Lixiviacion Microbiana

BIOLIXIVIACION DE PIRITAS POR Acidithiobacillus ferrooxidans Y CEPAS NATIVAS MAYTA HERRERA LITHMAN HUAMAN CARBALLO DAVID CATAY CUNYAS
YAS OSVALDO LEON MORALES FREDDY ZACARIAS PAPUICO ALEXANDER
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RECURSOS NATURALES NO RENOVABLES
A MIS PADRES Y HERMANOS QUE SIEMPRE ME ESTAN APOYANDO EN MIS ESTUDIOS Y TRABAJOS QUE SE REALIZA EN LA UNIVERSIDAD.
ndice
1.Captulo1:Introduccin................................................................................... 1 1.1. Aspectos Generales. .......................................................................................................... 1 1.2. Antecedentes Bibliogrficos. ............................................................................................ 2 1.2.1. Disulfuro de hierro, Pirita. ......................................................................................... 2 1.2.2. Lixiviacin bacteriana. .............................................................................................. 3 1.2.3. Acidithiobacillus ferrooxidans y otros microorganismos de biolixiviacin. ............. 4 1.2.4. Metabolismo bacteriano. ........................................................................................... 5 1.2.5. Estudios de Biolixiviacin de Pirita. ......................................................................... 6 1.3. Descripcin del Proyecto. ............................................................................................... 11 1.4. Objetivos. ........................................................................................................................ 12 1.4.1. Objetivo General...................................................................................................... 12 1.4.2. Objetivos Especficos. ............................................................................................. 12 1.5. Alcances. ......................................................................................................................... 12 2. Captulo 2: Metodologa......................................................................................................... 13 2.1. Materiales. ....................................................................................................................... 13 2.2. Mtodos. ......................................................................................................................... 14 2.2.1. Biolixiviacin de pirita. ........................................................................................... 14 2.2.2. Adherencia bacteriana sobre pirita. ......................................................................... 15 2.2.3. Biolixiviacin de pirita sin adherencia bacteriana. .................................................. 15 2.2.4. Comparacin de la generacin de sulfato entre Acidithiobacillus ferrooxidans y cepas nativas. .......................................................................................................................... 16 2.2.5. Mtodos analticos. .................................................................................................. 16
3. Captulo 3: Resultados. .......................................................................................................... 19 3.1. Adherencia Bacteriana sobre Pirita. ................................................................................ 19 3.2. Capacidad oxidativa de azufre por Acidithiobacillus ferrooxidans y cepas nativas. ...... 21 3.3. Biolixiviacin de Pirita. .................................................................................................. 23 3.3.1. Biolixiviacin de pirita por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 2,4 g/l. ............................................................................................................. 23 3.3.2. Biolixiviacin de pirita por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 5 g/l. ................................................................................................................ 26 v 3.3.3. Biolixiviacin de pirita por cepas nativas provenientes de PLS Minera Escondida con concentracin de in frrico inicial: 1,8 [g/l]. ................................................................. 29 3.3.4. Comparacin y anlisis de experiencias de biolixiviacin. ..................................... 31 3.4. Biolixiviacin de pirita sin adherencia bacteriana por cepas nativas provenientes de PLS minera Escondida con concentracin de in frrico inicial: 1,8g/l. ........................................... 34 4. Captulo 4: Discusin. ............................................................................................................ 38 4.1. Biolixiviacin de pirita. .................................................................................................. 38 4.2. Biolixiviacin de pirita sin adherencia. .......................................................................... 39 4.3. Discusiones generales y recomendaciones. .................................................................... 40 5. Captulo 5: Conclusiones. ...................................................................................................... 42 6. Bibliografa............................................................................................................. ............... 43 7. Anexos. ............................................................................................................................... ... 45 A) Modelo del Ncleo sin Reaccionar. ................................................................................ 45 B) Tablas de datos: Biolixiviacin de Pirita. ....................................................................... 47
a. Por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 2,4 g/l. .... 47 b. Por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 5 g/l. ....... 52 c. Por cepas nativas provenientes de PLS Minera Escondida con concentracin de in frrico inicial: 1,8g/l. .............................................................................................................. 57 C) Tablas de datos: Adherencia Bacteriana. ........................................................................ 58 D) Tablas de datos: Comparacin en la generacin de sulfato entre Acidithiobacillus ferrooxidans y cepas nativas. ..................................................................................................... 59 E) Tablas de datos: Biolixiviacin de pirita sin adherencia bacteriana. .............................. 60 vi
ndice de Figuras.
Figura 1: i) Celda cbica centrada en las caras de la pirita, a=0,542[nm]. ii) Celda ortorrmbica de la marcasita, a=0,444[nm] b=0,542[nm] c=0,339. ..................................................................... 2 Figura 2: Esquema de los distintos tipos de lixiviacion de un sulfuro segn Tributsh (Ballester 2005). ............................................................................................................................... ............... 4 Figura 3: Mecanismo bacteriano que mejora la tasa de lixiviacin de pirita. (Crundwell, 2003). .. 7 Figura 4: Esquema del mecanismo de thiosulfato y polisulfuro en biolixiviacin de sulfuros metlicos. MS = sulfuro metlico; M2+ = in metlico; S2O3 2- = thiosulfato; Sn 2-= polisulfuro con largo de cadena (n); S8 = azufre elemental; Af, Lf, At= reacciones enzimticas por At. ferrooxidans, L. ferrooxidans, y/o A. thiooxidans (Sand, 2001). .................................................... 9 Figura 5: Estudio de granulometra de muestra de pirita. ............................................................. 13 Figura 6: Esquema de montaje de biolixiviacin de pirita sin adherencia, se grafica la presencia del tubo separador que evita el contacto de las bacterias con el mineral de pirita. ....................... 16 Figura 7: Concentracin de At. ferrooxidans en solucin a pH 1,6 con agitacin a 100rpm y 30C
de temperatura. .............................................................................................................................. 19 Figura 8: Concentracin de cepas nativas en solucin a pH 1,6 con agitacin a 100rpm y 30C de temperatura. ............................................................................................................................... ... 20 Figura 9: Porcentaje de adherencia bacteriana sobre pirita. .......................................................... 21 Figura 10: Variacin del pH en el tiempo para experimentos de oxidacin de azufre por At. ferrooxidans y cepas nativas a pH 2,3 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ............ 21 Figura 11: Variacin de la concentracin de in sulfato en el tiempo para experimentos de oxidacin de azufre por At. ferrooxidans y cepas nativas a pH 2,3 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ..................................................................................................................... 22 Figura 12: Variacin del potencial en el tiempo para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 2,4g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ............................................................................................................................... ... 23 Figura 13: Variacin del pH en el tiempo para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 2,4g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ............................................................................................................................... ....................... 24 Figura 14: Variacin de la concentracin de fierro total y in frrico para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 2,4g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. .................................................................................................. 24 Figura 15: Variacin de la concentracin de fierro total por mtodo de ofenantrolina y digestin por HCl para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 2,4g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ............................................ 25 Figura 16: Recuperacin de fierro para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 2,4g/l de
in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ........... 25 Figura 17: Variacin del potencial en el tiempo para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 5g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ............................................................................................................................... ... 26 vii Figura 18: Variacin del pH en el tiempo para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 5 g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. . 27 Figura 19: Variacin de la concentracin de fierro total y in frrico para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 5g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. .................................................................................................................. 27 Figura 20: Variacin de la concentracin de fierro total por mtodo de ofenantrolina y digestin por HCl para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 5g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ............................................ 28 Figura 21: Recuperacin de fierro para biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 5g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ........... 28 Figura 22: Variacin del potencial en el tiempo para biolixiviacin de pirita por cepas nativas con 1,8g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ............................................................................................................................... ....................... 29 Figura 23: Variacin del pH en el tiempo para biolixiviacin de pirita por cepas nativas con 1,8 g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. . 30 Figura 24: Variacin de la concentracin de fierro total por mtodo de ofenantrolina y digestin por HCl para biolixiviacin de pirita por cepas nativas con 1,8g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ........................................................... 30 Figura 25: Recuperacin de fierro para biolixiviacin de pirita por cepas nativas con 1,8g/l de in
frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ................. 31 Figura 26: Comparacin de los resultados en la recuperacin de fierro desde la pirita para los diferentes experimentos. ................................................................................................................ 31 Figura 27: Modelo de ncleo sin reaccionar sobre resultados de biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 2,4g/l de in frrico en solucin. ....................................................................... 32 Figura 28: Modelo de ncleo sin reaccionar sobre resultados de biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans con 5g/l de in frrico en solucin. .......................................................................... 32 Figura 29: Modelo de ncleo sin reaccionar sobre resultados de biolixiviacin de pirita por cepas nativas con 1,8g/l de in frrico en solucin. ................................................................................ 33 Figura 30: Variacin del potencial en el tiempo para biolixiviacin de pirita por cepas nativas sin adherencia con 1,8g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. .............................................................................................................................. 34 Figura 31: Variacin del pH en el tiempo para biolixiviacin de pirita por cepas nativas sin adherencia con 1,8g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. .............................................................................................................................. 35 Figura 32: Variacin del fierro total en solucin para biolixiviacin de pirita por cepas nativas sin adherencia con 1,8g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. .............................................................................................................................. 35 Figura 33: Recuperacin de fierro para biolixiviacin de pirita por cepas nativas sin adherencia con 1,8g/l de in frrico inicial en solucin a pH 1,6 con 100rpm de agitacin y 30C de temperatura. ............................................................................................................................... ... 36 Figura 34: Modelo de ncleo sin reaccionar sobre resultados de biolixiviacin de pirita sin
adherencia por cepas nativas con 1,8g/l de in frrico en solucin. ............................................. 37 viii Figura 35: Modelo de ncleo sin reaccionar sobre resultados de biolixiviacin de pirita por cepas nativas con 1,8g/l de in frrico en solucin. ................................................................................ 37 Figura 36: Esquema de proceso de lixiviacin en el tiempo segn modelo de ncleo sin reaccionar (Levenspiel). ................................................................................................................ 45
ndice de Tablas
Tabla 1: Algunas propiedades mecnicas y termodinmicas de la pirita y marcasita. .................... 2 Tabla 2: Resultados del modelo de ncleo sin reaccionar para los diferentes experimentos de biolixiviacin de pirita. .................................................................................................................. 33 Tabla 3: Resultados del modelo de ncleo sin reaccionar para lixiviacin por cepas nativas. ..... 36 Tabla 4: Ecuaciones conversin tiempo del modelo de ncleo sin reaccionar. ............................ 46 Tabla 5: Tiempos para conversin total segn modelo de ncleo sin reaccionar. ........................ 46 Tabla 6: Potenciales para biolixiviacin por At. ferrooxidans. y 2,4g/l, valores en milivolts....... 47 Tabla 7: pH para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 2,4g/l. ..................................................... 48 Tabla 8: Fe+2 para biolixiviacin por At. fox. y 2,4g/l, valores en ppm......................................... 49 Tabla 9. Fe total para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 2,4g/l, valores en ppm. ...................... 50 Tabla 10: Fe+3 para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 2,4g/l, valores en ppm. ....................... 51 Tabla 11: Fe tot por digestin con HCl y recuperacin para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 2,4g/l, valores en ppm ................................................................................................................... 51 Tabla 12: Potenciales para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 5g/l, valores en milivolts......... 52 Tabla 13: pH para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 5g/l. ...................................................... 53 Tabla 14: Fe+2 para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 5g/l, valores en ppm. .......................... 54 Tabla 15: Fe total para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 5g/l, valores en ppm. ....................... 55 Tabla 16: Fe+3 para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 5g/l, valores en ppm. .......................... 56
Tabla 17: Fetot por HCl y recuperacin para biolixiviacin por At. ferrooxidans y 5g/l, valores en ppm ............................................................................................................................... ................ 56 Tabla 18: Potenciales para biolixiviacin por cepas nativas, valores en milivolts........................ 57 Tabla 19: pH para biolixiviacin por cepas nativas. ..................................................................... 57 Tabla 20: Fetot para biolixiviacin por cepas nativas, valores en ppm. ......................................... 57 Tabla 21: Fetot por HCl y recuperacin para biolixiviacin por cepas nativas, valores en ppm. .. 58 Tabla 22: Adherencia de Acidithiobacillus ferrooxidans. ............................................................. 58 Tabla 23: Adherencia de cepas nativas.......................................................................................... 58 Tabla 24: pH para ambos experimentos. ....................................................................................... 59 Tabla 25: Concentracin de in sulfato para ambos experimentos, valores en ppm. ................... 59 Tabla 26: Promedios obtenidos para biolixiviacin sin adherencia por cepas nativas. ................. 60
INTRODUCCIN Biolixiviacin de piritas por Acidithiobacillus ferrooxidans y cepas nativas

El presente trabajo de ttulo tiene por objetivo el estudio de la biolixiviacin de pirita por un cultivo puro de Acidithiobacillus ferrooxidans y por un consorcio de cepas nativas provenientes de la solucin lixiviante de la pilas de biolixiviacin de Minera Escondida (PLS). El estudio se efectu con una muestra de pirita purificada y de fina granulometra proveniente de relaves de Minera Escondida, la cual fue lixiviada en reactores de frascos agitados. El porcentaje de disolucin del mineral se determin a partir del monitoreo del hierro disuelto desde el mineral, cuantificado como la suma del hierro en solucin ms el hierro precipitado como jarositas. Los resultados de conversin del mineral en el tiempo se analizaron segn el modelo del ncleo sin reaccionar. Se compar tambin la eficiencia de la adherencia a pirita y la capacidad de oxidar azufre de ambos tipos de microorganismos. Los resultados indicaron que la cintica de biolixiviacin de pirita con At. ferrooxidans en soluciones con 2,4g/l de
frrico se comporta de acuerdo a un control por difusin. El tiempo para alcanzar disolucin total del sulfuro, D, en estas condiciones es de 833 das. Al aumentar la concentracin de ion frrico a 5g/l la cintica de disolucin de la pirita con este microorganismo pasa a ser controlada por reaccin qumica y el valor de D se reduce a 141 das. Por otra parte la cintica de biolixiviacin de pirita con las cepas nativas en soluciones con 1,8g/l de frrico se comporta de acuerdo a un control por reaccin qumica y el valor de D en estas condiciones es de 122 das. Los experimentos de adherencia mostraron que el 100% de las cepas nativas se adhiere a pirita mientras que la adherencia mxima de At. ferrooxidans alcanza a solo un 30% de los microorganismos presentes. Por otra parte la capacidad oxidativa de azufre a sulfato en las cepas nativas se registr de forma inmediata en los experimento de oxidacin de azufre, mientras que para At. ferrooxidans la actividad se observ posterior a la semana de monitoreo. Los resultados indican que la velocidad de biolixiviacin de la pirita con los microorganismos nativos es mucho mayor que con la cepa pura de At. ferrooxidans. Este resultado parece estar determinado por la mayor capacidad de adherencia y de oxidacin de azufre de los microorganismos nativos, lo que posibilita una eficiente disolucin de subproductos pasivantes desde la superficie de la pirita. Sin embargo, esta capa tambin puede ser removida en presencia de At. ferrooxidans si se aumenta la concentracin de ion frrico a 5g/l. Finalmente, los resultados indicaron que la adherencia bacteriana en el caso de las cepas nativas favorece la disolucin de la pirita, alcanzando una recuperacin y velocidad de lixiviacin ms alta que en el caso sin adherencia.
Agradecimientos
En primer lugar le doy gracias a mi familia por creer en mi y apoyarme en todas mis decisiones. Agradezco a mi madre y padre por confiar en mi y en mis capacidades, y darle la oportunidad y la libertad a su conchito de convertirse en un hombre por sus propios medios. A mi hermana Denise por todo el cario que he recibido de su hermosa familia, y a mi hermana Catherine por mostrarme la fuerza que se necesita para lograr lo que uno quiere. Gracias a mi pequea angelita, Florencia, por transportarme con su alegra a esos momentos de infancia en que me bastaba con mi imaginacin. A Nonoy por ser mi compaera y amiga estos ltimos aos, gracias por soportarme y quererme como nadie nunca antes lo haba hecho. Agradezco a mis compaeros de toda la vida, aquellos que pese a la distancia siguen siendo mis mejores amigos: Claudio, Pashuco, Carlos y todos aquellos de ese ya lejano 4 medio B, Cocochi 2002. Gracias a Alejandra, Camila y Ricardo con quienes compart la enriquecedora experiencia de dirigir el CEIQBT. Por tu amistad e increble paciencia, gracias Marychanfli. Gracias por su compaa Marce, Panky, Vika y Cuchi-chan. A mis buenos amigos y futuros colegas, Igor y Ronpi. Por su buena onda y obligarme a jugar a la pelota, gracias Chicho, Jano, Sergio, Diego, Carlitos, Jaime y Daniel. A todos ustedes les deseo lo mejor en vuestras vidas. Agradezco tambin por esos buenos y entretenidos momentos que viv en la antigua y ya derrumbada salita, lo que me hace recordar a varios que ya portan su ttulo de InJenieros como aquellos que pronto nos seguirn.
Gracias Melanie por tu amistad. Muchas gracias a Emma y a las hermanitas Lazo por su apoyo y hacer ms entretenido el trabajo en el laboratorio. Deseo agradecer tambin el gran apoyo y los buenos consejos de mi jefe y profesor, Sr. Luis Amestica. Por ltimo, quisiera agradecer a mis profesores guas, Sr. Toms Vargas y Sra. Blanca Escobar, por su apoyo y ayuda en el desarrollo de esta memoria. S que hay muchos que se me quedan en el tintero, para todos ustedes mis ms sinceros agradecimientos. LOS AUTORES
CAPTULO 1: INTRODUCCIN.
1.1. ASPECTOS GENERALES.
La importancia econmica de la produccin de cobre en Chile impulsa el ptimo aprovechamiento de los recursos minerales explotados. El cobre se presenta fundamentalmente en dos formas: como minerales oxidados y como minerales sulfurados. Los primeros son fcilmente solubles por lo que son tratados por medio de lixiviacin acida, mientras que los minerales sulfurados, principalmente calcopirita (CuFeS2), calcosina (Cu2S) y covelina (CuS) en Chile, son insolubles incluso en cidos concentrados. Es en este contexto que la biolixiviacin o lixiviacin bacteriana se presenta como una opcin para recuperar metales de inters a travs de su solubilizacin bajo la accin directa o indirecta de microorganismos desde, por ejemplo, botaderos y pilas. Dependiendo de la composicin del mineral sulfurado, la biolixiviacin es una alternativa ventajosa con respecto a las tecnologas pirometalurgicas. Si bien la lixiviacin bacteriana es ms lenta que la pirometalurgia en cuanto a la velocidad de obtencin del metal, demanda menores inversiones de capital y menores costos de operacin. Adems se presenta como una tecnologa ms limpia que las practicadas comnmente, debido a que no se emite SO2 al ambiente en su periodo de operacin (Ballester 2005). Es as, como la bsqueda de las condiciones optimas de crecimiento y actividad de los microorganismos involucrados en estos procesos, es decir los parmetros que estimulan o inhiben su accin, se vuelve de vital importancia para la industria. Las mayores tasas de biolixiviacin de minerales sulfurados, dentro de ellos el disulfuro de hierro o pirita, se alcanzan a altas temperaturas por la accin de
microorganismos termfilos y termfilos moderados. Sin embargo, elevar la temperatura de una pila de lixiviacin por inyeccin de calor a travs de aire precalentado u otras alternativas, implica un costo adicional encareciendo el proceso. La disolucin de la pirita genera un calor de reaccin considerable que permitira elevar la temperatura en el interior de la pila permitiendo el desarrollo de microorganismos termfilos, facilitando posteriormente la biolixiviacin de la calcopirita y otros sulfuros de cobre. En este contexto, el presente trabajo pretende identificar las condiciones ptimas para la lixiviacin de la pirita debido al ataque biolgico por una cepa pura de Acidithiobacillus ferrooxidans y por un cultivo mixto de cepas nativas provenientes de Minera Escondida.
1.2. Antecedentes Bibliogrficos.

1.2.1. Disulfuro de hierro, Pirita. El disulfuro de hierro (FeS2) se puede encontrar en abundancia en yacimientos minerales. Morfolgicamente se distinguen dos tipos: la pirita de estructura cbica y la marcasita de estructura ortorrmbica. Esta diferencia les proporciona adems propiedades termodinmicas diferentes.
