Microbiologa General 2007 - 2008

Microbiologa Industrial - I
17 abril 2008

MG2007

BLOQUE III.- MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

Tema 15.- Microorganismos y productos industriales Tema 16.- Aislamiento y caracterizacin de productos de origen microbiano Tema 17.- Produccin microbiana de alimentos Tema 18.- Utilizacin de microorganismos en procesos ambientales

Bibliografa: Biologa de los Microorganismos de Brock, captulo 12 en la 8 edicin Biologa de los Microorganismos de Brock, captulo 30 en la 10 edicin
MG2007

Tema 15.- Microorganismos y productos industriales

Origen de las cepas industriales. Propiedades de un microorganismo industrial Productos industriales de origen microbiano Trofofase e idiofase Caractersticas de los fermentadores a gran escala Cambio de escala en la fermentacin: escalado

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Tema 16.- Aislamiento y caracterizacin de productos de origen microbiano

Antibiticos -lactmicos Produccin de vitaminas y aminocidos Bioconversin microbiana Produccin microbiana de enzimas Clulas inmovilizadas Produccin de cido ctrico

MG2007

Produccin industrial de penicilina

Microbiologa General Curso 2007 2008 21 de abril de 2008

INTRODUCCION
Los antibiticos son productos del metabolismo microbiano que son capaces de matar o inhibir el crecimiento de otros microorganismos a bajas concentraciones. Durante la II Guerra Mundial la demanda de agentes quimioteraputicos para tratar las infecciones de las heridas condujo al desarrollo de un proceso de produccin para la penicilina y al inicio de la era de investigacin sobre los antibiticos. En la actualidad continua siendo una de las reas ms importante de investigacin dentro de la Microbiologa Industrial.
1900-15 Ehrlich concibe la idea de usar compuestos qumicos de sntesis como balas mgicas selectivas hacia microorganismos, pero inofensivas para las personas o animales superiores. En 1909 descubre que el salvarsn es efectivo contra la sfilis. Acua el trmino quimioterapia. Domagk, siguiendo los pasos de Ehrlich, descubre la accin del rojo de prontosilo (la primera sulfamida) sobre el neumococo y otros estreptococos in vivo Woods descubre el mecanismo de accin de las sulfamidas. Estamos en plena Edad de oro de la Quimioterapia de sntesis. Fleming descubre la penicilina, el primer antibitico natural, pero fracasa en su intento de purificarlo. La industria farmacutica se muestra "indiferente. Chain y Florey purifican la penicilina. Se usa en la 2 Guerra Mundial. Comienza la era de los antibiticos naturales Waksman, un microbilogo de suelos, ha iniciado una bsqueda de microorganismos productores de antibiticos. Descubre la estreptomicina. Comienza la poca dorada de los antibiticos (quimioterpicos naturales), y la bsqueda racional rinde decenas de nuevos antimicrobianos procedentes de Actinomicetos, otras bacterias y hongos.

1932-35 1940 1929 1940 1944

INTRODUCCION
Los antibiticos son productos del metabolismo microbiano que son capaces de matar o inhibir el crecimiento de otros microorganismos a bajas concentraciones. Durante la II Guerra Mundial la demanda de agentes quimioteraputicos para tratar las infecciones de las heridas condujo al desarrollo de un proceso de produccin para la penicilina y al inicio de la era de investigacin sobre los antibiticos. En la actualidad continua siendo una de las reas ms importante de investigacin dentro de la Microbiologa Industrial. El nmero de antibiticos descritos contina aumentando debido a los programas intensivos de bsqueda en todos los pases industriales. En 1961 eran conocidos 513 antibiticos, 4076 en 1972, 7650 en 1985 y en 1990 alrededor de 8000. Cada ao se detectan aproximadamente 300 nuevas sustancias con actividad antibitica, de las que el 30-35% son componentes secundarios de las fermentaciones de antibiticos conocidos. Del gran nmero de antibiticos conocidos de origen microbiano, solamente 123 se producan por fermentacin en 1984. Adems, ms de 50 antibiticos se producan como compuestos semisintticos y 3 antibiticos (cloranfenicol, fosfomicina y pirrolnitrina) se producen en forma completamente sinttica.

