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QUMICA ANALTICA II



Prticas





Curso: Fsica e Qumica / Qumica




2004-2005



Responsvel: Jos Paulo Pinheiro












2
Programao das aulas prticas de QA II 2004/2005
(Os trabalhos com relatrio completo esto representados a negrito)

1 Aula- 22 Fevr - TP1 Regresso linear e erros associados.

2 Aula- 28 Fev P1 Determinao do Q e RT/F num elctrodo de vidro

3 Aula- 7 Mar P2 Determinao potenciomtrica do cido acetilsaliclico numa
aspirina

4 Aula- 14 Mar P3 Preparao e aferio de uma soluo de iodo

5 Aula- 4 Abr P4 Determinao do CQO - 1 parte

6 Aula- 11 Abr P5 Determinao do CQO - 2 parte

7 Aula- 18 Abr P6 Extraco por solventes

8 Aula- 2 Mai P7 Cromatografia em camada fina

9 Aula- 16 Mai. P8 Cromatografia lquida de alta eficincia

10 Aula- 23 Mai P9 Cromatografia gasosa

11 Aula- 30 Jun. P10 Cromatografia inica

12 Aula- 6 Jun. TP2 Problemas de reviso














3

O que e para que serve um relatrio

Um relatrio prtico destina-se a:
- explicar a experincia efectuada,
- descrever os resultados experimentais,
- apresentar os clculos efectuados e discutir os resultados obtidos.

Um relatrio prtico deve ser elaborado de tal forma que:
- outra pessoa possa repetir o trabalho efectuado com base nele,
- qualquer pessoa possa perceber qual o objectivo do trabalho, o que se fez, quais
foram os resultados obtidos e ter uma apreciao crtica dos resultados.

As normas seguintes destinam-se a ajudar na elaborao de relatrios prticos.

Um relatrio composto por:
- Titulo
- Objectivos/Introduo
- Mtodos/Parte Experimental
- Apresentao de Resultados Experimentais
- Clculos e Discusso de Resultados
- Concluses
- Bibliografia

Ttulo: Deve ser claro e descritivo.

Objectivos/Introduo: Deve conter uma descrio simples e clara dos objectivos, dos
dados que vo ser recolhidos e dos prncipios que vo ser demonstrados.
A Introduo pode conter os Objectivos. A Introduo deve ser uma descrio concisa
da histria e da teoria relevantes para o trabalho prtico. Tome em considerao a
metodologia especfica da(s) experincia(s) realizada(s). Podem ser adicionados esquemas
quando forem relevantes.
A Introduo no deve ter mais do que meia pgina A4 (10 a 15 linhas).

Mtodos/Parte Experimental: No copie o protocolo prtico. Pode adicionar uma
cpia do protocolo ao relatrio para consulta. Quaisquer modificaes, desvios ou adies ao
protocolo devem ser registadas.
Devem sempre especificar todo o equipamento usado (se necessrio) e tambm
descrever os reagentes usados (especialmente o tipo de reagente e o grau de pureza).


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Apresentao de Resultados Experimentais: Sempre que possvel os resultados
devem ser apresentados em tabelas. Cada tabela deve ser numerada para eventual referncia
no texto e incluir uma breve descrio do seu contedo (ex: Tabela III - Efeito do cido
clordrico nas roupas dos estudantes que no usam bata). A primeira linha de cada coluna da
tabela deve conter o nome da quantidade e respectiva unidade, incluindo quando necessrio o
factor multiplicativo usado.
As unidades so muito importantes. No inclua mais do que trs algarismos
significativos nos nmeros a menos que esteja convencido que o seu erro experimental
extremamente baixo (<1%). (Note que a gota tpica deixada numa bureta de 5 ml de 0.05 ml,
ou seja, 1%).

Clculos e Discusso de Resultados: Duma maneira geral os clculos devem ser
apresentados de forma completa. Se tiver muitos clculos iguais deve apresentar
detalhadamente um deles e depois pode apresentar apenas os resultados finais dos outros
casos idnticos.
Os resultados finais dos clculos devem ser apresentados em destaque e devem
estar sempre em concordncia com os erros calculados.
A discusso uma das partes mais importantes do relatrio. As discusses no so
lobrigatriamente longas, mas devem ser completas e concisas.
Pode discutir os clculos conforme forem sendo apresentados. A discusso deve ser
feita do ponto de vista de avaliao dos resultados finais, do seu significado e da sua
exactido. Tente pensar sobre as possveis implicaes dos resultados, relacionando-os com
os objectivos do trabalho.

Concluses: As concluses devem ser uma descrio breve do que foi encontrado ou
demonstrado na aula prtica. por vezes tambm apropriado incluir um resumo dos
resultados quantitativos. As concluses so feitas com base nos objectivos do trabalho.

Bibliografia: Se em qualquer parte do relatrio usou qualquer fonte bibliogrfica deve
fazer referncia no texto a esse facto. A ultima parte do relatrio deve ser uma lista de todas as
referncias usadas.

Notas
- Se usar um livro ou artigo duma revista, no perca tempo a copiar pargrafos
inteiros; limite-se a extrair a informao relevante para o fim em vista.
- Leia o relatrio com ateno no final para verificar se cometeu erros.





5
Protocolos dos trabalhos prticos:

Nota: Nesta coleco de protocolos existem mais trabalhos prticos que aqueles que
vo ser efectuados. Alguns destes trabalhos foram feitos no passado e voltaro a ser feitos no
futuro e constituem tambm material de estudo, pelo que foram incluidos nesta coleco.

Determinao de Q e RT/nF num elctrodo de vidro.
O objectivo deste trabalho calcular os parmetros Q e RT/nF de funcionamento dum
elctrodo combinado de vidro, usando uma titulao cido forte-base forte.
O pH duma soluo est relacionado com a actividade do io H
+
pela seguinte
equao:
pH = -log(H
+
) (1)
sendo a actividade do H
+
dada por:
(H
+
) = [H
+
] f
H
(2)
onde f
H
o coeficiente de actividade do io H
+
, que depende directamente da fora inica da
soluo. Logo tm que calcular-se [H
+
] e f
H
para obter o valor terico da actividade do H
+
.
Um elctrodo combinado de vidro segue uma equao do tipo de Nernst:
E (V) = Q + (RT/nF) log (H
+
) = Q - (RT/nF) pH (3)
Os parmetros Q e RT/nF podem determinar-se atravs duma titulao cido
forte/base forte desde que se conheam as concentraes exactas da base e do cido.

A- Parte experimental
Aparelhagem
Medidor de pH.
Elctrodo combinado de vidro.
Sonda de temperatura ou termmetro.
Agitador magntico e barra de agitao.
Bureta de 50 ml.
Pipetas volumtricas de 10 e 100 ml.
Material de vidro corrente de laboratrio.
Reagentes
Hidrxido de sdio, NaOH 0.1 M,
cido clordrico, HCl 0.100 M,
Cloreto de sdio, NaCl 0.100 M
gua destilada.