En particular la pirita tiene un 53,4% de azufre y un 46,4% de hierro y es comnmente conocida como oro falso por su brillo y color similar al metal noble. En los yacimientos se pueden encontrar otros minerales con el mismo contenido de hierro y azufre pero asociados a otros elementos, tales como la calcopirita (CuFeS2) y la arsenopirita (FeAsS2). (Lowson 1982).
1.2.2. Lixiviacin bacteriana. Los microorganismos presentes en los procesos de biolixiviacin tienen un rol cataltico en la oxidacin del ion ferroso (Fe+2) y del azufre elemental producidos durante la lixiviacin qumica, a ion frrico (Fe+3) e ion sulfato, respectivamente (Ecuacin 1 y 2). Los iones frricos corresponden a los agentes qumicos oxidantes que disolvern el sulfuro metlico (Ballester 2005; Watling 2006).
Los fundamentos bioqumicos de las reacciones de lixiviacin han sido ampliamente estudiados en los ltimos aos, habindose propuesto 2 mecanismos para estos procesos: a) El primero consiste en la llamada lixiviacin indirecta o mecanismo indirecto, en que la oxidacin del sulfuro metlico se realiza a travs de los iones frricos sin mediar contacto entre los microorganismos y la superficie o alguna reaccin enzimtica, combinada con la oxidacin biolgica de los iones ferrosos en solucin obtenidos de la reaccin anterior, como se muestra en la Ecuacin 1 (Figura 2) (Watling 2006). b) La lixiviacin por contacto o mecanismo por contacto supone que la mayora de las clulas se adhieren a la superficie de los minerales sulfurados mediante exo-poli-sacridos (EPS), lo que se traduce en la disolucin del mineral producto de los procesos electroqumicos que tienen lugar en la interfaz entre la pared del microorganismo y la superficie del sulfuro (Figura 1) (Watling 2006). Se aade a estos mecanismos la lixiviacin cooperativa, que no es ms que la presencia simultnea de los mecanismos anteriores, lo que podra traducirse en un suministro optimo de energa qumica a partir de una superficie limitada de sulfuros favoreciendo la supervivencia de las bacterias (Figura 1) (Ballester 2005).
1.2.3. Acidithiobacillus ferrooxidans y otros microorganismos de biolixiviacin. La mayor parte de los microorganismos involucrados en los procesos de biolixiviacin se caracterizan por crecer quimiolitotrficamente en ambientes cidos con pH menor a 3, con alta concentracin de iones metlicos y por ser capaces de utilizar el ion ferroso o los compuestos de azufre reducido como fuente de energa (Rawling, 1998; Watling, 2006). Sin embargo, tambin se pueden encontrar microorganismos heterotrficos cuyo trabajo consiste en eliminar del ambiente los compuestos orgnicos presentes producto de la muerte celular o de desechosmetablicos de los microorganismos quimiolittrofos (Brierley, 2000). Los microorganismos asociados a estos procesos se clasifican segn la temperatura a la que se desarrollan de forma ptima, encontrndose los mesfilos (temperaturas menores a 40C), termfilos moderados (temperaturas entre los 40C y 55C) e hipertermfilos (temperaturas entre los 55 y 85C) (Brierley, 2000). At. ferrooxidans es una bacteria del gnero Acidithiobacilli, mesfilas y se desarrollan en un rango de pH entre 1,8 y 2,0.Tiene habilidad para oxidar iones ferroso en soluciones de cido sulfrico obteniendo la energa necesaria para crecimiento y fijacin de CO2. At. ferrooxidans es til principalmente para aplicaciones en la lixiviacin de minerales debido a que esta bacteria puede oxidar sulfuros metlicos a sulfatos solubles en soluciones cidas. La oxidacin de materiales sulfurados es mediada por in frrico el cual en la reaccin es reducido qumicamente a
Fe2+ y reoxidado por At. ferrooxidans. De esta forma durante el proceso de biolixiviacin, At. ferrooxidans mantiene favorable la razn Fe3+ / Fe2+ el cul se refleja en el relativamente altopotencial redox en la solucin de lixiviacin (Grishin y Tuovinen, 1988). Dentro del grupo de las bacterias mesfilas se encuentran tambin At. thiooxidans, Leptospirillum ferrooxidans y Leptospirillum ferriphilium. En el rango de la termfilas moderadas aparecen el At. caldus, Leptospirillum thermoferrooxidans y las del gnero de Sulfobacillus. Finalmente, los principales microorganismos termfilos son las arqueas del gnero Sulfolobus, Acidianus, Metallosphaera y Sulfisphaera, entre otras. (Rohwerder, 2003). 1.2.4. Metabolismo bacteriano. La bacteria utiliza rutas metablicas que son comunes en organismos quimiolittrofos. Acidithiobacillus ferrooxidans presenta el ciclo de Calvin para fijacin de CO2 y rutas para fijacin de nitrgeno y fosfato. El ciclo de Calvin necesita de la formacin de ATP y NADPH. Ambas molculas energticas son obtenidas para este caso a travs de la oxidacin de in ferroso con oxgeno. Existen dos semi-reacciones que estn relacionadas para la oxidacin de in ferroso, estas son:
La bacteria no utiliza para su metabolismo al in ferroso completo, solo utiliza un electrn ya que este in no logra atravesar la pared celular, sin embargo, a travs de ella si pueden pasar protones, molculas de agua y oxgeno. Aqu comienza el transporte desde el exterior cruzando la pared celular, el transportador recibe el electrn que ha obtenido del in ferroso y se reduce, para luego oxidarse nuevamente y ceder el electrn al siguiente transportador de la pared celular. De esta manera el electrn va siendo transportado hasta llegar al citoplasma, donde encuentra el oxgeno que es el aceptor final del electrn. Este oxgeno se une a dos protones para formar una molcula de agua, con el consiguiente consumo de protones a consecuencia de esto (Yamanaka,1995). Dentro de los transportadores que participan en este proceso se encuentran: Rusticianina, citocromo c y citocromo a.Para el caso de la bacteria At. ferrooxidans, la oxidacin bacteriana de in ferroso ocurre a travs de la siguiente reaccin (Domic, 2001):
Se necesita oxidar 2 moles de in ferroso para formar un mol de molculas de adenosntrifosfato (ATP) tal como sigue:
1.2.5. Estudios de Biolixiviacin de Pirita. Al estudiar la biolixiviacin del disulfuro de hierro en sus dos morfologas, marcasita y pirita, se ha observado que la marcasita es menos recalcitrante tanto a la oxidacin biolgica como a la puramente qumica en comparacin con la pirita (Wang et al, 2007). Esta diferencia se atribuye en relacin a la estructura cristalina de cada uno de los minerales y de las propiedades termodinmicas como se mencion en el captulo 1.2.1. En los estudios de Wang la biolixiviacin de ambos minerales fue realizada a diferentes rangos de temperatura, 222C, 452C y 652C. En el primer intervalo se utilizaron microorganismos mesoflicos tales como Acidithiobacillus ferrooxidans, en segundo rango microorganismos termfilos moderados como Acidithiobacillus caldus y especies de Sulfabacillus. Finalmente, Sulfolobus metallicus fue utilizado para el experimento a 65C. La disolucin tanto de pirita como marcasita fue ampliamente acelerada al incrementar la temperatura desde los estudios a 22C hasta los de 65C. En el rango de los microorganismos mesfilos la lixiviacin de la marcasita alcanz un valor 5 veces ms alto que la pirita. Esta diferencia disminuy hasta 1,2 veces en la biolixiviacin por termfilos y termfilos moderados. En el caso de la marcasita la diferencia en la recuperacin de fierro entre los experimentos biticos y abiticos es bastante baja en las diferentes temperaturas estudiadas. Sin embargo, se aprecia una notoria diferencia en la lixiviacin de la pirita, ya que en presencia de bacterias la recuperacin de fierro es al menos 4 veces mayor que en ausencia de microorganismos para los diferentes rangos de temperatura. La lixiviacin de pirita ocurre con alta recuperacin en presencia y en ausencia de bacterias bajo diversas condiciones de estudio. Anlisis de la velocidad de reaccin como funcin de la concentracin de in frrico indican que el orden de la reaccin es el mismo en presencia y en ausencia de bacterias, el orden de reaccin es 0,5. Sin embargo, el orden de reaccin con respecto a la concentracin de protones (H+) es -0,5 en ausencia de bacterias, y -0,39 en presencia de actividad biolgica. Esto sugiere que la presencia de bacterias no cambia el mecanismo de lixiviacin de pirita, pero en cierta forma afecta el pH en la superficie del mineral (Fowler et al, 1999). En base a estos resultados, los investigadores establecen que la presencia de bacterias, eneste caso At. ferrooxidans, mejora la velocidad de lixiviacin de la pirita, pero no cambia el mecanismo de lixiviacin. Holmes et al (1999) demostr que en presencia de bacterias disminuye el potencial mixto, el cual se mantiene constante en ausencia de los microorganismos. Adems, los estudios de Fowler et al (1999) permitieron determinar el orden de reaccin en el proceso de lixiviacin de pirita, que son datos primordiales para establecer el mecanismo cintico en la
qumica. Adems, un detallado mecanismo de la lixiviacin de pirita en soluciones con sulfato frrico demostr que los resultados alcanzados en la lixiviacin se pueden explicar debido al incremento local del pH en la superficie del mineral como resultado de la actividad bacteriana. La bacteria consume protones (H+) en la oxidacin del in ferroso, y as se incrementa el pH. Si la velocidad de lixiviacin de pirita aumenta con el incremento del pH, entonces la presencia de bacterias favorece la disolucin del mineral. Esto significa que el incremento en la lixiviacin de pirita es resultado de la cooperacin entre los mecanismos de lixiviacin directo e indirecto, pues segn el mecanismo directo la clula bacteriana debe estar adherida al mineral, sin embargo, la lixiviacin es indirecta por la accin de in frrica sobre los sitios activos del mineral de pirita. El mecanismo se explica segn la Figura 3. (Crundwell 2003). Crundwell (2003) postula que la presencia de bacterias azufre oxidantes en la superficie del mineral permiten aumentar la velocidad de lixiviacin de minerales sulfurados. Sus estudios en base al modelo de ncleo sin reaccionar comprobaron que la capa de azufre elemental producto de la lixiviacin frrica en ausencia de bacterias opona resistencia al paso de los iones desde la solucin hacia el ncleo de la partcula, siendo as la difusin en las cenizas la etapa limitante del proceso. Al realizar los experimentos en presencia de bacteria la resistencia producida por la capa de azufre no fue detectada, siendo la etapa limitante la reaccin qumica segn el modelo. En conclusin la accin bacteriana permite remover la capa de azufre formada convirtindola en cido sulfricos segn la Ecuacin 2, disolviendo as la barrera difusional para el paso del in frrico hacia los sitios activos del mineral.
