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Captulo III DESARROLLO HISTORICO; MICROSCOPISTAS Y CLULA Rodriguez-Pea
CAPITULO III Los Microscopistas y La Clula

Se enfoca este captulo desde el punto de vista del significado de los descubrimientos de personajes que a travs de los tiempos han realizado ensayos, observaciones y planteado hiptesis en torno a las lentes hasta los ms encumbrados descubrimientos que han conducido tanto al desarrollo de instrumentos de observacin y sus tcnicas, como a los grandes descubrimientos de la estructura y funcin de los seres vivos. Se expone acerca de la incertidumbre del invento de las lentes, una breve descripcin de la ptica. El surgimiento del microscopio simple y compuesto, su evolucin, la invencin del microscopio electrnico y su repercusin en el entendimiento de la clula, la aplicacin de diversas tcnicas de preparacin de especimenes, la microscopia de contraste de fase, la microscopia confocal, la microscopia de campo oscuro, la aplicacin de la fotnica para el aumento de la resolucin al microscopio ptico, el STED (Stimulated Emisin Depletion) y 4Pi. Su uso en biologa y los personajes que hicieron observaciones que cambiaron la visin del mundo en torno a los seres vivos conocidos hasta ese momento. El descubrimiento de la Clula, el origen del nombre, los personajes que han contribuido a su descubrimiento y conocimiento, las tcnicas de preparacin, la teora celular y la convergencia de esta disciplina con otras disciplinas biolgicas. Se resea la teora endosimbitica como elemento que permite entender los procesos energticos de la clula y su interaccin con otros organismos. Aunque este punto se trata tambin, con otros matices, en el Captulo XIV Evolucin.
Microscopia y Microscopistas
Microscopia se denomina al campo tcnico del estudio y aplicacin del microscopio desde diversos puntos de vista, con incidencia o aplicaciones en la fsica, la ingeniera, la arqueologa, la qumica y la biologa. A los personajes que han contribuido significativamente con el desarrollo del instrumento y las tcnicas para una mejor observacin y entendimiento de lo que se observa, se les denomina microscopistas. Atendiendo a eso el microscopio (del griego micron, que significa pequeo y escopen, que significa mirar a travs de) es el instrumento que sirve para observar imgenes de objetos aumentadas de tamao. Los microscopistas son los que han hecho posible el surgimiento y desarrollo de la microscopia. En ese sentido se pueden considerar en las siguientes etapas: A) de nacimiento, que no es ms que los inicios de la ptica, el desarrollo del telescopio y del microscopio compuesto hasta 1873; B) moderna, que se remonta a finales del siglo XIX con los trabajos de Ernst Abb (1840-1905) en 1873 y 1884 hasta 1931 con la invencin del microscopio electrnico y C) actual, desde la dcada de 1940.
Aunque la microscopia se aplica en muchas otras disciplinas no biolgicas, se relacionar en este caso con los trabajos que condujeron al descubrimiento y posterior entendimiento de la clula. Su aplicacin es de suma importancia en biologa, pero los principios bsicos que lo rigen caen dentro del campo de las ciencias fsicas, por lo que no debe extraar que para explicar la magnificacin y calidad de la imagen, se acuda a modelos matemticos propios de la fsica. De hecho, la ptica, elctrica, fotnica, corresponden al campo de las ciencias Fsicas. El desarrollo de la microscopia est estrechamente relacionado con obtener o modificar dispositivos que permitan un poder de resolucin que vaya de la mano con el desarrollo del poder de magnificacin. Esto es que no se hace nada con conseguir un equipo con un alto poder de aumento si no se obtiene un alto poder de resolucin, sin el cual la imagen resultante carece de valor cientfico y cualquier interpretacin que se haga de ella no es vlida.
Nacimiento de la Microscopia
Los primeros pasos hacia el nacimiento de la microscopia son los de la observacin precursora de las lentes realizadas por Euclides (590 a.C.) quien estudi y document algunas propiedades de las superficies reflectoras curvas (Gabriel y Fogel, 1955), mientras el matemtico griego Ptolomeo (309-246 a.C.) investiga el problema de magnificacin por medio de superficies curvas. Lucius Annaeus Seneca (4 a.C.-65 d.C.) report que los glbulos de cristal llenos de agua ayudan a ver las cosas que frecuentemente escapan a la vista (http://www.clt.astate.edu/aromero/History%20of %20Biology/CHRONO.HTM consultado mayo 03, 2008). Sin embargo, las bases modernas de la ptica se atribuyen a lbn-al-Haitham (965-1038) conocido en Europa como Alhazen quien tambin es considerado el precursor del renacimiento en Europa ya que propici el encuentro de los trabajos de Aristteles, Platn y Galeno. Sus escritos reflejan la aplicacin del mtodo cientfico mediante la formulacin de hiptesis y teoras, realizacin de observaciones y sometimiento a prueba de las hiptesis formuladas (Moll, 2006) Alhazen, Fsico rabe nacido en Basrah, educado en Basrah y Baghdad, escribi la obra en siete volmenes Kittab Al Manadir (Moll, 2006) traducida al latn como Opticae Thesaurus Halasen Arabis. En la misma se establece el significado del aspecto experimental, que permite probar varias proposiciones relacionadas con la accin de las lentes, al mismo tiempo que intenta establecer los nexos entre las caractersticas anatmicas del ojo con la fsica de la visin. A pesar de su inters en los aspectos matemticos, filosficos y mdicos de la ptica, no hizo ninguna sugerencia acerca de aplicacin prctica de este fenmeno (Magner, 2002), lo que permite visualizar que el cientfico no tiene que cubrir la parte bsica y de aplicacin de su trabajo. Le corresponde el mrito de ser el primer personaje en la humanidad que mostr cmo se forma la imagen en el ojo, utilizando como analoga una cmara oscura. Francis Bacon de Verulam (1561-1626) estudi el desarrollo y la naturaleza de los instrumentos pticos, abord el tema de la ptica y las propiedades de la luz y compar sus puntos de vista con los de Alhazen. Magner (2002) seala que Bacon prest atencin a las propiedades de magnificacin de las lentes y al diseo de lentes fundidos, espejos y magnificadores. Tambin considera que algunos pasajes de sus trabajos parecen describir el telescopio para luego acota que acadmicos modernos sugieren que Bacon se refera ms bien a objetos dentro del lente e ilusiones creadas con secuencia de espejos. Que se dio cuenta de que un hombre viejo, con escasa visin, pudo utilizar lentes curvas de un lado para ayudarse a leer. Anastasius Kircher (1602-1680) escribi Ars Magna Lucis et Umbrae (Kircher, 1645) en el que hace una clasificacin de los microscopios existentes hasta el siglo XVII. Tambin escribi Scrutinium Pestes (Kircher, 1658).
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Este auxilio a la visin utilizando lentes con determinado poder de magnificacin para leer, pudo ser relevante para despertar la curiosidad de diversos seres humanos en torno a la observacin de objetos pequeos. Con las lentes desarrolladas hasta el momento, se inici en Europa medieval de finales del siglo XIII la realizacin de espectculos utilizando un dispositivo con lentes frente a los ojos. Este pudo ser el nacimiento del uso de lentes para la fabricacin de anteojos que hicieran posible mejorar la visin. Magner (2002) seala que el espectculo fue probablemente inventado por un artesano a pesar de que el noble de Florencia, Salvano d`Aramento degli Amati (1317) clam que l fue el inventor del espectculo, mientras que Alessandro de la Espina de Pisa (1313) proclam que l aprendi las tcnicas para hacer espectculo, por lo tanto, comparte el descubrimiento con otros. Natural Magic (Geanbautista de la Porta, 1589) hace referencia a la maravilla del uso de unas lentes extraas que se pueden utilizar para corregir la visin. Si las lentes pudieron ser desarrolladas por artesanos para la realizacin de espectculos, entonces el descubrimiento de las caractersticas que condujeron a la invencin del telescopio, se produjo por serendipia. Todo lo sealado en los prrafos anteriores, la definicin de microscopio y dado que el instrumento ms simple que se conoce como tal es la lupa, no se puede establecer quin lo invent. Si se asumiera el esquema y caractersticas de la lupa utilizada por Antonie van Leeuwenhoek (16321723, Fig.3.1), se le puede atribuir el mrito de haberla mejorado considerablemente, aunque se ver que probablemente Leeuwenhoek utiliz el microscopio compuesto a escondidas. Esto es que se puede determinar qu personajes reportaron haber descubierto algunos aspectos que condujeran a desarrollar instrumentos de microscopia ms sofisticados que se aplicaran al estudio de los seres vivos como forma de conocerlos, entenderlos para producir conocimiento y para su uso prctico.
Fig. 3.1.- Dibujo de Antonie van Leeuwenhoek realizado por JanVerkolje (extrado de
http://en.wikipedia.org/wiki/Anton_van_L eeuwenhoek )
El microscopio compuesto fue inventado en la dcada de 1590 por Zacharias Jansen (158?-1640), hijo de Hans Jansen (-1595). Estos no tenan que ver con la ciencia, se dedicaban a realizar espectculos para entretener al pblico. Los Jansen colocaron lentes en los extremos de un tubo para observar con una magnificacin de 20x (Fig.3.2). Aunque Zacharias pudo haber producido un microscopio, debido a su juventud, es muy probable que su padre le haya ayudado (http://www.bomansystems.com/microscope_histoy.htm). Hans Lippershey (1570-1619) fue el primero en describir el telescopio adems del primero en intentar patentarlo en 1608, pero esta peticin le fue negada por la dificultad que implicara mantenerlo en secreto. Sin embargo, el trmino microscopio se atribuye a Giovanni Faber (1574-1629) en 1625, miembro fundador de la Academia dei Lincei (http://www.bomansystems.com/microscope_histoy.htm). Johannes Kepler (1571-1630) public un trabajo amplio sobre ptica Ad Vitellionem Paralipomena, Quipus Astronomiae Pars Optica Traditur (Kepler, 1604) y tambin public Diopre (Kepler, 1611) en donde sugiri una forma de construir telescopios usando lentes convexos. Giovanni du Pont (1614) utiliza el telescopio de manera invertida para observar cosas pequeas ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?rid=mboc4.table.1721). La descripcin de este instrumento data de 1619 y se atribuye a Cornelius Drebbel (1572-1633), Fsico inventor de la corte de Jacobo I de Inglaterra, famoso por la construccin de telescopios y microscopios, quien public la descripcin precisa de un microscopio simple, presumiblemente despus del diseo realizado por Zacharias Jansen. (http://shl.stanford.edu/Eyes/MICRO_FINI/ drebbel/cornelius_drebbel.htm consultado mayo 03, 2008). Galileo Galilei (1564-1642) en carta escrita al Prncipe Federico Cesi en 1624 le cuenta que le envi un instrumento por medio del cual puede observar de cerca las cosas ms pequeas. Que a travs de este haba visto con infinita admiracin muchos animales, entre los cuales la pulga es la ms horrible. Cabe destacar que el diagrama mas viejo que se conoce de un microscopio se atribuye a Isaac Beeckman (1588-1637) encontrado en su diario en 1625 (Moll, 2006) (Fig.3.3) y que desde el siglo XVII se han producido diversos modelos de microscopio compuesto que pueden ser examinados en http://brunelleschi.imss.fi.it/museum/esim.asp?c=408002 . Mientras que la imagen ms vieja que se conoce al microscopio, titulada Melissographia con una magnificacin de 20x, fue realizada por Johan Friederich Greuter () en 1625 para la Academia dei Lincei (Egerton, 2004c).