INTRODUCCION
Los antibiticos son producidos por bacterias y hongos. Entre los hongos, solamente 10 de los antibiticos conocidos se producen comercialmente y solamente las penicilinas, cefalosporina C, griseofulvina y cido fusdico tienen importancia clnica. En las bacterias existen muchos grupos taxonmicos que producen antibiticos. La mayor variedad en estructura y nmero de antibiticos se encuentra en los actinomicetos, especialmente en el gnero Streptomyces. La produccin mundial de antibiticos en 1979 estaba por encima de las 100.000 toneladas por ao. Las ventas brutas anuales, slo en USA, eran de 1000 millones de dlares, con la cefalosporina en la posicin de cabeza, seguida de la ampicilina y las tetraciclinas.

Porcentajes de produccin de diversas familias de quimioterpicos

INTRODUCCION
Los antibiticos son producidos por bacterias y hongos. Entre los hongos, solamente 10 de los antibiticos conocidos se producen comercialmente y solamente las penicilinas, cefalosporina C, griseofulvina y cido fusdico tienen importancia clnica. En las bacterias existen muchos grupos taxonmicos que producen antibiticos. La mayor variedad en estructura y nmero de antibiticos se encuentra en los actinomicetos, especialmente en el gnero Streptomyces. La produccin mundial de antibiticos en 1979 estaba por encima de las 100.000 toneladas por ao. Las ventas brutas anuales, slo en USA, eran de 1000 millones de dlares, con la cefalosporina en la posicin de cabeza, seguida de la ampicilina y las tetraciclinas. Antes de 1960 aproximadamente el 5% de los antibiticos recientemente aislados eran tiles teraputicamente. En los aos siguientes fueron descubiertos nuevos antibiticos a una velocidad aproximadamente constante, pero el porcentaje de los nuevos antibiticos que realmente llegaban al mercado descendi desde el 2,6% entre 1961-1965 al 1% entre 1966-1971. Esto se debe fundamentalmente a un aumento severo en los costes del desarrollo y de las pruebas clnicas, de forma que muchos fabricantes producen solamente aquellos compuestos que claramente muestran un progreso teraputico prometedor. Por trmino medio se necesitan alrededor de 8-10 aos para desarrollar un nuevo antibitico a un coste medio de 10x106 - 20x106 dlares (6 12x106 ). La obtencin de mejores antibiticos se lleva a cabo por modificacin de los compuestos conocidos utilizando medios qumicos o genticos (mutasntesis, fusin de protoplastos, tecnologa del DNA recombinante). Sin embargo, solamente por procesos de Screening pueden esperarse encontrar antibiticos con estructuras bsicas enteramente nuevas, especialmente por la utilizacin de nuevos procedimientos de prueba y por la investigacin en nuevos grupos de microorganismos.

PRODUCCION DE PENICILINAS

Los antibiticos -lactmicos son metabolitos secundarios Los antibiticos -lactmicos se caracterizan por poseer en su estructura el anillo -lactmico que est compuesto por 3 tomos de carbono y 1 tomo de nitrgeno. Los antibiticos lactmicos se pueden dividir en cinco clases diferentes: Penicilinas Clavamas Cefalosporinas Monobactamas Carbapenemas Las penicilinas y cefalosporinas pertenecen a los ms efectivos de todos los agentes teraputicos usados en el control de las enfermedades infecciosas.

PRODUCCION DE PENICILINAS
La penicilina fue descrita por Fleming en 1929. Un grupo de investigacin en Oxford, bajo la direccin de Florey y Chain, la aisl a partir de cultivos de Penicillium notatum en 1940 y la primera aplicacin clnica de la penicilina se realiz en 1941. Las penicilinas son producidas por muchos hongos, particularmente especies de Penicillium y Aspergillus.