El mecanismo de lixiviacin cooperativa ha sido apoyado por los estudios de Rodrguez et al (2003), al proponer que mediante el contacto directo de la
bacteria sobre el mineral, existe consumo constante de iones ferrosos los cuales quedaron adsorbidos en la superficie de la pirita como productos de la reaccin. Al re-oxidar los iones ferroso a iones frricos mediante el mecanismo indirecto, la bacteria libera el sitio activo utilizado por un in ferroso permitiendo que el in frrico regenerado pueda atacar nuevamente este sitio activo. Como todas estas reacciones ocurren en la superficie del mineral los reactantes no tienen barreras difusionales para acercarse a los sitios activos de la pirita. Los estudios de Sand et al (2001) plantean la hiptesis de que el proceso de biolixiviacin de sulfuros metlicos es debido a la accin del in frrico y/o los protones en solucin, mediante el mecanismo indirecto previamente mencionado. La bacteria cumple la funcin de regenerar los agentes oxidantes y concentrarlos en la interface mineral/solucin o mineral/bacteria de tal forma de mejorar la tasa de degradacin del mineral. Sand establece que un factor determinante es la delgada capa de exopolimeros producida por las bacterias y que las circunda sobre la superficie del mineral. Es en esta capa donde el proceso qumico ocurre causando la disolucin del sulfuro metlico. Debido a la concentracin de los agentes oxidantes en la interface conlleva en la aceleracin del proceso de degradacin en presencia de los microorganismos de lixiviacin. Basado en los productos intermediarios del proceso de biolixiviacin, Sand propone dos mecanismos indirectos de disolucin segn el tipo de mineral lixiviado: a) Sulfuros como la pirita (FeS2), molibdenita (MoS2) y tungstenita (WS2) son degradados exclusivamente por el in frrico como agente oxidante va thiosulfato como el intermediario principal de la degradacin. Posteriormente, el thiosulfato es degradado en un proceso cclico hasta la generacin de sulfato, con produccin de azufre elemental como un producto lateral. Esto explica porque slo las bacterias hierro-oxidantes son capaces de degradar estos metales sulfurados. b) Para el caso de los sulfuros como galena (PbS), esfalerita (ZnS) y calcopirita (CuFeS2) son degradados por la accin conjunta de in frrico y protones. El intermediario principal de este mecanismo son los polisulfuros y azufre elemental (thiosulfato aparece slo como un producto lateral de la reaccin). Estos sulfuros metlicos son degradables por todas las bacterias capaces de oxidar azufre, sin embargo, la cintica de este proceso es dependiente de la concentracin de in frrico. Los mecanismos indirectos planteados por Sand se presentan en la figura 4.
Rodrguez et al (2003) establece que existe relacin directa entre la tasa de adherencia bacteriana sobre la superficie mineral y la velocidad de disolucin de la pirita. En presencia de altos niveles de adherencia en los inicios de sus estudios de biolixiviacin obtuvo mayores tasas de disolucin durante el proceso que en los casos en que la adherencia fue tarda. Tambin comprob el efecto inhibitorio de in frrico sobre el crecimiento bacteriano cuando se encuentra presente en altas concentraciones (>16 g/l). Esto ha permitido demostrar la disminucin de la velocidad de lixiviacin a medida que transcurre el tiempo, pues la acumulacin de in frrico inhibira la actividad bacteriana por lo que se comenzara a acumular los iones ferroso sobre la superficie del mineral como productos de la lixiviacin frrica, bloqueando as los sitios activos de la pirita y disminuyendo la disolucin de este mineral. La pirita se puede encontrar en la pilas de lixiviacin donde el mineral de inters es la calcopirita, con el fin de recuperar el cobre de estos minerales de baja ley. La calcopirita es recalcitrante a la accin bacteriana en el rango de las mesfilas, pero su disolucin aumenta considerablemente a altas temperaturas (60-70C) donde se favorece el desarrollo y la actividad de los microorganismos termfilos (Petersen y Dixon, 2006). 10 El calor liberado por la disolucin de la pirita y la calcopirita, se presenta en las ecuaciones 7 y 8 respectivamente (Petersen y Dixon, 2002):
De estas reacciones la lixiviacin de la pirita se considerablemente ms exotrmica que la disolucin de la calcopirita, por lo que la energa liberada por la lixiviacin de estos minerales permite calentar las pilas, incrementando la temperatura en el interior de estas. As, si en los inicios de una pila de lixiviacin se favorece la disolucin de la pirita, se lograr un aumento en la temperatura en el interior dando las condiciones ptimas para el desarrollo de los microorganismos termfilos y termfilos moderados, finalizando en una mayor tasa de disolucin de la calcopirita.
1.3. Descripcin del Proyecto.

El proyecto consiste en el estudio de la biolixiviacin de pirita mediada por la accin bacteriana de Acidithiobacillus ferrooxidans y cepas nativas provenientes de PLS de Minera Escondida, con el fin de establecer las condiciones ptimas de disolucin del mineral de pirita. Para esto, se realizarn estudios de la cintica de disolucin de la pirita en frascos agitados a 30C, para as identificar el nivel de recuperacin de fierro desde el mineral y determinar la velocidad de reaccin y etapa controlante segn el modelo de ncleo sin reaccionar. Con el fin de explicar el comportamiento de la recuperacin de fierro en funcin del tipo de inculo utilizado, se realizarn pruebas de adherencia bacteriana sobre la pirita y medicin del potencial generador de cido a partir de azufre.El mecanismo de biolixiviacin ha sido ampliamente estudiado, no obstante, no se ha logrado establecer con claridad el rol de la adherencia bacteriana sobre la superficie del mineral en relacin a la variacin de las tasas de disolucin de los minerales sulfurados. Se ha demostrado que el mecanismo predominante es el indirecto, en el cual los microorganismos de lixiviacin cumple la funcin de restablecer el in frrico consumido como agente oxidante del mineral. Sin embargo, el mecanismo indirecto puede realizarse en cooperacin con el mecanismo directo al estar los microorganismos adheridos sobre la superficie del mineral. Adems, se estudiar la importancia de la adherencia de los microorganismos a la superficie de la pirita en relacin con la conversin final del mineral, con el fin de establecer si el mecanismo indirecto en ausencia de adherencia bacteriana presenta los mismos niveles de recuperacin que en el caso en que los microorganismos se encuentran en contacto fsico con la pirita. Para esto, se montar un reactor tipo frasco agitado provisto de un tubo separador, que a travs de una membrana permite separar a los microorganismos del mineral dentro de una misma solucin. Este trabajo se centra en la necesidad de determinar las condiciones ptimas de lixiviacin de la pirita, con el fin de favorecer su disolucin en las pilas industriales, pues el calor emitido por su
degradacin permite elevar la temperatura en el interior de la pila permitiendo el desarrollo de los microorganismos termfilos moderados los cuales aceleran la recuperacin de cobre desde los minerales de baja ley.
1.4. Objetivos.
1.4.1. Objetivo General. En el presente trabajo se compara la biolixiviacin de pirita en presencia de una cepa pura de Acidithiobacillus ferrooxidans y la disolucin en presencia de un consorcio de cepas bacterianas nativas provenientes de una pila industrial. 1.4.2. Objetivos Especficos. Entre los objetivos especficos se encuentran: Determinar la velocidad y mecanismo de biolixiviacin de pirita en presencia de un cultivo puro de Acidithiobacillus ferrooxidans. Determinar la velocidad y mecanismo de biolixiviacin de pirita en presencia de un cultivo mixto de cepas nativas provenientes de una pila industrial. Determinar las condiciones ptimas de biolixiviacin de pirita en funcin del inculo utilizado y la concentracin inicial de in frrico en solucin. Determinar la influencia del grado de adherencia bacteriana sobre la velocidad y mecanismo de biolixiviacin de pirita.
1.5. Alcances.
Este proyecto pretende establecer alguna comparacin entre la biolixiviacin de un mineral de pirita por un cultivo puro de At. ferrooxidans y la accin coordinada de un cultivo mixto de microorganismos provenientes de un PLS industrial de Minera Escondida. Adems, se busca establecer el efecto de la concentracin inicial del potencial oxidante (in frrico) sobre conversin de la pirita. Para esto, se medir el aumento del fierro total presente en la solucin de biolixiviacin de pirita, y as determinar el porcentaje de conversin del mineral. Mediantes tcnicas qumicas se determinarn los parmetros fisicoqumicos de las soluciones de biolixiviacin, tales como pH, Eh y la concentracin de iones presentes Fe+2, Fe +3 y sulfato. Paralelamente se estudiar el efecto de la adherencia bacteriana sobre la superficie de la pirita, siempre y cuando se cumpla que el potencial electroqumico de la solucin sea similar para el caso con adherencia y el sin posibilidad de contacto entre el mineral y las bacterias.
. Captulo 2: Metodologa.
2.1. Materiales.
La muestra de pirita utilizada en todos los experimentos realizados proviene de relaves de Minera Escondida, operada por BHP Billiton en la II Regin de Antofagasta, Chile. La pirita fue purificada llegando a una muestra con un contenido de fierro del 43,8% p/p. La muestra de pirita en base a un estudio de granulometra realizado en mallas Tyler se identific que aproximadamente el 90% de la muestra se encuentra entre -140 / +450 mallas, lo que implica un dimetro de partcula entre 0,105 y 0,032[mm]. En la figura 5 se muestra la distribucin de tamao de la muestra.