6
Procedimento experimental
1- Prepare uma montagem constituda por:
i) uma bureta cheia com uma soluo de NaOH 0.1 M.
ii) copo com cerca de 10 ml de HCl 0.100 M (medidos rigorosamente), ao qual se
adicionam 150 ml duma soluo de NaCl 0.100 M e uma barra de agitao.
iii) Aparelho de pH com o elctrodo mergulhado no cido e agitador magntico.
2- Regule o aparelho de pH para ler mV. Mea a diferena de potencial e a
temperatura da soluo. Anote o valor lido.
3- Titulao (Depois de cada adio de titulante espere que a leitura da diferena de
potencial estabilize e anote o valor lido e a temperatura da soluo).
i) Adicione 0,5 ml de NaOH de cada vez at perto do ponto de equivalncia.
ii) Perto do ponto de equivalncia reduza as adies de base para 0.05 ml.
iii) Depois do ponto de equivalncia, adicione 0.5 ml de cada vez, at atingir 20 ml.
4- Monte uma nova bureta com HCl e faa a titulao de retorno.
B- Elaborao do relatrio
Apresentao de Resultados
a) Apresente tabelas com os volumes de base ou cido adicionados e os valores de
diferena de potencial lidos.
b) Apresente os grficos de diferena de potencial vs. volume de base ou cido
adicionados, para cada uma das titulaes.
c) Apresente o grficos de diferena de potencial vs. nmero de moles adicionadas de
base ou cido (para a titulao de retorno faa n
OH
=n
OH,inicial
-n
H,adicionado
, de modo a que se
possa sobrepor primeira titulao).
Clculos e Discusso
d) Calcule a concentrao da base pelo mtodo da derivada e pelo mtodo de Gran
(mtodos explicados no anexo 1). Compare os valores de concentrao de base obtidos. Qual
o valor mais preciso ?
e) Calcule a actividade do H
+
em cada ponto da titulao (anexo 3). Converta os
valores de actividade em pH.
f) Faa o grfico de diferena de potencial versus pH (E vs. pH). Porque que no
grfico de E vs. pH se podem observar desvios significativos linearidade para valores entre
pH 6 e 8 ?
g) Faa a regresso linear para E vs. pH.
h) Porque que precisa de medir rigorosamente todos os volumes adicionados no
decorrer da experincia ?
i) Compare o valor obtido para RT/nF com o valor terico. O valor de RT/nF deve
coincidir com o valor terico se o elctrodo de vidro estiver em boas condies de
funcionamento. Explique esta afirmao.
j) Se quiser medir o pH precisa de determinar os parmetros do elctrodo ? Explique.


7
Influncia da temperatura na medio do pH
O objectivo deste trabalho alertar para a influncia da temperatura na determinao
do pH de uma soluo.

A- Parte experimental
Aparelhagem
- Material corrente de laboratrio,
- Aparelho de pH com elctrodo combinado de vidro.
- termmetro
- Agitador magntico c/ aquecimento
Reagentes
- Solues tampo de pH 4 e pH 7.
- Soluo de NaCl 0.1M.
- Gelo
Procedimento experimental
1- Preparao do aparelho de pH
i) Coloque 150 ml de cada soluo tampo num copo de 250 ml e adicione uma barra
de agitao.
ii) Mea o potencial e a temperatura da soluo para cada uma das solues tampo.
Anote o valores lidos.
2- Coloque o gelo numa tina e coloque a tina no agitador magntico. Coloque o copo
com a soluo tampo coloque o copo na tina a aquecer lentamente. Anote os valores de
potencial a intervalos de 5 C. Pare quando atingir uma temperatura de 40 C. Repita o mesmo
procedimento para a outra soluo tampo.
3- Repita o mesmo procedimento para a soluo 0.1M NaCl
B- Elaborao do relatrio
Apresentao de Resultados
a) Apresente tabelas com os a temperatura e os valores lidos de potencial para cada
soluo.
b) Apresente o valor do produto de dissociao da gua a 25 C e da respectiva
entalpia de reaco.

Clculos e Discusso
1) Para cada soluo tampo calcule:
a) o valor de Q e RT/F para a temperatura inicial.
b) o valor de pH para cada temperatura.
2) Usando a lei de VanHoof calcule o valor do produto de dissociao da gua, K
w
, a
cada temperatura.


8
Doseamento do cido acetilsaliclico numa aspirina por
potenciometria

Titulao do cido acetilsalclco com uma base forte, por meio de titulaes
potenciomtrica.

A- Parte experimental
Aparelhagem
- Material corrente de laboratrio,
- Aparelho de pH com elctrodo combinado de vidro.
Reagentes
- Borax,
- Soluo de hidrxido de potssio 0,100 M.
- Soluo de cido clordrico 0,010 M aferida.
- Soluo de aspirina. Pese um comprimido de aspirina e dissolva num copo com
gua, aquecendo ligeiramente. Perfaa o volume de 250 ml num balo graduado. A soluo
de aspirina fica sempre turva por conter um excipiente (amido).

Procedimento experimental
Titulao potencimtrica:
1- Prepare uma montagem constituda por:
i) uma bureta cheia com uma soluo de NaOH 0.100 M.
ii) copo com 50 ml de HCl 0.010 M (medidos rigorosamente), ao qual se adicionam
100 ml gua destilada e uma barra de agitao.
iii) Aparelho de pH com o elctrodo mergulhado no cido e agitador magntico.
2- Preparao do aparelho de pH
i) Calibre o aparelho de pH.
ii) Mea o pH e a temperatura da soluo. Anote o valores lidos.
3- Aferio da base (Depois de cada adio de titulante espere que a leitura da
diferena de potencial estabilize e anote o valor lido e a temperatura da soluo).
i) Calcule primeiro aproximadamente o volume de titulante que deve gastar at ao
ponto de equivalncia.
ii) Adicione 0,5 ml de NaOH de cada vez at perto do ponto de equivalncia.
ii) Perto do ponto de equivalncia reduza as adies de base para 0.05 ml.
iii) Depois do ponto de equivalncia, adicione 0.5 ml de cada vez.





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4- Titulao da amostra
a) Para um outro copo pipete 100 ml da soluo de aspirina e perfaa 150 ml com
gua. Titule potenciometricamente com a soluo de hidrxido de potssio, procedendo do
mesmo modo que anteriormente.

B- Elaborao do relatrio
Apresentao de Resultados
a) Apresente tabelas com os volumes de base adicionados e valores de pH lidos
b) Apresente os grficos de pH vs. volume de base adicionado, para cada uma das
titulaes potenciomtricas.
Clculos e Discusso
a) Com o valor obtido na primeira titularo potenciomtrica determine a concentrao
da soluo de hidrxido de potssio usando o cido clordrico como padro. Para tal desenhe
a curva de titulao (pH, vol. titulante) e determine o ponto final da titulao.
b) A partir da curva de titularo obtida no segundo ensaio, determine do mesmo modo
a concentrao de cido acetilsalicilico na soluo de aspirina, e com o valor obtido calcule a
percentagem de matria activa existente num comprimido.




10
Preparao e aferio duma soluo de Iodo 0.05M

A reaco de titulao do iodo uma reaco de oxidao-reduo:

H
2
AsO
3
-
+ H
2
O + I
3
-
3I
-
+ HAsO
4
2-
+ 3H
+

Potencial de reaco: E=+0,380V

Potenciais de reduo

I
3
-
+ 2e
-
3I
-
E
0
=+0.5338 V (pH=8.3)

H
3
AsO
4
+ 2H
+
+ 2e
-
H
3
AsO
3
+ H
2
O E
0
= +0.559 V
E
0
=+0.226V (pH=8.3)


Peso molecular do iodo: 253.8 g/mol
Peso molecular do xido arsenoso: 197.83 g/mol

Concentrao de iodo necessria para formar cr visivel com amido: 10
-6

mol/L


A- Parte experimental

Reagentes
Iodo slido, I
Iodeto de Potssio slido, KI
xido arsenoso, As
2
O
3

Hidrxido de sdio, NaOH 6M
cido clordrico 1:3,
Fenolftalena
Bicarbonato de sdio, NaHCO
3
, slido
gua de amido

Preparao da soluo
Pese cerca de 3,2g de iodo (directamente no copo ou balo onde se vai solubilizar).
Junte 10g de iodeto de potssio (isento de iodato) e 10 a 20 mL de gua. Agite at dissolver
todo o iodo e dilua at 250 mL. Transfira para um frasco escuro (de rolha de vidro) e rotule.