Penicillium notatum
Sir Alexander Fleming, 1952
Photograph courtesy of Associated Press

PRODUCCION DE PENICILINAS
La penicilina fue descrita por Fleming en 1929. Un grupo de investigacin en Oxford, bajo la direccin de Florey y Chain, la aisl a partir de cultivos de Penicillium notatum en 1940 y la primera aplicacin clnica de la penicilina se realiz en 1941. Las penicilinas son producidas por muchos hongos, particularmente especies de Penicillium y Aspergillus.

Penicillium notatum
Placa de Petri sembrada con Staphylococcus aureus y contaminada con P. notatum

PRODUCCION DE PENICILINAS
La penicilina fue descrita por Fleming en 1929. Un grupo de investigacin en Oxford, bajo la direccin de Florey y Chain, la aisl a partir de cultivos de Penicillium notatum en 1940 y la primera aplicacin clnica de la penicilina se realiz en 1941. Las penicilinas son producidas por muchos hongos, particularmente especies de Penicillium y Aspergillus.

Fleming

Chain

Florey

PRODUCCION DE PENICILINAS

Las penicilinas naturales son efectivas contra numerosas bacterias Gram +. Son lbiles en medio cido y pueden ser inactivadas por hidrlisis del anillo -lactmico con penicilinasas. Debido a su baja toxicidad pueden ser utilizadas grandes dosis de penicilina, solamente un pequeo porcentaje de pacientes desarrollan alergia (0,5-2%). Los antibiticos -lactmicos son inhibidores especficos de la sntesis de peptidoglicano, componente de la pared celular bacteriana. Son anlogos estructurales de la D-alanil-D-alanina y por ello se considera que estos frmacos se unen a las transpeptidasas a las que inactivan irreversiblemente. Algunas penicilinas son menos efectivas frente a Bacterias G - debido a que la membrana externa bloquea su paso al interior, aunque las penicilinas sintticas y cefalosporinas tienen efecto tambin frente a Bacterias G -.

SITIO DE ACCIN DE LAS PENICILINAS

1.- Estructura qumica

La estructura bsica de las penicilinas es el cido 6-aminopenicilnico (6-APA), que consiste en un anillo tiazolidnico con un anillo -lactmico condensado. El 6-APA lleva una parte variable acilada en la posicin 6.

1.- Estructura qumica

La estructura bsica de las penicilinas es el cido 6-aminopenicilnico (6-APA), que consiste en un anillo tiazolidnico con un anillo -lactmico condensado. El 6-APA lleva una parte variable acilada en la posicin 6.

2.- Biosntesis y regulacin

El anillo -lactmico-tiazolidnico de la penicilina se produce a partir de L-cistena y Lvalina. La biosntesis se produce por medio de un dipptido compuesto de cido L-a-aminoadpico (L-a-AAA) y L-cistena. Subsecuentemente se conecta la L-valina mediante una reaccin de epimerizacin, dando lugar a la formacin del tripptido d-(L-a-aminoadipil)-L-cisteinil-D-valina. El primer producto de la ciclacin del tripptido que puede ser aislado es la isopenicilina N, pero no se conocen las reacciones bioqumicas que conducen a este intermediario. La bencilpenicilina se produce en el intercambio de L-a-AAA (L-a-aminoadpico) con cido fenilactico activado. El 6APA, que no es un producto intermediario de biosntesis, se excreta en ausencia de un precursor de la cadena lateral.

Metabolito secundario

2.- Biosntesis y regulacin

Ruta de produccin de penicilina en Penicillium chrysogenum

2.- Biosntesis y regulacin

SNTESIS DE PENICILINA G Ruta de produccin de penicilina en Penicillium chrysogenum

2.- Biosntesis y regulacin

Se conocen varios mecanismos reguladores en la biosntesis de la penicilina. El aminocido lisina es sintetizado a partir de la va que origina el cido L-a-aminoadpico de forma que la penicilina y la lisina comparten una ruta biosinttica ramificada comn. La lisina inhibe la sntesis de penicilina debido a que inhibe por retroalimentacin a la homocitrato sintasa, un enzima implicado en la sntesis de L-a-AAA. Si el L-a-AAA es deficiente, no puede sintetizarse penicilina. Sin embargo, la retrorregulacin por lisina no parece ser una etapa limitante en la biosntesis de penicilina. La biosntesis de penicilina se ve afectada por la concentracin de fosfato y tambin muestra una clara represin catablica, particularmente por glucosa.

