PRACTICA N 12 EXTRACION DEL ADN

INTRODUCCIN
La extraccin del ADN en las clulas vegetales, en las clulas de lenteja (Lens esculenta) requiere una serie de etapas bsicas: en primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lpidos de las membranas celulares y las rompen. La sal evita la unin de las protenas al ADN. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol etlico de 95% (isopropilico), refrigerado. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.

OBJETIVOS
Extraer el ADN de muestras vegetales Determinar la presencia del cido desoxirribonucleico (ADN) en algunas especies vegetales. Observar en forma directa las fibras del ADN que componen las clulas vegetales.

MATERIALES
MATERIAL PROPORCIONADO POR EL LABORATORIO DE LA UFPS Microscopio Estereoscopio MATERIAL QUE DEBE TRAER EL ESTUDIANTE Hojas de espinaca (Spinacie oleracea), en su defecto semillas trigo (Triticum aestivum), frijol (Phaseolus vulgaris) o lentejas (Lens esculenta). Sal (10 gramos) Detergente lquido (50ml) Ablandador de carnes (jugo de papaya o de pia espeso);o solucin para lentes de contacto) Licuadora bolsa para colar caf Un palo de madera (tamao de chuzo) MATERIALES BSICOS

Bata

Cajas de petri Vasos precipitado 600ml Vasos precipitado 1000ml

Portaobjetos y cubreobjetos Guantes Tapabocas

Tubos de ensayo Gradilla y varilla de vidrio Pipeta de 10ml, mortero Alcohol etlico de (isopropilico), refrigerado. 95%

Gorro Goteros Toalla para limpiar Papel para lentes Papel absorbente Zapatos cerrados Ropa adecuada

Lupa Juego de agujas de diferentes tamaos Bistur Block blanco de tamao carta Lpiz o portaminas Gua de la practica Material bibliogrfico o de consulta.

PROCEDIMIENTO 1. Medir media taza de lentejas (Lens esculenta), (o una cantidad equivalente a 20gr aproximadamente); una pizca de sal y 200ml de agua. Todo esto se coloca en el vaso de la licuadora y se procesa durante 60 segundos.

Fotografa tomada con cmara canon 12,1 Mpx por Marly Paola y Aida luz.

2. Finalmente, la mezcla resultante se filtra o se cuela con el colador de tela, para eliminar cualquier partcula de gran tamao. Este procedimiento se realiza para obtener un jugo viscoso. Este proceso tambin se puede realizar manualmente con el mortero, si no se cuenta con una licuadora para realizar este paso.

3. A

la

mezcla

que

obtuviste agrgale 30 ml de

Fotografa tomada con cmara canon 12,1 Mpx por Marly Paola y Aida luz.

ablandador de carnes (jugo de pia o de lechosa); agrega 30 ml de detergente liquido y revuelva sin formar espuma. (si lo haces muy rpidamente NO LOGRAS VER NADA AL FINAL DE LA EXPERIENCIA).

Fotografa tomada con cmara canon 12,1 Mpx por Marly Paola y Aida luz.

4. Luego deja reposar la mezcla obtenida anteriormente por 10 minutos. Finalmente coloca la mezcla en 4 tubos de ensayo y aproximadamente 1/3 del tubo de la muestra.

Resultados obtenidos de la muestra vegetal. Fotografa tomada con cmara canon 12,1 Mpx por Marly Paola y Aida luz.

5. Inclina el tubo de la mezcla y vierte por las paredes del tubo muy lentamente el alcohol etlico al 95% refrigerado de modo que se forme una capa sobre la mezcla anterior de la lenteja. Por medio de un palillo tome la masa blancuzca sobrenadante y el ADN asciende hasta llegar al alcohol.

Fotografa tomada con cmara canon 12,1 Mpx por Marly Paola y Aida luz.

El ADN es una molcula muy larga y tiende agruparse, de ah la facilidad para retirarla. El agua con pizca de sal es una mezcla isotnica.

RESULTADOS
Observe las graficas para que las compare con los resultados, especifique y describa los detalles sealando las partes estructurales correspondientes.

Fibras de ADN

Figura 12. Observacin de las Fibras de ADN de color blanco en las lentejas (Lens esculenta) observadas al estereoscopio en el aumneto de 35 X. Fotografa tomada con cmara canon 12,1 Mpx por Marly Paola y Aida luz.

DISCUSION
1. explique la importancia que tiene la extraccin del ADN en los vegetales? 2. Por qu es importante agregar sal a la preparacin del agua y las lentejas en la licuadora? 3. explique que funcin cumple el jabn lquido en la preparacin de la muestra del ADN? 4. Con sus propias palabras defina que es el ADN

CONCLUSIONES
Registre sus propias conclusiones del trabajo desarrollado en su informe.