Captulo III DESARROLLO HISTORICO; MICROSCOPISTAS Y CLULA Rodriguez-Pea Fig. 3.2. Reproduccin del primer microscopio compuesto hecho por Hans y Zacharias Jansen alrededor de 1590.
Ver detalles para solicitar permiso, si es necesario, para uso fuera de USA.
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Fig. 3.3.- Diagrama ms antiguo que se conoce de un microscopio, del diario de Isaac Beeckman de Middelburg, Holanda, 1625
http://www.euronet.nl/ users/ warnar/leeuwenhoek.html#eel)

(copiado de No tengo el permiso
Cual es la diferencia entonces entre un microscopio compuesto y un telescopio, si se restringen estos trminos a las lentes en los extremos de un tubo hueco? Si se invierte un telescopio y se observa a travs de l, se tiene el microscopio compuesto. El uso documentado del microscopio en Ciencias Biolgicas, debe empezar con las primeras observaciones de seres vivos, realizadas por Jan Swammerdam (1637-1680), Marcelo Malpighi (1628-1694) y Robert Hooke (1635-1703) (Moll, 2006). Leeuwenhoek (1674 y siguiente) realiz mltiples observaciones de seres vivos con una lupa que l construy y que permite ver imgenes aumentadas de tamao unas 200x (Fig. 3.4 ver tambin 3.5). A pesar de su escasa formacin acadmica, hizo descubrimientos importantes que no public como trabajos independientes sino mediante cartas a la Sociedad Real de Londres para reportar sus hallazgos. Las cartas a las sociedades cientficas eran muy usadas en el siglo XVII (Fig. 3.8). Todava se utilizan en muchas revistas cientficas y puede tener el mismo u otro significado. (e.g. cartas al editor en EMBO: http://www.nature.com)
Fig. 3.4.- Reproduccin del microscopio construido por de Leeuwenhoek con el cual hizo los descubrimientos de organismos unicelulares, espermatozoides, glbulos rojos y cloroplastos, entre otros. Sacado de http://www.sciences.demon.co.uk/wav-mics.htm consultado mayo
04, 2008. (confirmar permiso solicitado)
Swammerdam (1668) fue el primero en observar glbulos rojos y de los primeros cientficos en utilizar el microscopio para hacer disecciones para sus estudios de anatoma (ver CaptuloVI: Morfologa, Museos de Historia Natural y Expediciones Cientficas). Hooke (1665), miembro de la sociedad Real de Londres, reporta en su obra Micrographia que observ, a travs de un microscopio compuesto (Fig. 3.6), poros microscpicos en un corte de epidermis de corcho, los llam clula (Fig.3.7), por la analoga con las cuadrculas de los monjes. Aunque a esto se debe el nombre, se sabe que no corresponde al concepto que se usa en biologa, porque son las paredes celulares de clulas vegetales muertas. Dado que Micrographia (Hooke, 1665) se menciona con frecuencia en biologa para referirse al origen del trmino mencionado, es importante destacar que esta obra cubre tambin aspectos de la teora ondulatoria de la luz, el origen orgnico de los fsiles y la anatoma de abejas, entre otras cosas. En torno a los insectos ofrece detalles importantes de sus ojos compuestos, una excelente ilustracin de la pulga (Fig. 3.7) y las alas y patas de la abeja melfera. Probablemente inspirado en Micrographia (Hooke, 1665), Leeuwenhoek puso en juego su curiosidad puliendo lentes y observando a travs de ellos gotas de agua y otros materiales que le permitieron descubrir, entre otras cosas, bacterias, espermatozoides, protozoos, rotferos, larvas de insectos y cloroplastos. Comunic sus hallazgos mediante 375 cartas (Magner, 2002 dice que 400), la mayora publicadas en Phylosophical Transactions of the Royal Society of London (ver Captulo I Edad Media, Antigua, Moderna y Actual), liderada por Hooke y Henry Oldenberg (1615?-1677). Varias de esas cartas, escritas en holands (Dutch) con su puo y letra, no fueron publicadas hasta el siglo XX, tenan diferente extensin y han sido citadas por fecha en Dobell (1960) y Moll (2006). Como era monoglota, solo hablaba holands, y tena que enviar las misivas en idioma ingls consult traductores para hacer las traducciones (Antonie van Leeuwenhoek: A REAPPRAISAL OF LEEUWENHOEK AS MICROSCOPIST AND INVESTIGATOR The Brian J.Ford Science Website consultado 20 de aogsto de 2007). Leeuwenhoek fue introducido a la Sociedad Real de Londres por Regnier de Graaf (1641-1673), miembro de esta institucin que le recomend mediante carta fechada en abril de 1673 y unos meses antes de su muerte a los 32 aos de edad. Seal que se prestara atencin a los resultados de estas observaciones al microscopio. Atendiendo a la misma, el secretario de esta Sociedad
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contact al descubridor de las bacterias y protozoos para indagar en torno a los estudios que este vena realizando. El microscopista respondi con mucho entusiasmo mediante dos cartas amplias en las cuales explicaba sobre sus observaciones (Serafni, 1993). La primera traduccin al ingls de una carta de Leeuwenhoek para la Sociedad Real de Londres fue realizada por Christian Huygens (1629-1695) en 1676, a pedido de su padre Constantijn Huygens (1596-1687). Christian Huygens (1653) construy su primer microscopio, hizo un diagrama del "Aalkijker microscope or Fishglass" (Universiteitsbibliotheek Leiden, Hug 6. Fol. 37r).) e invent el denominado microscopio acutico (Fig. 3.4) alrededor de 1678 y lo public en su libro Oeuvres Compltes de Christian Huygens. Christian Huygens es considerado pionero en el establecimiento de la ciencia moderna (Moll, 2006).
Fig. 3.5.- Microscopio usado por Leeuwenhoek para estudiar la circulacin en anguilla. (copiado de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Van_ %27s_microscopes_by_Henry_Baker.jpg ).
Leeuwenhoek
Para descubrir estos microorganismos Leeuwenhoek se vali de lentes pulidos, muchos microscopios y tcnicas de preparacin que nunca quiso revelar, "las cuales conservar para mi mismo, (Moll, 2006: http://www.euronet.nl/users/warnar/leeuwenhoek.html). Los comentarios y dudas que despert su trabajo en muchos miembros de la naciente comunidad cientfica, muestra que se fragua el principio de que en ciencia todo trabajo es cuestionable hasta que otros puedan repetir y observar lo que se asegura ha sido visto por cualquier cientfico. En el campo de la ciencia, para minimizar el impacto negativo de un fraude, lo primero que asalta es la duda, ya que se debe recordar que ningn cientfico puede decir que hizo un descubrimiento de algo que solo l puede constatar. El trabajo cientfico debe ser repetible bajo las mismas condiciones que dice quien hace el descubrimiento someti su objeto de estudio, aunque luego se introduzcan cambios en el proceso que permitan establecer cuales son las variaciones del proceso o patrn descubiertos. Esta es una de las mayores cualidades de la ciencia.
Figura 3.6. - Representacin grfica del microscopio compuesto utilizado por Hooke (1665). (Micrographia: Hooke, 1665).
Las revisiones sucesivas no eliminan los cuestionamientos que se hagan a los mismos, los cuales no afectan la carrera de ningn cientfico si este no ha incurrido en faltas ticas de plagio, falsificacin o fabricacin de datos. Se hizo necesario que la Sociedad Real de Londres designara dos cientficos, Nehemiah Grew (botnico) y Robert Hooke para que repitieran las observaciones de Leeuwenhoek y las confirmaran como forma de hacerlas crebles. Inicialmente no tuvieron xito, lo que puso en duda este reporte. Luego, Hooke repiti las observaciones en un microscopio que aumentaba 330x y esto permiti a ambos cientficos confirmar el reporte de Leeuenhoek que implic el descubrimiento de las bacterias y protozoos. Dado que la magnificacin alcanzada por Leeuwenhoek se calcula hasta 500x, es probable que l usara microscopios diferentes al que reportaba. Meyer (2000) especula que el microscopio de mano exhibido por Leeuwenhoek probablemente se usaba solo para demostraciones pero que en su trabajo utilizaba uno compuesto, que mantuvo en secreto hasta su muerte (Fig. 3.5). Comprobado que Leeuwenhoek no era un farsante, la Sociedad Real de Londres le dirigi una carta ofertndole alquilarle su microscopio por unos das. Esta oferta fue descartada en los hechos porque nunca envi su valioso instrumento. Las confirmaciones de Grew y Hooke hicieron posible que esta sociedad cientfica declarara a Leeuwenhoek como cientfico, le reconociera el descubrimiento de las bacterias y lo eligiera como uno de sus miembros en 1679. Una actitud de enclaustramiento acadmico como la exhibida por Leeuwenhoek en torno al microscopio usado, no sera bien recibida por la comunidad cientfica actual, que tiene ms bien un sentido de colaboracin para beneficio de la humanidad. La ciencia se considera una actividad social, para beneficio de la humanidad, y quien no es capaz de revelar cmo realiza su trabajo, no tiene derecho a incursionar en la misma. En la actualidad los trabajos que conducen a la produccin de patentes no se socializan hasta tanto se tienen cubiertos todos los aspectos legales de las mismas. De haber aceptado tener estudiantes y ensear su tcnica a otros, probablemente su trabajo hubiese constituido un mayor aporte a la ciencia y un mayor beneficio para la humanidad. El trabajo cientfico que se hace hoy tiende a ser ms abierto y colaborador.
