ANTEPROYECTO DE PRODUCCION DE FORRAJES MEJORADOS

RESUMEN DEL PROYECTO Las metodologas de mejoramiento para alfalfa (Medicago sativa L.) han cambiado poco durante los ltimos 50 aos, enfocndose a mtodos de policruzas y seleccin fenotpica recurrente; estos esquemas tradicionales de mejoramiento han incrementado nuestro conocimientos en la biologa de esta especie forrajera, en particular la relacin gentica entre miembros del complejo M. sativa, como se deduce por anlisis de ADN. Esto ha conllevado a establecer nuevos esquemas de seleccin, a partir de la recombinacin y segregacin de genes relacionados a caracteres de importancia agrcola, como es rendimiento, resistencia a plagas y enfermedades, contenido de protena, digestibilidad, fibra y persistencia en condiciones de cosecha mecnica y/o pastoreo. En esta propuesta de investigacin, incluimos 10 genotipos de alfalfa de familias de medios hermanos; para determinar no solo la heredabilidad y correlaciones genticas de caracteres genticos, sino determinar la similitud y discrepancias a nivel de fragmentos genmicos en ambos gneros. Este proyecto tiene la finalidad de incrementar nuestro conocimiento en seleccin de especies forrajeras, sobre todo en cultivares sintticos poliploides. Adems, se propone publicar artculos cientficos y tesis, as como la formacin de recursos humanos. INTRODUCCION En el norte y centro de Mxico la alfalfa (Medicago sativa) es un cultivo muy popular entre los agricultores, teniendo un papel muy importante en la produccin de leche en estabulacin y en la elaboracin de concentrados alimenticios para aves, ganado de engorda y equinos. Se estima que se cultiva alrededor de 300000 hectreas de alfalfa bajo condiciones de

riego en todo el pas, sobresaliendo los estados de Guanajuato y chihuahua como lderes en superficie sembrada. Otros estados productores de forraje de alfalfa son Hidalgo, Puebla, Quertaro, Michoacn, Jalisco, Estado de Mxico y Baja California. En Mxico debido al crecimiento de la ganadera lechera en estabulacin y al uso relativamente reciente del agua de bombeo del subsuelo y/o de presas para regar, la alfalfa es ahora cultivada todo el ao en una gran diversidad de regiones. La explotacin se hace en forma intensiva, tenindose desde 8 hasta 12 cortes de forraje por ao, dependiendo de la frecuencia de riegos y el clima. Normalmente la alfalfa tiene una persistencia que va desde los dos aos hasta los seis aos, dependiendo de la variedad y el manejo que reciba. Se considera que el promedio nacional de persistencia econmica de la alfalfa es de casi tres aos. La principal limitante de la alfalfa es la cantidad de agua, tenindose algunas regiones donde se riega nicamente con aguas negras o tratadas provenientes de las grandes ciudades. La industria en general descarga sus aguas sin tratar en ros y presas, teniendo una gran variacin en su contenido de elementos pesados. El empleo de esta agua industrial es el riego trae como consecuencia primaria una disminucin importante en la persistencia del alfalfar y una posible intoxicacin del ganado. La superficie de alfalfa seguir creciendo en Mxico, a pesar de la fuerte campaa de desprestigio que ha sufrido en los ltimos aos por el asunto del agua. La tendencia general es que cada ao se siembra ms variedades mexicanas mejoradas y que se empleen cada vez ms los riegos altamente tecnificados para producir alfalfa. A mediano y largo plazo se formarn en Mxico y se liberarn al mercado variedades tolerantes al riego con aguas negras y con mayor eficiencia en el uso del agua. Asimismo, a largo plazo se incrementar el empleo de variedades de temporal para produccin de alfalfa en el centro de Mxico, especialmente en las regiones templadas de los estados de Guanajuato, Michoacn, Mxico, Jalisco y Puebla. REVISION DE LITERATURA Perspectiva Histrica del Mejoramiento Gentico de Alfalfa (M. sativa L.) Alfalfa es la especie forrajera ms antigua que se ha empleado, con datos histricos de uso desde 1300 AC en Turqua y