2.- Penicilinas naturales, semisintticas y biosintticas

La estructura bsica de las penicilinas es el cido 6-aminopenicilnico (6-APA), que consiste en un anillo tiazolidnico con un anillo -lactmico condensado. El 6-APA lleva una parte variable acilada en la posicin 6. Si la fermentacin de penicilina se lleva a cabo sin adicin de precursores de la cadena lateral se producen las penicilinas naturales. A partir de esta mezcla solamente es til teraputicamente la bencilpenicilina; los otros compuestos deben ser eliminados durante la etapa de recuperacin del producto. La fermentacin puede ser controlada mejor aadiendo un precursor de la cadena lateral, de forma que solamente se produzca una penicilina deseada. Ms de 100 penicilinas biosintticas han sido producidas de esta forma. En los procesos comerciales, sin embargo, solamente han sido producidas la penicilina G y la penicilina V, y cantidades muy limitadas de penicilina O. Utilizando el cido fenoxiactico, como precursor de la cadena lateral, se consigui la obtencin de penicilina V (fenoximetilpenicilina), penicilina que es particularmente estable en medio cido y que puede, por tanto, suministrarse por va oral al contrario de lo que ocurre con la penicilina G ya que debido a su sensibilidad a los cidos no se puede administrar oralmente puesto que es hidrolizada en el estmago.

2.- Penicilinas naturales, semisintticas y biosintticas

PRODUCCION DE PENICILINAS

PRODUCCION DE PENICILINAS
Amoxicilina

Ampicilina

Ncleo central de la penicilina Ncleo central de las cefalosporinas

2.- Penicilinas naturales, semisintticas y biosintticas

A diferencia de las anteriores, las penicilinas semisintticas incluyen diversas penicilinas obtenidas al aadir qumicamente una gran variedad de cadenas laterales al cido 6-APA. Penicillium chrysogenum puede sintetizar este cido si el medio de cultivo carece de precursores de la cadena lateral. Sin embargo, la produccin de 6-APA en estas condiciones es tan pequea que hace inviable este procedimiento. La deacilacin qumica tampoco es rentable pues este proceso comprende tres etapas que deben llevarse a cabo a baja temperatura y en condiciones anhidras estrictas, requirindose adems varios solventes qumicos. Por estas razones, la produccin industrial del 6-APA necesario para la fabricacin de penicilinas semisintticas se realiza por deacilacin enzimtica de la penicilina G. Este proceso biolgico se basa en la produccin por ciertas bacterias de acilasas que eliminan el grupo bencilo. La deacilacin se realiza en H2O a 37C, lo que reduce considerablemente los costes. Despus de la deacilacin se obtiene una solucin de sales sdicas del cido fenilactico y 6-APA. El fenilactico recuperado se puede utilizar posteriormente para la produccin de penicilina G. Debido a sus mejores caractersticas (estabilidad a la acidez, resistencia a -lactamasas, mayor espectro antimicrobiano), las penicilinas semisintticas han llegado a ser extensamente utilizadas en terapia. Aproximadamente el 38% de las penicilinas naturales producidas comercialmente se utilizan en medicina humana, el 12% en veterinaria y el 43% como material de partida para la produccin de penicilinas semisintticas.

2.- Penicilinas semisintticas

3.- Desarrollo de cepas y de tcnicas de cultivo

La produccin de penicilina por la cepa aislada por Fleming era de aproximadamente 2 u.i./ml; los procesos actuales producen un ttulo de penicilina de aproximadamente 85.000 u.i./ml. Este es un aumento desde 0,0012 g/l hasta 50 g/l e ilustra bien el valor y el poder de un programa de seleccin de cepas. Los primeros procesos para la produccin de penicilina implicaban el crecimiento de Penicillium notatum sobre la superficie de un medio lquido (Czapek-Dox-glucosa). El perodo de incubacin era usualmente de 6-12 das y posteriormente la penicilina se extraa con solventes previa separacin del micelio

3.- Desarrollo de cepas y de tcnicas de cultivo

La mejora del cultivo inicial se produjo en 1943 con el aislamiento de la cepa Penicillium chrysogenum NRRL1951. Este microorganismo era ms adecuado para la produccin en cultivo sumergido que la cepa original, Penicillium notatum.

