[Escriba el ttulo del documento] [Seleccione la fecha]

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Per, DECANA DE AMERICA) FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MDICA

Curso de TOXICOLOGA Informe de Seminario N2 Determinacin de alcoholes y glicoles Grupo B1

Apellidos y Nombres:

Ocho Montes, Yeni Ortiz Gomez Tamin Nohely

-2012-

1. Introduccin
Aunque se trata de una droga legal, el alcohol etlico contribuye a ms muertes en los jvenes que el conjunto de todas las drogas ilegales. El consumo excesivo de etanol es el responsable o contribuyente de muchos accidentes de trfico, accidentes laborales, conductas violentas, suicidios, accidentes por fuego y ahogamientos. [1] En el Per el 11% de los accidentes de trnsito son atribuidos al consumo de alcohol. [2] No solo el alcohol etlico sino que otros alcoholes como metanol, isopropanol y glicoles como el etilen glicol estn presentes en un gran nmero de productos farmacuticos (antitusgenos, descongestionantes, etc.), cosmticos (colonias, lociones para despus del afeitado, perfumes, etc.), detergentes, lacas, productos de limpieza del hogar y bebidas, siendo frecuente la ingestin accidental de estos productos por los nios. Diversos mtodos cualitativos y cuantitativos que emplean como muestras aliento, saliva, sangre, cabello y orina han sido desarrollados para demostrar la presencia de estos alcoholes y glicoles

2. Anlisis Qumico de alcoholes y glicoles

La principal propiedad que caracteriza tanto a los alcoholes como a los glicoles es la presencia de grupos hidroxilo en su estructura qumica lo que les confiere su naturaleza polar; sin embargo es tambin la presencia de grupos hidroxilo lo que los diferencia, pues los glicoles como el etilenglicol o propilenglicol son considerados dioles ya que poseen dos grupos hidroxilo en su composicin qumica a diferencia de los monoles como el metanol que solo poseen uno. Por tanto solo estaramos hablando de un grupo qumico, el de los alcoholes, cuyas propiedades fsicas como solubilidad, densidad y color son semejantes tanto para alcoholes como glicoles. Mientras que la temperatura de ebullicin de los glicoles es ms alta, los alcoholes poseen un comportamiento ms voltil. Es debido a sus caractersticas fsicas y qumicas los que los hace idneos como disolventes, desinfectantes, anticongelantes o estabilizantes. Los alcoholes ms importantes en toxicologa son el etanol, el metanol, el isopropanol y el etilenglicol. [3]

Tabla 1 Caractersticas fsicas de los alcoholes y glicoles. [3] Color Olor Solubilidad Densidad (aprox.) Punto ebullicin Punto congelacin Uso principal Alcoholes Incoloros Aromtico Agua/grasas 0.8 gr/ml Bajo (voltiles) Bajo Disolventes Glicoles Incoloros Inodoros Agua/grasas 0.8 gr/ml Alto Muy bajo Disolventes Anticongelantes

Tabla 2 Caractersticas qumicas, utilizacin y fuentes de alcoholes y glicoles. [3] Frmula qumica Alcoholes Metanol Etanol CH3OH CH3-CH2OH Pm Usos ms comunes Disolvente Desnaturalizante Disolvente Antisptico Disolvente Antisptico Disolvente Anticongelante Solvente farmacutico Disolvente Excipiente farmacutico Fuentes del txico