BIBLIOGRAFIA
Consulte la propuesta del programa en las bases tericas y en pginas Web

El ADN es la receta de la vida que se transmite de generacin en generacin. El gen es la unidad de la herencia y est compuesto de ADN. Si bien se saba que las caractersticas se podan transmitir de una generacin a otra, Darwin desconoca los mecanismos de la herencia. El ADN tiene ciertas propiedades por las que es importante en la evolucin: I) almacena informacin, II) es una molcula estable, por lo que no cambia (muta) con mucha frecuencia y III) de vez en cuando ocurren pequeos cambios en el ADN que dan lugar a la variacin necesaria para que se produzca la seleccin natural.

En las plantas, los animales y los hongos, el ADN se encuentra mayormente en el ncleo de las clulas. Para extraer el ADN de las clulas vegetales hay que romper la fuerte pared celular exterior y emulsionar los lpidos de la membrana plasmtica y la envoltura nuclear. El detergente rompe las uniones entre lpidos. Los iones de sodio de la sal neutralizan el ADN, que sale de la clula.

El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN puro ya que, entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se realiza aadiendo enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

Para realizar una extraccin pura ocurrir que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y protenas. ste acta de la misma manera en el protocolo de extraccin de ADN, separando las grasas (lpidos) y las protenas que constituyen las membranas que rodean la clula y el ncleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la clula

El calor suaviza los fosfolpidos (grasas) en las membranas que rodean la clula y el ncleo. Tambin desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si estn presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeos que lo hara imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, ste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60 Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80 Celsius.

Los zumos de pia y papaya contienen un enzima, la papana, la solucin ablandadora de carne tambin acta como una enzima, que contribuye a eliminar las protenas que puedan contaminar el ADN. La solucin ablandadora de carne acta como una enzima. El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solucin, donde puede ser visto. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.

Los cientficos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran en las clulas, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).

El material que se necesita para ello es fcil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno de los ingredientes tiene su propia funcin. La solucin de sal y jabn sirve para romper la membrana plasmtica y nuclear e incluso la pared celular. El lquido de lentejas elimina las protenas que degradan el ADN. El alcohol etlico sirve para precipitar el ADN.

El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En l estn escritas las instrucciones que deben seguir las clulas para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las clulas que forman un individuo contienen una copia idntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso hay clulas con diferentes formas y funciones.

El ADN est presente en los indicios biolgicos como sangre, semen, saliva, hueso, pelo, etc.

El Salting- out es uno de los mtodos de extraccin de ADN ms utilizados por su fcil implementacin, baja toxicidad de los reactivos y permite la visualizacin del ADN.

ACTIVIDAD PEDGOGICA
Estas actividades son propuestas para mejorar el aprendizaje de cada educando, en donde cada actividad pretende reforzar las prcticas de cada laboratorio visto. Estas actividades contienen la pedagoga dialogico.critica, constructivista y conductual ya que cada estudiante es autnomo de realizar las actividades individualmente o en grupo para optimizar sus conocimientos y estos sean aplicables a solucionar problemas mediante el criterio cientfico. 1. Por qu es importante la sal en el proceso de la extraccin de ADN?

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______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ 3. Con sus propias palabras diga la importancia que tiene la extraccin del ADN.

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5. Realizar el apareamiento de la columna (A) con la columna (B). COLUMNA A Se forman entre las bases nitrogenadas de adenia, guanina, citosina y timina por enlaces covalentes de tipo fosfodiester. COLUMNA B A, G, C, T

Es la abreviatura del cido desoxirribonucleico. Constituye el material gentico de los organismos. Y es una molcula que se encuentra en todas las clulas de los seres vivos y se encarga de codificar todo lo que nosotros formamos o somos, desde nuestro color del pelo hasta las protenas que tenemos en nuestra sangre.

POLINUCLETIDOS

Es uno de los mtodos de extraccin de ADN ms utilizados por su fcil implementacin, baja toxicidad de los reactivos y permite la visualizacin del ADN.

SAL Y JABON

Son bases nitrogenadas que estn formadas por -D desoxirribosa y un ion fosfato. Se utiliza para romper la membrana plasmtica y nuclear e incluso la pared celular.

SALTING-OUT

ADN

PAGINAS WEB EXTRACCIN DE ADN. (En lnea). Disponible en internet en: http://www.educa.madrid.org/web/ies.antoniogala.mostoles/dep_bio_archivos/EXTRACCION_DE_ ADN.pdf

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