Estudio de los tejidos biominerales: desarrollo y microestructura del esmalte dental

Postgrado en Geologa Asignatura de Master Metodologa y tcnicas de campo y laboratorio en investigacin paleontolgica 60331 Jos Ignacio Canudo y Gloria Cuenca-Bescs

Biomineralizacin
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La biomineralizacin es la formacin de minerales por los organismos. Es por tanto un campo multidisciplinar que incluye diversas areas tanto en ciencias qumicas como biolgicas. Los organismos de los 5 reinos forman ms de 60 minerales distintos. La orientacin y estructura nicas de los cristales dentro de las fases inorgnicas de los tejidos mineralizados y en algunos casos la morfologa distintiva de estos biominareles son claras indicaciones de que los procesos de la nucleacin y crecimiento de los cristales estn fuertemente controlados por los organismos. Los organismos utilizan macromolculas como proteinas y glicoproteinas para controlar estos procesos moleculares.
Janet Moradian-Oldak varias citas a partir de su art. en Science, 2005

Histologa

Desarrollo dentario: http://es.wikipedia.org/wiki/Desarrollo_dentario

Desarrollo de un incisivo humano

Origen del esmalte

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Las proteinas y estructuras bsicas de los cristales de esmalte se conservan en numerosos vertebrados, como los peces pulmonados o dipnoos. El pez pulmonado de Australia Neoceratodus forsteri pertenece al clado sarcopterigia cuyos fsiles ms antiguos son del Devnico, hace unos 500 My. Esto sugiere que los mecanismos de formacin del esmalte dental pueden tener una historia de al menos 500 My. Satchell, P.G., Shuler, C.F., and Diekwisch, T.G.H. (2000). True enamel covering in teeth of the Australian lungfish Neoceratodus forsteri. Cell & Tiss. Res. 299, 27-37.

Cairns, Explanade, NQs. Australia, 2007

B&C1887

Seccin de la union del esmalte (marrn) y dentina (blanco). Las lneas blancas indican la direccin de los prismas de esmalte y de los tbulos de dentina respectivamente

Estrias de Retzius A&D1990

Microestructura del esmalte: Schmelzmuster

La formacin del esmalte: biomineralizacin
Esmalte decusatio

Esmalte

Dentina

Posicin de la proteina amelogenina en los ameloblastos o clulas formadoras del esmalte y las vesculas que lo segregan as como en la capa de esmalte recin formada en el diente en desarrollo. La tincin de la amelogenina es roja.
Diekwisch et al., 1993

Janet Moradian-Oldak, Universidad Sur de California, Los ngeles Science, 2005: formacin del esmalte dental en experimentos in vitro: proceso de autoensamblaje de protenas durante el desarrollo del esmalte en mamferos. Las ordenadas estructuras que configuran el esmalte dental tienen especial inters porque se forman sin colgeno, la protena que proporciona la estructura tridimensional durante la formacin sea. En su lugar, el esmalte dental cuenta con la protena amelogenina, que se autoensambla formando nanosferas, unas estructuras que se organizan espontneamente y generan micro-cintas.

La biomineralizacin: amelogenina

La biomineralizacin: amelogenina
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Estas micro-cintas pueden servir como marco para orientar el crecimiento de los cristales de apatito que conforman el esmalte dental. La amelogenina tiene una fuerte tendencia a ensamblarse en nanosferas lineales y esta propiedad es clave para su funcin como protena estructural durante las primeras fases de la mineralizacin del esmalte. Durante el proceso de ensamblaje, las nanosferas pueden alinearse de manera directa o, por el contrario, reorganizarse dentro de la propia estructura de la nanocadena. "El trabajo ofrece informacin esencial para estudiar los distintos mecanismos de biomineralizacin, confirma la habilidad del componente extracelular de la matriz para controlar la orientacin del cristal a travs del autoensamblaje supramolecular y contribuye al diseo de materiales especficos", segn Moradian-Oldak.

Importante: la amelogenina desaparece al terminar el proceso de formacin del esmalte, no as el colgeno, que permanece en los huesos.

Retzius y Hunter-Schreger bands

Retzius

Hunter-S

Seccin longitudinal de un diente en el que se muestran las lneas de Retzius y las bandas de Hunter-Schreger. En: http://alf3.urz.unibas.ch/vmic/oralhisto/

Hunter-Schreger bands

En: Koenigswald & Rose: 2005. The enamel microstructure of Early Eocene Pantodont Coryphodon and the Nature of the Zigzag enamel. Journal of Mammalian Evolution, 12, 419-432.