32 46

Alcohol isoproplico Glicoles Etilenglicol Propilenglicol Dietilenglicol

CH3-CHOHCH3

60

Alcohol de quemar Barnices Bebidas alcohlicas Colonias Disolventes

CH2OH62 CH2OH CH3-CHOH76 CH2OH CH2OH-CH2- 106 O-CH2-CH2OH

Anticongelantes Productos farmacuticos Disolventes

3. Anlisis Toxicocintico de alcoholes y glicoles

Despus de abordar de forma comparativa la constitucin qumica de los alcoholes y glicoles, es necesario abordar lo procesos que involucran la interaccin entre el txico y el organismo, producto de la administracin ya sea de manera accidental o intencional de este tipo de compuestos; para conocer estos mecanismos de transformacin segn la toxicocintica, merece responder la pregunta Cules son los procesos de biotransformacin que sufren los alcoholes? Si abordamos los compuestos ms representativos de este grupo qumico como son el etanol, isopropanol y metanol se menciona que una vez en el organismo pueden ser absorbidos principalmente por el tracto gastrointestinal; el etanol lo es ,tambin, a nivel pulmonar. Adems de estos mecanismos de absorcin, el metanol incluso puede absorberse a nivel renal, a pesar de serlo en un bajo porcentaje comparado con el 20% a nivel respiratorio y el 3% por va renal. [4] Posterior a la absorcin, el principal mecanismo del que es sujeto un compuesto alcohlico son las reacciones de oxidacin mediada por la enzima alcohol deshidrogenasa. As, el etanol es transformado en acetaldehdo, posteriormente la enzima acetaldehdo deshidrogenasa lo convierta en acetato el cual es disociado a dixido de carbono y agua; estas molculas encuentran su principal forma de excrecin por va renal y pulmonar. [5] Tanto el acetaldehdo como el acetato son metabolitos involucrados en la inhibicin de la gluconeognesis (esto explica la disminucin de los niveles de glucosa srica) por tanto un acumulo de cido lctico y la consecuente acidosis metablica que caracteriza el diagnstico clnico. El metabolismo del isopropanol es ms simple pero particular; pues, una parte puede ser degradado hasta acetona y otra, puede continuar como isopropanol, ambos tambin pueden ser excretados a nivel renal y pulmonar. El metanol, al ofrecer otras vas de absorcin para su ingreso como toxico, se transforma en formaldehido despus en cido frmico o formato, pudiendo luego disociarse como dixido de carbono y agua. Es importante sealar que es el formato ms que otros metabolitos el que ejerce sus efectos txicos, porque es capaz de bloquear la enzima del ltimo eslabn de la cadena respiratoria, la citocromo oxidasa; interrumpiendo el proceso de respiracin intracelular, lo cual conduce inevitablemente a una acidosis metablica. La siguiente interrogante busca saber Por qu procesos de biotransformacin pasan los glicoles? Debido a ciertas propiedades qumicas que comparte con los alcoholes, los glicoles no estn exentos de ser metabolizados o biotransformados por la enzima oxidativa, la alcohol deshidrogenasa. Si bien es cierto que papel protagnico de sta es

importante, tambin lo es saber dnde se lleva a cabo. Los diversos procesos de transformacin tanto de alcoholes y glicoles a travs de la enzima alcohol deshidrogenasa se dan primordialmente en el hgado [5]; rgano detoxificador por excelencia. Por tanto, el etilenglicol es metabolizado hasta glicoaldehido, luego en cido gliclico (glicolato) para despus ser degradado a glioxilato, cuya capacidad de inhibir la respiracin celular nos lleva a un cuadro de acidosis metablica por aumento de cido lctico, ya antes sealada. Adems, se seala que el etilenglicol puede sufrir una transformacin alterna hasta cido oxlico, el cual establece uniones con el calcio formando depsitos de oxalato de calcio que podran precipitar en rganos blandos como rin, pulmn o cerebro. Conociendo la forma cmo el organismo humano busca metabolizar estos compuestos txicos a fin de minimizar sus efectos adversos, podremos abordar el como stos y sus respectivos metabolitos interfieren con los sistemas orgnicos de nuestro cuerpo.