800 AC en Babilonia (Hendry, 1923). Su valor como forraje fue reconocido por los romanos 2000 aos atrs, establecindose en todas las provincias conquistadas por el imperio romano (Alegren, 1949). Alfalfa fue introducida en Sud-Amrica en el siglo XVI, llegando a Mxico en el siglo XVII (Klinkowski, 1933). Los genotipos que han sido introducidos en Mxico, suelen ser diversos, ya que la introduccin fue por ambos polos, desde la patagonia en Argentina hasta las regiones heladas de Canad. A pesar de encontrarse una gran diversidad gentica dentro del germoplasma introducido a Mxico, no existe un reporte valido para la clasificacin filogenetica del gnero Medicago en nuestro pas. A pesar de esa deficiencia, actualmente se han identificado 9 fuentes de germoplasma distintivos que se han introducido en Norte Amrica (Barnes et al., 1977). Estas fuentes (grupos) son: 1) M. sativa ssp. falcata; 2) Ladak (contiene genotipos de ssp sativa y ssp. falcata); 3) M. sativa ssp varia (hbridos naturales de ssp. sativa y ssp. falcata); 4) Turquistan (principalmente ssp. sativa); 5) Flemish (principalmente ssp. sativa); 6) Chilena (principalmente ssp. sativa); 7) Peruana (solo ssp. sativa); 8) Indu (solo ssp. sativa); y 9) Africano (solo ssp. sativa). Los grupos 6-9 son genotipos no-dormantes de invierno, y los grupos 1-5 son de alto a moderada dormancia en invierno. Los grupos 6 y 7 derivan de alfalfas espaolas, ampliamente usadas en Mxico. Kidwell et al. (1994) us marcadores moleculares de RFLP (Restricted Fragment Lenght Polymorphism) para evaluar la diversidad gentica entre accesiones que representan los 9 grupos de Medicago, clasificados por Barnes et al. (1977). Los resultados encontraron una alta variabilidad gentica entre individuos dentro de accesiones, y comparado con la diversidad entre accesiones, muchas de las fuentes de accesiones presentaron poca variabilidad. Esto puede asumir dos puntos: 1) que la clasificacin gentica hecha en 1977 por Barnes y col. no es del todo confiable; , 2) el germoplasma usado por Kidwell et al. en 1994 no sea del todo representativo de los 9 grupos divergentes de alfalfa, debido a un intercruzamiento entre grupos genotpicos ocurridos durante el intervalo inter-experimental. Estos y muchos otros resultados publicados nos llevan a comprender la necesidad de proponer metodologas confiables para estimar la variabilidad gentica entre y dentro de accesiones que se emplean intensivamente en Mxico. La alfalfa se siembra en 32 millones de hectreas a nivel mundial, siendo EU, Rusia, Europa oriental y Argentina, los que siembran alrededor del 70% a nivel mundial (Irwin et al., 2001). En nuestro pas se encuentran