Figura 3.7.- Diagramas realizados por Hooke (1664): A) corte de epidermis de corcho en el cual son evidentes los compartimientos de paredes celulares que mereci el nombre de clula; B) diagrama de una pulga el cual se observan los detalles del cuerpo y los apndices.
Elmer Bendiner califica a Leeuwenhoek como el padre de la microscopia de alto poder y el progenitor de la microbiologa (Ford, 1992). Ford (1992) destaca la preocupacin de Leeuwenhoek por mantenerse informado de los trabajos publicados por filsofos de la poca, lo cual es significativo porque solo poda comunicarse en sueco. De ah que el conocimiento de los trabajos de los filsofos de la poca, producidos en el campo que estaba cultivando, la biologa experimental, le permita hacer comparaciones con otros trabajos como hace un cientfico actualmente. Entre estos filsofos cita a Willi (1645) con Cerebri Anatome; Hooke (1665) con Micrographia; Swammerdam (1669) con Historia Insectivorum Generalis; Redi (1671) con Experimenta circa Generationem Insectivorum; de Graaf (1672) con De Mulierum Oganis Generationi; Grez (1675) con Comparative Anatomy of Trunks; Willoughby (1686) con Historia Piscium. Tomando como ejemplo el prrafo anterior, una consideracin que tiene que hacer un cientfico de hoy es que si no se mantiene al da de los descubrimientos y nuevas propuestas en su campo de
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especialidad, se hundir en un gran atraso y no ser capaz de hacer aportes cientficos relevantes en este campo. De ah que las informaciones ofrecidas por Ford resultan edificantes para entender que el reconocimiento a Leeuwenhoek como cientfico constituy un merecido honor a su dedicacin y aportes al desarrollo de las ciencias biolgicas. Ford (1981) report diversos paquetes de especimenes atados a las cartas de 1674 que Leeuwenhoek envi a la Sociedad Real de Londres. Estos incluyen secciones muy finas de corcho de modo que las paredes celulares se observan con claridad al ser examinadas al microscopio secciones de tejido esponjoso viejo de plantas, partculas de polvo, esporas, caros, granos de polen, semillas de algodn, seccin del nervio ptico de una vaca y muestras secas de infusorios de aguas someras (Magner, 2002 y http://www.brianjford.com/wavintr.htm, consultado 01 de junio de 2008). (Fig. 3.8).
Fig. 3.8.- Especimenes y cartas de Leeuwenhoek enviadas desde Holanda hasta Londres durante el siglo XVII (http://www.brianjford.com/wavintr.htm solicitar permiso)
Sin embargo, hay que destacar que dentro de los mritos de Leeuwenhoek al momento de considerar sus aportes a la ciencia estn que intent establecer la densidad de las poblaciones de microorganismos comparando con entes con un tamao definido, tambin trat con espermatozoides y la poblacin humana y critic trabajos de su poca. Tom una gota de agua (Fig.3.9), la compar con un grano de arena y determin cuantas porciones de este tamao caban en la misma. Razon que si calculaba la densidad de microorganismos existentes en la porcin del
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tamao del grano de arena y lo multiplicaba por el total de pequeas porciones en la gota de agua, obtena que en esta haba unos 27x106 microorganismos. Usando la misma analoga intent calcular la densidad de espermatozoides. Compar los clculos de la cantidad de espermatozoides del bacalao con la poblacin mundial de su poca y estim que en el mundo existan unos 13385 millones de habitantes. Una cifra a todas luces exagerada ya que la poblacin humana actual en el Planeta est cerca de la mitad de esa cifra. Este reporte lo hizo en sus comunicaciones a Nehemiah Grew el 21de febrero y 25 de abril de 1679. Sin embargo, lo relevante aqu es tratar de solucionar un problema que llam la atencin de otros para mejorarlo y aproximarse a la realidad.
Fig. 3.9.- Diagrama que muestra la tcnica utilizada por Leeuwenhoek para determinar tanto la magnificacin como la densidad de organismos en una gota de agua (http://www.euronet.nl/users/warnar/leeuwenhoek.html).
En la actualidad, el hemocitmetro permite hacer conteos de clulas y el micrmetro medir las clulas al microscopio ptico. Los microscopios electrnico y ptico de mayor magnificacin, poseen sensores elctricos que permiten determinar la longitud de cualquier estructura que sea observada a travs del microcopio. Regularmente se ubica una barra con un valor en m o nm. Existen software con los cuales se pueden hacer conteos de clulas, medirlas y determinar su forma (e.g. ) Leeuwenhoek ley con mucho entusiasmo el libro Micrographia Nova de Johannes Fransiscus Griendelio (1687), pensando que iba a aprender algo del mismo. Expuso su frustracin al encontrar que no aportaba nada significativo al conocimiento de la humanidad por la baja calidad de los dibujos de insectos visibles a simple vista pero dibujados sin el cuidado necesario, lo que atribuy a la calidad de las lentes o a un diseo muy pobre (referencia 89 de Moll, 2006).
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El microscopio ptico brind la oportunidad de realizar muchos descubrimientos pero presentaba limitaciones debido al poder de resolucin. Para obtenerlo era necesario resolver tres problemas bsicos:
a) aberracin cromtica (la inclinacin desigual de diferentes colores de la luz que se produce
en una lente). A pesar de que otros patentaron y se beneficiaron de la solucin a este problema, el mismo fue resuelto inicialmente por Chester Hall en la dcada de 1730, quien descubri que si se utiliza un segundo lente de estructura diferente con la propiedad ondulatoria se podan realinear los colores sin perder toda la magnificacin de los primeros lentes. b) aberracin esfrica, es la inclinacin inicial de la luz que choca contra diferentes partes de las lentes. Joseph Jackson Lister descubri en 1839 que, colocando lentes a distancias precisas uno del otro, se poda eliminar la aberracin de todas las lentes anteriores. Ubicando lentes en serie de bajo poder y baja curvatura, se obtena como resultado una aberracin mnima. c) la solucin de Abbe (http://invsee.asu.edu/Modules/size&scale/unit3/microscopy.htm consultado 10 de junio de 20008) que dio origen a la microscopia moderna. Joseph J. Lister (1786-1869), muy interesado en la historia natural, dise el microscopio acromtico en 1826 y comision a W. Tulley para que construyera un prototipo. Tulley pas este plan a un fabricante de instrumentos llamado James Smith para que lo completara y este lo realiz ese mismo ao (http://www.molecularexpressions.com/primer/museum/lister.html consultado 22 febrero 2008). Lister consider que los microscopios disponibles a inicios de 1800 no permitan una resolucin adecuada para observar con claridad las estructuras de clulas animales y vegetales. Esto lo llev a intentar disear y construir un lente acromtico con mejor calidad. Para ello combin lentes de cristales de diferente dispersin y, con el fin de eliminar la aberracin cromtica, mostr que la aberracin esfrica se puede minimizar mediante la separacin correcta de lentes combinados, lo que condujo a la perfeccin del microscopio ptico (http://en.wikipedia.org/wiki/Joseph_Jackson_Lister consultado 22 febrero de 2008). La microscopia de campo oscuro. El examen al microscopio de luz que se consider ms depurado hacia 1840 se produjo con el uso de la diatomea Navicula spencerii, dedicada a Charles Spencer porque fue quien contribuy a la solucin de este problema. Se encontr que la luz oblicua, primer paso hacia la microscopia de campo oscuro, era necesaria para dar mayor resolucin a las estras de esta diatomea. Esta luz irradia desde el espcimen mientras el resto del campo permanece oscuro (Bagnell, 2008). Este tipo de microscopia se hizo popular con la sfilis ya que la espiroqueta que causa esta enfermedad, Treponema pallidum, fue descubierta en 1905 gracias a esta tcnica. Ello gener se utilizara primero para la profesin mdica y luego para la biologa en general. La microscopia de campo oscuro constituye el nico mtodo de campo que no utiliza la iluminacin de Augus Khler (1866-1948). En este no entra luz directa del condensador a las lentes objetivo, a las cuales solo penetra la luz reflejada, refractada o difractada por el espcimen. El condensador de campo oscuro produce un crculo de luz y esta est en un ngulo en extremo oblicuo a la superficie del portaobjeto (de la preparacin), la cual se pone en foco con el espcimen y diverge tanto que ninguna luz directa entra al objetivo. Este tipo de iluminacin constituye un vaco cnico. La iluminacin oblicua utilizada por los antiguos microscopistas para dar resolucin a N. spencerii proviene de una sola direccin producida por una aguda inclinacin del espejo del microscopio
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hacia un lado. El condensador de campo oscuro suministra iluminacin oblicua de 360 alrededor del espcimen (Bganell, 2008 cap.9). En este caso, la apertura numrica del condensador debe ser mayor a la del objetivo. La Khler (1893) de la Zeiss consiste en una iluminacin uniformemente brillante y libre de sobre iluminacin, que permite al usuario obtener el potencial mximo de la microscopia (http://micro.magnet.fsu.edu/primer/anatomy/kohler.html consultado 30 de mayo de 2008). Esta facilita una resolucin y contraste ptimos al microscopio de luz mediante su alineacin y centrado, organizando las aperturas del microscopio para acoplar mejor las lentes objetivo con la apertura numrica (Callaham, http://www.bio.umass.edu/microscopy/doc/Kohler_Illumination.pdf consultado 9 de mayo de 2008)
Microscopia Moderna
Ernst Abbe (1840-1905, Fig.3.11), considerado el fundador de la microscopia moderna. Escribi en 1893 el libro Microscopia Prctica (Practical Microscopy). Analiz los efectos de la difraccin en la formacin de la imagen al microscopio y mostr cmo optimizar el diseo de este instrumento. Su trabajo gener la definicin de la apertura numrica y la teora de difraccin de la formacin de la imagen (Bagnell, 2008). Abbe (1873, 1884) estableci que la resolucin de la imagen viene dada por la forma en que se produce la difraccin de la luz a travs de los especimenes y por medio de lentes objetivo (Inou, 2006) y que los lmites de resolucin del microscopio ptico estaban alrededor de 200nm (0.2m). Defini el papel de la apertura de las lentes objetivo y condensador en la resolucin de la imagen y las condiciones necesarias para disear un lente cuya resolucin fuera el lmite de la difraccin, que no estuviera limitada por la aberracin cromtica y esfrica. Schickore (2007) considera que la microscopia cientfica moderna inici alrededor de 1830 cuando Joseph Lister describi e imprimi un sistema de lentes que minimiza las aberraciones que afectaban a los primeros microscopios. El microscopio de Lister constituy la fusin que produjo una explosin de los trabajos sobre la naturaleza de los tejidos y prepara el camino para determinar la forma en que en el futuro se abordara el papel de las bacterias como agentes de enfermedades (Bracegirdle 1977:191 en Schickore, 2007: http://www.indiana.edu/~hpscdept/ASU/SchickoreIntroduction-ed.pdf consultado 7 de enero de 2009).
