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Zusammenfassung Kapitel 17

Vom Gen zum Protein


Die Verbindung zwischen Gen und Protein
Gene spezifizieren Proteine
Zellen bauen organische Molekle ber Stoffwechselprozesse auf und ab. Diese Prozesse werden von Enzymen katalysiert. Gene wiederum steuern die Produktion von Enzymen. Fehlt ein entsprechendes Enzym, entsteht ein anderer Phnotyp. Beadle und Tatum experimentierten mit Schimmelpilzen und schlossen daraus, dass ein einzelnes Gen fr ein einzelnes Enzym zustndig ist (Ein-Gen-ein-Enzym-Hypothese). Spter fand man heraus, dass nicht alle Proteine Enzyme sind. Man erkannte auch, dass viele Proteine aus mehreren Polypeptiden bestehen wobei jedes Polypeptid ein eigenes Gen hat. (Bsp. Hmoglobin besteht aus 2 Polypeptiden 2 Gene sind zustndig) Aus der ein-Gen-ein-Enzym-Hypothese wurde somit die ein-Gen-ein-Polypeptid-Hypothese.

Transkription und Translation verbinden Gen und Protein


Die Brcke zwischen Gen und Protein bildet eine RNA. (Sie ist hnlich aufgebaut wie die DNA, hat jedoch an Stelle der Desoxyribose eine Ribose und an Stelle des Thymin (Base) ein Uracil. Zudem liegt die RNA meistens als Einzelstrang vor.) Ihre Aufgabe ist es, die Nukleotidsequenzen der DNA1 in Aminosuresequenzen zu bersetzen.

Nukleotidtripletts bestimmen die Aminosuren


Es gibt 20 verschiedene Aminosuren, doch die DNA besteht nur aus vier verschiedenen Nukleotiden. Deshalb bilden jeweils drei Nukleotide ein Basentriplett (Codon) und sind so fr eine Aminosure spezifisch. Die genetische Sprache wird also als Folge von dreibuchstabigen Codewrtern gelesen. Bei der Transkription wird nur ein Strang des Gens bersetzt; er wird Matrizenstrang (template strand) genannt. Der andere Strang dient ausschliesslich zur Replikation. Welcher Strang als Matrizenstrang dient, ist von Gen zu Gen verschieden.

Entschlsselung des genetischen Codes Nirenberg stellte eine knstliche RNA aus U-Basen her poly-U. Er gab alle 20 Aminosuren, Ribosome, .. dazu. Es entstand ein Polypeptid aus Phenylalanin. Er wusste nun also, dass das Codon UUU fr Phenylalanin steht. Das gleiche wurde dann mit den anderen drei Basen gemacht. Man kannte nun also bereits den Code von vier Aminosuren. Spter gelang es auch, die restlichen Codons zu entschlsseln. Es wurde erkannt, dass nur 61 Tripletts Aminosuren codieren. Die restlichen drei dienen ausschliesslich als Stopcodons. AUG hat eine Doppelfunktion: Es dient als Startcodon, steht aber auch fr Methionin. Somit tragen alle neu gebildeten Polypeptide ein Methionin als erste Aminosure. Diese wird spter teilweise wieder abgetrennt. Da es 61 Codons fr 20 Aminosuren gibt, haben einige Aminosuren mehrere Codes. Diese unterscheiden sich meistens aber nur in der dritten Base. (Tabelle mit Aminosuren und den zugehrigen Codons auf S. 299)

Frhe Entwicklung des genetischen Codes


Der genetische Code ist in fast allen Organismen identisch., egal ob einfaches Bakterium oder komplexer Mensch. Es gibt nur wenige Ausnahmen wie zum Beispiel Mitochondrien und Chloroplasten bei denen einige Codons eine andere Bedeutung haben.

ein Gen besteht aus 100en bis 1000en von Nukleotiden 1

Es ist mglich, einzelne menschliche Gene in Bakterien einzusetzen, so dass diese Bakterien dann ein menschliches Protein synthetisieren. In der Medizin ist das von grosser Bedeutung (Bsp. Insulin).