P. Chrysogenum permiti trabajar en cultivo sumergido empleando lactosa como fuente de carbono y energa, y agua de macerado de maz (corn-steep liquor) como fuente de nitrgeno.
Mediante posterior mutagnesis fue aislada la cepa WisQ176, la cepa original de la lnea de cultivos Wisconsin. WisQ176 fue adoptada por la mayor parte de los fabricantes de penicilina y fue utilizada como cepa original en los distintos programas comerciales de mejora de cepas, acerca de los que se ha publicado poco (secreto industrial). Si bien los aumentos de rendimiento han sido el objetivo principal del desarrollo de las cepas, tambin han sido optimizados otros factores que tienen un efecto sobre la fermentacin y la eficiencia de recuperacin del producto.

3.- Desarrollo de cepas

Los principales avances en el procesamiento han sido obtenidos a travs del screening emprico de mutantes. Hasta mitad de los aos 60 los mutgenos utilizados ms frecuentemente eran los rayos X, mostaza nitrogenada y radiaciones de longitud de onda corta. Ms recientemente han sido utilizados como mutgenos la nitrosoguanidina, los agentes alquilantes y los nitritos. A principios de los 70 la mejora de cepas por el mero uso de la mutacin haba alcanzado su lmite. El descubrimiento de un ciclo parasexual en Penicillium chrysogenum proporcion una forma de utilizar la recombinacin gentica para el desarrollo de cepas. Se describieron diploides heterozigticos que tenan ttulos de penicilina superiores a los de las cepas haploides parentales. Sin embargo, el mayor porcentaje de cepas con produccin superior de penicilina se produjo a partir de los haploides segregantes de los cruces entre mutantes de diferentes lneas. La tcnica de fusin de protoplastos abri un nuevo enfoque en el desarrollo de cepas de alta produccin obtenindose rendimientos del 8% superiores a los obtenidos por mutacin y seleccin. Adems, algunas de las cepas resultantes han tenido mejores caractersticas de crecimiento, como esporulacin ms estable y mejor crecimiento para la produccin del inculo. El uso de la ingeniera gentica para aumentar la sntesis de enzimas que catalizan pasos limitantes, mediante la amplificacin gnica o mejora de la transcripcin, no ha sido todava posible en Penicillium chrysogenum debido a la ausencia de datos biosintticos precisos y a la ausencia de buenos sistemas vector-hospedador. Sin embargo, se ha construido un banco de genes para Penicillium chrysogenum y se ha desarrollado un sistema de transformacin

4.- Mtodos de produccin

La penicilina G y la penicilina V son producidas utilizando procesos sumergidos en fermentadores de 40.000-200.000 litros. Debido a las dificultades en el suministro de oxgeno no pueden ser empleados tanques mayores. La fermentacin de penicilina es un proceso aerbico con una velocidad de absorcin volumtrica de oxgeno de 0,4-0,8 mM/l min. La velocidad de aireacin requerida est entre 0,5-1,0 volmenes de aire (volumen de lquido)-1 min-1 dependiendo de la cepa, del biorreactor y del tipo de impulsor. Para el mezclado se suelen utilizar varios impulsores de tipo turbina (120-150 rpm). El rango de temperatura ptima es de 25-27C. En un esquema tpico de produccin de penicilina el inculo se inicia utilizando esporas liofilizadas. Debido a la gran variabilidad de las cepas de alta produccin, es necesario el mantenimiento cuidadoso de las cepas. La concentracin de esporas (ptima 5x103/ ml) y la formacin de agregados son cruciales para el rendimiento subsecuente. Si se quiere conseguir una velocidad ptima de formacin de penicilina, los agregados (pellets) no deben crecer como bolas compactas sino de una forma suelta. Despus de varias etapas de crecimiento est preparado el cultivo de produccin. En la fermentacin tpica de penicilina existe una fase de crecimiento de unas 40h con un tiempo de duplicacin de 6h, durante la cual se forma la mayor parte de la masa celular. El suministro de oxgeno es crtico en el cultivo en crecimiento ya que el aumento de la viscosidad dificulta la transferencia de oxgeno. Despus de la fase de crecimiento, el cultivo llega a la fase real de produccin de penicilina. Debido al aporte de distintos componentes al medio, la fase de produccin puede extenderse hasta 120-160h.