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Fig. 3.10.- Ernst Abbe (1840-1905).

Abbe invent el objetivo apocromtico (ver aberracin cromtica, Fig. 3.11), las lentes de inmersin, las piezas oculares compensatorias, el grupo de objetivo perfocal y el condensador que lleva su nombre. Su mayor descubrimiento fue la naturaleza fundamental de cmo se forma la imagen al microscopio de luz.
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Fig. 3.11.- Aberracin cromtica de un lente, que fue corregida con el objetivo apocromtico de Abb. (GNU Free Documentation Licence: http:// www.gnu.org/copyleft/).
Las lentes de inmersin se utilizan para compensar la difraccin de la luz. Quien primero sugiri la tcnica de inmersin fue Hooke (1678) en su presentacin Ctedras y Colecciones que public durante ese mismo ao en Microscopium en donde escribi: si tuviera un microcopio con una sola refraccin que permita una mayor claridad y brillo, en el cual, esparciendo un poco de fluido sobre una capa de cristal para ser examinado, llevar esto bajo uno de los glbulos para entonces moverlo suavemente hacia arriba hasta que el fluido toque y se adhiera al glbulo (Hooke, 1678). D. Brewsester sugiri la inmersin de la lente objetivo en un medio lquido, mientras Giovanni Battista Amici (1786-1863) abord el problema de la aberracin cromtica y us agua entre la lente objetivo y el cubreobjeto, lo que constituye una gran mejora para la calidad y brillo de la imagen al microscopio. En 1855 Amici introdujo, en una exposicin en Pars, su objetivo de inmersin en agua que haba construido en 1853. Amici (1816) haba iniciado sus mejoras al microscopio con la publicacin de su trabajo Descrizione di un nuevo micrmetro (http://gbamici.sns.it/eng/pdf/notabiografica.pdf consultado 7 de enero de 2009: l present su artculo Descrizione di un nuovo micrometro < Description of a new micrometer > (Memorie di Matematica e di Fisica della Societ Italiana delle Scienze, Tomo XVII-1816). Esto tuvo una gran influencia en el desarrollo de la microbiologa, ya que permita observar con ms detalle los microorganismos, por lo tanto contribuy significativamente con el entendimiento de su forma y funcionamiento. Robert B. Tolles (1820-1883) construy en 1858 lentes objetivos de inmersin en agua que tenan elementos intercambiables, una cara para agua y una seca. Tolles y Spencer corrigieron la aberracin cromtica proveniente del cubreobjeto utilizando un anillo para mover los elementos centrales de los objetivos de inmersin sin mover los elementos frontales. Tolles patent en 1855 el denominado ocular slido, diseado para eliminar las superficies internas de la lente. Tolles (1858) patent un adaptador binocular para microscopios monoculares. Tolles (1868) fabrica lentes de inmersin para glicerina. Carl Zeiss (1816-1905) fabrica en 1886 una serie de lentes, diseados por Abbe, que permiten a los microscopistas dar resolucin a las estructuras hasta alcanzar los lmites tericos de la luz visible. Antes de continuar, es importante recordar que las lentes que se utilizan para ver al microscopio tienen dos propiedades relevantes que se deben destacar, estas son el poder de magnificacin, que
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no es mas que la capacidad de permitir ver aumentadas de tamao las imgenes y el poder de resolucin, que es la propiedad del lente que hace posible ver separados dos puntos que estn muy prximos entre s. Abbe (1870) invent el aperturmetro, para medir la apertura numrica de los objetivos del microscopio. En 1871 complet los clculos para el diseo de los objetivos del microscopio lo que permiti a la fbrica de microscopios Zeiss manufacturar los objetivos de inmersin acutica que permitan una mayor calidad de la imagen. Dise y present una demostracin prctica que verific e hizo posible su teora de la formacin de la imagen al microscopio basada en la clarificacin de la teora de difraccin, para una mayor audiencia. Esto gener un acoplamiento entre las bases tericas del diseo de microscopios con la del diseo de los telescopios (Masters, 2007).
Principio de ptica.- La magnificacin general viene dada como el producto de las lentes y la
distancia sobre la cual se proyecta:
M = (DM1M2)/250mm
Donde D = longitud de proyeccin del tubo, frecuentemente 250mm; M1, M2 = magnificacin del ocular y el objetivo. 250mm = a la distancia mnima de visin 20/20. La formula aceptada para medir el poder de resolucin viene dada por:
dmin =1.22 0/NAobj + NAcond

Donde dmin es la distancia lateral en el espacio del espcimen o espacio mnimo de un ciclo peridico en el cual se puede resolver o distinguir; 1.22 se obtiene del trabajo de Lord Rayleight (1898) y tiene que ver con un trmino geomtrico relacionado una vista 20/20 (Bagnell, 2008cap7); 0 es la longitud de onda de la luz en el vaco; NA es la apertura numrica o la capacidad de una lente objetivo de concentrar la luz (Inou, 2006). La apertura numrica (NA) (Abbe, 1873) es un valor que se escribe en casi todas las lentes, condensador y objetivo de cada microscopio, que implica su poder de resolucin. A mayor apertura numrica mejor es el poder de resolucin. Bagnell (2008) seala que antes de que Abbe propusiera la formulacin cuantitativa del poder de resolucin, otros como Charles Spencer (fabricante newyorkino de lentes), entendieron de manera intuitiva los principios generales y lo usaron para producir lentes de mayor calidad. El valor de N.A. es la medida de la capacidad de un lente objetivo de concentrar la luz. N.A. = n seno = ngulo subtendido por las lentes (Rack, crack@utk.edu). donde n es el ndice de refraccin y constituye la mitad del ngulo de aceptancia del lente. El ndice de refraccin indica el grado de deflexin de la luz cuando esta entra y sale de un medio. El ndice de refraccin del aire es 1.0 y el mayor ngulo de apertura posible pero no alcanzable es de 180. La apertura numrica mxima para un lente seco es casi 0.95 (La apertura numrica tpica para un objeto seco va desde 0.04 para magnificacin 1x del objetivo hasta 0.95 para 60x del objetivo.). Para lentes en aceite de inmersin el ndice de refraccin puede llegar hasta 1.51, por lo que se puede alcanzar una apertura numrica de 1.4.
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La profundidad de foco (resolucin vertical) es la habilidad de producir imgenes planas a partir de una superficie no plana.
DOF /N.A.
Donde y N.A. ya se mencionaron. La profundidad de foco es incrementada con la incorporacin de la abertura del objetivo, justo un iris que corta hacia abajo la luz que entra al lente objetivo. Sin embargo, esto disminuye la resolucin. Microscopia de contraste de fase.- La Microscopia de Contraste de Fase fue descrita por primera vez por el fsico nacido en Amtersdam, Holanda, Frits Zernike (1888-1966) en 1934 y por el cual mereci el galardn de premio Nobel de Fsica en 1953. Constituye una tcnica de contraste ptico que se puede utilizar para producir imgenes de alto contraste de especimenes transparentes como clulas vivas, microorganismos, cortes finos de tejido y partculas subcelulares como ncleo y otras organelas (http://www.microscopyu.com/articles/phasecontrast/phasemicroscopy.html consultado 01 de marzo de 2008). Se utiliza, igual que el microscopio de interferencia (Lebedeff, 1930), para ver con detalle por primera vez clulas vivas no teidas. En otras palabras, se usa para exagerar las diferencias estructurales entre los componentes celulares, lo que genera que las estructuras dentro de una clula viva no teida sean visibles en alto contraste y con buena resolucin. Georges (Jerzy) Nomarski (1919-1997) descubre y patenta el sistema diferencial de contraste de interferencia para la microscopia de luz que lleva su nombre. Este sistema es importante para el estudio de especmenes y tejidos biolgicos no teidos.
Microscopia Electrnica
Hacia la invencin del microscopio electrnico se debe destacar que H. Bush calcul la trayectoria de electrones a lo largo de un campo magntico y encontr que ese campo magntico de giro corto posee el mismo efecto en el grupo de electrones de la misma manera que ocurre en una lente convexa con una distancia focal definida en un haz de luz (Ruska, 1986). Ernst Ruska (1906-1988) recibi el premio Nobel de Fsica 1986 por la invencin del microscopio electrnico junto a Max Knoll (1897-1969). Dado que la distancia focal de estas lentes electromagnticas puede ser cambiada continuamente por medio a una corriente giratoria, Bush (1927) quera revisar experimentalmente su teora (Ruska, 1986) del uso en 1926 de una bobina magntica como lente. Con el fin de calcular con mayor precisin las propiedades de la mancha de escritura de un oscilgrafo de rayos catdicos producida por un giro corto (short coil) Ruska revis la teora de la lente de Busch, con un arreglo experimental simple pero bajo mejores condiciones experimentales. Encontr propiedades de acercamiento ms satisfactorias de las escalas de imgenes tericas esperadas por Bush. Ruska (1929) someti su trabajo, con imgenes opacas y diferentes poderes de magnificacin de un nodo de electrn irradiado por una abertura de 0.3nm de dimetro que haba sido tomada a travs de un anillo corto o lente electromagntico, a la Facultad de Ingeniera Electromagntica con imgenes opacas con diferentes poderes de magnificacin. Estas constituyen las primeras imgenes pticas documentadas al microscopio electrnico.