11
Aferio da soluo
Pese 3 pores de xido arsenoso de peso compreendido entre 115 e 125 mg.
Dissolva cada poro em balo Erlenmeyer com 10 mL de NaOH 6M. Junte 20 mL de gua,
uma gota de fenolftalena e neutralize com HCl 1:3 at ao desaparecimento da cor vermelha.
Junte 0,5 mL de cido em excesso. Adicione pequenas pores de bicarbonato de sdio para
neutralizar o cido. Quando cessar a efervescncia, adicione mais 3 gramas para tamponizar.
Adicione 5 mL de gua de amido e titule com a soluo de iodo at ao aparecimento duma cr
azulada que persista por um minuto.

Notas:
Para fazer o teste de presena de iodato no iodeto, dissolva 1g de iodeto em 20
mL de gua, junte 1mL de H
2
SO
4

6M e 2mL de gua de amido. No deve aparecer cr azul em
30 segundos
Prepara-se a gua de amido fazendo uma papa de 2g de amido solvel em 25
mL de gua e junta-se pouco a pouco, com agitao, a 500 mL de gua fervente. Ferve-se por
mais 2 minutos e junta-se 1g de cido brico. Deixa-se arrefecer e rolha-se.

B- Elaborao do relatrio

Clculos e Discusso

a) Calcule a concentrao da soluo de Iodo. Calcule a mdia, o desvio padro e os
intervalos de confiana a 95 e 99%.
b) Calcule teoricamente a curva de titulao com pelo menos 5 pontos.
c) Diga qual o indicador usado neste trabalho e explique o seu funcionamento.
d) Porque que se tamponiza a soluo a pH 8.3.












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Preparao de uma soluo aferida de Fe
2+
0,05M
A- Parte experimental

Preparao da soluo
Pese cerca de 4 gramas de Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
3
e dissolva-os num balo de diluio de
250mL onde previamente colocou cerca de 100mL de gua e 5 mL de cido sulfrico
concentrado. Acabe de encher com gua destilada.

Aferio da soluo
a) Preparao de uma soluo aferida de dicromato de potssio:
O dicromato de potssio quando puro e seco pode servir como padro primrio e
como tal pode-se, por pesagem directa, preparar uma soluo de concentrao rigorosa.
Depois de seco a 140-150 C pese rigorosamente cerca de 3,8 g de dicromato de
potssio e dissolva-os num balo de diluio de 250 mL, ajuste at marca e tome nota da
concentrao exacta.
b) Determinao da concentrao da soluo de ferro(II)
Pipete para um balo redondo de 250 mL, 15 mL de soluo de dicromato de
concentrao conhecida rigorosamente. Junte cerca de 100 mL de gua destilada e 25 mL de
cido sulfrico concentrado. Depois de arrefecida, junte duas gotas de ferroina e titule com a
soluo de ferro(II) preparada.

Constantes referentes ao trabalho
Reaces:
Cr
2
O
7
2-
+ 14 H
+
+ 6e <=> 2 Cr
3+
+ 7 H
2
O E
0
= +1,33 V
Fe
3+
+ e
-
<=> Fe
2+
E
0
= +0,771 V

B- Elaborao do relatrio

Clculos e Discusso

a) Calcule a concentrao da soluo de ferro. Calcule a mdia, o desvio padro e os
intervalos de confiana a 95 e 99%.
b) Calcule teoricamente a curva de titulao com pelo menos 5 pontos.
c) Diga qual o indicador usado neste trabalho e explique o seu funcionamento.




13
CARNCIA QUMICA DO OXIGNIO (CQO)

A carncia qumica de oxignio (CQO) define-se como a quantidade de matria
oxidvel nas condies a seguir referidas e equivalente, em termos de oxignio, quantidade
que deste gs se consumiria a longo praso para provocar tais oxidaes.
Esta medida corresponde apenas a uma estimativa da matria orgnica e/ou
inorgnica oxidvel existente numa gua em virtude de poder haver alguns compostos
orgnicos que no sejam oxidados nas condies tcnicas da anlise. Todavia um dos
parmetros referidos na Lei das guas (Dec-Lei n 74/90 de 7 de Maro) indicadores do grau
de poluio das guas.

O dicromato de potssio em meio cido e em excesso, por aquecimento, oxida grande
parte da matria orgnica e inorgnica existente na gua. Se medirmos a quantidade inicial de
dicromato adicionado e determinarmos, ao fim deste processo de oxidao, a quantidade de
dicromato ainda existente, poderemos saber qual a quantidade que foi consumida e,
consequentemente, qual a quantidade de oxignio que lhe equivaleria.

A- Parte experimental

Ensaio preliminar

Por falta de tempo disponvel para execuo de todo o trabalho, considera-se que o
aluno tem sua disposio a seguinte informao: a gua a analisar acusar de CQO menos
que 300 mg/L( valor mximo admissvel numa gua de consumo). Deste modo o aluno no
far ensaio preliminar e utilizar as quantidades de reagente e de amostra necessrias para
um valor perto daquele.
Se partir de 100 ml da amostra (gua a analisar), se ela tiver um valor de CQO de
200mg/L corresponde-lhe 20/32 mmol/L de oxignio. Como por cada mole de oxignio so
consumidos 4 moles de electres, so necessrios 20x4/32 mmoles de electres para oxidar a
matria existente naqueles 100 ml de amostra.
Como cada mole de dicromato consome 6 moles de electres, vai ser necessrio,
pelo menos 20x4/(32x6) mmol de soluo de dicromato. Se a soluo de dicromato for cerca
de 0,05 mol/L, torna-se necessrio um volume deste reagente superior a 20x4/(32x6x0,05)
ml.






14
Ensaio definitivo
Mea rigorosamente 250 mL da amostra que coloca num balo redondo de 500mL.
Junte sulfato de mercrio slido em quantidade aproximadamente 10 vezes superior ao teor
em cloretos (2.5x10
-3
M). Adicione 10 mL de soluo de sulfato de prata (sulfato de prata- 6,6
g/L em cido sulfrico concentrado), 25 mL de cido sulfrico concentrado e 15 mL da soluo
aferida de dicromato.
Ferva em refluxo durante duas horas. Deixe arrefecer, junte duas gotas de ferroina e
titule com a soluo de ferro(II).

Constantes referentes ao trabalho

Reaces correspondentes:

Cr
2
O
7
2-
+ 14 H
+
+ 6e <=>2 Cr
3+
+ 7 H
2
O

C
x
H
y
+ (x+ y/
4
) O
2
<=> x CO
2
+ y/
2
H
2
O

Fe
2+
<=> Fe
3+
+ e
-



Expresso dos resultados

C Q O
Vo V C
V
. . .
( )
=
8000 1
mg/L

V1=Volume da soluo de ferro(II) gasto na titulao do excedente de dicromato.
Vo =Volume da soluo de ferro(II) necessrio para a aferio.
C = concentrao da soluo de Ferro(II)
V = Volume da amostra


B- Elaborao do relatrio

a) Calcule a carencia qumica de oxignio para o seu ensaio.
b) Usando os valores de CQO para todos os ensaios realizados calcule a mdia, o
desvio padro e os intervalos de confiana a 95 e 99%.
c) Quais os erros possveis neste trabalho ? Como os pode minimizar ?



15
Separao de Zn(II), Ag(I), Hg(II) e Cu(II) por extraco
com ditizona

Objectivos
Estudo da extraco dos ditizonatos de alguns ies metlicos com tetracloreto de
carbono.
Separao dos caties de uma mistura por extraco selectiva com ditizona.

