Ingeniera Gentica; Mutaciones.

Rodolfo Ordaz . 4B
- Lechuga con alta capacidad para crecer a bajas temperaturas -

- Lactuca sativa - Reine de Mai - American British School Departamento de Ciencias - Biologa Electivo-

Ingeniera Gentica; Mutaciones. 25 de junio de 2012.

I.

Tabla de contenido
Pgina 2 Pgina 3 Pgina 4 Pgina 5 Pgina 6 Pgina 7 Pgina 8 Pgina 9 Pgina 10 Pgina 11 Pgina 12 ndice. Introduccin. Experimento, Objetivo , Materiales. Experimento, Descripcin. Experimento, Descripcin. Experimento, Descripcin. Experimento, Tabla de Desarrollo. Experimento, Tabla de Desarrollo. Conclusin. Conclusin Bibliografa

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II.

Introduccin
Este documento detalla el proceso en el cual se busc la presencia de un gen mutado en una variante de lechugas, que podra permitir a estas crecer en un ambiente con una alta concentracin de sales, en este caso NaCl (sal comn). Antes de comenzar el experimento que llev a descubrir la presencia de este gen mutado, se sabia que en Tomates, exista una variante de su especie que creca en ambientes muy salados, aunque que no era comestible por su misma salinidad (Estudiadas por la Universidad de Atacama, Chile), por lo tanto se conclua que existen genes que codifican para protenas que actuaran de alguna forma en la regulacin hidro-salina de la planta permitindole crecer en ambientes ricos en sales minerales. El objetivo de este proyecto es encontrar en Lechugas una variante de un Gen que permita la posibilidad de que germinen en un ambiente salado y as, a travs de la Bioingeniera, crear un hibrido de lechugas que crezca bajo estas condiciones como tambin otras especies de plantas transgnicas. El primer paso para este proyecto ser descubrir la presencia natural del gen, con un experimento que se detallar mas adelante. Se sabe que la temperatura ideal para la germinacin de una semilla de Lechuga oscila entre los 15 C y los 20 C, sin embargo se han encontrado lechugas que germinan desde los 4 C hasta los 30 C y debido a las bajas temperaturas de la poca en nuestro pas, ocuparemos una variante de lechugas que crecen a bajas temperaturas, llamadas comnmente Lechugas de Invierno, en este experimento utilizaremos la variante llamada Lactuca Sativa Reine de Mai que se sabe que puede germinar a temperaturas de 2C a 3C. Si se encuentra en forma natural en lechugas el gen que permitira germinar en medios con altas concentraciones de sales, se proceder a obtener una cepa con una alto porcentaje de expresin y presencia de tal gen, para as lograr estudiarlas a futuro, descubriendo las protenas necesarias para esta hazaa y crear, a partir de esto y el conocimiento de la Biotecnologa, otras especies de plantas o frutos con estas caractersticas, creando especies transgnicas que puedan germinan en ambientes salinos. Si no se encuentra una lechuga que pueda crecer en medios con alta concentracin de sales, simplemente se descartar que las lechugas tengan un gen que codifique una protena capaz de permitir esto y se buscar otra planta o fruto que presente esta caracterstica, para as, proceder de la misma manera que en el prrafo anterior para generar especies transgnicas.

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III.

Experimento
Objetivo del Experimento: El objetivo de este experimento es encontrar la presencia, en forma natural, de un gen que permita a Lechugas germinar y desarrollarse en medios con altas concentraciones de sales ( NaCl). Materiales del Experimento:

4 Bandejas de Aluminio 3 Experimentales, 1 Control

8 Novas cortadas al tamao de cada bandeja ( 2 c/u )

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1 Paquete de Lechugas de especie Sativa

Descripcin 1 Foil Plstico del Experimento: Para encontrar la expresin del gen que

Sal ( NaCl) y 1 Cuchara pequea

2 Botellas de 1Lt. de H2O

se busca, se proceder a sembrar en bandejas de aluminio (por su capacidad para conservar la temperatura) una cantidad de 100 semillas que se distribuirn por toda la bandeja. Se utilizaran 3 Bandejas Experimentales y 1 Bandeja de Control. Previamente al sembrado de las semillas, la bandeja se cubrir con dos

Ingeniera Gentica; Mutaciones. 25 de junio de 2012. papeles absorbente (Nova) que mas adelante se mojara con la mezcla de agua salada o normal para que las semillas obtengan H2O, necesaria para la germinacin.