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En otras palabras, el desarrollo de la ptica electrnica hace posible que Ruska fabrique el primer microscopio electrnico de rastreo, que apenas permiti una magnificacin de 17x, muy por debajo del mximo que permite un microscopio ptico, pero que mostr que se pueden utilizar bobinas magnticas como lentes electrnicos para la obtencin de imgenes. Ruska (1933), el colaborador ms joven de Knoll en la Universidad Tcnica de Berln, construye el primer microscopio electrnico que excede el poder de resolucin de la luz, denominado Microscopio Electrnico de Transmisin (MET), acelerado a 75kV, que sobrepas los lmites del poder de resolucin del microscopio ptico que es de 200nm e hizo posible una magnificacin de 12,000x. Knoll y Ruska (1932) se aventuraron a pronosticar los lmites de resolucin del microscopio electrnico por lo que supusieron que la ecuacin del lmite de resolucin del microscopio de luz era tambin valida para las longitudes materiales de onda de los electrones. Reemplazaron la longitud de onda de la luz por la de los electrones a un voltaje de aceleracin de 75kv y lo insertaron en la relacin de imagen de apertura de Abbe (2x104 rad). Ruska (1986) establece que esto arroj una resolucin de 2.2 , que resulta relevante porque hubo que esperar 40 aos para obtenerla, debido quizs a que este clculo no fue tomado en serio por la mayora de los expertos de la poca. En 1934 se producen las primeras fotomicrografas de una muestra biolgica al microscopio electrnico (ver Figuras 6-9 en Ruska, 1986), tomada por dos jvenes que no supervivieron a la II Guerra Mundial, Heinz Otto Mller (estudiante de ingeniera electrotcnica) y Friederich Krause (estudiante de medicina). Marton (1934) construy su primer microscopio horizontal con el cual obtuvo una magnificacin relativamente baja pero en 1936 construy un segundo instrumento de columna vertical. Con el fin de ilustrar las vicisitudes por las que puede atravesar quien realiza un descubrimiento para el cual no se conoce una aplicacin segura, que requiere fondos para seguir adelante, se debe citar los dos prrafos que aparecen en Ruska (1986) acerca de que le cost tres aos conseguir apoyo econmico para seguir adelante con sus investigaciones. El Dr. Richard Siebeck, Director de la I Clnica Mdica Caridad de Berlin, el 9 de octubre de 1936, le escribi:
Si estas cosas fueran a ser aceptadas se requerira enfatizar que los avances en el campo de la investigacin en la causa de enfermedades debera ser de inters prctico inmediato para los doctores. Esto afecta significativamente problemas reales relacionados con enfermedades muy diseminadas de crecimiento clnico significativo y de gran importancia para la salud pblica. Si fuera posible que la resolucin del microscopio electrnico excediera los valores por un factor de un ciento, las consecuencias cientficas seran incalculables. Lo que parece atendible en estos momentos, considero que es muy importante, y el triunfo parece estar tan cerca, que estoy preparado y en condiciones de aconsejarlo en el trabajo de investigacin mdica y colaborar en facilitar los recursos de mi instituto.
En 1937 se produce el primer microscopio electrnico de rastreo y en 1939 Siemens provee comercialmente el primer microscopio electrnico. El primer microscopio de rastreo se produjo comercialmente en 1965. A finales de 1930 el microscopio electrnico alcanza una resolucin terica de 10nm que se redujo a 2nm en 1944. Koller et al (1945) publicaron las primeras fotomicrografas de clulas intactas al microscopio electrnico.
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Dentro de la familia de microscopios electrnicos, se pueden destacar el Microscopio Electrnico de Rastreo (MER) y de Transmisin (MET), que no permiten hacer observaciones de muestras vivas por el proceso de preparacin para observar dentro de una cmara al vaco y el Microscopio de Rastreo de Punta de Aguja (SPM) o de tunel que se ha constituido en una familia de microscopios para el trabajo cientfico y tcnico. Microscopio Electrnico de Rastreo.- Los objetos a observar a travs de este son relativamente grandes, muy grandes comparadas con casi todos los microscopios pticos y electrnicos. En este tipo de microscopio, las muestras de tejidos u organismos completos, deben ser sometidas a un proceso de deshidratacin primero con alcohol y luego con el denominado Secado a Punto Crtico para que no se altere su morfologa, es decir para que no se arrugue. Ya seca de manera adecuada, la muestra se coloca en un porta muestra de metal cilndrico o en forma de clavo con cabeza, al cual se le coloca una cinta de doble cara, se coloca el espcimen a observar, se le agrega un poco de tintura de plata para que toque la muestra y la base con el fin de reducir las posibilidades de que se cargue elctricamente y se dae. Regularmente se procede a cubrir con una capa muy fina (en nm) de oro paladio o platino en un aparato especial al vaco, pero si se desea hacer un anlisis de sus componentes se deja sin cubrir. Luego se procede a colocarla en la cmara del MER para hacer vaco y as eliminar o minimizar la posibilidad de interaccin con tomos libres. Se abre el can, que tambin est al vaco, a travs del cual viajan los electrones emitidos desde la parte superior de este. Los electrones dirigidos a la muestra, que han sido acelerados entre 2kv y 40kv, chocan contra esta y son recogidos en un receptor que forma la imagen y la transmite a un monitor, para ser observada y fotografiada si lo que se ve es de inters del investigador o del tcnico que est operando el equipo (Recuerde que esto es para estudios en biologa ya que para otras reas pueden producirse variaciones en preparacin). Microscopio Electrnico de Transmisin.- Las muestras a travs de este microscopio se deben preparar para hacer cortes ultra finos, por lo que se necesitan fijar in situ o inmediatamente se toman, cortarlas en trocitos de 1mm3 aproximadamente. La fijacin se hace con glutaraldehido mezclado con otras sustancias, se lavan con tampones o buffer, se postfijan en tetraoxido de osmio (OsO4), se deshidratan en alcohol absoluto y se incluyen en viales con resina que luego se polimeriza para luego hacer cortes ultrafinos de 70nm, y colocar las lonjas sobre una rejilla con diferente nmero de aberturas, para luego teir los cortes con sustancias electrn densas como el acetato de uranilo y citrato de plata y observar de modo tal que los electrones, acelerados a mas de 75kv atraviesen la muestra y permitan observar la imagen. Microscopio de Rastreo de Punta de Aguja (SPM) (Fig. 3.13).- Se desarrolla luego el microscopio de rastreo de punta de aguja que no utiliza luz ni haz de electrones para producir la imagen de una muestra sino en especie de una aguja exploradora para rastrear hacia delante y hacia atrs, lnea por lnea, sobre la superficie de la muestra. Esta interaccin de la exploracin de punta de aguja con la superficie de la muestra se recoge y agrupa para formar una imagen. El primer miembro de este tipo de microscopio fue el microscopio de tnel de rastreo (scanning tunneling microscope) desarrollado en el Laboratorio de Investigacin de IBM en Suiza por Gerd Binnig y Heinrich Rohrer (entre 1979 y 1981) lo que les hizo merecedores del premio Nobel en Fsica de 1986. Al igual que los microscopios electrnicos, los de rastreo de punta de aguja han conseguido la resolucin atmica, sin necesidad de someter las muestras al vaco que incluso pueden estar en medio lquido. Este tipo de microscopio ha generado la produccin de diversos tipos de microscopios que permiten hacer nano-imgenes tridimensionales de la topografa de una
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superficie as como la determinacin de la friccin, dureza, propiedades trmicas y nanoescala de la muestra (http://invsee.asu.edu/Modules/size&scale/unit3/microscopy.htm).
Figura 3.12.- Principio del Microscopio de Rastreo de Punta de aguja. Ntese la posicin del espcimen, la aguja y la trayectoria para formar la imagen. Con permiso del autor Prof. Joost Frenken
http://www.physics.leidenuniv.nl/sections/cm/ip/group/Principle _of_SPM.htm Tip, punta de la aguja; trajectory, trayectoria; specimen, la

muestra a observar; A, amperaje; V, voltaje.
De este tipo de microscopio existe una gran diversidad que puede ser consultada en http://en.wikipedia.org/wiki/Scanning_probe_microscopy.
MICROSCOPIA DE MUY ALTA RESOLUCIN, SISTEMA CONFOCAL

Microscopia Confocal (Fig. 3.14).- La microscopia confocal constituye una poderosa tcnica de visualizacin de estructuras tridimensionales dada la propiedad de seccionar ptimamente una muestra gruesa (Shi et al., 2004). El principio de seccionamiento ptico fue descrito por Lucas (1930). El concepto base para el microscopio confocal es el punto de apertura o franja confocal y fue desarrollado originalmente por Marvin Minsky (1957), cuando era estudiante doctoral en la universidad de Harvard, y fue patentado en 1961 (Claxton et al.,). Sin embargo, previo a los trabajos de Minsky se produjeron aportes relevantes en las reas de oftalmologa por Goldman (1940) y microfotometra por Koana (1943) y Naora (1951) (Sheppard y Cox, colin@nus.edu.sg). Petran introdujo el microscopio de disco giratorio (Petran y Hadravsky, 1966). La iluminacin estructurada fue descrita por Lukosz (Lukosz y Marchant, 1963). Zworykin y Ramberg (1949) introdujeron por primera vez el concepto de barrido con el microscopio de mancha de vuelo (Sheppard y Cox, colin@nus.edu.sg). Minsky quera obtener imgenes de redes neuronales en preparaciones de tejido cerebral no teido, realizado con el deseo de captar imgenes de eventos biolgicos al momento que estaban ocurriendo en sistemas vivos (Claxton et al.,). Egger y Petran (1968) fabricaron comercialmente un microscopio confocal de multi-beam (mltiples rayos de luz) que utiliza un disco de multicirculacin
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para examinar secciones no teidas del cerebro y clulas de ganglios. Egger desarroll el primer microscopio confocal escaneador mecnico y public la primera imagen de clula conocida a este microscopio (Davidovits y M. D. Egger, 1973). A finales de la dcada de 1970 y en la dcada de 1980, los avances en computadoras y la tecnologa lser trajeron como consecuencia el surgimiento de nuevos algoritmos para la manipulacin digital de imgenes, lo que gener inters en la microscopia confocal (Amos y White, 2003). El uso comercial de este tipo de microscopio se inici en 1987 (Inou, 2006). Claxton et al () destacan las ventajas que ofrece la microscopia confocal en comparacin con la microscopia ptica convencional de campo amplio como son el control de la profundidad de campo, la eliminacin o reduccin de la informacin residual fuera del plano focal y la capacidad de reunir serie de secciones pticas de una muestra gruesa. La clave para este tipo de microscopia es el uso de la tcnica del filtrado espacial para eliminar la luz fuera de foco, la distincin (glare) en especimenes cuyo grosor excede el plano inmediato de foco. La popularidad de este instrumento estriba en que permite obtener una imagen de altsima calidad con relativa facilidad a partir de muestras preparadas para microscopia convencional fluorescente. Su aplicacin en biologa celular reside en la calidad de la imagen de clulas y tejidos, fijados y frescos. Tambin el costo de operacin es ms econmico que el del microscopio electrnico. La microscopia confocal, generalmente se utiliza en estudios de microscopia fluorescente, elimina la luz fuera de foco que proviene del detector, mejora la imagen, usa excitacin multifotnica una de las cuales puede aumentar ligeramente el poder de resolucin. Es importante porque, hasta hace poco, la resolucin ptica estaba gobernada por la barrera de difraccin de Abbe, con el tamao del rea iluminada limitada por aproximadamente 250nm en el plano focal y 500nm en la direccin del eje focal. Esta situacin cambi desde 1990 cuando se desarroll el nuevo concepto del microscopio ptico que mejor la resolucin hasta unos 30nm, rompiendo la barrera de Abbe. Esta tcnica incluye la microscopia 4Pi, microscopia I5M y microscopia de emisin de deplesin estimulada (STED). Microscopia 4Pi, Confocal.- Dentro de la familia de los microscopios confocales, la microscopia 4Pi fue desarrollada por Stefan Hell en la dcada de 1990, basado en las ideas emanadas de su trabajo doctoral (Helms, 2004) (ver T. A. Klar et al., 2000 PNAS 97). Para el uso de la microscopia 4Pi, un pulso de luz (STED) llega al plano focal inmediatamente despus de la excitacin fluorescente y esto fuerza las molculas de la energa excitada a regresar a un estado bajo. Por medio de este mtodo de microscopia ha sido posible aumentar el poder de resolucin a lo largo de un axis ptico desde 500nm a uno entre 70 y 140nm. A pesar de que la barrera de difraccin de Abbe no fue afectada, el concepto del 4Pi permiti a Stefan Hell demostrar la existencia de mltiples probabilidades para desarrollar la microscopia de luz. Cuando trabajaba en su doctorado, Hell produjo imgenes 3D de alta resolucin que muestran la distribucin de protenas dentro del Aparato de Golgi (Klar et al., 2000). A diferencia de los microscopios estndares, el 4Pi posee dos objetivos opuestos. Las ondas de luz de los dos objetivos estn superpuestas de manera que intensifican sus campos en el punto focal (interferencia constructiva). De esta manera, se produce una honda de luz que posee casi una forma cnica y que converge en el punto focal desde casi cualquier direccin. Esto trae como resultado una mejor cobertura de ngulos slidos dentro del 4Pi. La mancha ovalada se convierte en un foco estrecho, casi redondo.