establecidas 285,657 has de alfalfa, y tan solo en el estado de Mxico se han establecido 11,770 has que corresponden a un 4.1% de la superficie nacional. Los estados del valle de Mxico, que corresponden Hidalgo, Puebla, Tlaxcala, Mxico, y Quertaro, se han establecido 82,018 has en los ltimos tres aos, que representan un 29% de la superficie establecida a nivel nacional. Las variedades de alfalfa tetraploide que se cultivan son Moapa, Valenciana, Jpiter, CUF-101, ABI-xx, Florida 77, Alfalfa Genes, Milenia, Comet, Astro, San Miguelito, Salado, Maya, AltaVerde, Rodeo, La Joya, Espaola, Atlixco, Oaxaca, Bajio-xx, Mixteca 76, Puebla 76, Mesa Sirsa, Multifoliar, Tlacolula, DK-xx, AD-xx, Mgnum III, Maya, El Camino-xx, y Sonora (Nota: xx representa el nmero de variedad liberada, ej. DK-170, DK-192, ABI-805, entre otros). A pesar de presentar una amplia gama de variedades sembradas en nuestro pas, poco se ha reportado acerca de la variabilidad gentica dentro y entre variedades, as como los programas de mejoramiento y seleccin de material entre y dentro de las poblaciones previamente descritas. Esta propuesta de investigacin tiene el objetivo de ser un promotor de la caracterizacin morfolgica, gentica y molecular del germoplasma de alfalfa, con el objeto de proponer estrategias de mejoramiento gentico. Biologa, Evolucin y Gentica de Alfalfa El gnero Medicago comprende ms de 60 especies, las cuales se cultivan a diversas latitudes y altitudes, desde Canad hasta Argentina, desde China a Espaa, y desde Suecia a frica del norte. El centro de origen de diversidad gentica del gnero Medicago est en el Caucaso, nor-oeste de Irn, y nor-este de Turqua (Ivanov, 1977). El numero bsico cromosmico para Medicago es x=8, excepto para las especies anuales M. constricta, M. praecox, M. Polymorpha, M. rigidula, y M. murex, con x=7 (Quiros y Bauchan, 1988). Se han encontrado tres niveles de ploida dentro del gnero: 2n=2x=14 y 2n=2x=16, 2n=4x=32 y 2n=6x=48. El incremento de ploida se ha obtenido evolutivamente por gametos no reducidos, derivndose poblaciones altamente heterocigticas que son suficientemente agresivas para colonizar nuevos habitas e incrementar el rango de distribucin de los diploides. Las especies anuales son autgamas, mientras que las perennes son algamas, con diferentes grados de auto esterilidad (Quiros y Bauchan, 1988). La alfalfa comercial es autotetraploide, y se distingue de las formas diploides por un tamao mayor de sus flores, vainas, y

semillas, as como su velocidad de crecimiento y sobrevivencia a factores abiticos (Alarcn et al., 2001; 2005, en imprenta). La importancia y origen de la autotetraploidia en alfalfa, reside en la ocurrencia de la segregacin tetrasmica y gametos no reducidos entre genotipos de la misma poblacin, subspecie, o centro de origen. Cruzas entre 2x X 4x o 4x X 2x son posibles cuando el progenitor-hembra tiene la habilidad de generar gametos no reducidos (2n), dando progenie tetraploide (Vorsa y Bingham, 1979). El estudio de la variabilidad gentica en Medicago por medio del anlisis de isozimas (codominancia isoenzimtica), ha resultado en mayor variabilidad gnica en tetraploides que diploides, medido como porcentaje de heterocigosidad; asumiendo varias hiptesis de la accin gnica del alfalfa tetraploide. La subespecie tetraploide M. sativa ssp. falcata tiene un porcentaje mayor de heterocigosidad y nmero de alelos entre todas las subespecies, incluyendo 2x y 4x, siendo superior en poblaciones comerciales y naturales de M. sativa ssp. sativa, encontrndose el doble de plantas tri- y tetra-allicas (Quiros y Morgan, 1981; Riday y Brummer, 2005). Sin embargo, ssp. falcata tiene su centro de origen en Rusia y Siberia, por lo que su estacionalidad productiva es una limitante para ser empleada en el incremento de la variabilidad gentica del germoplasma para Mxico. Los autores proponen que la habilidad de las subespecies tetraploides para presentar un mayor rendimiento, persistencia, resistencia a plagas y enfermedades, est en un mayor porcentaje de plantas tri y tetra-alelicas dentro de la poblacin, o en su habilidad para hibridar y recombinar alelos contrastantes asociados a caracteres de importancia agronomica y zootecnica. Estos mismos resultados se han reportado empleando marcadores de ADN de amplificacin no selectiva (RAPDS y AFLP), por Kidwell et al. (1994). Los anlisis de RFLP (Restricted Fragment Lenght Polymorphism) demostraron la mayor importancia del pool gentico del germoplasma empleado, que la seleccin inter-poblacional por genotpica recurrente, asumiendo esto a la interaccin gentica complementaria en las poblaciones 4x (Bingham et al., 1994). Para comprender con mayor precisin la importancia de la variabilidad gentica en ssp. sativa tetraploide, a continuacin se describe la importancia de la interaccin gnica complementaria. La mxima heterocigosidad y heterosis se obtiene en diploides en una generacin (cruzas simples), mientras que en tetraploides es progresiva y se maximiza hasta las cruzas dobles o generaciones sucesivas, dependiendo del nivel de endogamia en los progenitores (Brummer, 1999). El cuadro 1 muestra las interacciones allicas complementarias posibles en alfalfa tetraploides (Fenster y Galloway, 2000; Luo et al., 2001; Zeng et al., 1999).

