Biotecnologia

Resumo I - Microbiologia Tortora

Introduo biotecnologia
Biotecnologia o uso de microrganismos, clulas ou componentes celulares para fazer um produto. Tecnologia do DNA recombinante Os organismos de parentesco prximo podem trocar genes por recombinao natural. Os genes podem ser transferidos entre espcies no-relacionadas por meio de manipulao de laboratrio, em um processo chamado de engenharia gentica. O DNA recombinante DNA que foi artificialmente manipulado para combinar genes de duas origens diferentes. Viso geral da metodologia do DNA recombinante Um gene desejado inserido em um vetor de DNA, como um plasmdeo ou genoma viral. O vetor insere o DNA em uma nova clula, que se multiplica para formar um clone. Grandes quantidades do gene ou do seu produto podem ser obtidas a partir do clone.

Ferramentas da biotecnologia
Seleo Micrbios com caractersticas desejveis so selecionados, por meio de seleo artificial, para serem cultivados. Mutao Mutagnicos so usados para causar mutaes que possam resultar em um microrganismo com caractersticas desejveis. A mutagnese stio-dirigida usada para mudar um cdon especfico em um gene. Enzimas de restrio Enzimas de restrio j esto disponveis em kits pr-embalados para muitas tcnicas de engenharia gentica. Uma enzima de restrio reconhece e cliva apenas uma determinada sequncia nucleotdica no DNA. Algumas enzimas de restrio produzem extremidades coesivas, que so pequenos segmentos de DNA de fita simples nas extremidades de fragmentos de DNA. Fragmentos de DNA produzidos pela mesma enzima de restrio vo se unir espontaneamente por pareamento de bases. A DNA ligase pode ligar covalentemente os esqueletos do DNA.

Vetores Os vetores bi-funcionais (shuttle vectores) so plasmdeos que podem existir em vrias espcies diferentes. Um plasmdeo contendo um novo gene pode ser inserido em uma clula por transformao (absoro de DNA livre do meio). Um vrus contendo um novo gene pode inserir aquele gene em uma clula (transduo) Reao em cadeia da polimerase A reao em cadeia da polimerase (PCR) utilizada para produzir enzimaticamente mltiplas cpias de um fragmento de DNA desejado. A PCR pode ser utilizada para aumentar a quantidade de DNA em amostras at nveis detectveis. Isso pode permitir o sequenciamento de genes, o diagnstico de doenas genticas ou a deteco de vrus.

Tcnicas de engenharia gentica

Introduo de DNA exgeno nas clulas As clulas podem captar DNA livre por transformao. Os tratamentos qumicos so utilizados para tornar clulas que no so naturalmente competentes para a absoro de DNA. Os poros produzidos em protoplastos e em clulas animais por aplicao de uma corrente eltrica no processo de eletroporao podem permitir a entrada de novos fragmentos de DNA. A fuso de protoplastos a unio de clulas que tiveram suas paredes celulares removidas. O DNA exgeno pode ser introduzido em clulas vegetais injetando partculas cobertas com DNA para o interior das clulas. O DNA exgeno pode ser injetado em clulas animais com o auxlio de uma micropipeta de vidro. Obtendo DNA As bibliotecas de genes podem ser produzidas a partir da clivagem de todo um genoma com enzimas de restrio e da insero dos fragmentos em plasmdeos bacterianos ou fagos (vrus infectantes de bactrias) O cDNA, produzido a partir de mRNA por transcrio reversa, pode ser clonado em bibliotecas de genes. O DNA sinttico pode ser produzido in vitro por mquinas de sntese de DNA. Selecionando um clone Os marcadores de resistncia a antibiticos em vetores plasmideais so utilizados para identificar, por seleo direta, clulas contendo o vetor modificado geneticamente. Na seleo branca-azul, o vetor contm os genes ampR e beta-galactosidase. O gene desejado inserido em um stio no gene da beta-galactosidase, tornando o