Por otro lado, dos manchas focales pequeas se forman sobre el punto focal inferior. El gran reto durante el desarrollo de este mtodo era cmo mantener este suficientemente pequeo. Se requera encontrar una condicin fsica bajo la cual la intensidad de ambos satlites no fuera mayor
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que el 50% de la mancha focal principal. En este caso, el efecto sobre la imagen se podra corregir. Esto se puede alcanzar con la ayuda de un fotn de excitacin (ver el artculo Microscopy as an Optical Scalpel pp34ff.) a pesar que esto solo intenta ser una solucin pragmtica. Esta fuente de excitacin solo requiere un recurso de lser complejo y es necesario trabajar con radiacin pulsada. El cientfico de Gottingen piensa que ser posible en el futuro disponer de dos fotones de excitacin cuando se est trabajando con microscopia 4Pi, la cual ser ms fcil de manipular. Est convencido tambin que es superior el esfuerzo para aproximarse sistemticamente a la solucin del problema de resolucin y de muchas direcciones. Aproximaciones independientes como microscopia STED y 4Pi pueden ser combinadas y reforzadas mutuamente (Klar et al., 2000). Microscopia de Deplecin por Emisin Estimulada (Stimulated Emission Depletion) o STED, Confocal.- Dentro de la familia de la microscopia confocal, significa realmente destruccin (de una molcula fluorescente) por emisin estimulada. Es una tcnica microscpica que permiti vencer las barreras de la microscopia ptica planteada por Abbe (1873). Esta tcnica microscpica combina los lmites impuestos por la difraccin con la microscopia confocal de rastreo lser y la convencional ptica de profundidad de campo. Utiliza halo de foco lser para iluminar una pequea parte de la muestra y el lser es acoplado a una frecuencia que excita la fluorescencia de un punto en la muestra y la ilumina desde una regin pequea, regin excitada observada por un detector. Su poder de resolucin viene dado por el tamao de la mancha en la cual la esta mancha de excitacin se puede enfocar.
TCNICAS Y ACCESORIOS PARA MICROSCOPIA

Lionel Beale (1826-1906) es un pionero en la coloracin diferencial. En 1852 abri un laboratorio King College para el uso del microscopio. Henry Sorby (1826-1908) desarroll una tcnica similar para material geolgico. William Nichol (1831) prepar secciones finas de madera fosilizada mientras Sobre desarroll las tcnicas de investigacin rutinaria. Sorby (1858) public el trabajo On the Microscopical Structure of Crystals Indicating the Origins of Mineral and Rocks, que sirvi de base para la petrologa. Para poder estudiar objetos al microscopio surgieron diversas tcnicas que implicaron la invencin y produccin de nuevos instrumentos accesorios y tcnicas de tincin: Micrtomo.- Utilizado para hacer cortes muy finos que permitieran que el objeto fuera traspasado por la luz. Adams (1780) y otros inventaron el micrtomo para hacer secciones finas de unos 12.7m (Gabriel y Fogel, 1955:2, ofrecen 1/2000 pulgadas). Retzius (1881) describe muchos tejidos animales con tal nivel de detalle que no ha sido superado por ningn otro microscopista. Durante la prxima dcada, l, Cajal y otros histlogos desarrollaron mtodos de tincin y propiciaron la fundacin de la anatoma microscpica. Para microscopia electrnica de transmisin se usa el ultramicrtomo con el fin de hacer cortes ultrafino, el cual fue producido por primera vez en 1951 por Poter y Blue, utilizando cuchillas de vidrio. En 1954 se produce la primera cuchilla de diamante para el ultramicrtomo. Centrfuga.- Para romper la clula y aislar sus diversas estructuras, se han utilizado diversas tcnicas, una muy importante es la centrifugacin con una centrfuga que consiste en someter la muestra dentro de tubos especiales para esos fines a rotacin en base a un eje que le confiere diversas fuerzas de gravedad a un punto que rompe la membrana celular
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y libera el contenido interno de la clula. Dependiendo de la fuerza a que es sometida la muestra y el medio en el que se haga, las organelas celulares quedan en diferentes secciones de la columna de lquido que permite al cientfico o al tcnico obtener la organela o estructura de que se trate en cantidades apreciables para su estudio aislado. Cmara clara.- Tambin llamada cmara lcida, fue inventada por William Wollaston (17661828). Es un dispositivo para el microscopio ptico, que no se invent para esto, que se utiliza para la ilustracin cientfica que funciona bajo el siguiente principio un tubo telescpico extendido en tres piezas que contienen un prisma de reflexin y lentes de observacin montados en un dispositivo, todo esto atado a una tabla o superficie. El prisma del instrumento inventado por Wollaston (1807) contena cuatro lados, con uno en el ngulo izquierdo, dos en un ngulo de 67.5 y otro en un ngulo de 135. (http://www.aps.org/publications/apsnews/200410/history.cfm consultado 27 de mayo de 2008). Estos datos fueron producto de estudios realizados por Wollaston en los cuales determin los ngulos y distancia de los dispositivos utilizados. La cmara lucida se utiliza con frecuencia como un accesorio de microscopio compuesto, principalmente el estereoscpico, para dibujar organismos pequeos o estructuras de estos que se quieren ilustrar para un trabajo cientfico. A la cmara lcida tambin se asocia el nombre de Amici Robert Koch (1882) usa anilina para teir microorganismos e identificar bacterias que causan tuberculosis y clera. En las dcadas siguientes, otros bacterilogos como Klebs y Pasteur, identificaron los agentes causales de muchas otras enfermedades mediante el examen de preparaciones teidas al microscopio. Lacassagne et al. (1924) desarrollan el primer mtodo autorradiogrfico para localizar polonio en especimenes biolgicos. Charles Philipe Lebrond (1910-2007) desarroll tcnicas autoradiogrficas y demostr que las clulas se renuevan constantemente. Coors (1941) utiliza antibiotics coupled to fluorescent dyes para detectar antgenos celulares. Allen e Inou perfeccionan el video (video enhance) para microscopia de luz 1984 Agard y Sedat usan la deconvolucin computarizada para reconstruir el ncleo politnico de Drosophila 1994 Chalfie y colaboradores introducen la protena verde fluorescente (GFP) como marcador en microscopia Para tener una idea de la magnitud de las medidas utilizadas en microscopia se debe saber los equivalentes en la tabla 2.1.
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Captulo III DESARROLLO HISTORICO; MICROSCOPISTAS Y CLULA Rodriguez-Pea Equivalente unidades Peq. 1m = 100cm 1cm = 10mm 1mm = 103m 1 m = 103nm 1nm = 10 Equivalente potencia 10 1cm = 10-2 m 1mm =10-3m 1 m =10-6m 1nm =10-9m 1 = 10-10m Equivalente decimal 1cm = 0.01m 1mm = 0.001m 1 m = 0.000001m 1nm = 0.000000001m 1 = 0.0000000001m
Tabla 2.1.- Equivalentes de longitudes utilizadas en biologa: cm = centmetro; mm = milmetro; m = micrmetro; 1nm = nanmetro; = ngstrm. Ms que nada, se muestran estos equivalentes para resaltar que cuando usted escribe un artculo cientfico las revistas no le permiten colocar punto a estas abreviaturas. Los puntos se colocarn nicamente cuando se est al final de una oracin o prrafo.