En los experimentos de biolixiviacin de pirita se utilizaron dos cultivos de microorganismos distintos. El primero corresponde a un cultivo puro de Acidithiobacillus ferrooxidans cepa ATCC 19859 mantenidas en el laboratorio de Biohidrometalurgia de la Facultad de Ciencias Fsicas y Matemticas, Universidad de Chile. El segundo fue un cultivo de cepas nativas provenientes de una muestra de PLS (pregnant leach solution) de las pilas de lixiviacin de Minera Escondida, que segn los anlisis moleculares realizados por Demergasso et al (2005) existe presencia de microorganismos azufre y hierroxidantes tales como At. ferrooxidans, Leptospirillum ferrooxidans, Ferroplasma acidiphilum y especies del gnero Sulfurisphaera y Sulfobacillus. La preparacin de inculos y los diferentes ensayos de biolixiviacin de pirita fueron realizados sobre un medio basal MC pH 1,6 de composicin: 0,4 (NH4)2SO4, 0,4 MgSO4x7H2O, y 0,056 KH2PO4 [g/l], ajustado a pH 1,6 con cido sulfrico. Para la cuantificacin de fierro por colorimetra e in sulfato por turbidimetra se utiliz un equipo de espectrofotometra UV marca Agilen modelo 8453 equipado con una lmpara de tungsteno. El pH se midi en un equipo Corning modelo 340 equipado con un electrodo de pl/cloruro de plata (Ag/AgCl). Para la medicin del potencial electroqumico de la solucin se utiliz el equipo pH 211 de Hanna instruments, con un electrodo de referencia
de Ag/AgCl. El recuento de bacterias se realiz en un microscopio marca Nikon modelo Labophot, equipado con filtro para contraste de fase. El aumento de ocular fue de 10X mientras que el objetivo de 40X. El recuento se realiz sobre una cmara Petroff-Hausser de 0,02mm de profundidad.
2.2. Mtodos.
2.2.1. Biolixiviacin de pirita. Los experimentos de biolixiviacin de pirita se llevaron a cabo en matraces de 250 ml a 100rpm de agitacin aproximadamente a 30C de temperatura. La cantidad de pirita en solucin fue de 0,5% p/v. Al medio de cultivo MC pH 1,6 se le agreg sulfato frrico con el fin de ajustar la concentracin de in frrico inicial a 2.4, 5 y 1.8 g/l segn el caso. Posteriormente el medio fue esterilizado por filtracin. El inculo de At. ferrooxidans proviene de un cultivo realizado con 4,5ml de una solucin de sulfato ferroso al 33% (concentracin final 3g/l) esterilizada previamente por filtracin y 5ml de un cultivo anterior o de mantencin de la cepa bacteriana, todo en un volumen final de 100ml con medio MC pH 1,6 estril. El cultivo se llev a agitacin a 100rpm y temperatura de 30C por 48 horas. La concentracin de bacterias alcanzada transcurrido este tiempo es aproximadamente 2x108 bacterias/ml. Para el caso de las cepas nativas provenientes de Minera Escondida, se coloc en un matraz estril 20g de mineral granulado proveniente de la mina sin esterilizar con 200ml de PLS. Se llev a agitacin a 100rpm y temperatura de 30C por aproximadamente una semana o hasta que el potencial de la solucin alcanz los 600mV vs Ag/AgCl. Para recuperar las clulas se filtr el cultivo bajo vaco en un equipo de filtracin con una membrana Millipore de nitrocelulosa de 0,2um de dimetro. Una vez filtrado el total de la solucin, se lav la membrana con un pequeo volumen de medio MC pH 1,6 sin desmontar del equipo de filtracin. Finalmente la membrana utilizada se deposit en el medio de cultivo MC pH 1,6 con in frrico en solucin y se agit vigorosamente para traspasar la mayor cantidad de clulas desde la membrana hacia el medio. En un matraz de 250ml previamente esterilizado se colocaron 40ml de medio de cultivo MC pH 1,6 con in frrico en solucin, luego se agregaron 10ml del inculo correspondiente y finalmente 0,25g de pirita sin esterilizar. La concentracin inicial de microorganismos en solucin es de 2x108 bacterias/ml. El experimento fue programado para la toma de siete muestras en un transcurso de 600 horas. Cada muestra est conformada por un control estril y un ensayo de biolixiviacin en duplicado. En cada instante de medicin los matraces correspondientes a una muestra deban ser desmontados para cuantificacin de fierro total por el mtodo de digestin con cido clorhdrico (metodologa en captulo 2.2.5 (c)). Los parmetros medidos para monitorear la biolixiviacin de pirita fueron potencial de la solucin (E), pH y la concentracin de iones de fierro en solucin. 2.2.2. Adherencia bacteriana sobre pirita. En experimentos con un montaje similar a los de la biolixiviacin de pirita se registr la adherencia bacteriana sobre el mineral monitoreando en las primeras dos horas de duracin del experimento el recuento de la cantidad de microorganismos presentes en solucin por microscopa. En matraces de 100ml se colocaron 0,25g de pirita no estril en 50ml de medio de cultivo MC pH 1,6 en ausencia de in frrico inicial. Los matraces se llevaron a agitacin
de 100rpm y 30C de temperatura. La concentracin inicial de bacterias fue de 2,5x108 bacterias/ml para At. ferrooxidans y 4x107 bacterias/ml para las cepas nativas. La observacin al microscopio se realiza cargando 8l de la solucin de biolixiviacin en una cmara de recuento de Petroff-hausser. Contar cantidad clulas/ml en microscopio ptico equipado con contraste de fase. Los resultados corresponden slo a bacterias presentes en la solucin; no se puede determinar mediante esta metodologa si las bacterias que se cuentan son activas o no. 2.2.3. Biolixiviacin de pirita sin adherencia bacteriana. Los experimentos de biolixiviacin de pirita sin adherencia bacteriana se llevaron a cabo en matraces de boca ancha de 250 ml con agitacin a 100rpm y 30C de temperatura. La cantidad de pirita en solucin fue de 0,5% p/v. Al medio de cultivo MC pH 1,6 se le agreg sulfato frrico con el fin de ajustar la concentracin de in frrico inicial 1.8 g/l. Posteriormente el medio fue esterilizado por filtracin. La preparacin del inculo corresponde a la presentada para los experimentos de biolixiviacin de piritas (Captulo 2.2.1). En este experimento se prepar un tubo separador que no permite el contacto entre los microorganismos y la pirita en la misma solucin Para esto al tubo en su parte inferior se le coloc una membrana Millipore de policarbonato con dimetro de poro 0,2um procurando que no presentaran filtraciones. El esquema del montaje se presenta en la figura 6. En un matraz de 250ml de boca ancha previamente esterilizado se colocaron 80ml de medio de cultivo MC pH 1,6 con 1,8 g/l in frrico en solucin, luego se agreg la pirita sin esterilizar. Finalmente se coloc el tubo antes mencionado dentro del matraz y en su interior se agregaron los 20ml de inculo de cepas nativas con una concentracin inicial de 2x108 bacterias/ml. El experimento fue programado con una duracin de dos semanas (336 horas), cada muestra estaba conformada por un control estril, un ensayo de biolixiviacin (similar al Captulo 2.2.1) y un ensayo de biolixiviacin sin adherencia, todos en duplicado. Los parmetros medidos para monitorear la biolixiviacin de pirita fueron potencial de la solucin (E), pH y concentracin de iones de fierro en solucin.
2.2.4. Comparacin de la generacin de sulfato entre Acidithiobacillus ferrooxidans y cepas nativas En matraces estriles de 250ml se colocaron 3g de azufre previamente esterilizado en 100ml de medio basal MC pH 2,3 en ausencia de in frrico. Los experimentos fueron inoculados con At. ferrooxidans puro y por otro lado con las cepas nativas provenientes de Minera Escondida con una concentracin inicial de 2x108 bacterias/ml, ambos experimentos fueron realizados en duplicado con agitacin a 100rpm y 30C de temperatura. Los parmetros medidos para determinar el potencial oxidativo de azufre de ambos cultivos fueron el pH y el sulfato generado como producto de la accin bacteriana mediante turbidimetra por precipitacin de sales de bario. 2.2.5. Mtodos analticos. a. Cuantificacin de Fierro Total por Colorimetra con o-fenantrolina. Tomar 0,1ml de muestra diluida hasta una concentracin mxima de fierro total de 100ppm. Agregar 0,1ml de Hidroxilamina y agitar. Agregar 0,4ml de Fenantrolina y agitar. Agregar 1,9ml de agua destilada y agitar nuevamente. Leer absorbancia a 510nm contra blanco. b. Cuantificacin de in Ferroso en presencia de in Frrico por Colorimetra con ofenantrolina. Tomar 0,1ml de muestra diluida hasta una concentracin mxima de 100ppm de ferroso. Agregar 1ml de solucin NaF 0,5 M y agitar. Agregar 0,4ml de Fenantrolina y agitar. Agregar 1ml de agua destilada y agitar. Leer absorbancia a 510nm contra blanco. c. Digestin con cido Clorhdrico.
Con el fin de medir todo el fierro disuelto desde la pirita en cada ensayo de biolixiviacin se aplic este mtodo que permite disolver los precipitados de fierro como hidrxidos o jarositas (Lindstrm et al, 1992). Tratamiento de la solucin: Tomar 2ml de muestra de la solucin dentro del matraz. Llevar a 20ml de volumen final con HCl 5N. Incubar a 60C por 30 minutos con agitacin. Finalmente, medir fierro total segn el mtodo 2.2.5 (a). Tratamiento de la pirita: Filtrar todo el contenido del matraz de tal forma de recuperar la mxima cantidad de pirita en el papel filtro. Romper el papel filtro y recolectar la pirita en un recipiente limpio utilizando 50ml de HCl 5N para desprender el mineral del filtro. Incubar la pirita con el cido a 60C por minutos con agitacin. Recuperar la solucin cida filtrando. Aforar en matraz de 100ml con agua destilada. Finalmente, medir fierro total segn el mtodo 2.2.5 (a). La concentracin total de fierro en solucin se determina segn la siguiente ecuacin:
Donde V corresponde al volumen en [ml] del matraz en el cual se realiz el ensayo. d. Cuantificacin de Sulfato en Solucin por Turbidimetra. En un matraz de aforo de 50 ml colocar Xml de muestra, 5 ml de Glicerina 1:1 y 2,5ml de NaCl 240g/l. Aforar con agua desionizada y agitar. Utilizar esta solucin como blanco, midiendo absorbancia a 500nm. Agregar 0,15g de sal de cloruro de bario (BaCl2x2H2O). Agitar por 1 minuto y luego dejar reposar por 3 minutos. Leer absorbancia a 500nm inmediatamente. El volumen de muestra X corresponde a: 0,5 ml si la [SO42-] se encuentra entre 1 y 10g/l. 5 ml si la [SO4 2-] se encuentra entre 0,1 y 1g/l.