4. Anlisis Toxicodinmico de alcoholes y glicoles

Los signos y sntomas de envenenamiento por alcoholes, por citar la intoxicacin por etanol es debido a sus metabolitos incluyendo al Acetaldehdo, responsable de inhibir el proceso de gluconeognesis provocando una hipoglicemia con la consecuente acumulacin de cido lctico contribuyendo al cuadro de acidosis metablica caracterstica de este tipo de intoxicacin, pudiendo alterar la funcionalidad de las membranas de clulas neuronales conllevando a una depresin de sistema nervioso central a nivel de la coordinacin motora y una evidente disminucin de los reflejos. Adems, la Gap osmolar se ve incrementada tanto como en la intoxicacin por isopropanol, metanol o etilenglicol; sin embargo, el anin gap no esta tan aumentado como si se observa tras la ingestin de metanol y etilenglicol. El anin gap (12 16 mEq/L) es una aproximacin matemtica de la diferencia entre los aniones y cationes del suero no medidos [6].Para efectos del presente tema, los aniones no medidos pueden ser fosfatos, sulfatos u cidos orgnicos (cido frmico, por ejemplo) cuyos precursores son los alcoholes orgnicos ya tratados con antelacin. As, el organismo buscara amortiguarlos con HCO3 como mecanismo compensatorio que provocara que el anin gap aumente. Este parmetro es muy utilizado en el diagnostico de acidosis metablica. Del mismo modo la Gap osmolar es necesaria para identificar la

presencia de sustancias toxicas, pues tras la intoxicacin con etanol, metanol o etilenglicol la osmolaridad plasmtica se eleva. Una caracterstica en el diagnostico diferencial de intoxicacin por isopropanol es la determinacin de cetonas en orina as como niveles sricos de acetona en suero sanguneo, estos metabolitos no se encuentran en la intoxicacin por otros alcoholes. Por otro lado, la formacin de cristales de oxalato de calcio caracteriza la intoxicacin por etilenglicol, a esta caracterstica casi exclusiva se suma la no deteccin del olor en el aliento a diferencia de los dems alcoholes que tras su ingesta masiva es detectable en el aliento. Los problemas visuales son consecuencia del consumo de metanol, pues su metabolito formaldehido es capaz de inhibir la fosforilacin oxidativa retiniana provocando trastornos de la visin. [4]Tambin se observa un aumento de anin gap y la gap osmolar sumado una severa acidosis metablica sospechando tambin de una intoxicacin por etilenglicol; pero esta, puede presentar los signos y sntomas clnicos distribuidos en 3 etapas: dentro las 12 horas de la intoxicacin puede presentarse depresin de sistema nervioso central, cuadro de acidosis metablica con preservacin de la funcin visual. La segunda etapa involucra (12-24h) taquicardia o taquipnea, hipertensin y colapso en la circulacin. La tercera etapa (24-72h) puede hallarse proteinuria, hematuria, hipocalcemia y un posible fallo renal. Ante las consecuencias adversas que ocasionan estos txicos existe tratamiento diferencial de acuerdo al tipo de alcohol ingerido. As, es muy efectivo procedimientos de lavado gstrico antes de las 2 horas de la intoxicacin, uso de bicarbonato de sodio para restablecer el equilibrio acido base del cuerpo tras la acidosis metablica. La administracin de etanol es muy comn en una intoxicacin con metanol, basado en l principio de que el etanol inhibe competitivamente el metabolismo del metanol por la alcohol deshidrogenasa, ya que tiene una afinidad por la enzima de hasta 20 veces que la del metanol, por tanto esto tratara de evitar que se formen los metabolitos txicos como acido frmico o formato. [5]

5. Mtodos cualitativos para la determinacin de alcoholes y glicoles

La prueba cualitativa ms utilizada es la prueba del aliento para etanol: En la actualidad hay diferentes tipos de probadores de aliento de alcohol, que van desde equipos desechables hasta equipos que proveen resultados legalmente admisibles (pruebas cuantitativas).