mesmo inativo (bactria perde a capacidade de metabolismo de galactose, ganhando o gene de interesse). Os clones contendo o vetor recombinante sero resistentes ampicilina e incapazes de hidrolisar X-gal (formando colnias brancas). Os clones contendo o vetor sem o novo gene sero azuis. Clones sem o vetor no formaro colnias, sendo mortos pela ampicilina. Os clones contendo DNA exgeno podem ser testados para identificao daqueles expressando o produto do gene desejado. Um pequeno fragmento de DNA marcado, chamado de sonda de DNA (a qual normalmente contm partculas radioativas ou fluorescentes), pode ser utilizado na identificao de clones portadores do gene desejado. Fazendo um produto gnico E.coli utilizada para produzir protenas pela engenharia gentica porque ela facilmente multiplicada em cultura e a sua genmica bem conhecida. Devem ser feitos esforos para assegurar que a endotoxina da E.coli no contamine um produto destinado ao uso humano. Para recuperar o produto, E.coli deve ser lisado ou o gene deve estar ligado a outro que produza uma protena secretada naturalmente. As leveduras podem ser modificadas geneticamente e podem, em geral, secretar de forma contnua o produto gnico. As clulas de mamferos podem ser modificadas geneticamente para produzir protenas como hormnios para uso mdico. As clulas vegetais podem ser modificadas geneticamente para produzir plantas como novas propriedades.

Aplicaes da engenharia gentica

O DNA clonado utilizado na obteno de produtos, no seu prprio estudo e na alterao do fentipo de um organismo. Aplicaes teraputias Os genes sintticos ligados ao gene da beta-galactosidase (lacZ) em um vetor plasmidial foram inseridas na E.coli, fazendo com que a bactria produzisse e secretasse os dois polipeptdeos utilizados na produo da insulina humana. As clulas podem ser modificadas por engenharia gentica de modo a produzirem uma protena de superfcie de um patgeno que pode ser utilizada como uma vacina de subunidade (contendo somente o componente proteico que vai fazer a sensibilizao do sistema imunolgico, sem material gentico, e sem risco de infeco) Os vrus animais podem ser modificados por engenharia gentica para carregarem um gene que codifica uma protena de superfcie de um patgeno. Quando o vrus utilizado como uma vacina, o hospedeiro desenvolve resposta imune contra o patgeno. A terapia gnica pode ser utilizada na cura de doenas genticas pela substituio do gene defectivo ou ausente. As tcnicas de engenharia gentica foram utilizadas para mapear o genoma humano pelo Projeto Genoma Humano.

 Isso fornecer ferramentas para diagnstico e, possivelmente, viabilizar o reparo de doenas genticas. Aplicaes cientficas As tcnicas de DNA recombinante podem ser utilizadas para aumentar o conhecimento disponvel a respeito do DNA, para fingerprinting gentico e para terapia gnica. As mquinas de sequenciamento de DNA so utilizadas para determinar a sequncia de bases nucletdicas de fragmentos de restrio no sequenciamento aleatrio por shotgun. Bioinformtica o uso de aplicaes computadorizadas para estudar dados genricos; protemica o estudo das protenas da clula. O Souther blotting utilizado em DNA fingerprinting para identificar patgenos bacterianos ou virais. As sondas de DNA podem ser utilizadas para identificar rapidamente um patgeno em um tecido corporal ou em alimentos. Aplicaes agrcolas As clulas das plantas com caractersticas desejveis podem ser clonadas de modo a produzirem muitas clulas idnticas. Essas clulas podem ento ser utilizadas na produo de plantas completas, a partir das quais podem ser obtidas sementes. As clulas vegetais podem ser modificadas geneticamente utilizando o plasmdeo Ti como vetor. Os genes T produtores de tumor so substitudos pelos genes desejados e o DNA recombinante inserido em Agrobacterium. A bactria modifica naturalmente suas plantas hospedarias. Os genes para resistncia ao glifosato, toxina Bt e supresso da pectinase foram inseridos em lavouras atravs da engenharia gentica. O Rhizobium foi modificado por engenharia gentica para ter uma maior capacidade de fixao de nitrognio. Pseudomonas foi modificada por engenharia gentica para produzir a toxina de Bacillus thuringiensis contra insetos. O hormnio de crescimento bovino est sendo produzido em E.coli

Questes de segurana e tica na engenharia gentica

Para evitar a liberao acidental de microrganismos modificados por engenharia gentica so utilizados rgidos padres de segurana. Alguns micrbios utilizados em engenharia gentica foram alterados de modo que eles so incapazes de sobreviver fora do ambiente de laboratrio. Os microrganismos destinados utilizao no meio ambiente podem ser modificados por engenharia gentica de modo a conterem genes de suicdio. Assim, eles no persistem no meio ambiente. A tecnologia gentica suscita questes ticas, como: empregadores e companhias seguradoras podem ter acesso aos registros genticos de uma pessoa? Ser que algumas pessoas se tornaro alvos para reproduo ou esterilizao? O aconselhamento gentico estar disponvel para todos? As culturas de alimentos alterados por engenharia gentica devem ser seguras para consumo e para serem liberadas no meio ambiente.