e forense; Noes de terapia gnica; Mapeamento gentico; Aconselhamento gentico; Tcnicas de deteco de mutaes gnicas; Correlaes gentipo-fentipo; Polimorfismos moleculares.

Empresas Privadas - Rotina

Empresas Privadas - Pesquisa

Organizao da disciplina
Cada aula: parte terica + lista de exerccios OU parte terica + laboratrio + lista de exerccios

Avaliaes: NP1: valor 9,5 pontos + 0,5 ponto de trabalho NP2: valor 9,5 pontos + 0,5 ponto de trabalho SUBSTITUTIVA: Toda a matria do semetre EXAME: Toda a matria do semestre

Bibliografia: Princpios da Bioqumica Lehninger Biologia Molecular da Clula Alberts

Importante: O contedo das listas de exerccios NO so suficientes para o estudo da prova. A utilizao de livros e do material de apoio fornecido pelo professor indispensvel.

Clula
Menor unidade funcional dos seres vivos.

Podem ser: Procariticas: sem ncleo protegendo o material gentico. Eucariticas: possui ncleo protegendo o material gentico.

1. Clula procaritica

2. Clula eucaritica

Clula eucaritica

2. Clula eucaritica: o ncleo

3. Clula eucaritica animal versus vegetal

4. Evoluo celular

5. Estruturas formadoras das clulas

Biologia Molecular
A Biologia Molecular o estudo da Biologia em nvel molecular, com especial foco no estudo da estrutura e funo do material gentico e seus produtos de expresso, as protenas. Mais concretamente, a Biologia Molecular investiga as interaes entre os diversos sistemas celulares, incluindo a relao entre DNA, RNA e sntese protica. um campo de estudo abrangente, que abrange outras reas da Biologia e da Qumica, em especial Gentica e Bioqumica.

Dogma da Biologia

cidos nuclicos
Existem dois tipos principais de nucleotdeos:
Desoxinucleotdeos ; Ribonucleotdeos RNA; Possuem natureza qumica semelhante.

Os cidos nuclicos (DNA e o RNA) so polmeros formados por nucleotdeos.

O DNA formado por desoxiribonucleotdeos; O RNA formado por ribonucleotdeos.

Nucleotdeos: subunidades bsicas dos cidos nuclicos

1. Caractersticas bsicas

1 3 2

nucleotdeo

BASES NITROGENADAS

(U) (C)

(A)

(T)

(G)

As bases encontradas no DNA so: Citosina, timina, guanina e adenina. As bases encontradas no RNA so: Citosina, uracila, guanina e adenina.

RNA : O acar possui OH no carbono 2 ACARES

DNA : O acar no possui OH no carbono 2

Desoxirribonucleotdeos: Adenina, Timina, Guanina, Citosina

Ribonucleotdeos: Adenina, Uracila, Guanina, Citosina

2. Nomenclatura dos nucleotdeos DNA: desoxiribonucleotdeos

2. Nomenclatura dos nucleotdeos

RNA: ribonucleotdeos

2. Nomenclatura dos nucleotdeos

ribonucleotdeos

desoxiribonucleotdeos

3. A ligao entre os nucleotdeos forma o DNA e o RNA

DNA
Extremidade 5

5
S e n t i d o d a f i t a

RNA
Extremidade 5

Ligao fosfodister

Ligao fosfodister

Extremidade 3

Extremidade 3

A ligao sempre ocorre entre o grupo fosfato ligado ao Carbono 5 com o OH ligado no Carbono 3 (sentido 5 3)

4. O pareamento das bases entre as cadeias ocorre atravs de ligaes de hidrognio

2 Pontes de H

Quanto maior o nmero ligaes de H, maior a fora de atrao.