Clula
En la seccin anterior de este captulo se evidenci que el trmino clula se debe a Hooke (1665) pero y el concepto de clula a quien se debe? Para responder a esta pregunta, es importante resaltar que la observacin de verdaderas clulas se debe a Swammerdam (1637-1680) cuando document los glbulos rojos al microscopio y encontr que los embriones de sapo estaban formados por partculas globulares. Leeuwenhoek (1674 y siguiente) report sus hallazgos de bacterias y protozoos en las comunicaciones 6, 13,13, 18 y 18b a Oldenberg entre septiembre de 1674 y octubre de 1676. Observ clulas vivas dentro de lo que hoy se conoce como dominios Bacteria y Eukarya (ver Woese, 1998 y Cox et al., 2008 para detalles sobre estos dominios), dentro de este ltimo observ protozoos, espermatozoides humanos y clulas sanguneas (Dobell, 1960). Leeuwenhoek (1702) descubre y describe Vorticella: se presenta como una campana y en el punto de su abertura redondeada alborota las partculas en el agua y las mantiene en movimiento (Ford, 1992). Como un adelanto a la teora celular, Lamarck (1815 y 1822) escribi: nadie puede tener vida si las partes que contiene no constituyen tejido celular o no estn formadas por tejido celular (http://www.ucmp.berkeley.edu/history/lamarck.html consultado julio 17, 2007). Matthias Jacob Schleiden (1804-1881) botnico nacido en Hamburgo, Alemania, propuso en 1838 que todos los elementos estructurales de las plantas estn constituidas por clulas o sus productos. Tambin describi la relacin de hongos con plantas llamada micorhiza y propuso que las clulas se generaban mediante lo que l llam el citoblasto, descrito como un ncleo de cristalizacin dentro de una sustancia intracelular que luego se alargaba progresivamente hasta convertirse en una nueva clula. Esta teora de la formacin libre de la clula es un remanente de la teora de la generacin espontnea propuesta como una variante intracelular, que fue refutado por Robert Remak (1815-1865), Rudolf Virchow (1821-1902) y Albert Kolliker (1817-1905) cuando establecieron que toda clula proviene de una preexistente (Mazzarello, 1999). Theodore Schwann (1810-1882) fisilogo animal de Alemania, extendi la teora celular a los animales en (1839). Estableci que las partes elementales de todos los tejidos estn formadas por clulas y que existe un principio universal de desarrollo para las partes elementales de los organismos, la formacin de la clula (Mazzarello, 1999). Observ los ncleos de las clulas como lo haba hecho Schleiden en plantas. Schleiden y Schwann proponen la teora celular, que establece que los tejidos estn formados por unidades de clulas nucleadas que son la base del funcionamiento en animales y plantas.
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Entonces el concepto de que la clula es la unidad estructural, fisiolgica y de origen de los seres vivos (Fig.3.13), corresponde a los descubrimientos e hiptesis de Lamarck (1815, 1822), Schleiden (1838), Schwann (1839) y Virchow (1855). Trabajos posteriores a estos permitieron determinar que la clula consta de mltiples estructuras para su funcionamiento que fueron descubrindose en la medida que avanzaban tanto las investigaciones como los instrumentos y tcnicas para poner en evidencia estructuras celulares que no se podan apreciar.
Fig. 3.13.- Representacin de la morfologa de una clula completa.- A (Procariota): 1) Pili; 2) plsmido; 3) ribosomas; 4) citoplasma; 5) membrana plasmtica; 6) pared celular; 7) capsula; 8) nucleoide, DNA circular y 9) flagelo 25
Captulo III DESARROLLO HISTORICO; MICROSCOPISTAS Y CLULA Rodriguez-Pea bacteriano. B (Eukarya): 1) nucleolo; 2) ncleo; 3) ribosoma; 4)vesicula; 5) retculo endoplasmtico rugoso; 6) complejo o aparato de Golgi; 7) citoesqueleto; 8) retculo endoplasmtico liso; 9) mitochondrion; 10) vacuola; 11) citoplasma o citosol; 12) lisosoma y 13) centrolo (dos por centrosoma).
Constituye esto un concepto reduccionista? Bueno, permite que exista un punto unificador en torno a la estructura bsica de los seres vivos y desde ese punto de vista es reduccionista pero cuando se requiere estudiar los seres vivos a otros niveles diferente del celular y se hacen interpretaciones relevantes para otras disciplinas biolgicas en las cuales se considera el todo mayor que las partes, se podra considerar holista. Esto as para que al estudiar discusiones tan interesantes como las de Mazzarello (1999) al debate sobre la historia de la teora celular en donde expresa que la teora celular estimul el acercamiento reduccionista a los problemas biolgicos, no se piense que este concepto excluye elementos holistas que, como dijo (Looijen,1998), son conceptos complementarios ms que mutuamente excluyentes. La clasificacin de la clula en Procaritica y Eucaritica se debe a Caton (1925) basado exclusivamente en la presencia o ausencia de ncleo. Lo que abre el escenario para la clasificacin dualista de los seres vivos en Prokaryota y Eukaryota, como se expone en Whittaker y Margulis (1975) y Mhn (1984) (Taylor, 2003). Sin embargo, el concepto de procariota correspondera a un grupo parafiltico (ver definicin en Captulo VI) Clifford Dobell (1886-1949) consider en 1911 que los organismos unicelulares dentro del reino Protoctista eran acelulares, no unicelulares, bajo el argumento de que l a funcin y organizacin de los protistas unicelulares es equivalente al conjunto de clulas de que est formada una planta o un animal (Scamardella, 1999). Esto refleja una interpretacin del concepto de clula manejado por Hooke (1665) que implicaba nicamente compartimiento, diferente al que se ofrece aqu en trminos estructurales, funcionales y evolutivos, en otras palabras, el concepto que incluye patrones y procesos derivado de las ideas de Lamarck, Schleiden, Schwann, Virchow, Remak y Kolliker El desarrollo de nuevos instrumentos y tcnicas permiti hurgar con detalle en esta estructura microscpica para poner en evidencia sus diferentes estructuras y organelas. Dentro de las tcnicas e instrumentos se deben destacar los objetivos de inmersin, la introduccin del micrtomo, desarrollo de diversos fijadores y colorantes, invencin del microscopio electrnico y las modificaciones mas recientes al microscopio ptico sobrepasando las limitaciones fsicas del poder de resolucin formulado por Abb (1873, 1884). La exploracin interna de la clula permiti entonces descubrir todos sus componentes, describir su morfologa y estudiar su fisiologa. En Ese sentido, la siguiente seccin constituye la historia de la exploracin y descubrimiento de las diversas estructuras celulares y su funcin. Las estructuras a que se hace referencia son la membrana celular, los elementos coloidales del citoplasma, ncleo, aparato o complejo de Golgi, las mitochondria, retculo endoplasmtico, centrosoma, vacuolas, peroxisomas, plastos, ribosomas,
Pared y Membrana Celular

Pared Celular.- Estructura celular no uniforme que se encuentra por fuera de la membrana celular que le da rigidez y forma a la misma. Ha sido identificada y caracterizada en diversos grupos de seres vivos, i.e. Bacteria, Archaea, Eukarya (nicamente en Plantae y Fungii). Fue reportada por primera vez por Hooke (1665) en el diagrama presente en Micrographia y al que se debe el nombre de clula (Fig. 3.8a).
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Dado que los cientficos estimaron que la pared celular era una realidad, no as la membrana celular, muchos de ellos llegaron a considerar que la clula estaba dentro de una especie de vejiga que era parte de la pared celular. Alrededor de 1860, Leydig, de Bary y Schiltz consideraron que la pared celular no es esencial para la clula y jugaron con la idea de las clulas sin membrana. Overton () estableci que existan diferencias entre la pared y la membrana (http://www.seorf.ohiou.edu/~tstork/compass.rose/cell.pages/hcmw.html consultado 16 de junio de 2008). Pared celular en plantas.- En la clula vegetal est compuesta por: A) celulosa (su principal componente) en forma de microfibrillas organizadas, la celulosa es un carbohidrato formado por miles de molculas de glucosa unidas en sus extremos; B) hemicelulosa, polisacrido formado por los azucares Xilosa, arabinosa y manosa (http://www.bio.indiana.edu/~hangarterlab/courses/b373/lecturenotes/cellwall/cellwall .html consultado 16 de junio de 2008) Y C) pectina y pectoglicanos, que conectan transversalmente, tambin polisacridos y glucoprotenas. En general se identifican las denominadas capa media, primaria y secundaria de la pared celular. Pared celular en hongos.- Es variable y esto le confiere una importancia filogentica. La pared celular de hongos ha sido caracterizada por no especialista en hongos como una pared relativamente simple, formada por celulosa y quitina (http://www.palaeos.com/Fungi/ FPieces/ CellWall.html#top consultado 16 de junio de 2008). Constituye el 30% o ms de la masa seca del peso del hongo y es un sistema altamente dinmico que desaparece y se regenera constantemente, dependiendo de las necesidades del momento (Adams, 2004). La pared celular de hongos, est constituida por tres capas: a) una de -glucano (un polmero de glucosa), b) una de -glicano y c) glicoproteinas; adems, puede haber quitina presente (Grn, 2003). Esta pared posee cantidades variables de quitina, en muchos casos la quitina es el componente principal de la pared celular, aunque en otros casos puede estar presente y solo aparecer durante la divisin celular o en estructuras reproductivas. Los administradores de http://www.palaeos.com/ Fungi/FPieces/CellWall.html#top estn renuentes a aportar ms datos por la ausencia de ms detalles, basados en estudios filogenticos de la ultraestructura real en casos particulares. Pared Celular en Bacteria.- En Bacteria, la pared celular no es uniforme, aunque posee una familia de componentes qumicos que la hace nica. En general se puede considerar la pared celular de las bacterias gram positivas y gram negativas. La pared celular de las bacterias gram positivas est formada por capas de pectoglicanos conectadas por puentes de aminocidos, que varan con la especie. Este polmero de peptidoglicanos est compuesto por secuencias alternas de Nacetilglicosamina (NAG) y cido N-acetil-murnico (NAMA). El 90% de la pared celular de las bacterias Gram-positivas, est formada por peptidoglicanos. La pared celular de las bacterias Gram-negativas es mas fina y est constituida solo por 20% de peptidoglicanos (http://medic.med.uth.tmc.edu/path/00001438.htm consultado 16 de junio de 2008). Pared Celular en Archaea.- No todos los representantes del Dominio Archaea poseen pared celular, por ejemplo las especies del gnero Thermoplasma carecen de pared celular. Estos microorganismos se pueden teir con la tincin de gram (- y +). Las Archaea gram positivas que poseen polisacridos en su pared son Methanosarcina, cuyos polisacridos son sulfatados, similar al condroitin sulfato del tejido conectivo de los animales; Halococcus posee polisacridos sulfatados en su pared. Las gram negativas, carecen de la ectomembrana compleja de polisacridos