3. Captulo 3: Resultados.
3.1. Adherencia Bacteriana sobre Pirita.
La adherencia bacteriana sobre la superficie del mineral de pirita se control en experimentos de frascos agitados, para el caso de At. ferrooxidans los resultados de la variacin de la concentracin de clulas en la solucin se presentan en la figura 7, mientras que para las cepas nativas en la figura 8. La preparacin de los experimentos realiz segn el captulo 2.2.2.
Al contactar las cepas nativas con la muestra de pirita, se estima que al cabo de 90 minutos el 98,5% de las clulas se han adherido al mineral. La adherencia de At. Ferrooxidans sobre la muestra de pirita es considerablemente ms baja al compararla con las cepas nativas proveniente de minera Escondida. En este caso slo se logra un 33,3% de adherencia de las bacterias sobre el mineral, la cual ocurre durante el instante en que se contactan mineral e inculo, comparacin de adherencia bacteriana en figura 9. En tiempos posteriores (mayor a 15 minutos) la concentracin bacteriana en solucin no vara. El experimento se monitore luego de 24 horas, y la concentracin de las bacterias en solucin se mantuvo en 1,6x108 bact/ml.
Concluyendo as que la cepa de At. ferrooxidans utilizada en el experimento tiene una baja afinidad a crecer sobre la superficie de la pirita.
En el experimento de oxidacin de azufre por la accin bacteriana a una concentracin inicial de 2x108 bacterias/ml, se observ de forma inmediata la actividad de las cepas nativas provenientes de Minera Escondida pues el pH decrece desde el comienzo de la experiencia. En el caso de At. ferrooxidans el pH se mantuvo constante hasta la mitad del experimento, para finalmente decrecer a una tasa ms elevada que las cepas nativas, alcanzando el mismo valor final de pH igual a 1,2 unidades como se observa en la figura 10.
De forma similar, al cuantificar la generacin de sulfato en la solucin, el experimento con las cepas nativas presenta actividad de forma inmediata,
mientras que At. ferrooxidans se mantiene inactivo. Como se observa en la figura 11 en la mitad del experimento el cultivo puro activa su metabolismo oxidante de azufre para alcanzar una concentracin de sulfato final idntica al obtenido por las cepas nativas.
3.3. Biolixiviacin de Pirita.

3.3.1. Biolixiviacin de pirita por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 2,4 g/l. Como se observa en la figura 12, en los ensayos de biolixiviacin de pirita por At. ferrooxidans el potencial de la solucin decrece en las primeras horas de monitoreo, para luego mantenerse relativamente contante a lo largo del experimento. Sin embargo, la accin bacteriana se hace presente al existir una diferencia notoria en el potencial al comparar con el caso de los controles sin inculo. Cabe mencionar que el incremento observado al final de la experiencia en el caso de los controles se debe a que la muestra de pirita no fue esterilizada inicialmente, por ende durante el transcurso del experimento se pueden haber desarrollado microorganismos que se encontraran en estado de latencia sobre el mineral.
El comportamiento del pH se grafica en la figura 13 donde se observa que en ambos ensayos, biolixiviacin y control, tiende a decrecer en el tiempo, lo que indica una posible generacin de cido por la actividad bacteriana o tambin se puede atribuir a la precipitacin de hidrxidos frricos como jarositas.
El fierro total en solucin fue cuantificado por el mtodo colorimtrico con ofenantrolina. De la figura 14 se observa que el fierro total en ambos ensayos tiende a aumentar con el tiempo. Sin embargo, este mtodo utilizado no permite cuantificar los precipitados frricos que se puedan encontrar en solucin.
Con el fin de cuantificar todo el fierro que se encuentre dentro de reactor tipo frasco agitado se implement el mtodo de digestin con cido clorhdrico, mediante el cual se disuelven los precipitados de fierro que pueden estar en la solucin as como en la superficie del mineral de pirita. As, todo el fierro se encuentra soluble para ser cuantificado posteriormente con el mtodo de ofenantrolina. La diferencia entre ambos mtodos se presenta en la figura 15.
La recuperacin de fierro desde el mineral de pirita fue de un 27% luego de 600 horas bajo ataque de lixiviacin bacteriana. De la figura 16 se observa una notoria diferencia en relacin al experimento sin inocular, 14% de recuperacin despus de 600 horas. Se considera un 100% de recuperacin a la disolucin de los 0,25g de pirita con un porcentaje del 43,8%p/p de fierro en un volumen
de 50ml. Lo que corresponde a un incremento mximo de la concentracin de fierro total de 2,19g/l por sobre el valor inicial.
3.3.2. Biolixiviacin de pirita por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 5 g/l. Para el experimento con concentracin inicial de in frrico en solucin de 5g/l se observ que el potencial de la solucin comenz con una baja hasta la mitad del tiempo de monitoreo, para luego recuperarse y alcanzar valores sobre el inicial hacia fines de la experiencia (figura 17). Nuevamente el potencial de los ensayos sin inocular tuvo una cada ms abrupta que los que si fueron inoculados, y el incremento en el potencial con el paso del tiempo se podra explicar cmo desarrollo bacteriano ya que la pirita utilizada no fue esterilizada previo a su uso.
En relacin al pH se observ una cada de ste hasta mediados de la duracin del experimento, lo cual se atribuye a la generacin de cido en esa etapa. El incremento posterior se debe a un consumo de cido por la accin oxidativa del in ferroso por At. ferrooxidans, lo que coincide con el incremento del potencial de la solucin.
De la figura 19, nuevamente se observa un incremento en el fierro total disuelto tanto en los experimentos inoculados como en los controles. Con respecto a la precipitacin de hidrxidos frricos se observ durante la experiencia la existencia de estas especies. Sin embargo, al finalizar el monitoreo de los experimentos la diferencia en la medicin de fierro con los dos mtodos antes mencionados fue nula (figura 20).
La recuperacin de fierro desde la pirita se observa en la figura 21 alcanz un 45% para el caso del experimento inoculado con At. ferrooxidans, mientras que el caso sin inocular registr un recuperacin cercana al 30%.
3.3.3. Biolixiviacin de pirita por cepas nativas provenientes de PLS Minera Escondida con concentracin de in frrico inicial: 1,8 [g/l]. En el experimento de biolixiviacin de pirita por accin de un consorcio de cepas nativas provenientes de PLS de Minera Escondida se realiz slo el ensayo de biolixiviacin, el experimento control fue omitido en este caso. La concentracin bacteriana inicial fue de 4x107 bacterias/ml. La biolixiviacin de pirita mediada por las cepas nativas presenta actividad desde los inicios de la
experiencia, pues como se observa en la figura 22 el potencial de la solucin se incrementa rpidamente hasta valores cercanos a los 700mV para luego mantenerse en estos niveles durante toda la experiencia.
Como se observa en la figura 23, el pH presenta un mximo en las primeras 100 horas del estudio el cual se debe al consumo de protones por la oxidacin biolgica del in ferroso a in frrico, posteriormente el pH decrece principalmente por la generacin de cido.
En este experimento el potencial de la solucin se mantuvo siempre en valores sobre los 700mV, por ende la mayor cantidad del fierro en la solucin se encontraba como in frrico. La concentracin del in ferroso fue tan baja que no fue posible detectar por el mtodo de la ofenantrolina. La cuantificacin del
fierro total en solucin por el mtodo de la o-fenantrolina y la digestin con HCl fueron similares como se observa en la figura 24.
La recuperacin alcanzada por la accin de las cepas nativas se presenta en la figura 25, la cul fue del 55% al final de las 600 horas.
Del grfico 16 se observa claramente que cercano a la mitad de la duracin del experimento (300 horas) la recuperacin en similar para todos los casos. Sin embargo, en tiempos posteriores la recuperacin por las cepas nativas sobrepasa a la de 5g/l de in frrico en solucin y ms an el de concentracin
2,4g/l, ambas con At. ferrooxidans. Al comparar la biolixiviacin slo por At. ferrooxidans el cambio en la velocidad de recuperacin coincide con el instante en el que el potencial de los ensayos con 5g/l comienza a aumentar, a diferencia de los de 2,4g/l en los que se mantiene constante a lo largo delexperimento.
A partir de los porcentajes de conversin de la pirita en fierro soluble se analiza mediante el modelo de ncleo sin reaccionar (MNSR) cul es la etapa limitante en el proceso de biolixiviacin de la pirita para ambos casos antes mencionados.
De la aplicacin del modelo de ncleo sin reaccionar se obtiene que la lixiviacin de la pirita por At. ferrooxidans con una concentracin de 2,4g/l de in frrico en solucin est dominada por la resistencia difusional de los productos de la reaccin o cenizas. En cambio, para el caso de 5g/l la etapa dominante fue la reaccin qumica. Idnticamente, la lixiviacin mediada por las cepas nativas y 1,8g/l de in frrico en solucin fue dominada por la reaccin qumica. La etapa dominante se determin en funcin del coeficiente de determinacin (R2) al aplicar el modelo de difusin y el de reaccin. Aquella curva que present el R2 ms cercano a la unidad, es la que se ajusta de mejor forma al modelo, por ende la que se asemeja de mejor manera lo ocurrido en la realidad. En la tabla 4 se presenta un resumen de los parmetros del modelo
de ncleo sin reaccionar demarcando en color rojo los parmetros de la etapa controlante.
Como se observa la lixiviacin por At. ferrooxidans con concentracin de in frrico igual a 2,4g/l presenta la el mayor tiempo de residencia, 833,3 das. Para el caso de 5g/l de in frrico en solucin el tiempo de residencia disminuye considerablemente a 141 das aproximadamente, el cual es levemente mayor que el obtenido para el caso de las cepas nativas con 1,8g/l de in frrico en solucin. As, cuando controla difusin la velocidad de lixiviacin es considerablemente menor que cuando controla reaccin. Pese a que la recuperacin de las cepas nativas fue de un 55% y la de At. ferrooxidans con 5g/l de concentracin de in frrico de un 45% al final de las 600 horas, segn el modelo de ncleo sin reaccionar la velocidad de lixiviacin de la pirita es similar, 7,1x10-3 y 8,2x10-3 % recuperacin/da.
3.4. Biolixiviacin de pirita sin adherencia bacteriana por cepas nativas provenientes de PLS minera Escondida con concentracin de in frrico inicial: 1,8g/l.
