INTRODUCCION:

Un medio de cultivo intenta el crecimiento explosivo y reproduccin acumulando grandes nmeros de bacterias in vitros en un periodo de tiempo muy reducido, para observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio bioqumico e inmunolgico, al contar con material en cantidad suficiente. Por ello constare de algunas propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes, condicione de temperatura, etc.), que sern las ms idneas para la bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada una de ellas en particular, en la bacteriologa sistemtica. El aislamiento de los distintos microorganismos contenidos en una muestra se lleva a cabo sobre la superficie de un medio de cultivo solido contenido en una placa petri los medios de cultivo que se utilizaran irn a depender del tipo de muestra y los microorganismos presentes en ella as se usaran medios nutritivos generales, medios selectivos, medios diferenciales ya que los microorganismos que se han de aislar son nutricionalmente exigentes ; estos medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de enriquecimiento que tratan de aumentar el nmero de bacteria existentes, si consideramos que se encuentran en cantidad muy excesiva, a la vez que inhiben la flora de asociacin acompaante y de aislamiento (que tienen por fin conseguir una colonia o clon, es decir, grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus propiedades); los dos primeros son principalmente lquidos y los segundos, slidos. Los medios selectivos son aquellos que poseen algn componente que permite o no el crecimiento de una especie bacteriana, carcter de importancia para su identificacin, y los diferenciales por lo que suelen llevar indicadores (sustancias que varan su coloracin segn el pH del medio) u otros ndices de reacciones qumicas definidas. Ambos medios selectivos o diferenciales pueden ser lquidos o slidos. Se podra utilizar el agar como medio de cultivo.

OBJETIVOS:
La finalidad de este trabajo que se ha realizado nos podr ayudar a: Identificar mtodos eficaces para el aislamiento de microorganismos. Conocer algunos mtodos para obtener un cultivo puro. Identificar microorganismos siguiendo los pasos de la microbiologa. Identificar colonias y su nmero teniendo en cuenta su: Forma frontal Borde frontal Elevacin

Teniendo en cuenta las medidas de bioseguridad y los funcionamientos adecuados de los instrumentos y equipos del laboratorio para que se realice sin ningn percance esta prctica de cultivo de bacterias; as poder agregar nuestros conocimientos sobre bacterias su funcionamiento, forma, color, tamao, etc.

MATERIALES:
Material biolgico: bacterias (Escherichia coli) Placa Petri Porta objetos Cubre objetos Barilla Pipetas y micro pipetas Mechero Tubo de ependor Asas de kolle Reactivos y colorantes: safranina, violeta genciana, alcohol, lugol, agar, cloruro de sodio, cetona, peptona, glucosa, agua destilada Equipos: cmara de flujo laminar, auto clave, microscopio, horno, incubadora, vortex, estufa

MTODOS:
CULTIVO PLACA AGAR: Se utilizan variaos mtodos de siembra por estras (no se conoce los tipos de bacterias) en superficie entre las cuales tenemos el mtodo francs y el clsico, la finalidad de estos, es obtener colonias separadas tambin se realizara en puntos siempre y cuando se conocen las bacterias. METODO FRANCES (Estra compuesta) o Se flamea el asa y se toma la muestra del material a estudiar. o Coloque el inoculo en uno de los extremos de la caja de petri con el medio de cultivo indicado. o Extienda el cultivo haciendo 4 o 5 estras paralelas, sin romper el agar. o Flamee de nuevo el asa enfrela y sin tomar ms muestra, haga 4 o 5 estras paralelas formando un ngulo recto con las anteriores. Este paso se repite hasta cubrir toda el rea de la caja. METODO CLASICO (estra simple) o Flamee el asa y se toma muestra del material a estudiar.

o Extienda de un extremo a otro formando lneas en zigzag hasta cubrir toda el rea de la caja. CULTIVO EN AGAR INCLINADO o Rotule el tubo con su nombre, el nombre del germen que va inocular y la flecha en que se hace el inoculo. o Con la mano derecha tome la aguja de inoculacin y flamela. Sin soltarla, djela enfriar. o Sostenga el tubo con el cultivo en la mano izquierda, remueva el tapn con el meique de la otra mano y sostngalo de tal manera que no toque ninguna superficie. o Flamee la boca del tubo. o Retire con el agua de inoculacin una porcin de la colonia. Flamee nuevamente la boca del tubo. Tpelo y descrtelo. o Toma el tubo a inocular, destpelo, flamelo e inoclelo, haciendo una estra en su superficie en lnea recta. o Flamee de nuevo la boca del tubo, tpelo y colquelo en la gradilla. Antes de descartar la guja de inoculacin, esterilcela. o Incube a 37 grados centgrados por 24 a 48 horas. o Describa las caractersticas del crecimiento bacteriano en agar inclinado. CULTIVO EN AGAR NUTRITIVO o El crecimiento de las bacterias en medios lquidos se manifiesta por la aparicin de: turbidez o sedimento, velo en la superficie del medio y olor caracterstico. o Para la siembra proceda de igual manera que en el caso anterior pero utilizando el asa y agitndola en un medo lquido. Incube a 37 grados por 24 o 48 horas, interprete los resultados

DATOS:
SOPORTE TERICO:
CULTIVO DE MICROORGANISMOS:
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las caractersticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la disponibilidad de nutrientes en el medio.