4.- Mtodos de produccin

4.- Mtodos de produccin

Actualmente la extraccin con solventes es la base para la separacin y purificacin de la penicilina. El primer paso consiste en separar el micelio del medio de cultivo empleando un filtro rotatorio a vaco tipo cilndrico. El filtrado rico en penicilina es luego enfriado en un intercambiador de calor a 0 - 4 C con el objeto de disminuir la degradacin enzimtica y qumica durante las etapas de extraccin posteriores. Las penicilinas G y V son cidos fuertes (pKa entre 2.5 - 3.1). Las formas cidas son solubles en muchos solventes orgnicos y se pueden extraer con un alto rendimiento en acetato de amilo o de butilo a pH 2.5 - 3.0. La extraccin se puede realizar en operaciones continuas, a contracorriente en extractores centrfugos en etapas mltiples, a temperaturas de 0 - 3 C. Otra posibilidad es el empleo de mezcladores estticos o decantadores, los cuales tienen en menor costo de inversin. Se debe tener en cuenta que tanto la penicilina G como la V se degradan en medio cido con una cintica de primer orden a una velocidad proporcional a la temperatura y recproca con respecto al pH. Esto hace que la vida media en condiciones de eficiente extraccin en medio cido sea muy reducida. Sin embargo como la forma V en tales condiciones es ms estable que la G, si el objetivo es obtener 6-amino penicilnico (6-APA) la produccin de penicilina V es ms aconsejable.

4.- Mtodos de produccin

La extraccin de penicilina se puede realizar en una o ms etapas sucesivas, con una acidificacin del caldo filtrado con H2SO4 o H3PO4 al 10% P/V y con el agregado de un agente surfactante (0,003 - 0,1% P/P, en el solvente), realizndose la extraccin y concentracin en extractores centrfugos. Dependiendo de las especificaciones de uso final, el solvente conteniendo penicilina se puede tratar con carbn para separar pigmentos y otras impurezas. Esta etapa actualmente no se realiza debido a las bajas impurezas de los caldos y a los altos rendimientos obtenidos. La cristalizacin se puede realizar desde la fase acuosa si se desea, siendo los valores crticos las concentraciones de sodio o potasio, la temperatura, la concentracin de penicilina y el pH. En caso de hacerse la cristalizacin a partir de un solvente se requiere tambin un exceso de Na+ o K+ , siendo los cristales recuperados en un filtro rotatorio a vaco. Estos cristales son lavados y presecados con un solvente voltil que tambin separa impurezas coloreadas. El secado definitivo se puede realizar con aire caliente, vaco o calor radiante. La penicilina cristalina G o V as obtenida puede ser empleada como tal o como intermediario que es convertido a 6-APA para obtener nuevas penicilinas semisintticas, cuidando en todos los casos que los productos debern tener un grado farmacutico. El cido 6-APA puede ser obtenido por va enzimtica (penicilinacilasa) o qumica; sin embargo todas estas etapas escapan al alcance de esta monografa, por lo tanto se remite al lector interesado a la bibliografa.

4.- Mtodos de produccin

El medio de un cultivo tpico alimentado puede variar dependiendo de la cepa, y generalmente consiste en: Lquido de maceracin de maiz (4-5% peso seco). Una fuente de Nitrgeno adicional, harina de soja, extracto de levadura o suero. Una fuente de carbono, lactosa. Varios tampones El pH se mantiene constante a 6,5. El cido fenilactico o el fenoxiactico se alimentan continuamente como precursores (0,5-0,8% del total). Los procesos con alimentacin de glucosa o melazas tambin tienen xito. En estos casos las velocidades de alimentacin son de 1.0-2.5 kg*m-3*h-1, con una concentracin de glucosa de 500 kg*m-3. Aproximadamente el 65% de la fuente de carbono metabolizada se utiliza para el mantenimiento energtico, el 25% para el crecimiento y slo el 10% para la produccin de penicilina.

