RECUENTO DE LEUCOCITOS

I) Introduccin Para preservar la constancia del medio interno, las clulas hemticas han de mantenerse constantes. Por eso las clulas viejas o desgastadas son destruidas y renovadas continuamente. La cantidad de cada tipo de clulas sanguneas constituye un parmetro constante para cada especie, con las variaciones normales debidas a la edad y al sexo. Este parmetro slo se ver alterado en determinadas circunstancias ambientales o patolgicas. El recuento de clulas hemticas, tanto de eritrocitos como de leucocitos, es una de las pruebas clsicas en analtica clnica. El recuento de plaquetas no se suele hacer, salvo cuando se sospecha que el paciente tiene alguna anomala grave (normalmente de tipo leucmico). Estas pruebas tienen por objeto determinar la concentracin de los distintos tipos celulares presentes en la sangre. Permiten detectar anomalas como anemias y policitemias en el caso de los glbulos rojos, y leucopenias y leucocitosis en el de los glbulos blancos. La importancia clnica atribuida al recuento, sobre todo en el caso de los eritrocitos, ha fluctuado a lo largo de la historia. Actualmente se le da un valor menor, debido sobre todo a su inexactitud. Para determinar la anemia se considera ms exacto y simple el valor hematocrito (relacin entre el volumen de eritrocitos y el volumen total de sangre).

II) Material -Cmara de recuento de Neubauer o Burker -Cubreobjetos -Pipetas especiales para dilucin de la sangre -Solucin diluyente para la sangre -Microscopio

III) Mtodo Se llena de sangre la pipeta de dilucin , hasta la seal 0'5 1, dependiendo de cunto deseemos diluir la sangre. Tomaremos la precaucin de evitar burbujas que introduciran errores en la medicin.

Como se puede apreciar en la Fig.1, existen dos pipetas distintas de dilucin de la sangre: una para eritrocitos y otra para leucocitos. La de eritrocitos presenta una ampolla de dilucin mayor. Si la sangre sube ms arriba de la seal, se puede corregir el error aplicando la punta sobre la yema del dedo o sobre un papel de filtro. Si el exceso de sangre es grande, se debe limpiar la pipeta y repetir la operacin. Se limpia bien la punta de la pipeta y se sumerge en la correspondiente solucin diluyente. Se llena hasta la seal 101 en eritrocitos o hasta la 11 en leucocitos. Se tapan los extremos de la pipeta y se agita

suavemente unos segundos para facilitar la mezcla en la ampolla de dilucin de la pipeta. Como consecuencia, la sangre queda diluida en la pipeta de eritrocitos a 1/200 (si se llen de sangre hasta la seal 0'5) o a 1/100 (si se llen hasta la seal 1); y en la pipeta de leucocitos a 1/20 o a 1/10. Se prepara la cmara de recuento con el cubreobjetos y se vuelve a agitar la pipeta durante 2 3 min. (no con demasiada energa, para evitar que se rompan las clulas). Se eliminan soplando las primeras gotas de lquido que ocupan la porcin capilar de la pipeta, pues en esa zona el lquido est exento de clulas, y se apoya la punta de la pipeta (formando un ngulo de aproximadamente 35) en el borde del cubreobjetos Pipeta de toma de muestra

Laminilla
Cmara de Neubauer

El lquido penetrar por capilaridad. Debe llenar justamente el espacio plano situado bajo el cubreobjetos, puesto que un exceso de lquido tiende a elevarlo, con el consiguiente aumento en el volumen y en el nmero de clulas contadas. Si existe un pequeo exceso de lquido, puede eliminarse tocando ligeramente la gota con el dedo. Se sita la cmara en el microscopio, despus de unos minutos para que las clulas sedimenten, y se procede al recuento con el objetivo de 10 aumentos.

IV) Principio del recuento La cmara de recuento (de Neubauer o Burker) consiste en una gruesa capa de vidrio con unas plataformas centrales que son exactamente 0'1 mm ms bajas que las laterales. En las plataformas centrales existe una cuadrcula (diferente dependiendo de una u otra cmara, como muestra

Los lados de los cuadrados pequeos son, en ambas cmaras, de 0'05 mm. Los lados de los cuadrados grandes en la cmara de Neubauer son de 0'25 mm. La altura entre el cubreobjetos y la cmara central es de 0'1 mm. Normalmente se utiliza la cmara de Neubauer (los cuadrados grandes para el recuento de leucocitos, y los pequeos para el de hemates).

Una vez realizado el recuento, los resultados deben expresarse en nmero de clulas por milmetro cbico de sangre. n cls./mm3 de sangre = (A/V) x f Donde: A = nmero de clulas contadas V = volumen del cuadrado (en mm3) f = factor de dilucin Cada persona debe realizar el recuento en al menos 3 cuadrados diferentes y hallar la media, antes de calcular la concentracin de clulas.

V) Experiencias sobre esta prctica A los alumnos les resulta entretenida. Adems, cuando se hace bien, se obtienen valores correctos (555 millones de eritrocitos/mm3 en los chicos, algo menos en las chicas). Pero conviene recordar que actualmente se recurre ms al hematocrito (que, ya lo hemos dicho, tambin se puede realizar en clase si disponemos de tubos finos y graduados de vidrio).

Resultados A= 42 C= 37 B= 27 D= 48 42+27+37+48 = 154 (A,B,C,D) 154X50 7700 LC

MODO DE HACERLO: Se procede a hacer una tincin igual que en el ejemplo anterior Se contabilizan los distintos tipos de leucocitos, usando un contador de saco u otro cualquier artilugio que posibilite el contaje. Pueden cogerse varios campos del microscopio (los mejores, sin repetirlos) usando el sistema de conteo de dividir mentalmente el campo del microscopio en una esfera de reloj y ejecutar el contaje sistemticamente. Lo normal es hacer un recuento de 200 a 300 leucocitos; lo mnimo es 100. Se realizan los clculos pertinentes y se pasan a tanto por ciento. Se compara lo obtenido con los valores normales. VALORES NORMALES Leucocitos: En el hombre (en la mujer un poco menos): De 6.000 a 8.000 por milmetro cbico. Neutrfilos...... 60 al 70% Linfocitos........ 25 al 30% Monocitos........ 5 al 10% Eosinfilos....... 1 al 4% Basfilos.......... 0,5% VALORES ANORMALES. El aumento suele indicar una patologa, infecciosa o no. Leucocitos: Aumento entre 10.000 a 20.000 por milmetro cbico indica una infeccin aguda (apendicitis, neumona, etc.). Si el aumento es ms de 30.000 a 40.000 indica una probable Leucemia. Neutrfilos: Su aumento indica una infeccin aguda bacteriana normalmente, cercana en el tiempo. Monocitos: Su aumento indica una infeccin crnica bacteriana como la tuberculosis, fiebres tifoidea, paludismo y otras infecciones crnicas. Linfocitos: Los linfocitos aumentan en la tos ferina, la anemia perniciosa, por la permanencia a elevadas altitudes o en los trpicos, por las quemaduras solares y en ciertas enfermedades crnicas como la tuberculosis, etc. Aumentan tambin en las enfermadades agudas poco lejanas en el tiempo. (Primero aumentan los Neutrfilos y luego los Linfocitos).

Eosinfilos: Su aumento indica una parasitosis por tenias, anquilostomas, triquina, etc. Basfilos: Su nmero aumenta en los procesos alrgicos, asma, y algunas dermopatas.
Tambin puede alterarse su nmero en procesos puramente fisiolgicos como la regla (menstruacin), vivir en grandes alturas, diferentes horas del da, digestin, etc.