Introduo
A extraco lquido-lquido continua a ser uma tcnica separativa muito utilizada em
Qumica Analtica.
A utilizao de ligandos tais como ditizona, dietilditiocarbamato, oxina, cupferron e
TTA (tenoiltrifluoroacetona) permitiu numerosas aplicaes da extraco lquido-lquido na
separao de ies metlicos.
A difeniltiocarbazona, vulgarmente conhecida por ditizona, tem sido muito utilizada em
extraces de ies metlicos.
A ditizona apresenta duas formas tautomricas (Ph=C
6
H
5
):

N-NH-Ph NH-NH-Ph
H-S-C S=C
N=N-Ph N=N-Ph

tiol tiona

praticamente insolvel em solues aquosas cidas e neutras mas dissolve-se em
solues alcalinas (formando solues amarelas) pois reage como cido diprtico.
Representando abreviadamente a ditizona por H2Dz:

H
2
Dz H
+
+ HDz
-
Ka
1
= 2,1x10
-5

HDz
-
H
+
+ Dz
2-
Ka
2
< 10
-15


A ditizona forma complexos, chamados ditizonatos, com os metais indicados:

Mn Fe Co Ni Cu Zn Se
Pd Ag Cd In Sn Te
Pt Au Hg Tl Pb Bi Po




16
Existem dois tipos de ditizonatos:

M
n+
+ nH
2
Dz M(HDz)
n
+ nH
+

(ditizonato primrio)
e para alguns metais, a pH elevado (ou para concentraes insuficientes de ditizona),
formam-se os chamados ditizonatos secundrios:

(m-1) M
n+
+ M(HDz)
n
M
m
(Dz)
n
+ nH
+


As cores dos ditizonatos em solventes orgnicos enfraquecem ao longo do tempo. Por
isso conveniente que os resultados das experincias sejam anotados imediatamente aps a
sua realizao experimental.
Os solventes mais utilizados para a extraco de ditizonatos tm sido o tetracloreto
de carbono e o clorofrimo. A ditizona dissolve-se nestes solventes formando solues de cor
verde.
Embora se formem ditizonatos com bastantes metais como j foi referido, as reaces
de formao dos ditizonatos podem tornar-se especficas mediante os seguintes
procedimentos:
- ajustamento do pH da soluo aquosa.
- uso de sequestrantes (tais como CN
-
, SCN
-
, S
2
O
3
2-
, Br
-
, I
-
, EDTA) para os elementos
interferentes.
- alterao do estado de oxidao dos elementos interferentes.

Neste trabalho estudam-se alguns aspectos da extraco dos ies Zn(II), Ag(I), Hg(II)
e Cu(II) com ditizona e depois procede-se separao desses ies numa mistura.
Na tabela 1 indicam-se as cores dos ditizonatos dos ies em estudo neste trabalho:

Tabela 1 Cores dos ditizonatos
io metlico pH baixo pH elevado
Zinco(II) - vermelho
Zn(HDz)
2
Prata(I) amarelo
Ag(HDz)
violeta
Ag
2
(Dz)
Mercrio(II) laranja
Hg(HDz)
2

violeta
Hg(Dz)
Cobre(II) violeta
Cu(HDz)
2

amarelo
acastanhado
Cu(Dz)



17
Para estudos quantitativos da extraco convm muitas vezes considerar a constante
de extraco (K
ex
) que definida para a reaco:

M
n+
(aq) + n H
2
Dz (org) M(HDz)
n
(org) + n H
+
(aq)

Em que os ndices aq e org se referem respectivamente s fases aquosa e
orgnica. Na tabela 2 so dados os valores das constante sde extraco (K
ex
) e constantes de
estabilidade com EDTA para os ies metlicos estudados neste trabalho.

Tabela 2 Constantes caractersticas dos ies estudados
io metlico log K
ex
log K
M(EDTA)
log K
M(HEDTA)
Zinco(II) 2,3 16,5 18,4
Prata(I) 7,18 7,2 13,3
Mercrio(II) 26,85 21,8 24,5
Cobre(II) 10,53 18,8 21,8
A- Parte experimental
Material e aparelhagem
Ampolas de decantao
tubos de ensaio e respectivo suporte
provetas de 10 ml e 100 ml
pipetas de 1 ml e 10 ml
balo marcado de 250 ml
medidor de pH e elctrodo combinado
agitador electromagntico
Reagentes e solues
Tetracloreto de carbono
a) solues fornecidas j preparadas:
Nitrato de zinco 10
-4
M, Nitrato de prata 10
-4
M, Nitrato de mercrio 10
-4
M, Nitrato de
cobre 10
-4
M, cido ntrico 0,6M, cido actico 0,1M, Soda custica 0,1M e 1M, cido clordrico
0,03M e 6M, Cloreto de sdio 20%, Amnia 6M, EDTA 0,5M, Cloreto de clcio 1M, citrato de
amnio 25% + amnia at pH=9, soluo de ditizona 1,25.10
-3
M em tetracloreto de carbono
b) solues a preparar:
200 ml de soluo ditizona 3,7.10
-5
M (em CCl
4
) a partir da soluo 1,25.10
-3
M
(medir 15 ml para um total de 500 ml). Esta a soluo que ir ser utilizada no trabalho.
[ ] [ ]
[ ] [ ]
n
org aq
n
aq org n
ex
Dz H M
H HDz M
K
2
) (
+
+
=


18
Demonstrao da formao de ditizonatos
Formao de ditizonatos a pH baixo:
Medir 2 ml da soluo de nitrato de zinco 10
-4
M para uma ampola de decantao e
adicionar 5ml de cido ntrico 0,6M e 3 ml de gua destilada.
Usando uma proveta (que ser destinada apenas a medir a soluo de ditizona),
adicionar 10ml da soluo de ditizona 3.10
-5
M.
Agitar vigorosamente durante alguns minutos e deixar repousar em seguida. Quando
as duas fases estiverem separadas, tranferir a soluo orgnica para um tubo de ensaio.
Anotar a cor da soluo resultante.
Proceder de modo anlogo com as solues de nitrato de prata, nitrato de mercrio e
nitrato de cobre, mas usando 3 ml de ditizona.
Formao de ditizonatos a pH elevado (8-11):
Medir 2 ml da soluo de nitrato de zinco para uma ampola de decantao e juntar 3
ml de soluo de cido ntrico 0,6M e 5 ml de gua. Adicionar gotas de NaOH 1M de modo que
o pH fique compreendido entre 8 e 11.
Extrar com 10 ml de soluo de ditizona, transferir a fase orgncia para um tubo e
tomar nota da cor desta soluo. Proceder de igual modo com a soluo de nitrato de cobre.
Para as solues de nitrato de prata e nitrato de mercrio: acertar o pH com a soluo
de soda custica 1M e extrar com 4 ml de soluo de ditizona.
Separao da mistura de caties
Na pgina seguinte representa-se esquematicamente a separao dos quatro ies tal
como feita neste trabalho.
Medir 5 ml da soluo contendo a mistura de caties Zn(II), Ag(I), Hg(II) e Cu(II) para
uma ampola de decantao e juntar 3 ml de gua destilada.
a) Separao do zinco:
Juntar mistura 2 ml de cido ntrico 0,6 M. Extrar com 10 ml de soluo de ditizona
e passar a fase orgnica para outra ampola de decantao.
Repetir a extraco com pores de 10 ml de soluo de ditizona at que esta
mantenha a cor verde aps ter sido agitada com a fase aquosa. Juntar os vrios extractos.
Neutralizar a fase aquosa com soluo de soda custica 0,1M e juntar mais soda
custica de modo que o pH fique compreendido entre 8 e 11. Extrar com 5 ml de soluo de
ditizona e tomar nota da cor da fase orgnica (que contm o zinco).
b) Separao da prata:
A fase orgnica contendo os ditizonatos de prata, mercrio e cobre extrada por
duas vezes com 4 ml de soluo constituda por volumes iguais de cido clordrico 0,03M e
cloreto de sdio 20%.
Passar as fases aquosas para outra ampola de decantao, juntar 54 ml de gua e
extrar com 2 ml de ditizona 3.10-5M.