La experiencia de biolixiviacin de pirita por las cepas nativas corresponde a los valores de biolixiviacin presentados en el captulo 3.3.3 correspondientes a las dos primeras semanas de monitoreo, con un inculo inicial de 4x107 bacterias/ml. El experimento control se comporta de forma esperada, bajando el potencial durante toda la experiencia por lo que no se detecta contaminacin. Para el caso del experimento sin adherencia bacteriana sufre un cada inicial para luego recuperarse y alcanzar potenciales similares a los de la biolixiviacin directa, la concentracin de microorganismos inicial fue de 2x10 8 bacterias/ml (figura 30)
En el caso del pH para el caso de la biolixiviacin directa de la pirita la tendencia es hacia la generacin de cido. En cambio, en los otros dos ensayos el pH disminuye en el inicio del monitoreo para luego incrementar. En el caso de la biolixiviacin sin adherencia el incremento del pH se debe al consumo de protones por el metabolismo bacteriano, mientras que en el caso control se atribuye a la precipitacin de hidrxidos frricos. Sin embargo, al final del al experiencia los experimentos de biolixiviacin con y sin adherencia terminan con pH idnticos como se observa en la figura 31. La precipitacin del fierro en el ensayo control al final de la experiencia se puede observar en la figura 32 como una disminucin de la concentracin de fierro total en solucin.
La recuperacin mxima fue alcanzada por el experimento de biolixiviacin por las cepas nativas en contacto con el mineral, llegando a un 28% de disolucin del mineral. En el caso del experimento sin adherencia la recuperacin lleg a un 20% y es notoriamente mayor al caso control como se aprecia en la figura 33.
De los resultados obtenidos se observa que al utilizar las cepas nativas provenientes del PLS de Minera Escondida se logra el propsito de mantener un potencial similar dentro del reactor para los casos en que las bacterias se pueden adherir sobre el mineral como en el que las bacterias se encuentran aisladas dentro del tubo. El tener idntico potencial implica que el poder oxidante es el mismo en ambos experimentos, por ende los resultados son comparables. Al aplicar el modelo de ncleo sin reaccionar (figuras 34 y 35) se
obtiene que tanto en la biolixiviacin de pirita con y sin adherencia estn controladas por la reaccin qumica. La velocidad de disolucin del mineral es menor en el caso sin adherencia, 4,8x10-3% recuperacin/da, lo que se atribuye a perodo de tiempo en el que el potencial se mantuvo bajo el potencial del experimento de biolixiviacin con posibilidad de adherencia que alcanz un 7,7x10-3% recuperacin/ml.
4. CAPTULO DISCUSIN. 4.1. Biolixiviacin de pirita. Al comparar los resultados de la biolixiviacin de pirita por la accin de At. Ferrooxidans puro y cepas nativas provenientes de PLS de Minera Escondida se observa una notoria ventaja de utilizar el cultivo mixto por sobre el cultivo puro, pues el tiempo requerido para un 100% de lixiviacin (D) alcanzado por las cepas nativas en presencia de 1,8g/l de in frrico fue 122 das con un 55% de recuperacin al final de las 600 horas. El D que ms se acerca al presentado anteriormente se registr para la lixiviacin con At. ferrooxidans para una concentracin in frrico de 5g/l, e igual a 141 das con una recuperacin de 45% al final de las 600 horas. Es decir, se necesit un incremento considerable de la concentracin inicial del agente oxidante (2,5 veces aproximadamente) para tener resultados cercanos a los del cultivo mixto. De la aplicacin del modelo de ncleo sin reaccionar a los resultados de la experiencia de biolixiviacin de pirita se obtuvo que para el cultivo con At. ferrooxidans y 2,4g/l de in frrico inicial en solucin la etapa controlante fue la difusin en las cenizas o productos de la reaccin. En cambio, para la experiencia con 5g/l de in frrico y en presencia de la cepa pura de At. ferrooxidans la etapa controlante pas a ser la reaccin qumica. Para el caso de concentraciones similares de in frrico en solucin, 1,8g/l para las cepas nativas y 2,4g/l para At. ferrooxidans, la diferencia en la etapa controlante se puede atribuir a la baja adherencia registrada sobre el mineral por la cepa pura el cual slo se adhiri en un 33% con un tiempo de monitoreo de hasta 24 horas. En cambio, las cepas nativas alcanzan casi un 100% de adherencia en slo 90 minutos. Esto coincide con los resultados presentados por Rodrguez et
al. (2003) quien registr bajas tasas de biolixiviacin de pirita cuando la adherencia de At. ferrooxidans es tarda. El efecto de la adherencia de las bacterias en estos experimentos en que se permite el contacto entre las bacterias y el mineral, se puede otorgar principalmente a la capacidad azufre oxidante de los microorganismos involucrados. Segn el mecanismo del thiosulfato para la degradacin de la pirita propuesta por Sand, la adherencia de los microorganismos es necesaria con el fin de concentrar los agentes oxidantes sobre la superficie del mineral. El producto de azufre principal de la disolucin corresponde al sulfato o cido sulfrico, siendo el azufre elemental un producto lateral. La accin azufre oxidante bacteriana acta sobre este azufre oxidndolo a sulfato. Para el caso de At. ferrooxidans el metabolismo azufre-oxidante pareca encontrarse en un estado de latencia pues en el experimento de generacin de sulfato a partir de azufre elemental l concentracin de este in comenz a aumentar recin pasada una semana del inicio de la experiencia, y un similar comportamiento ocurri con la disminucin del pH. Por otra parte, las cepas nativas registraron actividad oxidativa inmediata. El metabolismo azufre-oxidante de At. ferrooxidans es constitutivo. Sin embargo, como esta bacteria se cultiva en un medio con nica fuente energtica el in ferroso, el metabolismo hierro-oxidante se ve inducido y predomina por sobre el azufre-oxidante. En las experiencias de biolixiviacin de pirita realizadas, nuevamente la fuente energtica inicial es el in ferroso generado por la lixiviacin frrica, por ende la oxidacin de los productos de azufre elemental que se depositan sobre la superficie del mineral difcilmente fueron utilizados por At. ferrooxidans como fuente energtica, ya que este metabolismo se encontraba inhibido o atenuado. Para el caso de las cepas nativas existe presencia de bacterias mesfilas que tienen ambos metabolismos oxidativos (At. ferrooxidans), hierro y azufre, pero tambin se encuentran microorganismos que usan slo uno de estos sustratos como fuente de electrones, tal es el caso del Leptospirillum ferrooxidans que slo capta electrones del in ferroso y las bacterias del genero Sulfobacillus que los obtiene del azufre. Por ende, la capacidad del cultivo nativo de disolver la barrera difusional propuesta por la capa de azufre elemental sobre la pirita se debe a esta variedad de microorganismos presentes forzando los metabolismos hierro-oxidante y azufreoxidante para la sobrevivencia de las distintas cepas. El ensayo de biolixiviacin por At. ferrooxidans con 5g/l de in frrico en solucin present control por reaccin qumica a diferencia de su smil con 2,4g/l. Esta diferencia se puede conceder a el mayor poder oxidante presente en la solucin, y a que el inculo utilizado para el caso de 5g/l proviene de las bacterias utilizadas en el experimento con 2,4g/l, por ende, estas bacterias pueden haber re-potenciado su actividad oxidativa de azufre al haber estado expuestos al azufre producido sobre la pirita en el experimento anterior. 4.2. Biolixiviacin de pirita sin adherencia. La presencia de la membrana entre la pirita y los microorganismos de biolixiviacin opone una resistencia adicional al proceso de disolucin del mineral. Esto se afirma en base a la diferencia existente entre los potenciales
de los experimentos con y sin adherencia, diferencia que se distingue claramente al inicio de la experiencia de biolixiviacin con las cepas nativas con 1,8g/l de in frrico en solucin. La disolucin mediada por las cepas nativas presentaron resultados favorables, pues pese a que en los inicios de la experiencia los potenciales entre el experimento de biolixiviacin con adherencia y el sin adherencia eran distintos, con el transcurso del tiempo estos se igualaron hasta el final de la experiencia. El mantener los potenciales iguales en ambos experimentos permite comparar el nivel de disolucin de pirita bajo un mismo poder oxidante, detectando claramente el efecto que tiene la adherencia en el proceso de biolixiviacin. De los resultados del modelo para la biolixiviacin por las cepas nativas se obtuvo que en ambos casos la etapa dominante fuera reaccin qumica, alcanzando un tiempo de disolucin igual a 130 das para el caso con posibilidad de adherencia y de 208 das para el caso en que las bacterias se encontraban separadas del mineral. Segn el mecanismo del thiosulfato la adherencia bacteriana favorece la velocidad de biolixiviacin, la que concuerda con los resultados expuestos, pues al permitir la adherencia de los microorganismos sobre la superficie del mineral existe una disminucin del tiempo requerido para disolucin total del sulfuro. Para el caso del experimento sin adherencia bacteriana la etapa controlante fue la reaccin qumica, por ende debe haber existido disolucin de los subproductos pasivantes formados por la lixiviacin frrica del mineral pese a la separacin fsica existente entre los microorganismos y la superficie del mineral donde ocurre la disolucin. Esto se puede atribuir a que la formacin de los productos de azufre elemental provienen del ciclo del thiosulfato propuesto por Sand, en que los intermediarios de la reaccin previo a la formacin del azufre son solubles y pueden haber traspasado a travs de la membrana y as contactare con los microorganismos azufre-oxidantes presentes dentro del cultivo mixto inoculado en el interior del tubo separador. Como se observa estos valores de D son mayores que los registrados para los experimentos de biolixiviacin de pirita por cepas nativas por 600 horas. No obstante, es importante recalcar que el tiempo de monitoreo para los experimentos sin adherencia fue de 14 das alcanzando un recuperacin mxima cercana al 28% para la biolixiviacin por cepas nativas, mientras que para los otros fue de 25 das con una recuperacin del 50% con el mismo inculo antes mencionado, por lo que estos ltimos modelan mejor el proceso y los resultados obtenidos para la velocidad de lixiviacin son ms representativos. 4.3. Discusiones generales y recomendaciones. Es importante mencionar que los experimentos realizados requirieron un exhaustivo monitoreo de la concentracin de fierro en solucin, pues la precipitacin del in frrico como jarositas disminuye el porcentaje de recuperacin al medir la concentracin de este in slo por el mtodo de la ofenantrolina. Debido a esto, se implement el mtodo de la digestin con cido clorhdrico 5N, mediante el cual se pudo determinar el fierro total presente como sulfato frrico en solucin y precipitados en la solucin o sobre el mineral. Sin embargo, la utilizacin de este mtodo implic que el experimento se