RNA - Synthese und - Prozessierung


Transkription
Am Anfang eines Gens befindet sich der sogenannte Promoter, der Transkriptionsstartpunkt der aus mehreren Dutzend Nukleotiden besteht. Die TATA Box, eine Basensequenz, die aus vielen Ts und As besteht, ist Teil des Promoters. Die Transkriptionsfaktoren (Proteine) erkennen diese und binden sich an sie. Erst jetzt kann auch die RNA Polymerase binden. Sie beginnt nun die beiden DNA Strnge lokal zu trennen und baut eine mRNA auf, indem sie den einen Strang als Matrizenstrang benutzt (5 3). Spezifische Nukleotidsequenzen der DNA markieren den Beginn (Initiation) und das Ende (Termination) eines Gens. Die gesamte DNA-Sequenz von 100en bis 1000en Nukleotiden einschliesslich Initiatons- und Terminationsequenz wird als Transkriptionseinheit bezeichnet. Sobald ein Stck transkribiert wurde, binden sich die beiden DNA Strnge wieder zusammen. Der neu entstandene Teil der mRNA lst sich also sofort wieder vom Matrizenstrang. Mehrere RNA Polymerasen knnen gleichzeitig ein Gen transkribieren. Sie fahren dann wie in einem Konvoi hintereinander ber die DNA. Das Ende der zu transkribierenden Sequenz wird durch eine Terminationssequenz angezeigt. Kurz nach dieser Sequenz bricht die RNA Polymerase die Synthese ab und entlsst die Pr - mRNA. Bakterien knnen nun sofort mit der Translation weiterfahren doch bei Eukaryoten folgt nun eine Umwandlung der Pr mRNA zur eigentlichen mRNA.

Eukaryotische Zellen verndern die RNA nach der Transkription


Vernderung der Enden Ans 5 Ende der Pr mRNA wird ein modifiziertes Guanosin angehngt ( 5 cap). Am 3 Ende wird ein Poly A Schwanz angehngt (30 200 As). Diese Vernderungen schtzen die mRNA vor hydrolysierenden Enzymen und sind spter fr die Ribosomen ein Andock Signal.

Mosaikgene und RNA Spleissen Die Pr mRNA enthlt viele Sequenzen, die fr die Translation unbedeutend sind (Introns). Dazwischen liegen die wichtigen Sequenzen, die Exons. Die Introns haben an den Enden typische Sequenzen die von den snRNPs erkannt werden. Verschiedene snRNPs bilden zusammen mit Proteinen die Spleissosome. Dieses schneiden die Introns aus der Pr mRNA heraus und verbinden die beiden angrenzenden Exons. (Die snRNPs enthalten RNA. RNA ist hufig in katalytischen Prozessen beteiligt. Ein solches RNA Molekl das als Enzym (also als Katalysator) wirkt, wird Ribozym genannt.) Funktion und Bedeutung der Introns Wahrscheinlich haben Introns einen regulierenden Effekt auf die Zelle. Einige Sequenzen kontrollieren die Genaktivitt. Einige Gene knnen aber auch die Informationen fr mehrere verschiedene Proteine geben, je nach dem, welche Stcke herausgeschnitten werden. Bei der Fruchtfliege wird durch unterschiedliches Spleissen sogar das Geschlecht bestimmt!! Zudem bewirken die Introns, dass die Exons weiter auseinander liegen. Damit wird die Chance fr ein Crossing over und somit fr eine Rekombination grsser. Dieses Mischen von Exons zweier homologer Chromosomen knnte im Laufe der Evolution zu neuen Proteinen mit neuen Aufgaben gefhrt haben (fhren). (Ein Protein besteht aus verschiedenen Domnen. Die einen sind fr die Funktion zustndig, die anderen fr die Verankerung in der Membran, ... Diese Domnen knnen so einzeln ausgetauscht werden.)