19
c) Separao do mercrio:
A fase orgnica contendo os ditizonatos de mercrio e de cobre extrada por duas
vezes com 4 ml de soluo de cido clordrico 6M (~6ml) e o pH acertado a ~2 mediante a
adio de cido ou amnia.

Zn, Ag, Hg, Cu
Zn
Ag,
Hg,
Cu
Zn
Ag
Hg,
Cu
Ag
Hg, Cu
Hg
Cu
Cu
NaOH 0,1M
Diluio com gua
HCl 0,03M +
NaCl 20%
HCl 6M
NH
3
6M + EDTA
Citrato de amnio + amnia + CaCl
2


20
Juntar fase aquosa 4 ml de soluo EDTA 0,5M e extrar com pores de 5 ml de
ditizona at a ditizona no perder a cor verde.

d)Extraco do cobre:
Juntar fase aquosa 2 ml de soluo de cloreto de clcio 1M e 3 ml de soluo de
citrato de amnio e amnia. Adicionar amnia de modo a que o pH fique aproximadamente
igual a 9.
Extrar com 3 ml de ditizona e tomar nota da cor da fase orgnica.

B- Elaborao do relatrio
a) Explique porque razo tm cores diferentes os extractos orgnicos obtidos a pH
baixo e a pH elevado (seco 3.3.1).
b) Justifique a tcnica experimental utilizada para separar o zinco do mercrio + prata
+ cobre.
c) Mostre que nas condies experimentais usadas conseguia separar a prata do
mercrio+cobre usando a soluo de cloreto de sdio+cido clordrico. Ver tabela 3.

Tabela 3 Constantes de formao de clorocomplexos
io log
1
log
2
log
3
log
4
Ag(I) 3,2 5,2 5,5 5,4
Hg(II) 6,74 13,22 14,07 15,07
Cu(II) 0,98 0,69 0,55 -

d) Mostre que consegue extrair quantitativamente o mercrio da fase orgnica para a
fase aquosa contendo cido clordrico 6M.
e) Explique qualitativamente (e quantitativamente) como conseguiu separar o mercrio
do cobre, em presena de EDTA.
f) Explique qualitativamente (e quantitativamente) como conseguiu extrar o cobre da
fase aquosa contendo EDTA. Dados: logK
Ca(EDTA)
=10,70 e tabela 4.

Tabela 4 Constantes de formao de aminocomplexos
io log
1
log
2
log
3
log
4
Cu(II) 3,99 7,33 10,07 12,03
Hg(II) 8,78 17,48 18,48 19,25





21
Separao de Aminocidos por Cromatografia em
Camada Fina

Objectivos

Pretende-se ilustrar a tcnica de cromatografia em camada fina (TLC), aplicando-a na
separao e identificao de aminocidos na cerveja.

A cromatografia permite analisar separadamente os componentes de uma mistura,
tirando partido das diferentes afinidades de cada componente por uma fase estacionria.
Baseia-se no mesmo princpio da extraco, mas no caso da cromatografia existe uma fase
(fase mvel, ou eluente) que se move continuamente sobre outra (fase estacionria).
A cromatografia em camada fina uma tcnica cromatogrfica de adsoro, o que
significa que a interaco entre a fase estacionria e os componentes a separar se d
essencialmente por processos de adsoro-desoro. A fase estacionria slida e forma um
revestimento fino de uma face de uma placa plana metlica, em vidro ou em plstico, a qual
lhe serve de suporte. Neste trabalho usar-se- como fase estacionria um adsorvente polar, a
slica-gel. A ordem de eluio dos componente seguir portanto a sua polaridade.
O mtodo mais comum de proceder cromatografia em camada fina o indicado na
figura 1. A mistura a analisar colocada sob a forma de manchas distanciadas de 1,5 cm entre
si e 2,0 cm do bordo da placa TLC. Aplicam-se na mesma placa manchas separadas para as
amostras e para os padres. Para que todas as manchas estejam alinhadas paralelamente ao
bordo da placa, marca-se levemente a lpiz uma linha sobre a qual se aplicam as manchas.

a b c

Figura 1. a) Colocao das amostras numa placa TLC. b) Eluio c) Placa TLC aps
eluio e revelao.
As manchas devem ser to estreitas quanto possvel, para que sejam arrastadas pela
fase mvel com um mnimo de alargamento. Devem ser aplicadas sobre a paca usando um


22
tubo capilar de dimetro muito estreito, ou com uma micropipeta. Os volumes aplicados devem
ser entre 1 e 10 l.
Aps a aplicao das amostras, a placa deve ser eluda. Para tal coloca-se numa
cmara de eluio contendo a fase mvel, lquida. A fase mvel sobe pela placa por
capilaridade, arrastando consigo as manchas. Os componentes da mistura movem-se com a
fase mvel a velocidades diferentes ao longo da fase estacionria e, se a mistura for colorida,
a separao visvel na placa.
Quando a mistura no colorida, necessrio recorrer a uma tcnica de revelao.
Uma tcnica simples a exposio a vapor de iodo, que absorvido na maior parte das
manchas, tornando-as visveis. Alternativamente, pode adicionar-se uma substncia
fluorescente ase estacionria, antes de efectuar a eluio, de modo que as manchas sero
visveis sob luz ultravioleta por no fluorescerem, enquanto a fase estacionria circundante
fluoresce. Um outro mtodo consiste em pulverizar a placa com um agente revelador, que
desenvolve cor em contacto com as manchas. Este mtodo til na identificao de
aminocidos, e ser seguido neste trabalho.
O exame visual do cromatograma permite identificar os componentes da mistura, por
comparao com os padres colocados na mesma placa. Alguns agentes reveladores
desenvolvem cores especficas para deerminados componentes, ajudando sua identificao.
O factor de reteno (R
f
) um parmetro usado na anlise qualitativa em TLC. Pode
calcular-se para cada componente e relaciona a sua velocidade com a velocidade da fase
mvel.
distncia percorrida pela mancha
R
f
=
distncia percorrida pela fase mvel

A- Parte experimental
Material
Cmara de eluio 20x20 cm
Folhas de papel de filtro 20x20 cm
Secador de ar quente
Estufa, programada para a temperatura de 100C
Pipetas de Pasteur
Pulverizador
Rgua graduada de 20 cm
Lpis
Placa de TLC 20x20 cm
Reagentes
Solues padro de aminocidos, 1,0.10
-2
mol/l.
Etanol
Butanol


23
cido propinico

Soluo reveladora I: 0,124g de ninidrina em 50 cm
3
de etanol, 10 cm
3
de cido
actico glacial e 2 cm
3
de 2,4,6-colidina (2,4,6-trimetilpiridina).
Soluo reveladora II: 1% de Cu(NO
3
)
2
.H
2
O em etanol absoluto.

Procedimento experimental
1- Preparao do eluente:
Prepare o eluente numa hotte com a aspirao ligada.
Numa proveta de 100 ml, misture 40 ml de etanol, 40 ml de butanol, 20 ml de ga e
8 ml de cido propinico. Homogenize bem.

2- Preparao da cmara de eluio:
Coloque nas paredes interiores da cmara de eluio as folhas de papel de filtro
cortadas com a dimenso adequada. Com a ajuda de uma vareta de vidro, faa escorrer todo
o eluente pelo papel de filtro, de modo que este fique saturado e adira s paredes da cmara.
Procure evitar a fomao de bolhas de ar entre o papel e o vidro.
Tape a cmara e deixe repousar durante cerca de hora, para que o seu interior
fique saturado em eluente.