Cuadro 1. Genotipos e interacciones allicas mltiples por locus posibles dentro de alfalfa

La heterocigosidad mxima y la heterosis resultante en alfalfa tetraploide pueden ser debido a las interacciones allicas mltiples a un solo locus (sobre-dominancia, Tetragenico en Cuadro 1) o segmentos de cromosomas con alelos complementarios (linkats, Quadriplex en Cuadro 1), o una combinacin de ambos (Bingham et al., 1994).Por lo cual, la identificacin de alelos mltiples en un mismo locus no puede ser distinguido de linkats en muchos, y los mtodos de mejoramiento genotpico para maximizar heterocigosidad dan los mismos resultados en ambos casos. Para probar tal planteamiento gentico-terico, Bingham et al. (1994) seleccion poblaciones di-allicas derivadas de la duplicacin gamtica de diploides para eliminar la posibilidad de locis tri- y tetra-allicos, encontrando que el fenmeno de heterosis en alfalfa 4x puede ser debido a un incremento progresivo en las interacciones gnicas complementarias involucrando alelos favorables con efectos aditivos en bloques de ligamientos (linkats). La interaccin gnica complementaria ocurre cuando los alelos dominantes en loci heterocigoticos, el cual afecta el mismo parmetro, complementan uno con otro enmascarando los alelos deletreos recesivos en un respectivo loci (epistasis). Por lo tanto, la ocurrencia de interacciones gnicas complementarias es mayor en 4x que en 2x, ya que las segregaciones tetrasmicas de bloques de ligamientos que contienen alelos dominantes favorables en repulsin producen interacciones que no son posibles en diploides. La mayor interaccin gnica complementaria en alfalfa 4x, nos permite explicar los resultados que se han obtenido con el uso de marcadores de ADN, indicando que el rendimiento en alfalfa 4x responde favorablemente a la diversidad gentica en lugar de la seleccin inter-poblacional o inter-familial (Riday y Brummer, 2005). Recientemente, se ha encontrado que la secuencia alelica selectiva de M. truncatula, leguminosa modelo para estudios genmicos, puede emplearse tambin para estudios de diversidad genetica en M. sativa 4x y 2x. Claramente la tecnologa de marcadores moleculares tiene mucho que ofrecer al mejoramiento genetico de alfalfa. El reto seria identificar caracteres morfofisiologicos en un rango amplio de climas, tipo de suelos, y condiciones de manejo al cual la alfalfa esta sujeto en el Valle de Mxico, que esten asociados a marcadores moleculares selectivos. Investigadores de la Fundacin Samuel Roberts Noble en Ardmore,

Oklahoma, han desarrollado diversas estrategias de construccin de marcadores polimrficos codominantes, a partir de EST (Expressed Sequence Tag). Este equipo de investigacin nos ha proporcionado la secuencia de marcadores EST-SSR en M. truncatula, con el objeto de caracterizar el material gentico descrito en esta propuesta y para futuras investigaciones construir mapas genticos que puedan localizar regiones genmicas asociadas con caracteres de importancia agronmica y zootcnica. Programas de Mejoramiento y Seleccin en Alfalfa En el mejoramiento de alfalfa, para maximizar rendimiento, los esfuerzos deben ser hechos con el objeto de minimizar la depresin endogamica, e incrementar la heterocigosidad y heterosis (Brummer, 1999). La seleccin recurrente por medios hermanos, seguido de policruzas de al menos 100 progenitores no relacionados (plantas individuales So, cada uno un genotipo diferente), se ha considerado como el esquema de hibridacin ms comn. Sin embargo, esto ha generado, en primer lugar, un intercruzamiento de pooles genticos de muchas variedades, reduciendo las posibilidades de mejora gentica que deriva a una menor cantidad de alelos favorables con interaccin gnica complementaria. En segundo lugar, la mayor presencia de sintticos, los cuales pudieron ser definidos como cultivares de polinizacin abierta producidos por cruzamiento aleatorio de muchos progenitores (clones o genotipos), y por tanto, con menores posibilidades de emplearse como progenitores en futuros programas de seleccin. Y en tercer lugar, menores posibilidades de generacin de alelos nuevos con potencial gentico de rendimiento o calidad forrajera, debido a la prdida de progenitores en ciclos iniciales. Por tal motivo, esta propuesta propone la identificacion dentro y entre genotipos divergentes, con el objeto de establecer estrategias de seleccin y cruzamiento para cada especie. OBJETIVOS Con base a la revisin de literatura publicada y en previos estudios se ha establecido los siguientes objetivos: 1) Determinar la diversidad gentica de las especies diploides y tetraploides alfalfa (Medicago sativa L.), ampliamente difundidas en el Valle de Mxico.