 MEDIOS DE CULTIVO:
Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energa y elementos qumicos para la sntesis de sus constituyentes celulares. Dependiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en autotrofos si es el CO2 atmosfrico (microorganismos que fotosintetizan) y heterotrofos si utilizan carbono orgnico. La frmula elemental de un microorganismo es, aproximadamente, C4H7O2N lo que supone que los componentes de las clulas son: carbono que representa alrededor del 50% del peso seco, oxgeno (32%), nitrgeno (14%), fsforo (3%), azufre (en torno al 1%) y otros elementos traza entre los que se encuentran Fe, K, Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn. La elaboracin de medios de cultivo requiere proporcionar los elementos antes citados en una forma asimilable. As, por ejemplo, el C debe estar en forma de carbono orgnico para los heterotrofos y como CO2 para los autotrofos, el N en forma de NH4, de NO3- o de NO2- o en forma de aminocidos a los que se pueda tomar su grupo amino; el P debe estar en forma de PO4 3-, el S procede de aminocidos sulfurados o de SO4 2-, etc. Adems, en ciertos casos, es necesario aadir a los medios de cultivo algunos aminocidos o vitaminas que determinados tipos de microorganismos no pueden sintetizar. En el caso de la levadura del pan (Saccharomyces cerevisiae) la frmula elemental ms concreta es: C3.72H6.11O1.95N0.61S0.017P0.035K0.056 esta composicin puede variar ligeramente en funcin de las condiciones de cultivo o de fase de crecimiento. El conocimiento de la frmula elemental del microorganismo que se cultiva facilita la formulacin del medio de cultivo ms adecuado para el mismo. Los medios de cultivo se pueden clasificar en definidos cuando su composicin qumica se conoce totalmente y complejos cuando no es el caso porque estn compuestos por mezclas de extractos de materiales complejos (extracto de levadura, extracto de carne, etc.).Por otra parte, los medios de cultivo pueden ser lquidos o slidos si se aade algn agente solidificante que no sea consumible por los microorganismos (normalmente agar).En funcin de los microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden ser generales, selectivos cuando favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos mientras suprimen el de otros (por ejemplo, el medio SPS para clostridios), diferenciales cuando alguno de sus componentes permite identificar las colonias de un tipo de microorganismos (por ejemplo medios con hemates para identificar colonias de microorganismos hemolticos), selectivo-diferenciales cuando combinan las dos caractersticas anteriores (por ejemplo, el

agar de MacConkey para identificar Escherichia coli), y medios de enriquecimiento que permiten aislar un tipo determinado de microorganismo a partir de una mezcla una poblacin mixta de gran tamao.

MTODOS DE AISLAMIENTO:
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de los casos, mediante la produccin de colonias aisladas en cultivos slidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran nmero de ellas a partir de una nica clula inicial de forma que, tras un periodo de incubacin en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales (un clon bacteriano).Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las muestras ambientales son cultivables (microorganismos no cultivables). Esto es debido a dificultades intrnsecas en el cultivo (microorganismos parsitos de otros), al desconocimiento de los requerimientos especficos de cultivo, y a la existencia de grupos de microorganismos que deben mantenerse en equilibrio para poder sobrevivir (casos de sintrofa por ejemplo). Se estima que en slo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1 - 0,01 % de la bacterias marinas son cultivables. Existen procedimientos de enriquecimiento del nmero de bacterias de ambientes naturales para facilitar su aislamiento. Uno de ellos es la Columna de Winogradski que crea un microcosmos para enriquecer el nmero de ciertos tipos de microorganismos presentes en ambientes naturales con objeto de facilitar su aislamiento.

CONCEPTO DE CULTIVO PURO:

Se denomina cultivo puro (axnico) al que contiene slo un tipo de microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias aisladas, de manera que todos los individuos del mismo tengan la misma composicin gentica. Los cultivos puros son esenciales para poder estudiar las caractersticas de los microorganismos y para poder identificarlos con seguridad. Sin embargo, cada vez se va conoce ms sobre el funcionamiento de las comunidades bacterianas lo que debe hacernos reflexionar sobre el hecho de que un cultivo puro supone unas condiciones no naturales y que, por consiguiente, la fisiologa de los microorganismos en ambientes naturales puede ser diferente de la que presentan en condiciones de cultivos puros.

 CRECIMIENTO MICROBIANO EN MEDIO LQUIDO:

Si la bacteria crece en un medio lquido, en la mayora de los casos las clulas que se producen en cada divisin continan su vida independientemente formndose una suspensin de clulas libres. En un cultivo discontinuo de bacterias en medio lquido, se pueden diferenciar cuatro fases en la evolucin de los parmetros que miden el crecimiento microbiano: 1.- Fase lag o de adaptacin 2.- Fase exponencial o logartmica 3.- Fase estacionaria 4.- Fase de muerte

PROCEDIMIENTO: Preparacin de medios de cultivo (se utiliza Agar (14g), Glucosa (5g), Peptona (5g)) Siembre de bacterias:
En las placas Petri previamente esterilizadas transferir el medio de cultivo hasta un tercio de la placa , homogenizar con movimientos suaves y tapar la placa dentro de la cmara de flujo laminar. Esperar 10 minutos hasta que soloidifique el agar. Con una asa de kolle estirilizada a la llama coger una pequea porcin de la bacteria y sembra en la placa Petri:el tipo de siembra ser especificado por el conductor del a prctica.

 Serrar la placa Petri dentro del a cmara de flujo laminar Etiquetar.

Incubacin
La placa Petri se transfiere ala incubadora graduada a una temperatura de 37.5C La placa Petri se coloca en forma invertida dentro de la incubadora

Luego de 48 horas la placa estar lista para la evaluacin

RESULTADOS:
CAMPOS VISUALES FAH

1 2 3 4 5 TOTAL X S S C.V.

48 48 18 6 22 142 28.4 283.84 16.85 59.33%