En una de las botellas, se har una mezcla para el riego de las 3 bandejas experimentales, esta mezcla consistir de 1 Lt. de H2O proveniente de la llave + 2 cucharadas de NaCl, Esta mezcla se denominara Mezcla Salada. La otra botella solo regara la bandeja de control y esta tendr solo H2O proveniente de la llave, esta mezcla se denominara Mezcla Control.

Luego de sembrar las semillas en las 4 bandejas por igual, se identificara la bandeja de control con la palabra CONTROL escrita en los costados de la bandeja, las 3 bandejas que sern las experimentales se identificaran con los nmeros 1. 2 y 3.

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Sembradas las semillas se proceder a regar las bandejas 1. 2 y 3 con la Mezcla Salada solo hasta que el papel absorbente este hmedo. De la misma forma se regar la bandeja CONTROL con la Mezcla Control hasta que el papel absorbente este hmedo.

La funcin que cumplir la bandeja CONTROL ser controlar la germinacin y el crecimiento normal que tendra la semilla de lechuga ya que se riega con agua dulce, la cual no le hace dao. La funcin que cumplirn las bandejas 1. 2 y 3 ser de mostrar germinacin y crecimiento anmalos, ya que de germinar y crecer, en el medio salino en las que estn, se debera a la presencia de alguna protena codificada por un gen, que de alguna forma permitira a la planta regular de mejor forma su balance hidro-salino. Se espera que solo unas pocas semillas germinen y no todas, esto explicara en las que germinaron la presencia del gen buscado, que permite la produccin de una protena que permite esta funcionalidad anmala, el descubrimiento de estas semillas que germinen en las bandejas 1. 2 y 3 es el objetivo del experimento. Luego, las bandejas sern cubiertas con un foil plstico para protegerlas y mantener la humedad en su interior. Finalmente se revisara el estado de avance de las 4 bandejas diariamente aproximadamente a la misma hora y poniendo los datos que se observaran en una tabla que se detallar ms adelante.

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Tabla de Desarrollo del Experimento: CONTROL Inicio. BANDEJA 1 Inicio. BANDEJA 2 Inicio. BANDEJA 3 Inicio. No se observan cambios. Riego. No se observan cambios.

DAS. Sbdo. 9 Jun. Dom. 10 Jun. Lun. 11 Jun. Mar. 12 Jun.

No se observan No se observan No se observan cambios. cambios. cambios. Riego. Riego. Riego. Se observan No se observan No se observan pequeos cambios. cambios. puntos blancos en algunas semillas. Los puntos No se observan No se observan blancos estn cambios. cambios. en todas las semillas. No hay No se observan No se observan cambios cambios. cambios. significativos. Comienza a Aun no Aun no surgir un brote germinan. germinan. pequeo de color blanco. Se asume que ha Germinado. No hay Aun no Aun no cambios germinan. germinan. significativos. Riego. Riego. Riego. El pequeo Aun no Algunas brote blanco germinan. semillas se ha crecido. ponen negras. Aun no germinan. Crece el brote. Aun no Aun no germinan. germinan. Crece el brote. Aun no Aun no germinan. germinan.

Mier. 13 Jun.

No se observan cambios. No se observan cambios. Aun no germinan.

Jue. 14 Jun. Vier. 15 Jun.

Sbdo. 16 Jun. Dom. 17 Jun.

Aun no germinan. Riego. Aun no germinan.

Lun. 18 Jun. Mar. 19 Jun.

Germinan pocas semillas. Se observa el mismo brote blanco que en CONTROL pero de menor

Ingeniera Gentica; Mutaciones. 25 de junio de 2012. tamao.

Mier. 20 Jun.

Jue. 21 Jun.

Riego El brote blanco llega hasta la mitad de la altura de la bandeja. En la punta del brote surge una hoja verde.

Riego Germinan pocas semillas.

Riego Germinan 2 semillas.

Riego.

Vier. 22 Jun.

La punta se hace mas verde y grande.

Sbdo. 23 Jun.

Dom. 24 Jun.

El brote blanco llega hasta la altura del foil plstico. 100% de las semillas germinaron. Todas llegan al foil. Riego El brote comienza a doblarse y caer.

Se observa el mismo brote blanco que en CONTROL pero de menor tamao. Crecen muy poco las que germinaron, las que no germinaron se encuentran igual. Algunas semillas se tornan negras (Necrosis). (Alrededor del 5%)

Germinan otras semillas Se divisa un 10% aprox. de semillas germinadas Se observa el mismo brote blanco que en CONTROL pero de menor tamao. Crecen muy poco las que germinaron, las que no germinaron se encuentran igual. Riego Algunas semillas se tornan negras. (Necrosis). (Alrededor del 5%)

No hay cambios significativos.