Die Protein Synthese


Translation
Die Transfer RNA (tRNA) ist der eigentliche bersetzer. Sie wandelt die Nukleotiden Sprache in die Aminosuren Sprache um. Die tRNA ist, wie die mRNA, eine Transkription eines DNA Abschnittes. Nach der Synthese gelangt sie ins Cytoplasma. Ihre L Form rhrt daher, dass einige Nukleotiden Wasserstoffbrcken zu anderen Nukleotiden des selben Stranges bilden. Am 3 Ende ist die Andockstelle fr die Aminosuren. Am anderen Ende befindet sich das Anticodon, eine Sequenz aus drei Nukleotiden, mit der sich die tRNA an die mRNA bindet. Das Anticodon ist also komplementr zum entsprechenden Basentriplett (Codon). Die dritte Base des Anticodon muss nicht immer genau zu der des Codons passen. Diese sogenannte Wobble Hypothese erklrt, warum zBsp. UUA und UUG im genetischen Code beide fr Leucin stehen. Die vielfltigste tRNA ist diejenige, die ein Inosine (I) an der dritten Stelle hat. I ist eine modifizierte Base die sowohl mit U, C und A Wasserstoffbrcken bilden kann. tRNAs die ihre Aminosure im Ribosom an das Polypeptid abgegeben haben, werden wieder frei und knnen eine neue Aminosure binden. Das Enzym Aminoacyl tRNA Synthetase verbindet die tRNA mit der zugehrigen Aminosure. Die Spaltung von ATP liefert die Energie dazu. Da es 20 verschiedene Aminosuren gibt, gibt es auch 20 verschiedene Aminoacyl tRNA Synthetasen.

Das Ribosom Ribosomen vermitteln whrend der Proteinsynthese die spezifische Bindung von Anticodon und Codon. Es besteht aus einer grossen und einer kleinen Untereinheit, welche beide aus Proteinen und ribosomaler RNA (rRNA) aufgebaut sind (Entstehung im Nucleolus). Erst wenn sich das Ribosom an eine mRNA anlagert, verbinden sich die beiden Untereinheiten. Die Struktur von eukaryotischen und prokaryotischen Ribosomen unterscheidet sich nur wenig, doch dies ist medizinisch sehr relevant: Gewisse Stoffe hemmen prokaryotische Ribosomen in ihrer Funktion, jedoch nicht eukaryotische. Diese Stoffe knnen als Antibiotikum zur Bekmpfung von bakteriellen Krankheiten eingesetzt werden. Das Ribosom hat eine Bindungsstellen fr die mRNA und drei fr tRNAs. Die A Stelle hlt die tRNA, deren Aminosure als nchste dem Polypeptid angefgt wird. Die P Stelle hlt die tRNA, deren Aminosure gerade angehngt wird und in der E Stelle befindet sich die tRNA, die ihre Aminosure gerade eben abgegeben hat. Von dort aus verlsst die tRNA das Ribosom wieder.

Die Polypeptide Synthese Die Synthese erfolgt in drei Schritten (Initiation, Elongation und Termination). Bei allen Schritten sind Proteinfaktoren (meist Enzyme) als Helfer ntig. Initiation: Die 5 cap der mRNA gibt der kleinen Untereinheit des Ribosoms das Signal, sich am 5 Ende anzulagern. Die Initiations tRNA bindet sich dann ans stromabwrts (gegen 3) liegende Initiations Codon. nun bindet sich auch die grosse Untereinheit. Die Initiations Faktoren (Proteine) helfen, diese Teile zu verbinden. Die Zelle liefert dazu Energie in Form von GTP (Guanosintriphosphat). Elongation: 1. Das Codon der A Stelle bindet das Anticodon der entsprechenden tRNA. Ein Elongationsfaktor schiebt dabei die tRNA an die A Stelle. GTP wird verbraucht. 2. Ein rRNA Molekl der grossen Untereinheit wirkt als Ribozym und katalysiert die Bildung einer neuen Peptidbildung zwischen der entstehen Kette und der tRNA in der a Stelle. Die Bindung der Kette zur tRNA in der P Stelle wird dabei aufgelst. 3. Die tRNA an der nun das ganze Polypeptid hngt, geht von der a Stelle in die P Stelle. Die tRNA, welche vorher in der P Stelle war kommt in die E Stelle und verlsst dann das Ribosom. Dieser Prozess erfordert wieder Energie die aus der Hydrolyse von GTP stammt. Das Ribosom wandert von 5 3. Termination: Sobald ein Stopcodon in die A Stelle kommt. wird die Synthese abgebrochen. Das Protein Release Faktor bindet am Stopcodon in der a Stelle. Es bewirkt die Freilassung des Polypeptids. Die Untereinheiten des Ribosoms, die mRNA und der Release Faktor trennen sich.