2) Estimar parmetros genticos cuantitativos y correlaciones genticas de caracteres de importancia agronmica y zootecnia en poblaciones de familias de medios hermanos de alfalfa.

HIPTESIS Los objetivos descritos anteriormente se lograrn mediante la comprobacin de las siguientes hiptesis: 1) La seleccin y mejora gentica de alfalfa, especie forrajera diploides y tetraploides, basan su respuesta a seleccin a la interaccin gnica complementaria 2) Pruebas de seleccin, usando progenitores de amplia base gentica, podran determinar el nmero de alelos y sus frecuencias allicas, con el objeto de determinar esa interaccin MATERIALES Y MTODOS Ubicacin del rea experimental El experimento se realizara en dos etapas: la primera en el invernadero de Forrajes del Departamento de Zootecnia y la segunda en el lote J-116 del Campo Agrcola Experimental Tabla San Juan, de la Universidad Autnoma Chapingo, en Chapingo, Estado de Mxico, con ubicacin geogrfica en las coordenadas 1929 latitud Norte y 9854 de longitud Oeste, a una altura de 2250 msnm (Garca, 1988). Clima El clima de la regin de Chapingo donde se realizara el experimento, se clasifica segn Garca (1988), con la siguiente formula Cb(wo)(w)(i)g, definido como templado subhmedo con lluvias en verano y una poca de secas en invierno, verano fresco y largo, temperatura media anual entre 12 y 18o C con oscilaciones medias mensuales de 5o C, siendo el mes de mayo el ms caliente y enero el mes ms fro, precipitacin media anual de 750 mm ocurriendo la mxima precipitacin en el mes de julio y la mnima en el mes de enero. Suelo El suelo del rea experimental correspondiente a la segunda etapa pertenece a la variante Nativitas, clasificado por Cachn et al. (1976) con las siguientes caractersticas: pendiente de 2 al 3, estrato superficial de poco espesor, color pardo

grisceo muy oscuro y de textura franco que cambia de migajn arenoso con la profundidad presentando un estrato cementado (tepetate), su fertilidad natural es baja con pobre contenido de materia orgnica y con baja capacidad de retencin de humedad con pH neutro a ligeramente alcalino. Material gentico experimental Los genotipos de alfalfa que se utilizaran sern 8 poblaciones de alfalfa (Medicago sativa L.), cada uno con 10 Familias de Medios Hermanos (Cuadro 1). La siembra con semilla de las accesiones y variedades de alfalfa se realizara en el invernadero de la Seccin de Forrajes del Departamento de Zootecnia, sembrndose en charolas (10x20), en sustrato Peat Moss. Las plntulas sern regadas diariamente y se les dar una aplicacin quincenal de fertilizante 20-30-20 (VerdeAbon) hasta el transplante. Las accesiones y variedades de alfalfa se transplantaran en la tabla San Juan, bajo un diseo de bloques incompletos (laticce rectangular 10x8) con tres repeticiones por localidad. Cada parcela estar constituida de 6 hileras de 4 m, con una separacin entre hileras de 20 cm, de 80 cm entre parcelas y 15 cm entre plantas, teniendo una densidad de 27 plantas por hilera y una densidad total de 162 por parcela, respectivamente. Al establecimiento, se dar una aplicacin de fertilizante de 80-60-60 de N-P-K. Posterior al establecimiento, se dar un corte de homogenizacin y se iniciara la evaluacin al siguiente corte, se realizaran aproximadamente 7 cortes, con una frecuencia entre cortes de acuerdo a la recuperacin y poca en el periodo experimental.