Adems de estas constricciones, durante la formacin del esmalte hay patologas que causan defectos

Patologas durante la formacin del esmalte: microdefectos y macrodefectos

Any disturbance, such as severe infection can disrupt enamel formation. That disruption of enamel formation will leave an enduring record as a disorientation of enamel prisms. Because the human dental growth sequence is known, the age at which the enamel disturbance occurred can be determined from the location of the disturbance within the enamel. A standard chart for dental development can be consulted for this purpose. There is an extensive literature (now in excess of 500 articles) on the epidemiology and etiology of enamel defects. Many are investigations using laboratory animals. There are two types of enamel developmental disturbance of interest to the paleoanthropologist.
http://www.uic.edu/classes/osci/osci590/4_5DietAnd%20DentitionInArchaeology.txt.htm

(1) Microdefects are histological structures known as Wilson bands. These are accentuated brown striae of Retzius. The most celebrated of these is the neonatal line (Schour, 1936). If the disturbance is short in duration and the enamel formation resumes, that disturbance is recorded as a narrow band seen in the section of enamel under a light microscope. That evidence of enamel formation disruption and recovery is called a Wilson band. Wilson bands are thin layers of abnormally structured enamel marking the position of the active ameoloblasts (Gr = enamel formers) at the time of insult. Wilson bands are sometimes called 'pathological brown striae' in the literature. This descriptive term is a nice way to describe the bands which contain 'sudden changes in prism direction associated with atypical rod forms.' Wide neonatal lines are associated with traumatic births. Wilson bands appear to represent brief periods of stress lasting from one to five days. The examination of teeth for histological disturbance is destructive; therefore, this technique is not used of rare ancient hominid teeth.
http://www.uic.edu/classes/osci/osci590/4_5DietAnd%20DentitionInArchaeology.txt.htm

Macrodefectos: hipoplasias
(2) Macrodefects are defects visible on the tooth surface. They are known as hypoplasias. These can vary in appearance from small pits or furrows to large, deep grooves or even large areas of missing enamel. Typically Hypopl. these defects are horizontal grooves that are called chronological or linear enamel hypoplasias. They seem to reflect impairment of enamel formation for weeks or months, while Wilson lines record events limited to one or a few days. If the enamel formation does not resume, the defect can be viewed macroscopically as a transverse area of depressed enamel. This is known as enamel hypoplasia. Enamel hypoplasias show a predilection for anterior teeth and for the cervical and middle thirds of tooth crowns. Investigators have shown statistical associations between Retzius striae, Wilson bands enamel hypoplasias and a variety of clinical conditions of and which we will only mention a few here: premature birth, malnutrition, fluorosis, high fever, localized trauma and hypoplasias systemic metabolic distress such as gastrointestinal disorders.
http://www.uic.edu/classes/osci/osci590/4_5DietAnd%20DentitionInArchaeology.txt.htm

Figure : Furrow (F) and pit (P) hypoplastic defects on the surface of an anterior tooth. The hypoplastic defects represent disruptions to the regular growth layers that can be seen running across the tooth.
Referencias: 2005 D. M. Antoine, S. W. Hillson, D. Keene, M. C. Dean and G. Milne, Using growth structures in teeth from victims of the Black Death to investigate the effects of the Great Famine (AD 13151317). American Journal of Physical Anthropology. 2005 D. Antoine and S. Hillson, Famine, Black Death and health in fourteenth-century London, in Archaeology International [8] 2004/5, London: Institute of Archaeology, UCL.

Did the Great Famine of AD 1315-1317 have a detectable effect on the growth of people who experienced it as children? The Great Famine of AD 1315-1317 is recorded as one of the greatest calamities of Medieval Europe but little is known about its direct effects on the people who survived it. An opportunity to address this question has been provided by the excavation of the Royal Mint Black Death cemetery in London, containing burials dating to 1349 when the epidemic was at its height. Those people buried in the cemetery who were in their thirties at the time of their death would have lived through the Great Famine as children. As teeth form during childhood, it is possible to use their dental development to investigate the impact of the famine on their overall health. Growth structures inside teeth, similar to tree-rings, mark out dental development. These structures, which are visible in thin sections, are being used to build a detailed growth record of the first years of their lives, including any periods of growth disruptions. Indeed, systemic disturbances (i.e. those which affect the entire body) experienced by a child during the period of dental development, such as episodes of nutritional stress, can disrupt tooth formation. Any such event can result in the formation of furrows or pit-like hypoplastic defects that can be seen on the surface of tooth crowns and, internally, as lines of disturbed growth (Figure). As dental tissues are not turned over, teeth offer a permanent and detailed record of any disturbances occurring during childhood. The dentitions of approximately 35 individuals who died in their early thirties are being analysed in this way. The timing of growth disturbances are compared to the detailed chronology of the Great Famine.