4.- Mtodos de produccin

Produccin de penicilina (x) en cultivos discontnuos. La variacin en biomasa se representa con punto negros

4.- Mtodos de produccin

Produccin de penicilina (x) en cultivos discontnuos. La variacin en biomasa se representa con punto negros

4.- Mtodos de produccin

La principal fuente nitrogenada empleada hasta la dcada del 70 fue "corn steep liquor" debido a que aumentaba los rendimientos del antibitico probablemente al suministrar compuestos como aminocidos, factores de crecimiento, precursores de la cadena lateral, adems de elementos trazas. Sin embargo, dada la variabilidad del producto entre distintas partidas, los problemas de suministro, y tambin debido a la introduccin de precursores especficos de la cadena lateral, las industrias buscaron reemplazarlo. Los productos alternativos son la harina de semilla de algodn, extractos y peptonas, y la harina de soja. Sin embargo en algunos casos estos productos son igualmente variables y tanto o ms caros.

4.- Mtodos de produccin

En 1976 se demostr la importancia de un suministro continuo de amonio (por alimentacin con (NH4)2SO4), que permitiese mantener niveles del mismo de aproximadamente 20 mM. Trabajando en cultivos alimentados y modificando la relacin nitrgeno/carbono en la alimentacin, se comprob que cuando el cultivo estaba limitado en nitrgeno cesaba la produccin de penicilina, la cual se restableca al ser la fuente de carbono la limitante. El requerimiento de grandes cantidades de NH4+ podra reflejar su necesidad para la sntesis de glutamato, el cual es requerido para producir valina y cistena. El azufre se incorpora como (NH4)2SO4 y con la fuente de nitrgeno orgnica (extractos, peptona). El fsforo en forma inorgnica se adiciona como sales de fosfato y se aconseja mantener su concentracin entre 250 y 500 mg l-1 con alimen tacin continua. Adems se debe tener en cuenta que el "corn-steep liquor" es una fuente importante de fsforo. Si se desea obtener un determinado tipo de penicilina, se debe incluir inicialmente, o bien por alimentacin en los medios, una cantidad relativamente grande de precursor. El requerimiento terico de fenilacetato sdico, es 0.47 g g-1 de penicilina G cida, y de fenoxiacetato de sodio, 0.50 g g-1 de penicilina V cida.

4.- Mtodos de produccin

Se ha intentado la produccin de penicilina por fermentacin continua, pero ha sido difcil debido a la inestabilidad de las cepas de produccin. Como alternativa se ha sugerido un sistema de "tanque de llenar y sacar (feed batch). En este procedimiento el 20-40% del contenido de la fermentacin se saca y se reemplaza con solucin fresca de nutrientes; este proceso puede ser repetido hasta diez veces sin reduccin del rendimiento.

4.- Mtodos de produccin

Se est llevando a cabo una intensa investigacin para producir penicilina con clulas inmovilizadas. En un estudio a escala de laboratorio se demostr la ventaja de este enfoque sobre el uso de sistemas discontinuos alimentados, pero esta tcnica no ha sido introducida todava a nivel comercial. La penicilina es excretada al medio y menos del 1% permanece unida al micelio. Despus de la separacin del micelio, la recuperacin del producto se lleva a cabo por medio de dos etapas de extraccin continua en contracorriente del caldo de fermentacin con acetato de amilo o de butilo a 0-3C y pH: 2,5-3,0. El rendimiento es de alrededor del 90%.

Referencias
http://nostoc.usal.es/sefin/MI/tema15MI.html http://www.biologia.edu.ar/microind/producci%C3%B3n_de_penicilina.htm http://www1.us.es/pautadatos/publico/asignaturas/40397/17564/BIOTEC_07-08_TEMA%2010.pdf