Algunas semillas se tornan negras (Necrosis). (Alrededor del 5%) No hay cambios significativos.

Riego Se divisa un 10% aprox. de semillas germinadas

Riego Crecen muy poco las que germinaron, las que no germinaron se encuentran igual.

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IV.

Conclusin
Se concluye que en la especie Lactuca sativa - Reine de Mai hay una cantidad no despreciable de individuos con la expresin de alguna protena, codificada por un gen, que les permite de alguna forma crecer en este ambiente con altas concentraciones de sales. Se confirma la tesis de que existen variantes de genes que actan sobre la regulacin hidro-salina. Se confirma tambin, que el compuesto NaCl acta inhibiendo la germinacin en plantas que no presentan esta variante del gen. Cabe destacar que el compuesto NaCl ralentiza el periodo de germinacin en los individuos que expresan la variante del gen. Con las muestras de las lechugas que crecieron exitosamente, a las que llamaremos Lechugas Anmalas, en el ambiente con alta concentracin de sal mineral NaCl se proceder a estudiar su Cdigo Gentico y compararlo con Cdigos Genticos de lechugas que no crecieron exitosamente, a las cuales llamaremos Lechugas Normales, por los medios de la Electroforesis y las Enzimas de Restriccin. Por medio de la Hibridacin de ADN-ARN se encontrara el segmento donde se encuentra la mutacin, se determinar como se logr ( Deleccin, Translocacin, Inversin o Duplicacin) Se encontrara con estos mtodos la secuencia que codifica a las protenas responsables de esta germinacin anmala. Una vez encontradas las protenas que influyen en la capacidad de tolerar el estrs salino, donde germinaron estas lechugas, se proceder a buscar en que estructuras se encuentra y cual es la funcin que cumple. Se cree que esta protena puede ser responsable de algn cambio en alguna de las siguientes estructuras o que sea una enzima capaz de influir en la regulacin hidro-salina de la planta de la siguiente manera: 1. Membrana Plasmtica: Posiblemente esta protena tenga alguna funcin en la membrana, inhibiendo el transporte de sales minerales al interior de la clula. 2. Aparato de Golgi: Posiblemente esta protena influya sobre el Aparato de Golgi, generando una cantidad excesiva de Vesculas ( de transporte) que excretaran el NaCl de la clula.

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Ingeniera Gentica; Mutaciones. 25 de junio de 2012. 3. Retculo Endoplasmtico Rugoso: Posiblemente esta protena influya sobre el RER, generando una cantidad excesiva de Vesculas ( de transporte) que excretaran el NaCl de la clula. 4. Plasmodesmos: Como estas unidades continuas de citoplasma, en organismos como los vegetales, pueden atravesar la pared celular, manteniendo interconectadas las clulas continuas permitiendo la circulacin directa de las sustancias del citoplasma entre clula y clula, esta protena podra actuar creando una forma de que el compuesto NaCl no sea transportado por estos poros . 5. Giberelinas: Esta Protena podra ser una Enzima que en presencia de NaCl acte sobre las Giberelinas, con el propsito de conseguir la germinacin de un modo mas lento, en el cual la clula no sucumba ante el estrs salino.

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V.

Bibliografa
-http://es.wikipedia.org/wiki/Giberelinas -http://www.faxsa.com.mx/semhort1/c60le001.htm -http://es.wikipedia.org/wiki/Germinacin -http://es.wikipedia.org/wiki/Plasmodesmo -http://es.wikipedia.org/wiki/Fitohormona -http://www.saltspringseeds.com/catalog/index.cfm?categoryid=4 -http://fichas.infojardin.com/hortalizas-verduras/lechugas-lechuga-iceberglechuga-romana.htm -http://es.wikipedia.org/wiki/Lactuca_sativa -http://www.botanical-online.com/tablasdegerminacion.htm -http://www.infoagro.com/hortalizas/lechuga.htm -biblioceop.files.wordpress.com/2011/02/equilibrio-hidrosalino-1.doc -http://es.wikipedia.org/wiki/Mutacin -http://es.wikipedia.org/wiki/Ves%C3%ADcula_(biolog%C3%ADa_celular) http://www.chilternseeds.co.uk/item_1760c_lettuce_may_queen_or_reine_de_mai _regina_de_maggio__heirloomheritage_variety__butterheadcrisphead_seeds

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