Los dispositivos desechables proveen resultados preliminares sin valor legal. Son los ms econmicos, aunque de un solo uso, y se utilizaron inicialmente para determinar si la persona debe someterse a un anlisis oficial para su confirmacin. Consisten en ampollas de vidrio cerradas que contienen cristales de dicromato de potasio en un medio de cido sulfrico. Antes de su uso se rompe la ampolla en una bolsa hermtica y se sopla durante un tiempo normalizado. El alcohol del aliento se detecta por el cambio de color (del amarillo al azul verdoso) de los cristales de dicromato de potasio. [7] En el caso de intoxicaciones por metanol, isopropanol y etilenglicol; el diagnostico oportuno se realiza con el cuadro clnico sugestivo mas pruebas de laboratorio complementarias.

6. Pruebas complementarias
Las pruebas complementarias se realizan previo antecedente o sospecha de exposicin a alguna de las sustancias anteriormente mencionas, que unidas al cuadro clnico sugestivo permitirn brindar un tratamiento oportuno mientras se van realizando las pruebas confirmatorias de valor cuantitativo. Un incremento en el gap osmolar es evidenciado en la presencia de todos los alcoholes. En adicin, metanol, etanol y etilen glicol tambin resultan en un incremento en acidosis metablica con un incremento de anin gap, separndolos del isopropanol. Una pista relevante para la ingestin de isopropanol es positividad para acetona en la orina o en la sangre, sin estar acompaado de hiperglicemia. En adicin a un incremento en el gap osmolar y acidosis anin gap, la ingesta de etilen glicol puede resultar en una anlisis de orina positivo para la presencia de cristales de oxalato de calcio, porque ste es convertido a oxalato, que puede quelar calcio y resultar en hipocalcemia. [8] En el caso de etilenglicol la formacin de cristales de oxalato de calcio no es muy abundante; sin embargo, este dato es caracterstico de esta intoxicacin. As el examen de orina con lmpara de Wood mostrara fluorescencia al incidir sobre los cristales de oxalato de calcio, dato indirecto que seala la intoxicacin por etilenglicol. [9] Diagnostico Diferencial de la Intoxicacin por Alcohol. Alcohol Etanol Etilenglicol Isopropanol Metanol Gap Osmolar Incrementado Incrementado Incrementado Incrementado Acidosis Anin Gap Presente Presente Ausente Presente Exmenes Auxiliares -------Cristales de Oxalato de Calcio. Acetonemia, Acetonuria( no hiperglucemia) ---------

7. Mtodos Cuantitativos para la determinacin de alcoholes

Los fluidos corporales, tales como sangre, orina, aliento, saliva, y el cabello se han utilizado para las pruebas de alcohol. El aliento no es un fluido corporal, pero es comnmente utilizado por las autoridades policiales para detectar la presencia de alcohol. Las pruebas de alcohol en orina son los menos costosos de todos, y pueden detectar la ingesta de alcohol principalmente en la ltima semana, o ms de regular la bebida. Una prueba de orina positiva, sin embargo, no indica que la persona estaba bajo la influencia del alcohol en el momento de la prueba. Las pruebas en sangre miden la cantidad de alcohol en la sangre en el momento en que se toma la muestra, pero no revela cunto tiempo una persona ha estado bebiendo, es uno de los mtodos ms precisos pero tambin ms caro. La determinacin de alcohol en saliva es a menudo es un mtodo preferido para la prueba de alcohol en comparacin con las pruebas de alcohol en la sangre, ya que la concentracin de alcohol en la saliva es muy probable que sea similar al contenido de la sangre que est en la sangre. Una prueba de alcohol en cabello detecta la presencia de etil glucurnido (EYG) y los steres etlicos cidos (FAEEs). Estos marcadores permanecen en el cabello de forma indefinida, siempre y cuando la persona no se afeite o corte el cabello. Estos marcadores slo se producen cuando hay alcohol en la sangre, por lo que existen ms marcadores cuanto ms alcohol consuma la persona. [10] A continuacin se detallaran los mtodos cuantitativos para la determinacin de alcoholes mas usados. o Prueba rpida de alcohol por saliva: Es un mtodo semicuantitativo. La Prueba Rpida de Alcohol se basa en la alta especificidad de alcohol oxidasa (ALOx) para el alcohol etlico en presencia de la peroxidasa y un sustrato enzimtico como tetrametilbencidina (TMB), tal y como se muestra a continuacin:

El color distinto en la almohadilla reactiva pudo observarse en menos de 20 segundos despus de que la punta tuviera contacto con las muestras de saliva con una concentracin de alcohol etlico superior a 0,02%. [11]

o Examen de alcoholemia en aire espirado: Las pruebas de aliento son mayormente utilizadas para evaluar el estado de los automovilistas, primero son sometidos a pruebas de cribado, cuando estas pruebas cualitativas resultan positivas, se realizan pruebas cuantitativas de valor legal. Estos dispositivos utilizan una muestra del ambiente como blanco y una muestra estndar de aire/etanol. La concentracin de alcohol en la muestra estndar es 35 ug/100 ml de aire, dos muestras de aliento son luego tomadas del automovilista y evaluadas. Si el mas bajo de los resultados se encuentre entre 40ug y 50 ug/100 ml de aliento, el conductor tiene derecho a solicitar un anlisis de sangre. Si el mejor resultado es mayor que 50ug/ml de aliento, el conductor es procesado. Estos equipos trabajan sobre el principio de que, en presencia de un catalizador, el oxgeno en la muestra de aire espirado convierte el etanol, en cido actico y luego a agua y dixido de carbono. Una celda de combustible o celda infrarroja convierte la energa qumica liberada cuando se produce la oxidacin, en una tensin elctrica detectable. Cuanto mayor sea el voltaje, mayor ser el alcohol que est presente en la muestra.[12]

La cromatografa de gases resulta hoy el mtodo ms apropiado y es la prueba confirmatoria para la valoracin de metanol e isopropanol en fluidos biolgicos, especialmente sangre.

Alcohol Etanol Isopropanol Metanol

Mtodo Preferente Cromatografa de gases; Mtodos Enzimticos. Cromatografa de gases (GC). Cromatografa de gases (GC).

o Mtodo Enzimtico: Permite la dosificacin del alcohol (etanol) en la sangre u otros fluidos biolgicos. Fundamento: El etanol es oxidado a acetaldehdo en presencia de la enzima alcohol deshidrogenasa.

El acetaldehdo formado puede ser desplazado totalmente hacia la derecha en condiciones alcalinas atrapando el acetaldehdo formado. El acetaldehdo es oxidado en presencia de aldehdo deshidrogenasa cuantitativamente a cido actico

En este mtodo el NADH formado es determinado por la medida de su absorbancia a 334, 340 345 nm. [13]

8. Mtodos cuantitativos de determinacin de glicoles

A pesar de que la presencia de oxalato de calcio en orina es una prueba valiosa para el diagnostico diferencial de intoxicacin por etilenglicol, la medicin del alcohol es la prueba ms definitiva para descartar o excluir el envenenamiento o ingestin. Por tanto, el anlisis qumico nos plantea una tcnica de anlisis basado en un ensayo enzimtico rpido (Ensayo Catachem) por Journal, Jeunke. [8] La cual, constituye en una herramienta para la rpida medicin de los niveles de etilenglicol. El ensayo Catachem utiliza una enzima bacteriana, la glicerol deshidrogenasa, la cual oxida al etilenglicol en presencia de NAD, generando NADH reducido, sta es detectada espectrofotomtricamente por un incremento en la absorbancia a 340 nm. La diferencia en la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de etilenglicol. A pesar de ser sta una valiosa herramienta de anlisis, el mtodo preferido para la deteccin y medicin de etilenglicol es la Cromatografa de gases- Deteccin de ionizacin en llama (CG-FID), considerado hasta hoy como el mtodo gold estndar. [8] Es conveniente abordar el Mtodo de Cromatografa de Gases (CG) acoplada a una Deteccin de ionizacin de llama (FID), es tal vez el ms ampliamente utilizado por su alta sensibilidad. La tcnica cromatografa ya abordada en su momento, tiene como fin

