Digestibilidade In Situ Nos sistemas usuais de produo, os ruminantes obtm a maioria dos nutrientes a partir de volumosos, porm o nvel

de produo desejado nem sempre conseguido. Da a necessidade de melhor entendimento dos mecanismos que governam a digesto ruminal dos nutrientes consumidos. A avaliao da alimentao para ruminantes, baseada apenas na quantidade de nutrientes fornecidos, tem sido reconhecida por muito tempo como insuficiente, buscando-se novas metodologias para avaliaes especficas da utilizao dos nutrientes da dieta pelos animais. Assim, trabalhando a proporo com que nutrientes especficos tornam-se disponveis aos microorganismos ruminais e a quantidade que escapa da fermentao ruminal tem elucidado o efeito da performance animal. Para estabelecer as quantidades e relaes de nutrientes necessrios para um timo desenvolvimento microbiano e resposta animal, deve-se em primeiro lugar predizer adequadamente a medida com que os nutrientes de vrias fontes de alimentos, tornam-se disponveis no rmen (NOCEK, 1988). O conhecimento de como ocorre degradao dos alimentos no ambiente ruminal de extrema importncia em estudos de avaliao de alimentos para ruminantes. Alguns pases disponibilizam tabelas com parmetros de degradao ruminal de vrios alimentos, o que facilita o uso dos mesmos na alimentao animal. No Brasil, alguns trabalhos desenvolvidos esto voltados ao estudo desses parmetros, pois devido s condies edafoclimticas, das diferentes regies, principalmente no uso de forrageiras, muitas informaes no esto disponveis. Rossi Jnior et al. (1997) destacaram a necessidade de uma avaliao mais precisa do valor nutritivo dos alimentos, concentrados e volumosos, devido variao na composio qumica e diversificao de mtodos de anlises das fraes dos alimentos para a determinao de alguns parmetros ruminais. A primeira limitao da fermentao ruminal a quantidade de nitrognio disponvel no rgo, sendo a concentrao tima aquela que proporciona mxima produo de protena microbiana por unidade de substrato fermentado ou mxima taxa de fermentao (LENG, 1990). Em dietas com predomnio de forragens o pH do fludo ruminal situa-se entre 6,2 e 7,0, enquanto dietas baseadas em concentrados resultam em valores de 5,5 a 6,5, sendo a digesto da celulose inibida quando o pH atinge valores inferiores a 6,0, o que pode prejudicar a digestibilidade da dieta.

Tendo em vista a grande importncia do entendimento da dinmica ruminal sobre o processo digestivo dos ruminantes, de grande importncia determinar as taxas de passagens das fraes lquida e slida, e o pH ruminal. As taxas de passagem dos alimentos so marcadas pela fibra e pela protena. As variaes das taxas de passagem observadas so reflexos das caractersticas das fibras, sendo a densidade volumtrica e a gravidade especfica determinantes para o comportamento de cada material (MINSON E TUDOR, 1982; WELCH, 1986). Os tempos mdios de reteno ruminal (TMRR) para as pastagens so marcados tambm pela fibra e pela protena. A menor permanncia no rmen pode ter resultado em menor digestibilidade dessa forrageira, no estando essa relacionada ao menor aporte de nutrientes pelo animal, pois menores TMRR normalmente esto relacionados a maiores consumos de alimento (FORBES, 1995). Alm disso, a taxa de passagem para fora do rmen est ligada ao tipo da dieta, ao nvel de ingesto e as formas das partculas (ALLEN, 2000; OWENS E GOETSCH, 1988). Barbi (1991) sugeriu que a taxa de passagem ruminal para forrageiras estaria em torno de 4,16% por hora. O ARC (1984) considera trs valores mdios para taxa de passagem, 0,02 para mantena, 0,05 para ganho de peso e 0,08 para produo de leite acima de 15 kg. A fase lquida avalia o volume do lquido ruminal, a taxa de diluio, o tempo de reciclagem, a taxa de reciclagem e a taxa de fluxo. Essas diferenas esto ligadas s peculiaridades dos volumosos oferecidos, gramneas frescas e gramneas fenadas, e ao nvel de consumo evidenciando a grande influncia do alimento e da fase fisiolgica do animal no enchimento ruminal. A relao entre os constituintes da parede celular e a digestibilidade de forragens um assunto amplamente abordado pela comunidade cientfica visando nutrio de ruminantes. O interesse em se determinar a digestibilidade de um alimento volumoso ocorre devido relao positiva existente entre digestibilidade destes alimentos e seu consumo, como foi recentemente demonstrado por STEEN et al. (1998). O conhecimento atual dos padres cinticos dos nutrientes no rmen, de acordo com Mertens (1993), se deu em funo do desdobramento conceitual da celulose, no incio da dcada de 70. A quantidade de alimento que desaparece do rmen resultado direto da competio entre as taxas de degradao e de passagem (VAN SOEST, 1994). A manipulao dessas taxas pode culminar em maior ou menor escape de determinado nutriente e na maximizao do crescimento