realizara en varias copias, pues en cada instante de medicin un grupo de matraces deba ser detenido para aplicar la digestin cida, mientras los otros matraces continuaban en estudio. Esto provoca que los datos iniciales tengan una menor desviacin del promedio calculado, ya que corresponden al promedio de siete ensayos en duplicado. En cambio, los datos finales corresponden a un solo ensayo en duplicado. Para el caso de los estudios de biolixiviacin sin adherencia el tratamiento con cido clorhdrico 5N no fue realizado pues no se dispona de una suficiente cantidad de tubos separadores para realizar la cantidad de muestras y sus duplicados. Esto dificult la medicin del fierro total en la solucin, debido a la precipitacin de in frrico como jarosita. Se recomienda seguir trabajando sobre el diseo del reactor con tubo separador utilizado para los experimentos de biolixiviacin de pirita sin adherencia bacteriana, de tal forma de maximizar el rea de transferencia mediante la membrana, pero procurando que no existan fugas del inculo desde el tubo hacia el matraz. Los estudios de biolixiviacin realizados en este trabajo fueron sobre una muestra de pirita con granulometra fina y bastante purificada, ya que provena de los relaves de Minera Escondida. En base a esto, los experimentos realizados no son capaces de representar lo que ocurre en una pila industrial de biolixiviacin, pues no se est considerando la forma nativa del mineral ni la ganga presente. En una roca de mineral la pirita se puede encontrar atrapada en el interior de esta, por lo que las barreras difusionales para los reactivos de la biolixiviacin son an mayores que los expuestos en este trabajo. Ms an, la adherencia de los microorganismos sobre la pirita se encuentra limitada en forma fsica por la masa de ganga que rodea al mineral. Es por esto que el estudio del efecto que tiene la adherencia de las bacterias al mineral es necesario, y se debe continuar su estudio con el fin de poder esclarecer que tan importante es el mecanismo por contacto directo en los procesos de biolixiviacin. 5. CAPTULO CONCLUSIONES. La biolixiviacin de pirita mediada por la accin metablica de At. ferrooxidans est controlada por la difusin del agente oxidante a travs de los subproductos de la reaccin y requiere un tiempo para su disolucin total de 833 das ante una concentracin inicial de in frrico en solucin de 2,4g/l. Al aumentar al doble la concentracin del in oxidante, 5g/l el tiempo disminuye en 6 veces llegando a 141 das. Por ende, se concluye que en la biolixiviacin por la cepa pura al incrementar la concentracin del in frrico en la solucin, se favorece para la conversin final de la pirita, pasando de un 27% de recuperacin a un 45%. La utilizacin de un cultivo mixto de cepas nativas provenientes de PLS de Minera Escondida presentaron los mejores rendimientos tanto en conversin como del tiempo de biolixiviacin de la pirita, 55% y 122 das, respectivamente. Lo anterior se atribuye a la alta actividad azufre oxidante presentada por las cepas nativas que permite disminuir las barreras difusionales existentes por la generacin de productos insolubles en la reaccin de disolucin de la pirita. Esto se complementa con la baja tasa de adherencia presentada por el cultivo puro de At. ferrooxidans (33,3%) en comparacin con la cepas nativas
(~100%). En relacin a los experimentos de biolixiviacin sin adherencia, se observ que el hecho de que los microorganismos de Escondida no pudieran adherirse a la superficie de la pirita implic una menor recuperacin de hierro y una menor velocidad de lixiviacin al comparar con el caso de la biolixiviacin con posibilidad de contacto. Por ende, se establece que la adherencia bacteriana sobre el mineral puro de pirita influye positivamente en la lixiviacin de ste. 6. Bibliografa. Ballester, A. (2005). Mecanismo de biolixiviacion. En: Fundamentos y perspectivas de las tecnologias biomineras Editado por Acevedo F. y Gentina J.C. 1a Edicion, Ediciones Universitarias de Valparaiso, Valparaiso, 9-24. Brierley, J.A. (2000). 2000 Wadsworth award lecture: Expanding role of microbiology in metallurgical processes. Mining Engineering 52: 49-53. Crundwell, F.K. (2003). How do bacteria interact with minerals?. Hydrometallurgy 71: 71-81. Demergasso, C., Galleguillos, P., Escudero, L., Zepeda, V., Castillo, D., Casamayor, E. (2005). Molecular characterization of microbial populations in a low-grade copper ore bioleaching test heap. Hydrometallurgy 80: 241-253. Fowler, T.A., Holmes, P.R., Crundwell, F.K. (1999). Mechanism of pyrite dissolution in the presence of Thiobacillus ferrooxidans. Applied and Environmental Microbiology Vol 65 N7: 2987-2993. Holmes, P.R., Fowler, T.A., Crundwell, F.K. (1999). The mechanism of bacterial action in the leaching of pyrite by Thiobacillus ferrooxidans: an electrochemical study. J. Electrochem. Soc.146: 2906-2912. Levenspiel, O. (1993). Ingeniera de las Reacciones Qumicas. Revert Ediciones S.A. Mxico D.F. 397-411. Lindstrm, B. et al. (1992). Solid-Phase products of bacterial oxidation of arsenical pyrite. Applied and environmental microbiology Vol 58 N3: 1046-1049. Lowson, R. (1982). Aqueous oxidation of pyrite by molecular oxygen. Chemical Reviews Vol 82 N 5: 461-497. Petersen, J., Dixon, D. (2002). Thermophilic heap leaching of a chalcopyrite concentrate. Minerals Engineering 15: 777-785. Petersen, J., Dixon, D. (2006). Competitive bioleaching of pyrite and chalcopyrite. Hydrometallurgy 83: 40-49.
Rawling, D.E. (1998). Industrial practice and the biology of leaching of metals from ores: The 1997 Pan labs lecture. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 20: 268-274. Rawling, D.E. (2002). Mining using microbes. Annual Review Microbiology 56: 65-91. Rohwerder, T., Gehrke, T., Kinzler, K., Sand, W. (2003). Bioleaching review part A: Progress in bioleaching: fundamentals and mechanisms of bacterial metal sulfide oxidation. Applied Microbiological Biotechnology 63: 239-248. 44 Rodrguez, Y., Ballester, A., Blzquez, M.L. Gonzlez, F., Muoz, J.A. (2003). New information on the pyrite bioleaching mechanism at low and hight temperature. Hydrometallurgy 71: 37-46. Sand, W., Gehrke, T., Jozsa, P., Schippers, A. (2001). (Bio)chemistry of bacterial leaching direct vs. indirect bioleaching Hydrometallurgy 59: 159-175. . Wang, H., Bigham, J., Touvinen, O. (2007). Oxidation of marcasite and pyrite by iron-oxidizing bacteria and archea. Hydrometallurgy 88: 127-131. Watling, H.R. (2006). The bioleaching of sulphide minerals with emphasis on cooper sulphides A review. Hydrometallurgy 84: 81-108. Yamanaka, T, (1995). Molecular aspects of the electron transfer system wich participates in the oxidation of ferrous ion by Thiobacillus ferrooxidans. FEMS Microbiology Reviews 17. 401-413. 45 7. Anexos. A) Modelo del Ocleo sin Reaccionar. En el mecanismo de lixiviacin basado en el modelo del ncleo sin reaccionar se pueden distinguir las siguientes etapas: 1. Difusin de los reactivos lixiviantes (H+, Fe+3) a travs de la capa lmite del fluido hacia la superficie de la partcula. 2. Los reactivos lixiviantes difunden en el interior de la partcula hacia la zona de reaccin. 3. Se realiza la reaccin qumica, formndose los productos. 4. Los productos solubles de la reaccin (Fe+2) difunden a travs de la ceniza hacia la superficie de la partcula. 5. Los productos solubles difunden a travs de la capa lmite hacia el seno de la solucin.
Por otra parte, las resistencias de las distintas etapas suelen ser muy diferentes; en tales casos hemos de tener en cuenta que la etapa que presente mayor resistencia constituye la etapa controlante de la velocidad de lixiviacin. La velocidad de lixiviacin es inicialmente alta ya que el reactivo ataca directamente a los minerales de pirita presentes en la superficie de la partcula. Con el tiempo la velocidad de lixiviacin decae porque la superficie de reaccin est cada vez ms alejada de la superficie de la partcula y entonces los reactivos y productos toman ms tiempo en desplazarse al interior de la partcula.
A continuacin se muestran las ecuaciones de conversin tiempo para partculas esfricas de tamao constante segn el modelo del ncleo sin reaccionar (Levenspiel).
DondeXb corresponde a la conversin alcanza por la partcula en cierto instante de tiempo (t). La partcula esfrica tiene un radio constante durante todo el proceso de tamao (R) Sin embargo, el radio del ncleo sin reaccionar (rc) disminuye con la accin de los agentes lixiviantes en el tiempo. Cuando el radio del ncleo llega a cero, es decir, a un 100% de conversin el tiempo transcurrido corresponde a e el cual depende de la resistencia que controla el proceso de lixiviacin del mineral.
Los parmetros de las ecuaciones son: cb, densidad molar del sustrato a lixiviar; b, constante estequiomtrica de la pirita en la reaccin de biolixiviacin; ky, coeficiente de transferencia de masa; De, coeficiente de difusin en la ceniza y CAg es la concentracin del reactante en la superficie del mineral. B) Tablas de datos: Biolixiviacin de Pirita. a. Por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 2,4 g/l.
b. Por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 5 g/l.
c. Por cepas nativas provenientes de PLS Minera Escondida con

concentracin de in frrico inicial: 1,8g/l.
C) Tablas de datos: Adherencia Bacteriana
D) Tablas de datos: Comparacin en la generacin de sulfato entre Acidithiobacillus ferrooxidans y cepas nativas.
E) Tablas de datos: Biolixiviacin de pirita sin adherencia bacteriana.
http://www.cochilco.cl/productos/pdf/2010/estudio_biolixiviacion.pdf http://www.monografias.com/trabajos7/liva/liva.shtml

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INTRODUCCIN Biolixiviacin de piritas por Acidithiobacillus ferrooxidans y cepas nativas

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1.2. Antecedentes Bibliogrficos.

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1.3. Descripcin del Proyecto.

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3.3. Biolixiviacin de Pirita.

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b. Por Acidithiobacillus ferrooxidans con concentracin de in frrico inicial: 5 g/l.