Observaciones y Resultados Factores que alteran la solubilidad proteica Muestr a L1 L2 L3 L4 H1 H2 H3 H4 Observaciones Se aclaro; transparente Precipitado blanquecino; 2 fases superior

transparente No hubo cambios Se enturbio Coloracin blanquecina 2 fases; superior grumos blancos, inferior transparente Tono durazno con slidos en el medio Tonalidad blanca; slidos

Cuantificacin de Protenas No. Tubo 1 C (mg) 0 Absorbanci 0 a 2 0.5 0.005 3 1.5 0.009 4 2.5 0.031 5 5 0.090 6 7.5 0.072 7 8 2.9* 0.034

* Obtenida por interpolcacin

Cuantificacin de Protenas Concentracin (mg) 0 0.5 1.5 2.5 5 7.5 Absorbanci a 0 0.005 0.009 0.031 0.09 0.71

Cuantificacin de Protenas (Regresin Lineal) Concentracin (mg) Absorbancia 0 -0.001 0.5 0.004 1.5 0.016 2.5 0.028 5 0.053 7.5 0.088

Clculos para determinar la concentracin de protenas Con 0.1 ml de Albumina

Con 0.3 ml de Albumina

Con 0.5 ml de Albumina

Con 1 ml de Albumina

Con 1.5 ml de Albumina

La concentracin del tubo 8 se obtuvo interpolando en la grafica de regresin lineal. Anlisis de Resultados Factores que alteran la solubilidad proteica Los factores que pueden afectar la solubilidad de una protena son la fuerza inica del medio (concentracin de sales), el pH, la temperatura y la constante dielctrica del solvente (polaridad). Cuando hay un cambio de cualquiera de estos factores, la protena responde con una intensidad proporcional al cambio, esto es, que puede afectar la estructura proteica de una manera superficial o lo puede llegar a hacer tan intensamente que provoca una desnaturalizacin irreversible. En la prctica se aadi tanto a la muestra de huevo como a la muestra de leche los siguientes reactivos que cambiaron la solubilidad proteica dando lugar a la precipitacin de protenas. HCl 2%

Los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero adems de afectar a la envoltura acuosa de las protenas tambin afectan a la carga elctrica de los grupos cidos y bsicos de las cadenas laterales de los aminocidos. Esta alteracin de la carga superficial de las protenas elimina las interacciones electrostticas que estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitacin. La solubilidad de una protena es mnima en su punto isoelctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsin electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados. el sobrenadante y la albumina; por eso es que en ambos casos se observa un pequeo precipitado en ambos tubos. Acetona La adicin de disolventes orgnicos como el etanol o la acetona, disminuye la permeabilidad de cualquier medio acuoso. Aumentan asi las fuerzas electrostaticas intra e intermoleculares, repulsivas y atractivas. Las interacciones intramoleculares electrostaticas repulsivas promueven el desplegamiento de la molecula proteica. En el estado desplegado la permeabilidad favorece la formacion de puentes de hidrogeno intermoleculares entre los grupos pptidos expuestos y las interacciones electrostaticas intermoleculares entre grupos con carga de signo opuesto. estas interacciones polares intermoleculares conducen a la precipitacion de la proteina en los disolventes orgnicos. Es por ello que al adicionar acetona a las 2 muestras se presentan precipitados ms pesados y ms evidentes. (NH4)2NO4 Sulfato de amonio La precipitacin salina de las protenas es una tcnica en donde se logra la precipitacin de una fraccin de protenas mediante el aumento de la fuerza inica del medio. Grandes cantidades de una sal agregada a una solucin de protenas, disminuye la interaccin protena- H2O porque quita la capa de solvatacin, predominando la interaccin protena-protena y generando la precipitacin de las mismas. La concentracin salina a la que se produce la precipitacin no es igual para todas las protenas, lo que permite usar sta propiedad para la separacin y purificacin de protenas particulares a partir de mezclas complejas. Comnmente se usa sulfato de amonio (NH4)2SO4 para tal fin, a causa de su gran solubilidad (760 g de sulfato de amonio/1000 ml. de agua a una temperatura de 20C) y porque el in sulfato divalente permite alcanzar altas fuerzas inicas. La adicin gradual de sta sal permite el fraccionamiento de una mezcla de protenas, las cuales son precipitadas pero no desnaturalizadas. Aumento de temperatura

Cuando la temperatura es elevada aumenta la energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las protenas, y se desnaturalizan. Asmismo, un aumento de la temperatura destruye las interacciones dbiles y desorganiza la estructura de la protena, de forma que el interior hidrofbico interacciona con el medio acuoso y se produce la agregacin y precipitacin de la protena desnaturalizada. Cuantificacin de Protenas Para poder conocer la concentracin de protenas de la solucin problema se realizo una interpolacin. Para esto primero se grafico los resultados obtenidos. Se observo que la grfica no era recta y se procedi a sacar una regresin lineal para reducir el error. Una vez realizada la regresin lineal la grafica ya era muy similar a una recta y ah se realizo la interpolacin. La cual nos permiti determinar la cantidad de protenas en la solucin problema, la cual era de 2.9 mg. En el tubo 7 en el que se analizo el sobrenadante de la leche que son lactoalbuminas y lactoglobulinas, son sensibles al calor. Cuando se calentaron en el bao de agua sufrieron una alteracin en su estructura ya que en esta parte se desnaturalizan por calor. Lo cual afecto su lectura de absorbancia en el espectrofotmetro y no se pudo medir su absorbancia con exactitud. Conclusiones Mediante esta experimentacin se logro ver cmo funcionan las pruebas de identificacin de protenas, principalmente la de Biuret. Tambin se aprendi como determinar la cantidad de protenas mediante el uso de un espectrofotmetro y la interpolacin, en el caso del tubo problema. De iigual forma, se pudo comprobar como los factores que alteran la solubilidad proteica, afectan a una mezcla que contenga a estas biomoleculas, haciendo que estas se desnaturalicen y pierdan su estructura nativa, haciendo que la solubilidad baje y por ende aparezcan como precipitados en la solucion.