microbiano, o que resulta em diferentes formas de utilizao de energia e do nitrognio contidos na dieta (RUSSELL et al., 1992). As tcnicas de avaliao dos parmetros cinticos da degradao ruminal dos alimentos compreendem estudos sobre o desaparecimento da massa de amostra incubada no ecossistema ruminal permitindo conhecer a adequao nitrogenada no rmen e nos intestinos. Tcnica da Cintica Ruminal Baseia-se no desaparecimento da amostra de alimento acondicionado em sacos de nilon ou outro material sinttico e incubados no rmen por diferentes perodos de tempo. A tcnica do saco de nilon suspenso no rmen para estimar a degradabilidade de determinado alimento, por intermdio do desaparecimento do mesmo aps diferentes tempos de incubao no rmen, apresenta-se como alternativa vivel, principalmente em funo de sua simplicidade e economicidade (RSKOV e McDONALD, 1979). A tcnica permite o contato do alimento teste com o ambiente ruminal, embora o alimento no esteja sujeito a todos os eventos digestivos, como mastigao, ruminao e passagem (NOCEK, 1988). uma tcnica amplamente utilizada em estudos do desaparecimento da frao nitrogenada da amostra, que fornecem informaes na elaborao de sistemas para exigncias nutricionais. A utilizao dessa tcnica expe caractersticas inerentes a determinado alimento e seu comportamento durante o processo digestivo. Os sistemas mais modernos de dietas para ruminantes levam em considerao a cintica da degradao das diferentes fraes dos alimentos, particularmente da protena e dos carboidratos no estruturais, alm de permitir o potencial de crescimento microbiano a partir da frao fermentvel (TONANI et al., 2001). No Brasil, vem sendo utilizada com sucesso para determinao da degradabilidade ruminal da matria seca e carboidratos (BERCHIELLI et al., 2006). O conhecimento da degradabilidade ruminal das diferentes fraes dos alimentos e, especialmente, da protena de grande importncia (TONANI et al., 2001). Permite identificar fatores que afetam o consumo voluntrio de forragens, como o grau de maturidade, a relao caule-folha e a forma de processamento (LADEIRA et al., 2001). A degradao ruminal dos alimentos fundamental para se