10

principal recuperar una muestra ms pura para luego detectar y posteriormente medir el analito que deseo analizar mediante un sistema de deteccin como es el FID, considerado como un tipo de detector universal pero selectivo para compuestos que presenten enlaces C-H, son muchas las sustancias que producen seales mediante este sistema detector. [14] Cmo cuantifico la presencia del analito que deseo analizar? Pues el proceso inicia con el suministro del gas proveniente de la columna cromatogrfica, la cual se mezcla con hidrogeno, sumado a un exceso de aire se quema hasta que genere iones, los cuales se captan a travs de un colector cilndrico polarizado para luego poder medir cuantitativamente la corriente inica generada. El mecanismo por el cual se generan los iones an no est del todo claro; sin embargo, se le atribuye a un proceso de ionizacin qumica: la energa de reacciones exotrmicas interaccionan con molculas orgnicas originando molculas ionizadas.

9. Conclusiones
o Los alcoholes y glicoles pertenecen a un mismo grupo qumico confirindole propiedades cuyo usos ms comunes le atribuyen ser buenos disolventes, anticongelantes y estabilizantes. o Los alcoholes ms importantes en toxicologa son el etanol, metanol, isopropanol y etilenglicol. o Loa procesos de biotransformacin que sufre tanto los alcoholes como los glicoles estn mediados por la enzima alcohol deshidrogenasa cuya funcin es llevada cabo a nivel heptico. o El anlisis comparativo toxicodinmico, muestra que el principal efecto de estos txicos sobre el organismo es el desarrollo de un cuadro de acidosis metablica. o Con el fin de proveer un tratamiento adecuado al paciente intoxicado, se hace uso de mtodos de determinacin ya cualitativos ya cuantitativos los cuales buscan identificar al toxico promotor de daos a la salud. o La cromatografa de gases es la prueba confirmatoria para la deteccin de metanol e isopropanol. o El mtodo preferido para la determinacin de etilenglicol es la CG-FID. o Una plataforma de anlisis qumico para la deteccin de etilenglicol muestra que los ensayos enzimticos rpidos son una buena alternativa para el diagnstico oportuno.

11

BIBLIOGRAFIA
1. J.R Lazerte Iradi. Intoxicaciones por alcoholes. 2. Organizacin Mundial de la Salud. Informe sobre la Situacin Mundial de la Seguridad Vial. 2010. 3. Dra. Estela Martin. Toxicologa Forense. Unidad IV. 2011. 4. Ramn Bataller Sifre. Toxicologa clnica. Universidad de Valencia. 2004. Pag.53, 58 y 60. 5. Sharon Lover,RN,PhD. Ethanol, Isopropanol, Methanol, and Ethylene Glycol Poisoning. Critical Care Nurse.Dec. 2000. Pag. 41. 6. Dr. Jose Alberto Rairez. Brecha anonica plasmtica. Arch.argent. pediatr. 2005. 7. Manual de instrucciones Breathscan Test. 2011. 8. Ishwarlal, J. Laboratory Diagnosis in ethylene glycol Poisoning. Am J Clin Pathol 2011. 136 165 166. 9. Manual de Toxicologa Bsica. E. Mencias Rodriguez y L. Mayerto Franco. 2000. Ediciones Daz de Santos S.A. Espaa- Madrid. 10. Gater. Detection Methods for Drug and Alcohol Testing. Corrections forum Sep Oct 2011. 11. Prueba rpida de alcohol por saliva. ABS Costa Rica. Numero de catalogo: 07RD 7124. 12. Buger, Alcohol Breath testing. British Medical Journal. Dec 14 2002; 325, 7377. 13. Gua de Trabajos Prcticos de Toxicologa y Qumica Legal Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqumica (1998). 14. Ricardo Rozo Uribe. Toxicologa. Prcticas & procedimientos. Guas de prctica clnica. Vol. 2.Hospital Universitario San Ignacio.Bogot-Colombia.2004. pag.29.

12