3- Preparao da placa TLC
Procure no ferir o revestimento da placa TLC, nem toc-lo com as mos.
Usando um lpiz pouco afiado, trace levemente uma linha a 2,0 cm de distncia do
bordo da placa. Sobre esta linha, marque levemente 12 pontos distanciados entre si de 1,5 cm.
Sobre estes pontos colocar-se-o as amostras a analisar.
Trace outra linha distanciada 10 cm da primeira. Esta linha marcar o fim da eluio.

4-Colocao das amostras
Usando uma pipeta de pasteur, retire um pequeno volume da primeira soluo a
analisar (1-1l). Coloque-o cuidadosamente sobre o primeiro ponto marcado, procurando no
tocar na placa com a ponta da pipeta. Seque imediatamente com ar quente, de modo a evitar
que a mancha alastre.
Coloque do mesmo modo as restantes solues padro de aminocidos e a amostra
de cerveja sobre os outros pontos marcados.
5-Eluio
Coloque cuidadosamente a placa dentro da cmara de eluio. O nvel do eluente
deve estar abaixo da linha das amostras. Tape a cmara e deixe eluir. Quando o eluente
atingir a linha superior (cerca de 1h) retire a placa e seque com um secador de ar quente, para
interromper a eluio.


24

6-Revelao
Misture 25 ml da soluo reveladora I com 1,5 ml da soluo II. Coloque a mistura no
pulverizador e pulverize a placa, numa hotte. Coloque imediatamente no interior da estufa a
100C, durante 2 min. Retire a placa e tome nota das cores e posio das manchas.
Obs: as cores desaparecem ao fim de algum tempo, pelo que conveniente marcar a
lpis a posio das manchas.

C- Elaborao do relatrio

Apresentao de Resultados
a) Calcule o factor de reteno para cada um dos aminocidos usados como padro.
b) Apresente uma tabela com os aminocidos usados como padro, os factores de
reteno e as cores das manchas respectivas.
c) Calcule os factores de reteno de todas as manchas observadas no
cromatograma da amostra de cerveja.
d) Apresente uma tabela com as cores e factores de reteno de todas as manchas
observadas na amostra de cerveja.

Discusso
e) Que aminocidos consegue identificar na amostra de cerveja? Justifique.
f) Justifique as diferenas de R
f
, com base na natureza da fase estacionria e na
estrutura de cada aminocido.
g) O processo de eluio do cromatograma foi demorado. Sugira uma forma de
diminuir o tempo de eluio, assim como uma desvantagem associada ao
processo que sugeriu.







25
Separao por Cromatografia Inica: Anlise de Anies
em guas

Introduo

Pretende-se ilustrar a tcnica de Cromatografia Inica aplicando-a na separao e
quantificao de alguns ies em guas.
Neste trabalho utiliza-se um aparelho cuja constituio se representa
esquematicamente na figura 1.



Figura 1: Representao esquemtica do cromatgrafo inico.
Uma amostra colocada na vlvula de injeco sendo posteriormente injectada na
coluna. O eluente (soluo de cido ftlico e TRIS) continuamente bombeado para a coluna
e vai arrastar os componentes da amostra.
Estabelecem-se equilbrios de permuta inica do tipo:
Soluto
-
+ (resina
+
_eluente
-
) eluente
-
+ (resina
+
_ Soluto
-
)
e os anies so separados uns dos outros porque as suas foras de interaco com os grupos
catinicos (fixos) da resina so diferentes.
Na reteno de espcies inicas tm importncia parmetros com a carga e tamanho
do io e a fora inica do eluente.
O detector condutimtrico utilizado vantajoso neste tipo de anlises pois a conduo
de corrente elctrica uma caracterstica de todas as solues de electrlitos.
Parte Experimental
Material e aparelhagem
- Material corrente de laboratrio,
- Cromatgrafo lquido SHIMADZU LC 6A,
- Detector de conductividade SHIMADZU CDA 6A,
- Forno de coluna SHIMADZU CTO 6A.


26
Solues a preparar
a) Prepare 1 litro de eluente (cido ftlico 2.5x10
-3
M + TRIS 2.4x10
-3
M) diluindo 1:10 a
soluo me de eluente fornecida.
b) Preparar uma soluo me contendo 1 g/L de Cl
-
, 500 mg/L de NO
3
-
e 500 mg/L de
SO
4
2-
.
c) Fazer quatro padres diluindo a soluo me 1:10, 1:20, 1:40, 1:100.

Tcnica
a) Prepare o cromatgrafo para efectuar as medidas, seguindo as instrues dadas
no guia do aparelho.
b) Condies de anlise: eluente: soluo de cido ftlico e TRIS; fluxo: 1,5 ml min
-1
;
tempo de eluio: 15 min; temperatura do forno: 40
0
C.
c) Fazer os cromatogramas dos padres. Registar os valores das reas e alturas dos
picos.
d) Fazer os cromatogramas das amostras. Registar os valores das reas e alturas dos
picos.

Tratamento de resultados e Discusso
No tratamento de resultados e discusso deve efectuar todos os clculos e discutir
todos os tpicos que achar conveniente. Sem prejuizo disso deve responder obrigatoriamente
s alneas seguintes.
a) Calcule as concentraes exactas de cada uma das solues padro preparadas.
b) Faa as rectas de calibrao para os diferentes ies.
c) Calcule as concentraes dos ies nas amostras.
d) Calcular o factor de resoluo
t - t
, (W W )
R, R, 1 2
2 1
0 5 +
. Ser que os picos cromatogrficos
so bem resolvidos? (t so os tempos de eluio (de reteno), e W as larguras dos picos,
todos em segundos).
e) Determinar a partir de cromatograma o tempo morto, t
M
, e calcular o factor de
capacidade, k

, para cada um dos compostos: k

t t
t
R M
M
'
=

.
f) Calcular velocidade linear u=L/t
M
. A partir dos tempos de reteno, calcular os
volumes de reteno. Apresentar os resultados dos clculos na forma tabular.
g) Comente o rigor possvel para as anlises dos diversos ies com o eluente usado.
Acha conveniente proceder a modificaes do mtodo de anlise ? Em caso afirmativo que
alteraes prope ?




27
Determinao do teor alcolico de bebidas por
Cromatografia em Fase Gasosa

Em cromatografia gasosa a amosta convertida em vapor e o eluente um gs (gs
de transporte). O gs de transporte um gs quimicamente inerte disponvel na forma pura
como o rgon, hlio, azoto ou dixido de carbono. A fase estacionria geralmente um lquido
no voltil suportado num slido inerte.
A amostra injectada usando uma micro-seringa, estando o sistema de injeco e o
detector a uma temperatura superior da coluna para promover a rpida vaporizao da
amostra no injector e impedir a sua condensao no detector.
A separao ocorre atravs da partio dos constituintes do vapor entre a fase gasosa
e a fase lquida. A amostra automaticamente detectada conforme emerge da coluna (a um
caudal constante) por uma variedade de detectores cuja resposta depende da composio do
vapor. A presena de um pico cromatogrfico a um tempo de reteno particular no garante
uma identificao absolutamente correcta. A probabilidade dua identificao positiva depende
de factores como a complexidade da amostra e dos mtodos de preparao da amostra
usados.
O teor em etanol de um vinho depende em princpio da riqueza em acares das uvas
e o seu conhecimento de grande importncia, pois faz parte de um conjunto de
caractersiticas que ajudam a definir determinado tipo de vinho. Est provado que a presena
do acetaldedo, produto da oxidao do etanol, se encontra intimamente relacionada com
fenmenos de oxidao e de envelhecimento dos vinhos. Nos vinhos novos, o acetaldedo
encontra-se em concentraes que vo de 5 a 50 mg/L: parte do acetaldedo encontra-se livre
e este fundamental para o sabor e aroma prprio dos vinhos velhos.
A determinao da concentrao de metanol no vinho, assim como noutras bebidas
alcolicas, de grande importncia em virtude deste lcool, pela sua toxicidade, ser muito
possivelmente um dos mais responsveis por certas formas crnicas de intoxicao alcolica.
A principal origem da presena deste lcool no vinho encontra-se relacionada com a
transformao das matrias pctidas das uvas. As doses encontradas nos vinhos variam entre
36 e 350 mg/L.
Pretende-se com este trabalho determinar a concentrao de etanol existente num
vinho, assim como a concentrao de metanol eventualmente presente.
Para a determinao quantitativa usa-se o mtodo do padro interno. Como padro
interno usa-se o propanol. Preparam-se padres adicionando em todos a mesma quantidade
de propanol e quantidades diferentes de etanol (e metanol).