avaliar a qualidade do nutriente (MOREIRA et al., 2003) e a quantidade de nutrientes disponvel para os microrganismos no rmen que chega ao intestino (BARBOSA et al., 1998). Como os microrganismos do rmen degradam as fontes proteicas, produzindo nitrognio amoniacal (QUEIROZ et al., 1998), a tcnica in situ tem sido adotada como metodologia padro para caracterizao da degradabilidade ruminal do nitrognio, por fornecer melhores comparaes com os resultados in vivo (MOLINA et al., 2002). Metodologia da tcnica O mtodo ou tcnica in situ utiliza sacos de nilon com porosidade e dimenses conhecidas, introduzidas no rmen atravs de fstula ruminal. A remoo dos sacos feita ao longo do tempo de incubao, determinando-se o desaparecimento da matria seca, fibra em detergente neutro e protena bruta em funo do tempo. Consiste em identificar os sacos de nilon com tinta aprova dgua (Figura 1), secar os sacos em estufa a 60C por 12hs colocar em dessecador por 0,5h e pesar (tara); e colocar 3 a 5g de amostras em cada saco de nilon (15 x 8 cm), selar ou amarrar o mesmo, secar em estufa a 60C por 24hs, colocar em dessecador por 0,5h, pesar (tara + matria seca) e, por diferena obter a matria seca da amostra. As amostras so colocadas nos sacos de nilon, em quantidades aproximadas de 1g de MS por saco, amarradas com uma corrente (Figura 3) e incubados na parte ventral do rmen de cada animal fistulado (Figura 2, e 4) nos tempos de: 0, 6, 48, 96 e 144 horas. Retira cada saco no tempo determinado, ou introduz cada um em um determinado tempo e retira todos de uma s vez. Aps a retirada do rmen, os sacos devem ser colocados de molho em gua com agitao e troca de gua frequente at clarear. Cumprida esta fase, seca em estufa a 60C por 24hs, coloca no dessecador por 0,5h e pesa (tara + resduo). Por diferena obtm o peso seco do resduo. Os sacos referentes ao tempo zero (utilizados para se determinar a frao prontamente solvel) sero lavados em gua corrente e posteriormente recebero os mesmos procedimentos destinados aos demais tempos. A digestibilidade da matria seca determinada aps 24h de fermentao. Na determinao da matria orgnica determina-se e desconta as cinzas do substrato e do resduo. Digestibilidade da matria seca e dada pela frmula:

DMS= gMS substrato gMS residual x 100 gMS substrato Fig. 1 - Amostras de forragem identificadas Fig. 2- Caprino Moxot fistulado

Fig. 3- Sacos presos em correntes prontos para serem colocados no rmen.

Fig. 4- Colocando os sacos das amostras do rmen.

Os resduos remanescentes nos sacos sero analisados quanto aos teores de fibra em detergente neutro (VAN SOEST; ROBERTSON; LEWIS, 1991), matria seca e protena bruta. Os procedimentos para a determinao da degradao da FDN, PB, e MS sero obtidos por diferena de peso encontrado para cada componente entre as pesagens, antes e aps a incubao ruminal e expressos em porcentagem. Os dados obtidos nos diferentes tempos de incubao (varivel independente) para MS e PB sero ajustados para uma regresso no linear pelo mtodo de Gauss-Newton (NETER; WASSERMAN; KUTNER, 1985), contido no pacote computacional SAEG Sistema de Anlises Estatsticas e Genticas, conforme a equao proposta por Orskov e McDonald (1979):

Y = a + b (1 - e-c t), onde:

Y = degradao acumulada do componente nutritivo analisado, aps um tempo t; a = intercepto da curva de degradao quando t igual a 0, que corresponde frao solvel em gua do componente nutritivo analisado; b = o potencial de degradao da frao insolvel em gua do componente nutritivo analisado; a + b = degradao potencial do componente nutritivo analisado quando o tempo no um fator limitante; c = taxa de degradao por ao fermentativa de b; t = tempo de incubao. Para o estudo da cintica de degradao da FDN, utiliza-se o modelo assinttico exponencial decrescente de primeira ordem proposto por Mertens (1993):

Y = b x exp (-c x t) + I
Em que: Y = o resduo no tempo t; b = a frao potencialmente degradvel;

c = a taxa de degradao; t = tempo de incubao; I = a frao no degradvel. A determinao da frao no degradada (I) feita por diferena (100-(a+ b)) e a taxa constante de degradao da frao c foi obtida pela regresso do logaritmo natural do resduo potencialmente degradvel. Para a descrio do comportamento cintico da digesto da FDN, PB e MS, no rmen utiliza-se o modelo exponencial de RSKOV e McDONALD (1979):

DP= a + b [1- e (-c x t)]

Neste modelo, DP representa a degradao potencial no tempo t; a a frao rapidamente solvel em gua; b frao insolvel em gua, mas potencialmente degradvel; c a taxa de degradao da frao b; e t o tempo de incubao em horas. A degradabilidade efetiva ou terica de MS, FDN e PB so calculadas pela equao:

DE= a + [(b x c) / (c+ k)]

Nesta equao, DE a degradabilidade efetiva a uma taxa k de passagem do alimento pelo rmen, e a, b e c tm o mesmo significado anterior. A taxa de determinao de passagem (k) feita pela infuso de 10g de xido de cromo (Cr2O3) em dose nica no rmen e pela retirada de amostras nos intervalos de tempo 0, 3, 6, 9, 12, 24,36 e 48h. A taxa de passagem obtida pela frmula:

Y= Y0 x e-kpt
Em que Y = concentrao do indicador no tempo t; Y0= Concentrao estimada do indicador no tempo zero; Kpt= a taxa de passagem no tempo.

e = base do logaritmo neperiano (2,714);

Vantagens da tcnica Propicia uma estimativa rpida e simples da degradao dos nutrientes no rmen; Permite acompanhamento de degradao ao longo tempo (Mehrez e Orskov, 1977); O processo ocorre em condies reais no rmen; Determina o efeito da adio de gros e concentrados sobre a ao celuloltica do rmen; Determina o efeito dos nutrientes (minerais, gordura, etc) sobre a digestibilidade da celulose no rmen; Determina o efeito de nveis de amnia no rmen sobre a atuao de microrganismos; Estima o valor nutritivo dos alimentos (MS, MO, celulose, FDN, protena e energia); Determina a degradao, a taxa de digesto, a taxa de passagem e o consumo; Apresenta baixo custo e rapidez na estimativa do valor nutritivo. Desvantagens da tcnica Pode ocorrer contaminao do resduo da fermentao resultante da colonizao das partculas pelos microrganismos. Necessidade de um grande nmero de horrios de incubao ruminal entre 3 e 6 dependendo da alimentao avaliada. A manuteno de animais fistulados para o estudo dos eventos digestivos constitui altos custos e requer cuidados especiais com estes animais durante toda sua vida. No h segurana de que o material removido do saco seja absorvido no trato digestivo.

Cuidados importantes no uso da tcnica Observar porosidade dos sacos de nilon, considerar uma porosidade adequada que permita a entrada dos microrganismos no interior dos sacos para degradao do alimento, remoo das perdas de amostras no degradadas (Van Hellen e Ellis, 1977), o tamanho do poro mais recomendado 45-50 micrometros. Cuidados na determinao do nmero de horrios de incubao que depende do alimento avaliado. De acordo com Orskov et al (1988) para a maioria dos suplementos proticos os tempos 2, 6, 12, 24 e 36 horas so suficientes. No caso de fenos, palhas e outros materiais fibrosos geralmente so requeridos tempos de incubao at 144 horas. Os sacos no rmen devem ser livre movimentao permitindo a entrada de lquido ruminal, de forma que todas possam ser colonizadas e possibilitem as trocas de fluidos internos e externos ao saco. A quantidade de amostra a ser incubada deve ser suficiente para as determinaes laboratoriais. Nocek (1988) cita a relao 10 a 20 mg/cm para forragens e concentrados. O tamanho das partculas das amostras devem ser modas e representar o processo mastigatrio do animal. Para forragens secas e cereais 2,5 a 3 mm e para forragem verdes, midas e ensiladas 5 mm. Adaptao dos animais fistulados a dieta experimental, para que o ambiente ruminal esteja adaptado aos ingredientes a serem avaliados e os microrganismos colonizem e degradem de forma eficiente o tipo de material incubado.

Consideraes Finais O uso dessa tcnica de extrema importncia na avaliao nutritiva dos alimentos, pois quantifica a eficincia de aproveitamento do alimento no rmen, proporcionando assim uma viso qualitativa e funcional dos alimentos, permitindo alterar ingredientes utilizados nas raes, tornando assim uma alternativa na composio de raes de acordo com a exigncia nutricional de cada animal dependendo das suas caractersticas produtivas, maximizando a produtividade e minimizando os custos.

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