Polyribosomen Eine mRNA kann gleichzeitig von mehreren Ribosomen bersetzt werden. Wenn sich mehrere Ribosomen hintereinander anlagern, entsteht ein Polyribosom.

Vom Polypeptid zum funktionsfhigen Protein Whrend und nach der Synthese beginnt sich das Polypeptid zu falten. Manchmal folgen dann noch posttranslationale Modifikationen: Dabei knnen Aminosuren chemisch durch Anhngen von Zuckern, Fetten, oder Phosphatgruppen modifiziert werden. Es ist auch mglich, dass sich das Polypeptid in zwei Stcke teilt, oder dass mehrere Polypeptide sich zu einem Protein zusammenschliessen.

Signalpeptide
Die Translation beginnt immer im Cytosol. Wenn das entstehende Protein in der Zelle bleiben soll, wird sie auch dort beendet (freie Ribosomen). Ist das Protein jedoch fr das Endomembransystem oder soll es ganz aus der Zelle ausgeschieden werden (Bsp. Insulin), besitzt es am Anfang ein Signalpeptid (ca. 20 Aminosuren). Sobald dieses bersetzt wurde, wird es vom SRP (signal recognition particle) erkannt und das ganze Ribosom mit mRNA und Polypeptid wird zu einem in der ER Membran eingelagerten Rezeptorprotein gebracht. Dort wird die Synthese von einem nun gebundenen Ribosom fortgefhrt. Wenn das Protein frs Endomembransystem ist, wird es direkt eingebaut. Falls es aus der Zelle heraus soll, geht es durch eine Pore in das ER Lumen. Das Signalpeptid wird abgetrennt. Andere Signalpeptide dirigieren das Protein zu den Mitochondrien, den Chloroplasten oder dem Innern des Kerns. In diesen Fllen wird das ganze Protein von einem freien Ribosom bersetzt.

Die Aufgaben der RNA


Wie wir gesehen haben, gibt es zahlreiche verschiedene Arten von RNA (mRNA, tRNA, rRNA, snRNA, SRP RNA). Sie knnen entweder katalytisch wirken, oder auf Grund ihrer Fhigkeiten, Wasserstoffbrcken zu bauen, strukturelle Aufgaben haben. Die RNA ist eigentlich vielseitiger als die DNA. Auch in Viren spielt sie eine grosse Rolle. (eine bersicht dazu auf S. 311, Tabelle 17.1)

Vergleich der Proteinsynthese von Prokaryoten und Eukaryoten


Die RNA Polymerase ist verschieden; diejenige von Eukaryoten braucht noch Transkriptionsfaktoren um sich an die DNA binden zu knnen. Auch die Ribosomen sind leicht unterschiedlich ( medizinische Bedeutung). Die grssten Unterschiede liegen jedoch darin, dass Transkription uns Translation bei Eukaryoten rumlich getrennt sind (Kern und Cytoplasma). Auch gibt es bei den Eukaryoten eine Pr mRNA (primary transcript) der zur mRNA umgewandelt werden muss. Bei den Prokaryoten findet die Transkription und die Translation gleichzeitig statt: Bakterielle Ribosomen heften sich bereits an die wachsende mRNA und die Translation beginnt, bevor die Transkription beendet ist. Kaum ist das Protein fertig, geht es direkt zu seinem Funktionsort. Es gibt keine Signalpeptide!