Bibliografa hipoplasias Alt., Rosing, F., and Teschler-Nicola, M. eds Dental Anthropology Fundamentals Limits and Prospects. New York: SpringerWien, 1998. Anderson, R. Magic, Science, and Health. New York: Harcourt Brace College Publishers, 1996. Garbarino, M. and Sasso, R. Native American Heritage. Prospect Heights: Waveland Press, Inc., 1994. Goodman, A. and Rose, J. "Dental Enamel Hypoplasias as Indicators of Nutritional Status" in Advances in Dental Anthropology. New York: Wiley-Liss, Inc., 1991. Goodman, A. "Developmental Defects in Dental Enamel" Cambridge Encyclopedia of Human Growth and Development New York: Cambridge University Press, 1998 pp210-211. Hillson, S. Dental Anthropology. New York: Cambridge University Press, 1996. Larsen, C. Bioarchaeology Interpreting Behavior from the Human Skeleton. New York: Cambridge University Press, 1999. Marmot, M. et al "Contribution of job control and other risk factors to social variations in coronary heart disease incidence" The Lancet Vol 350: July 26,1997 pp 235-239. Roberts, C. and Manchester, K. The Archaeology of Disease 2nd ed. Ithica: Cornell University Press, 1995. Rose, J. et al "Diet and Dentition: Developmental Disturbances" in The Analysis of Prehistoric Diets. New York: Academic Press, 1985.

Microestructura del esmalte dental

Proceedings of the Enamel Microstructure Workshop held by the University of Bonn at Andernach/Rhine, July 24-28, 1994 Edited by WIGHART v. KOENIGSWALD and P. MARTIN SANDER Department of Paleontology, University of Bonn, Germany A.A.BALKEMA ROTTERDAM BROOKFIELD 1997

As this transmission electron micrograph of an anhydrously prepared specimen demonstrates, enamel crystals grow in tight proximity to the adjacent dentin. However, careful analysis reveals that enamel crystals grow independently from adjacent dentin crystals. Diekwisch et al. (1995). Initial enamel crystals are spatially not associated with mineralized dentine. Cell & Tissue 279, 149-167.

Biomecnica: empaquetamiento de los prismas de esmalte

Perpendiculares a la unin entre la dentina y el esmalte porque as resisten mejor las fuerzas de compresin y tensin ejercidas durante la masticacin. Las bandas de HunterSchreger son paralelas al cuello del diente

HSB El esmalte radial soporta mejor la Compresion y tensin segn Pfretzschner, 1988

Modelos de empaquetamiento de los prismas de esmalte

El esmalte es un material compuesto por dos fases: cristal mineral [hidroxiapatito, Ca10(PO4)6(OH)2], formando prismas o largas cuerdas y orgnica, un complejo de proteinas en lo que se conoce como la matriz interprismatica (IPM) que tambin tienen cristales de Hidroxiapatito. Los cristalitos de la IPM son casi verticales a los prismas. Los cristales de esmalte tienden a crecer perpendiculares a la superficie de los ameloblastos que los secretan (como un tubo de pasta). Cada ameloblasto termina en su final secretor en los que se conoce como proceso de Tomes, el cual se encaja dentro del hueco del proceso de Tomes en la superficie de esmalte en desarrollo. Procesos de Tomes Prisma Angulo que forman los prismas con la superficie de esmalte

B&C1987

Prism

Tom e

Boyde1987 En Aiello & Dean 1990 (A&D90) Estras de Retzisu: flechas blancas grandes Constricciones circadiales en los prismas de esmalte: flechas blancas pequeas Perikimata: P y flechas negras

Imaginar un tubo de pasta que se presiona a velocidad diferente (A&D1990)