3 Pontes de H

Pareamento no DNA: A -------- T G --------- C

Pareamento no RNA: A -------- U G --------- C

5. Estrutura do DNA 1953 Watson e Crick: o DNA formado por duas cadeias helicoidais em volta do mesmo eixo formando um estrutura dupla hlice

Estrutura mais estvel do DNA

Prioritariamente encontrada na clula

5. Estrutura do DNA
O DNA ocorre em 3 estruturas tridimensionais diferentes: Formas A, B e Z.

6. Desnaturao do DNA
Desnaturao: perda da estrutura da molcula.
Ocorre sob aquecimento ou variaes bruscas de pH.

Aumenta temperatura

Diminui temperatura

Temperatura de melting (Tm): a temperatura em que 50 % das duplas fitas de DNA se desnaturam.

Resumindo - Caractersticas do DNA

Possui um esqueleto de desoxirribose e grupos fosfatos (estes conferem carga negativa molcula). Ligado ao carbono 1 de cada nucleotdeo se encontra uma base nitrogenada que pode ser purina (A ou G) ou pirimidina (C ou T) Os nucleotdeos se ligam formando uma fita contnua atravs de ligaes fosfodister nos carbonos 5e 3da ribose A molcula composta por duas fitas, antiparalelas, complementares, onde, C G e A T. Esta interao ocorre atravs de pontes de Hidrognio entre as bases nitrogenadas das fitas complementares. Estas fitas antiparalelas complementares possuem em meio fisiolgico a conformao de dupla hlice conforme o modelo proposto por WatsonCrick

Estrutura do RNA

- Simples fita; - Entretanto, o RNA pode fazer dupla fita na mesma molcula; - Em algumas situaes o RNA pode fazer pareamento de bases com DNA;

Estrutura do RNA

5. Estrutura do RNA
Existem 3 tipos principais de RNA nas clulas:

RNA mensageiro (mRNA): produto do DNA que especfica a sequncia de uma protena. RNA ribossmico (rRNA): Atua na sntese de protenas. RNA transportador (tRNA): responsvel pela identificao da sequncia do mRNA e incoporao do aminocido na cadeia da protena.

Outras funes dos cidos nuclicos

Genes e Genoma
Genoma: compreende toda a sequncia de DNA responsvel pela informao gentica de uma clula ou vrus. Gene: seqncia de DNA de um genoma capaz de produzir um produto biolgico funcional (protena ou RNA). Portanto: Um genoma compreende um grande nmero de genes.

Caractersticas bsicas de um gene procaritico

Promotor

Gene 1

Gene 2

Gene 3

terminao

mRNA 1

mRNA 2

mRNA 3

Caractersticas bsicas de um gene eucaritico

Organizao do genoma humano

Os genomas esto organizados na forma de cromossomos

 Genoma E. coli: 5 milhes de pares de bases dispostos em um cromossomo circular que desenrolado mede 1.500 um. Genoma humano: 6 bilhes e pares de bases dispostos em 46 fitas (cromossomos) que desenrolados e ligados mediriam 1,5 metros.

Como possvel que sequncias to grandes de DNA sejam capazes de ocupar um volume to pequeno dentro das clulas?

Organizao dos cromossomos

Dupla-hlice

Superespiamento do DNA

Organizao dos cromossomos

O material cromossmico ( DNA, histonas e outras protenas constituintes) chamado de cromatina

Caractersticas bsicas do cromossomo mittico

Eucromatina X Heterocromatina
Regies mais frouxas do genoma Regio de maior expresso gnica. Regies mais condensadas do genoma Regio sem expresso gnica

Sobre a estrutura e a funo do DNA, analise as afirmativas abaixo: I. Possui um esqueleto de desoxirribose e grupos fosfatos, que conferem carga negativa molcula. II. Ligado ao carbono 1 de cada nucleotdeo se encontra uma base nitrogenada que pode ser purina (A ou T) ou pirimidina (C ou G). III. Os nucleotdeos se ligam formando uma fita contnua atravs de ligaes fosfodister nos carbonos 5e 3do anel de desoxiribose. IV. A molcula composta por duas fitas, antiparalelas, complementares, onde, C G e A T. Esta interao ocorre atravs de pontes de hidrognio entre as riboses das fitas complementares. V. Estas fitas antiparalelas complementares possuem em meio fisiolgico a conformao de dupla hlice conforme o modelo proposto por WatsonCrick