Punktmutationen
Eine Punktmutation ist eine chemische Vernderung in wenigen oder gar nur einem Basenpaar eines Gens. Falls sie in den Gameten vorkommt, kann sie weitervererbt werden und somit zur Erbkrankheit werden (Bsp. Sichelzell Anmie). Es gibt zwei verschiedene Typen: Basenpaarsubstitution und Insertion / Deletion. Substitution: Ein ganzes Basenpaar wird ausgetauscht (also auf beiden DNA Strngen). Einige dieser Substitutionen werden silent mutations genannt, d.h. sie haben keine Auswirkungen auf das Protein.. Die ist mglich, wenn es sich um die dritte Base eines Codons handelt (Bsp. CCG und CCA stehen fr die selbe Aminosure). 4

Es ist aber auch mglich, dass eine andere Aminosure eingesetzt wird, dies aber das Protein kaum verndert. Eine falsche Aminosure in einem Protein kann dieses aber auch so verndern, dass es nicht mehr richtig (Missense Mutation) oder gar nicht mehr (Nonsense Mutation2) funktioniert. Insertion und Deletion: Eines oder mehrere Nukleotidenpaare werden zugefgt oder gehen verloren. Diese Auswirkungen sind viel grsser, da es nun eine vllig neue Dreier Aufteilung der Basen fr die Codons gibt (Frameshift oder Rasterschub Mutation). Das ganze Protein wird also verndert was meistens zu einer Nonsense Mutation fhrt.

Mutagene Irrtmer whrend der DNA Replikation, der Reparatur oder der Rekombination knnen zu Substitution, Insertion Deletion oder auch zu Mutationen, die lngere DNA Abschnitte betreffen, fhren. Dies sind sogenannte spontane Mutationen. Mutagene sind physikalische oder chemische Agenten, die Mutationen in der DNA auslsen. UV Strahlen, Rntgenstrahlen und Hitze zhlen zBsp. zu den physikalischen Mutagenen. Ein Beispiel fr ein chemisches Mutagen sind die Basenanaloga. Sie hneln den Basen der DNA und knnen diese somit vertreten, was zu einer inkorrekten Basenpaarung fhrt. Mit dem Ames Test kann die mutagene Aktivitt einer Chemikalie gemessen werden. Dabei wird einer Bakterienkultur der zu prfende Stoff beigefgt. Die Bakterien sind bereits Mutanten; sie knnen kein Histidin produzieren, was fr sie lebensnotwendig ist. Jedes Bakterium das nun eine Kolonie bilden kann, muss zurckmutiert worden sein. Je mehr solche Kolonien entstehen, desto strker mutagen wirkt die beigefgte Chemikalie. Dies wird hufig gemacht um zu prfen, ob ein Stoff krebserregend wirkt. (Die meisten krebserregenden Stoffe sind Mutagene und die meisten Mutagene sind krebserregend!)

Was ist ein Gen?


Ein Gen ist eine Region der DNA, deren schlussendliches Produkt entweder ein Polypeptid oder ein RNA Molekl (zBsp. tRNA) ist (die ein Gen ein Polypeptid Hypothese stimmt also nicht ganz genau). Erst durch die Proteine werden verschiedene Phnotypen ausgedrckt. Gene werden reguliert. Diese Kontrolle der Genexpression macht es mglich, dass sich in mehrzelligen Eukaryoten Zellen mit derselben DNA zu verschiedenen Zelltypen entwickeln knnen. (Bild 17.23 auf S.315 zeigt zusammenfassend alle Schritte der Transkription und Translation)

zBsp. wenn ein Codon zu einem Stopcodon mutierte und das Protein somit viel zu kurz ist 5