28
Parte Experimental
Prepare uma soluo de metanol (1:100)
Prepare os padres de metanol e etanol em bales volumtricos de 100 mL ou 200 mL,
tal como se esquematiza no quadro seguinte, perfazendo o volume com gua destilada:

VoIunes nedidos (nL)
MelanoI (1:1OO) O,O 2,5 2,5 5,O 1O,O 15,O
LlanoI (p.a.) O,O 5,O 5,O 1O,O 15,O 2O,O
IiopanoI (p.a.) 15,O 3O,O 15,O 15,O 15,O 15,O
VoIune lola1 1OO,O 2OO,O 1OO,O 1OO,O 1OO,O 1OO,O

Prepare a amostra do vinho a analisar num balo volumtrico de 100 mL pipetando 50,0
mL de vinho e 15,0 mL de propanol e perfazendo o volume com gua destilada.
Prepare o cromatgrafo de gases para as seguintes condies: temperatura da coluna:
40C; temperatura do injector: 180C; caudal de eluente (N2): 35 mL/min.
Injecte sucessivamente 6 L de cada um dos padres e de amostra.
Verifica-se para os padres o aparecimento de trs picos, sucessivamente: metanol,
etanol e propanol. Determine a razo das reas dos picos Amet/Aprop e Aet/Aprop, e
represente-a graficamente em funo das respectivas %(v/v) nos padres.
A partir das correspondentes razes para a amostra do vinho determine a % etanol (e
eventualmente % metanol).
Nota: o acetaldedo pode aparecer para tempos de reteno aproximadamente
idnticos aos do metanol.

Clculos
1) Trace as rectas de calibrao para o etanol (Aet/Aprop) em funo da concentrao
de etanol nos padres, e para o metanol (Amet/Aprop) em funo da concentrao de metano,
nos padres.
2) Calcule os limites de deteco para as duas rectas.
3) Calcule a concentrao de etanol e de metanol nas amostras.
4) Determine o nmero de pratos tericos da coluna e a altura equivalente de um prato
terico.
5) Determine o factor de resoluo para o etanol, metanol, e propanol.





29
Cromatografia Lquida de Alta Eficincia: Anlise
de Cafena em Bebidas

A cafena um produto conhecido pela sua presena no caf, no ch, em bebidas da
famlia das colas e em produtos farmacuticos. um estimulante, e o seu doseamento por
este mtodo bastante rpido e de aplicao simples.
A constituio de um equipamento para cromatografia lquida de alta eficincia est
representada esquematicamente na figura seguinte:

Figura 1 - Representao esquemtica de um cromatgrafo para HPLC

A amostra colocada na vlvula de injeco sendo posteriormente injectada na coluna.
O eluente, que continuamente bombeado para a coluna, vai arrastar os componentes
da amostra que vo sendo separados uns dos outros devido aos diferentes equilbrios de
distribuio a que esto submetidos (entre a fase mvel - eluente e a fase estacionria - leito
da coluna).
Em seguida os componentes da amostra vo ser detectados por absoro no
ultravioleta sendo o tempo de chegada ao detector dependente da forma como cada
componente interactua com a fase estacionria da coluna. Um registador, que est ligado ao
detetctor, permite obter automaticamente o sinal enviado por este o qual, em primeira
aproximao, proporcional concentrao do componente na soluo que passa nesse
instante atravs da clula do detector.
A representao grfica do sinal enviado pelo detector em funo do volume de
efluente da coluna constitui o cromatograma da mistura. Sendo conhecido o caudal de eluente,
pode facilmente transformar-se a escala de volumes de efluente em unidades de tempo.


30
volume
A
B

Figura 2 - Cromatograma como representao grfica de concentraes de
componentes ao passarem no detector em funo do volume de efluente da coluna.

Parte Experimental
Aparelhagem
O cromatgafo tem os seguintes componentes principais:
a) bomba
b) vlvula de injeco
c) coluna RP-8
d) detector de ultravioleta
Reagentes
- cido benzico
- cafena
- metanol
- cido perclrico (soluo 1:99)
2.3. Solues a preparar:
Prepare as seguintes solues em bales volumtricos:
- soluo-me de cido benzico 1x10-4 M
- soluo-me de cafena 1x10-3 M
Solues padro:
SoIuo O 1 2 3 4 5 6
conc. cafena (M) O 2x1O
-5
4x1O
-5
8x1O
-5
1x1O
-4
2x1O
-4
4x1O
-4

conc. cido
lenzico (M)
5x1O
-5
5x1O
-5
5x1O
-5
5x1O
-5
5x1O
-5
5x1O
-5
5x1O
-5





31
Preparar o eluente a utilizar misturando 420 mL de metanol (grau HPLC) com 580 mL
de uma soluo aquosa contendo 7 mL de cido perclrico. Filtrar o eluente com a montagem
apropriada para esse efeito.
Condies experimentais
Caudal de eluente: 1,0 mL/min
Comprimento de onda de deteco: 225 nm.
Procedimento
Para fazer as injeces das solues:
a) lave a seringa varias vezes com a soluo a ensaiar.
b) Em seguida encha vrias vezes com a soluo a vlvula de injeco na posio de
"load", tendo o cuidado de no introduzir ar na vlvula quando pressiona o mbolo da seringa
c) Para introduzir a amostra na coluna rodar a vlvula de injeco para a posio de
"inject". Iniciar simultaneamente o registo do cromatograma.
d) Proceder injeco de cada uma das solues padro, por ordem crescente de
concentrao. Aps a injeco da soluo padro mais concnetrada, injecte um branco para
confirmar que no ficaram quaisquer contaminaes a seringa.
Para a anlise das amostras:
(i) desgasifique trompa as amostras (principalmente se se tratar de refrigerantes
gaseificados).
(ii) repita a), b) e c) mas agora com cada uma das amostras.
(iii) misture em volumes iguais cada uma das amostras que vai analisar com a soluo
de padro interno e repita a), b) e c) mas agora com cada uma destas misturas.

Clculos
1) Trace a recta de calibrao cafena/padro interno em funo da concentrao de
cafena.
2) Calcule o limits de deteco e o limite de quantificao.
3) Calcule a concentrao de cafena nas amostras que analisou por meio do mtodo
do padro interno.
4) Determine o nmero de pratos tericos da coluna e a altura equivalente de um prato
terico tomando um dos cromatogramas como referncia.
5) Determine o factor de resoluo tendo em conta um dos cromatogramas obtidos.