Cuadro 1. Accesiones de Medicago sativa que sern utilizadas en el experimento. Variables de respuesta Altura; se realizaran mediciones de 10 plantas por parcela, medidas de la base del suelo hasta la altura mxima del tallo superior. Numero de tallos; se realizaran conteos de tallos en 10 plantas por parcela. Persistencia; se contaran las plantas por parcela y se calculara la persistencia para cada corte, la cual se realizara de la

siguiente manera: Persistencia (%) = [(plantas por parcela) * (100 %)] / plantas trasplantadas. Peso fresco por planta; se obtendr cortando y pesando la alfalfa de cada parcela y el resultado se dividir entre el nmero total de plantas por parcela. Peso seco por planta; se obtendr por medio del producto de peso fresco por planta y % de porciento de materia seca. Relacin Hoja: Tallo; Se tomara una muestra significativa de cada parcela en cada uno de los cortes y se separara manualmente la hoja y el tallo los cuales sern pesados y se calculara el porcentaje de hoja y tallo. La relacin hoja: tallo se obtendr del peso de la hoja entre el tallo. Rendimiento Fresco de Hoja por Planta; Se obtendr del rendimiento de materia verde por planta multiplicado por el porcentaje de hoja dividido entre cien. Rendimiento Fresco de Tallo por Planta; Se calculara con el rendimiento de materia verde por planta multiplicado por el porcentaje de tallo dividido entre cien. Materia seca; se tomaran muestras por parcela en bolsas de papel previamente identificadas, la cuales se pesaran para obtener la materia verde (MV) y se llevaran a la estufa por 48 horas a 55o C, hasta peso constante y se calculara el contenido de materia seca (MS) de la muestra por diferencia de pesos, de la siguiente manera: % MS = [(grs muestra MS) * (100 %)] / grs muestra MV Anlisis de calidad PROTENA CRUDA. Analizador de Nitrgeno por combustin (Perkin Elmer N-lyzer 2410 Serie II). FDN, FAD. Por el mtodo de Van Soest et al., 1991. Con un analizador automatizado de fibras (Ankom, Mod. 2000). Modelo estadstico A partir de la estimacin de componentes de varianza del modelo estadstico (ANOVA)

anteriormente descrito, se determinarn la heredabilidad en sentido estrecho, correlaciones genticas entre caracteres y loci, y respuesta a seleccin, donde: h2 = 2A / 2GL/ l + 2G Gc = kco2A / 2w + 2 + 2GL + 2G 2G = varianza gentica total h2 = heredabilidad del caracter k = Intensidad de seleccin Gc = kco2A / 4 2AL/ 4l + 14 2A 2 A = varianza aditiva del caracter co2A = covarianza aditiva k = Intensidad de seleccin 2GL = varianza gentica por localidad 2w = varianza dentro parcelas co2A = covarianza aditiva l = localidad 2 = varianza entre parcelas 2AL = varianza aditiva por localidad 2G = varianza gentica total 2GL = varianza gentica por localidad l = localidad 2A = varianza aditiva 2cL = (2w / n) + 2 2w = varianza dentro parcelas n = nmero de individuos 2 = varianza entre parcelas Pgina 6 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES FECHAS PRIMER SEGUNDO PRIMER SEGUNDO SEMESTRE SEMESTRE SEMESTRE SEMESTRE AO 2010 2010 2011 2011 2012

AO 2009 Octubre Noviembre Diciembre Fase 1: siembra en charolas germinadoras, riego, aplicacin de abonos a las plntulas, etc. Fase 2: preparacin del terreno, trasplante de plntulas, aplicacin de abono, control de malezas, riegos, cortes para la evaluacin de rendimiento, calidad, persistencia, etc. Fase 3: anlisis de calidad (Protena cruda, fibra detergente neutra, fibra detergente acida, lignina) Fase 4:

anlisis estadsticos Fase 5: escritura del artculo cientfico y la tesis profesional X X Enero X X X X X X X X X PRESUPUESTO El costo aproximado del proyecto es de $255,000.00, con el siguiente desgloce financiero: Personal $30,000.00 Materiales de campo, agroqumicos, $50,000.00 herramientas y fertilizantes Materiales y reactivos de laboratorio $120,000.00 Cobertura por movilizacin