Prismas o caas de esmalte

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Lo que llamamos prismas son discontinuidades en el esmalte debido a que los cristales crecen en ngulo con respecto a la superficie de los procesos de Tomes, y cuando dos de estas superficies se encuentran en un punto en la punta de la clula, los Empaquetado 3. cristales deben crecer en ngulo entre Ameloblastos hexagonales s, formando una lnea de Prismas en ojo de cerradura discontinuidad. Estas limitan largos conjuntos de cristales que son lo que llamamos prismas o caas de esmalte. Los prismas no estn completamente separados unos de otros, como podran estarlo un mazo de lpices y son solo discontnuos en las vainas de los mismos. Esto es importante pues as el esmalte es ms resistente que si estuviera formado por caas aisladas.
Superficie de diente de Australopithecus afarensis. Modo empaquetado 3

Modelos de empaquetamiento de los prismas de esmalte

Boyde 1976 en A&D90 Forma de los prismas en el empaquetado 2, 1 y 3 respectivamente. Los hexgonos son el permetro de los ameloblastos. Las formas de los prismas son en forma de herradura en el modo 2, en crculo en el 1 y en forma de ojo de cerradura en el 3. Estas formas son visibles cerca de la superficie del diente. Los ameloblastos, son menores en tamao en el modo 2, intermedios en el 1 y mayores en el 3 (20, 30 y 40 !m resp.). El modo 1 es comn en Sirenios, Cetceos, Quirpteros y otros mamferos El modo 2 en Lagomorfos, perisodctilos y artiodctilos El modo 3 en carnvoros, pinnpedos y proboscdeos. En homnidos predominan los modos 1 y 3, el 2 es comn en los monos del viejo mundo

Estructura del esmalte en los roedores: Schmelzmuster

IPM PE

PE Esmalte radial. A la derecha el de Phacochoerus

IPM

El esmalte radial tienes prismas en filas radiales (PE) separadas por espesas placas de matriz interprismtica (IPM)
Los incisivos de los roedores tienen dos capas de esmalte, la interna contiene HSB y la externa esmalte radial. Los de los lagomorfos, a pesar de tener la misma funcin tienen una nica capa. Los de otros mamferos con adaptaciones parecidas a las de los roedores tienen tipos distintos tambin: aparentemente no es adaptativo

El Schmelzmuster en los herbvoros de dientes hipsosontos

Los tres tipos de estructura de esmalte en los molares de los Arvicolinae A: radial B: tangencial (zigzag) C: Lamelar (uniserial HSB). Las caas se orientan en las 3 direcciones. P= prismas de esmalte IP= Matriz interprismtica En Koenigswald 1982

El Schmelzmuster en los herbvoros de dientes hipsosontos

A: radial B: tangencial (zigzag) C: Lamelar

Pfretzschne r 1988

m1 y M1 de arvicolino mostrando los trailing y leading edges y la distribucin del Schmelzmuster. Koenigswald 1982

Recordando la resistencia del esmalte radial a la fuerza que se ejerce sobre el diente comprendemos su distribucin en los trailing edges o lados sobre los que se ejerce la mayor presin durante la masticacin en los arvicolinos

Las dos capas de esmalte en los arvicolinos

El Schmeltzmuster de un tringulo de m1 de Arvicola terrestris (Holoceno). La seccin paralela a la superficie de masticacin muestra tres tipos distintos de esmalte que se vuelven visibles despus de una breve abrasin con cido clorhdrico (HCL). La organizacin de los tipos de esmalte se mantiene estable en toda la altura del molar (Koenigswald, 1982). No cambia con la ontogenia.

cmo preparar el material? 1. corrosin con cido HCL

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Limpieza de los fsiles Cubeta de ultrasonido Ligera corrosin con clorhdrico diluido Se vuelve a lavar en la cubeta de ultrasonidos Observacion al microscopio

cmo preparar el material? 2. abrasin con polvo esmril

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Limpieza de los fsiles Cubeta de ultrasonido Esmerilado o pulido probando distintos granos de polvo esmril Observacion al microscopio Pegado en portaobjetos con resinas sintticas por calor

Preparacion muestras para microscopio electrnico (SEM)

Clear Casting Polyester Resin for casting and embedding (thin castings up to 1/2 inch thick). Industrial Plastics Supply Co., 309 Canal St., New York, NY. Liquid hardener for hardening polyester resins and compounds 10 grams: 7 drops 20 grams:14 drops 30 grams (~1 ounce): 21 drops Mix well with wooden stick

1,2 y 4 Martin, 5 Wahlert, Uni Bonn

Sem

Debajo: capa de esmalte preprismatica de un mamfero Cretacico: prob. Gobiconodontido

Esmalte sin tratar en un molar de Marmota (Sciuridae)