32
Cromatografia Lquida de Alta Eficincia: Anlise
da degradao fotoqumica de um pesticida

O Fenarimol fungicida que se decompe por aco da radiao solar, dando origem a
diversos fotoprodutos. O doseamento de fenarimol remanescente, em funo do tempo de
irradiao, por este mtodo bastante rpido e de aplicao simples.
A constituio de um equipamento para cromatografia lquida de alta eficincia est
representada esquematicamente na figura seguinte:
A constituio de um equipamento para cromatografia lquida de alta eficincia est
representada esquematicamente na figura seguinte:

Figura 1 - Representao esquemtica de um cromatgrafo para HPLC

A amostra colocada na vlvula de injeco sendo posteriormente injectada na coluna.
O eluente, que continuamente bombeado para a coluna, vai arrastar os componentes
da amostra que vo sendo separados uns dos outros devido aos diferentes equilbrios de
distribuio a que esto submetidos (entre a fase mvel - eluente e a fase estacionria - leito
da coluna).
Em seguida os componentes da amostra vo ser detectados por absoro no
ultravioleta sendo o tempo de chegada ao detector dependente da forma como cada
componente interactua com a fase estacionria da coluna. Um registador, que est ligado ao
detector, permite obter automaticamente o sinal enviado por este o qual, em primeira
aproximao, proporcional concentrao do componente na soluo que passa nesse
instante atravs da clula do detector.
A representao grfica do sinal enviado pelo detector em funo do volume de
efluente da coluna constitui o cromatograma da mistura. Sendo conhecido o caudal de eluente,
pode facilmente transformar-se a escala de volumes de efluente em unidades de tempo.


33
volume
A
B

Figura 2 - Cromatograma como representao grfica de concentraes de
componentes ao passarem no detector em funo do volume de efluente da coluna.

Parte Experimental
Aparelhagem
O cromatgafo tem os seguintes componentes principais:
a) bomba
b) vlvula de injeco
c) coluna RP-18
d) detector de ultravioleta
Reagentes
soluo de fenarimol 200 mg/L em acetonitrilo (manter esta soluo protegida da luz).
Soluo de fenantreno - 200 mg/L em acetonitrilo acetonitrilo (deve manter esta soluo
protegida da luz).
- acetonitrilo
- gua bidestilada
Solues a preparar:
Prepare as seguintes solues em bales volumtricos:
Soluo aquosa de fenarimol 5 mg/L (200 mL).
Solues padro (solvente gua):

Soluo 1 2 3 4
Fenarimol (mg/L) 1 2,5 4 5
Padro interno (mg/L) 4 4 4 4




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Condies experimentais
Composio do sistema eluente: acetonitrilo 60%; gua 40%.
Caudal de eluente: 1,1 mL/min
Comprimento de onda de deteco: 220 nm.

Procedimento
Para fazer as injeces das solues:
a) lave a seringa varias vezes com a soluo a ensaiar.
b) Em seguida encha a vlvula de injeco na posio de "load" com um volume de
soluo superior ao do loop em utilizao, tendo o cuidado de no introduzir ar na vlvula
quando pressiona o mbolo da seringa
c) Para introduzir a amostra na coluna rodar a vlvula de injeco para a posio de
"inject". Iniciar simultaneamente o registo do cromatograma.
d) Proceder injeco de cada uma das solues padro, por ordem crescente de
concentrao. Aps a injeco de cada soluo padro, injecte um branco para confirmar que
no ficaram quaisquer contaminaes no sistema de injeco e seringa.
Para a anlise das amostras:
Coloque a soluo de fenarimol com 5 mg/L a irradiar ao Sol, num cristalizador com
tampa de quartzo.
Passadas 5 horas, recolha a amostra, retire 50 mL adicione padro interno (de forma a
ficar com a concentrao de 4 mg/L) e ajuste o volume a 100 mL em balo volumtrico.
(iii) repita a), b) e c) mas agora com a amostra irradiada, preparada na alnea anterior.

Clculos
1) Trace a recta de calibrao fenarimol/padro interno em funo da concentrao
defenarimol.
2) Calcule o limite de deteco e o limite de quantificao.
3) Calcule a concentrao de fenarimol na amostra irradiada que analisou por meio do
mtodo do padro interno.
4) Determine o nmero de pratos tericos da coluna e a altura equivalente de um prato
terico tomando um dos cromatogramas como referncia.
5) Determine o factor de resoluo (do fenarimol relativamente aos dois fotoprodutos
adjacentes) tendo em conta o cromatograma da amostra irradiada.





35
APNDICE - Mtodo do Padro interno
De uma maneira geral, recorre-se a esta tcnica sempre que num mtodo analtico
difcil manter inalterveis as condies operatrias.
No caso da cromatografia em fase gasosa, o recorrer-se ao padro interno deve-se
principalmente ao erro cometido na medio de pequenos volumes de amostra.
A injeco faz-se por meio de microseringas que nem sempre funcionam perfeitamente,
ao que se juntam os erros do operador no que respeita dificuldade de visualizao do lquido
e velocidade de accionamento do mbolo, que influencia tambm o modo como a amostra
vai atingir a coluna. Variaes do caudal do gs de arrastamento ou alteraes nas
temperaturas programadas so factores que, embora em menor grau, tambm contribuem
para que seja mais conveniente usar o mtodo do padro interno.
Neste mtodo escolhe-se uma substncia (padro interno) diferente de todos os
constituintes da mistura a analisar, que se adiciona na mesma proporo a todas as solues
a ensaiar, quer padres quer amostras.
Se as condies operatrias se mantiverem inalteradas, os picos correspondentes ao
padro interno teriam exactamente a mesma rea. Na realidade isto no se verifica e h
sempre maior ou menor diferena nas reas de picos de diferentes injeces; no entanto,
admite-se que estas variaes so proprocionais s que afectam os picos referentes aos
outros constituintes.
Sendo assim, as razes das reas dos picos dos diversos constituintes e as reas dos
picos correspondentes ao padro interno (A
n
/A
p
), manter-se-o aproximadamente
proporcionais s concentraes.
Traduzindo de uma forma quantitativa o que se acabou de referir, tem-se que, como a
rea sob o pico proporcional quantidade de composto eludo:
A
i
= f
E
.m
i

= f
E
.d
E
.v
i

= f
E
.d
E
.c
i
.V
em que:
A
i
- rea sob o pico do etanol do padro i
f
E
- factor de resposta do detector para o etanol
m
i
- massa de etanol eludo correspondente ao padro i
d
E
- densidade do etanol
v
i
- volume correspondente ao etanol no padro i
c
i
- concentrao do etanol, expressa em % volumtrica no padro i
V - volume total de padro injectado




36
Pode escrever-se uma relao idntica para o propanol:
A
p
= f
P
.d
P
.c
P
.V
Calculando a razo das reas:
A
i
/A
p
= (f
E
.d
E
.c
i
.V)/( f
P
.d
P
.c
P
.V) = K c
i
/c
p

em que
K = f
E
.d
E
/f
P
.d
P

Verifica-se portanto que A
i
/A
p
proporcional a c
i
, se cp tiver o mesmo valor em todos os
padres.
Traam-se curvas de calibrao tomando para ordenadas estas razes de reas e para
abcissas as vrias concentraes do contituinte respectivo (c
i
).
A escolha da substncia que se utiliza como padro interno depende da composio da
mistura a analisar. evidente que ter de ser diferente de qualquer um dos constituintes da
mistura, no reagir com estes e permitir uma boa resoluo entre o respectivo pico e os picos
dos contituintes da amostra.
Consegue-se uma melhor preciso se a razo das reas dos picos for prxima de 1.
Na prtica, para escolher um padro interno, depois de identificados os constituintes no
cromatograma da amostra, recorre-se consulta de tabelas para seleccionar substncias que
apresentem caractersticas na gama dos valores apropriados para casa caso.