$40,000.00 Servicios externos de pagos profesionales $15,000.00 Total $255,000.00 El presente proyecto de investigacin es financiado por la Fundacin Hidalgo Produce A.C. (folio 13-2007-0760), y Programa Universitario de Investigacin en Forrajes de la DGIPUniversidad Autnoma Chapingo; bajo la responsabilidad de investigacin del Dr. Pgina 7 X Baldomero Alarcn Ziga, profesor investigador del Departamento de Zootecnia de la Universidad Autnoma Chapingo. LITERATURA Cachn, A. H. A., H. E. Nery G. y Cuanalo, C. H. E., 1976. Los suelos del rea influencia de Chapingo. Colegio de postgraduados. ENA. Chapingo, Mxico. 79 pp. CIMMYT. 2006. Protocolos de laboratorio: Laboratorio de Gentica Molecular Aplicada del CIMMYT. Tercera edicin. Mxico, D.F.: CIMMYT. Garca, E. 1988. Modificaciones al sistema de clasificacin climtica de Kppen (para adaptarlo a las condiciones de la repblica mexicana). 4a ed. Mxico DF. 217 pp. Moreno S. G. y Talbot W. L. M. 2009. Fertilizacin equilibrada de la alfalfa. Departamento Tcnico. Stoller, Argentina. 10pp. Servicio de Informacin Agroalimentaria Y Pesquera (SIAP), 2009. Anuario estadstico de produccin Agropecuaria. http://www.siap.gob.mx/ Van Soest PJ, Robertson JB and Lewis BA. 1991. Symposium: Carbohydrate methodology, metabolism and nutritional implications in dairy cattle. J. Dairy Sci.; 74: 3586-3597. Alarcn-Ziga B.; T. Cervantes-Martnez; I. Sachiko. 2006. Morphological and molecular characterization of alfalfa populations adapted to Central Valley of Mexico. International

Plant Breeding Symposium Honoring John Dudley. CIMMYT. August 20-25th. Mexico City. Pg. 32. Alarcn-Ziga B., E.C. Brummer, K.J. Moore, D. Luth, and J. Robbins. 2004. Quantitative trait loci mapping of forage quality estimators in autotetraploid alfalfa (M. sativa). Plant and Animal Genome XII. The International Conference on the Status of Plant & Animal Genome Research. Jan 14-18. San Diego, Cal. Alarcn-Ziga B., P. Scott, K.J. Moore, D. Luth, and E.C. Brummer. 2004. Quantitative trait loci mapping of winter hardiness metabolites in autotetraploid alfalfa (M. sativa). In: Molecular Breeding of Forage and Turf. Developments in Plant Breeding. Vol. 11. Ed. A. Hopkins et al. Kluwer Academic Pub. Dordrecht, The Netherlands. p. 97-114 Alarcn-Ziga, B.; Cruz-Maya, M.E.; Cervantes-Martnez, T.; Lpez-Reynoso, J.J.; Mendoza-Rodrguez, M.; Peralta-Aban, A. 2005. Genetic Diversity of Mexican Tropical and Temperate Maize. I. Morphological and Molecular Characterization. Plant and Animal Genome XIII. The International Conference on the Status of Plant & Animal Genome Research. Jan 15-19. San Diego, Cal. Alarcn-Ziga B., E.C. Brummer, P. Scott, K.J. Moore, and D. Luth. 2005. Fatty acid identification and quantification in alfalfa taproots and crowns and their relationship to winter hardiness. Crop Science. In press. Brummer E.C., M. Maroof-Shah, and D. Luth. 2000. Reexamining the relationship between fall dormancy and winter hardiness in alfalfa. Crop Sci. 40:971-977. Fenster C.B., and L.F. Galloway. 2000. Population differentiation in an annual legume: genetic architecture. Evolution. 54(4): 1157-1172. Julier B., S. Flajoulot, P. Barre, G. Cardinet, S. Santoni, T. Hughuet, and C. Huyghe. 2003. Construction of two genetic linkage maps in cultivated tetraploid alfalfa (Medicago sativa) using microsatellite and AFLP markers. BMC Plant Biol. 3:9. Pgina 8

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