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encontrados en el dominio Bacteria, en cambio poseen una glicoprotena o subunidades de protenas, dentro de estas estn las Halobacterium, cuya cubierta externa est formada por glicoprotenas y aminocidos acdicos cargados negativamente, que contrasta con la carga positiva de ambientes con gran cantidad de Na+. Las paredes celulares de Mathanolobus, Sulfolobus, Thermoproteus, Deulfurococus y Pyrodictum estn formadas de glicoprotena (capa de glicoprotena S). En Methanomicrobium, Methanococcus, Methanogenium y Thermoncous la pared celular est formada exclusivamente de subunidades de protenas (capa de protena S). En Methnospirillum, la pared celular est compuesta de parches de protenas. Esto permite visualizar la diversidad qumica estructural en la pared celular, que indica que en la enseanza de esta disciplina hay que ser muy preciso cuando se haga referencia a la pared celular, para no incurrir en errores conceptuales, que lleven a los estudiantes a repetir la informacin como una poesa, mas que dominar los conceptos (ver Captulo IX Sistemtica). Membrana Celular.- Franz von Leydig (1821-1908), de Bary y Schiltz jugaron con la idea (hacia 1860) de la clula sin membrana, que se consider durante unas tres dcadas como una realidad. En 1980 el Dr. Rogelio Lamarche Soto (Primer Director del Departamento de Biologa, Universidad Autnoma de Santo Domingo), en su clase de Fisiologa Animal I, se refera a este tema sealando que antes de aceptar la membrana celular como una realidad, los fisilogos hablaban de la supuesta membrana celular ya que para explicar el transporte, el flujo de sustancias hacia dentro y fuera de la clula, deban suponer alguna estructura que trazara los lmites y regulara el paso de sustancias hacia fuera y dentro de la misma. El Dr. Lamarche fue profesor de fisiologa animal durante ms de 40 aos. Pringsheim (1854) report que la epidermis celular se repliega de la pared cuando es expuesta a una solucin hipertnica. De Vries (1884) ampli esta idea y propuso que la membrana celular es responsable del comportamiento osmtico en las clulas vegetales (http://www.seorf.ohiou.edu/~tstork/compass.rose/cell.pages/hcmw.html consultado 16 de junio de 2008). Los trabajos para entender la membrana celular se inician con los estudios de la expansin del aceite en el agua realizado por Benjamn Franklin (1706-1790). Franklin (1774). Agreg aceite en el agua de un charco y not que este se esparca inmediatamente formando un capa fina sobre la superficie hasta que gran extensin del charco se vea liso como un cristal (Tanford, 1989). Estos resultados fueron publicados en Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Este trabajo fue repetido por Lord Raleigh o John William Strutt (1842-1919) en 1890, cuando condujo varios experimentos cuantitativos del aceite en la superficie del agua. Este estudio de Raleight, al que se le prest poca atencin aunque ms que al de Franklin, fue relevante porque midi el rea en la cual se expanda un volumen conocido de aceite, adems del grosor de capa de aceite que se form. Agnes Pockets (1880) comunic a Raleight que ella haba obtenido resultados similares haciendo experimentos en su cocina, lo que gener que este la ayudara a publicar su primer trabajo cientfico. Charles Ernest Overton (1899), cuando trabaja con su tesis doctoral en Botnica en la Universidad de Zurich, descubri por serendipia, una barrera de lpidos entre el citoplasma de clulas eucariticas y el exterior, y adems centr su atencin en la superficie de la membrana celular como la ms accesible para realizar estudios experimentales. Encontr que la capacidad de una sustancia para atravesar la membrana celular estaba relacionada con su naturaleza qumica ya que las sustancias no polares pasaran rpidamente a travs de ella, contrario a lo que se cra entonces de que la membrana era impermeable a toda sustancia excepto al agua. Basado en estos resultados Overton public hiptesis preliminares en donde propona que existe alguna similitud entre la membrana celular y los lpidos como el aceite y que ciertas molculas, es decir los lpidos,
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pasan a travs de la membrana disolvindose en el lquido interior de la membrana (Tanford, 1989). (Eichman, http://www1.umn.edu/twincities/index.php consultado 30 de junio de 2008). Basado en los experimentos de Agnes Pockets pero con un aparato mejorado, Langmuir (1917) publica un modelo de cmo se orientan las molculas de aceite en la interfase agua-aire (Edidin, 2003), el cual propone que las molculas de los cidos grasos forman una monocapa debido a que se auto orientan verticalmente con la cadena de hidrocarbn lejos del agua y la del grupo carboxilo en contacto con el agua. Esto ayud a entender la capa bilipdica. Gorter y Grendel (1925) encontraron una forma de eliminar el contenido de los glbulos rojos para aislar las membranas, a esto le llamaron eritrocitos fantasmas. El anlisis de estos fantasmas revel la presencia de lpidos en cantidad suficiente para rodear dos veces el glbulo rojo. Dedujeron que esto se deba a que la membrana plasmtica est formada por una bicapa lipdica. Sadava (1993) establece que Porter y Grendel (1925) no extrajeron todo el material debido a lo poco depurada de la tcnica en esos tiempos que no les permiti extraer los lpidos y sobreestimaron el rea de superficie de los glbulos rojos, sin embargo estos dos errores les condujeron a conclusiones correctas (hiptesis apoyadas). Estimaron la superficie de un glbulo rojo en unos 100 m2. Por otro lado, Smidt (193-) encontr que si se haca pasar una rotacin de luz polarizada a travs de una pelcula de mielina esto revelaba la presencia de protenas. James F. Danielli () y Davson () estudiaron en las dcadas de 1930s y 1940s las bicapas de triglicrido sobre una superficie acutica y encontraron que se auto-organizaban en base a sus cabezas polares hacia fuera. A pesar de que siempre formaban gotas y la superficie de tensin era mucho mayor que la de las clulas. Sin embargo, cuando se aade protenas, la superficie de tensin se reduce y la membrana se aplana. Esto dio origen a la propuesta del modelo de emparedado de la membrana celular de Danielli y Davson (1935), mediante el cual esta estaba compuesta por una doble capa interna de lpidos cubiertas externamente por una capa de protenas, dentro y fuera de la clula. Para que fuera relevante para facilitar el movimiento de pequeas molculas a travs de la membrana postularon luego la presencia de poros formados por protenas. Sin embargo, J. D. Robertson (1959) cuando observ fotomicrografas al microscopio electrnico no detect la presencia de poros para esos espacios y propuso la hiptesis de que la va que se observaba era solo aparente debido al efecto de banda producido por el tetraoxido de osmio (OsO4) a las protenas y grupos polares de los lpidos. Leonard y Singer (1966) encontraron que alrededor del 30% de las protenas de la membrana se replegaban en una hlice alfa, de lo que se poda inferir que haba muchas protenas esfricas. Esto llev a Singer a estudiar la bicapa de fosfolpidos y encontr que las mismas pueden formar una superficie plana sobre el agua sin la necesidad de cubierta proteica, lo que se obtuvo gracias al mtodo de criofractura (describir), con el cual se pudo apreciar la doble capa de lpidos y los grumos, canales y crestas dentro de la membrana, que mas tarde se determino estaban compuestos por protenas (http://cellbio.utmb.edu/cellbio/membrane_intro.htm consultado 16 de junio de 2008). Propuesto y dominado el modelo del mosaico fluido de la membrana celular por Singer y Nicolson (1972) de S. J. Singer y Garth L. Nicolson (1943-) se podra pensar que reducira el dinamismo y cuestionamientos a los modelos de membrana propuestos hasta la fecha. En este modelo los lpidos se mueven dentro de la doble capa mientras que las protenas se mueven libremente dentro de esta doble capa. Si se revisa la literatura subsiguiente se ver que aument considerablemente. Luego de grandes debates en torno al modelo de membrana (ver Bretscher, 1973) se llega a un consenso de que la membrana celular est compuesta por una bicapa lipdica (Edidin, 2003). Se propuso otro modelo que indica que las membranas pueden ser ms mosaico
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que fluido (Jain y White, 1977). Henderson (1984) encontr que la protena que atraviesa la capa bilipdica es hidrfoba y se acopla de forma tridimensional. Edidin (2003) establece que la importancia del trfico de sustancias a travs de la membrana plasmtica en relacin con su estructura se inicia en la dcada de 1980 (Simona y van Meer, 1988; Brown y Rose, 1992 y Steinman et al., 1983). Se empieza a evidenciar que la membrana lipdica y las protenas juegan varias funciones celulares (Edidin, 1997 y Gheber y Edidin, 1999).
Figura 3.14. Modelo del mosaico fluido de la membrana celular, donde se aprecia que la parte externa de la membrana se presenta en azul claro y la interna en blanco. Ntese la doble capa de lpidos (gris), las protenas integrales y perifricas (morado), el colesterol (naranja), las fibras de la matriz extracelular (azul y morado plido), glicolpidos (verde oscuro) y carbohidratos (verde claro). Sacado de
http://telstar.ote.cmu.edu/Hughes/tutorial/cellmembranes/
conseguir el permiso, utilizar la de Wikipedia.
Solicitar
permiso.
De
no
La criofractura se utiliza en microscopia electrnica para estudiar muestras al microscopio electrnico de transmisin o rastreo, en el primero para hacer rplicas y obtener mayor resolucin en las muestras y as obtener proporciones tridimensionales ultraestructurales de las partes de la clula o en la microscopia electrnica de rastreo para estudiar la estructura tridimensional de las partes de la clula, tejidos, etc. Se congela rpidamente el tejido con nitrgeno lquido y luego se rompe la muestra con un golpe fuerte, esto hace que la clula se quiebre en partes frgiles y evita el corte plano de una cuchilla. Edidin (2003) pronostic un nuevo modelo que integre numerosas caractersticas de la clula Eucaritica. En la actualidad se encuentran muchas publicaciones en las cuales se establecen los diferentes mecanismos de transporte a travs de la membrana y la funcin tanto de los lpidos como de las protenas, globulares y conjugadas. J. Hanstein (1822-1880) acu el termino protoplasto para referirse a la parte interna de la clula. El trmino protoplasto significa todos los componentes de la clula de la planta, con exclusin de la
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pared celular. Su aislamiento se puede efectuar por va mecnica o enzimtica. De acuerdo con Binding (1966) y Bilkey y Cocking (1982) la va mecnica fue la primera que se utiliz para aislarlo (Dovzhenko, 2001) Protoplasma.- Abraham Trembly (1744) obtuvo un material viscoso extrado de plipos acuticos. Otto Frederik Miiller describe una sustancia gelatinosa transparente que sale del interior de un protozoo. Treviranus (entre 1803 y 1811) report el movimiento de un material gelatinoso dentro de clulas grandes de plantas. Lorenz Oken (1810) describe lo que considera la sustancia de las clulas vivas (ver Hall, 1969). Flix Duharding (1835) llam sarcode a la sustancia viva que aisl de las clulas de protozoos que fue descrita por Duharding como una pulpa homognea y gelatinosa sin rganos visibles, ya organizados, Hugo von Molh (1844) encontr en la clula de una planta joven que el ncleo estaba rodeado de un fluido viscoso, con pequeos grnulos al que denomin protoplasma (Ling, 1994). Ferdinand Cohn (1850) estableci que el sarcode que se encuentra en las plantas y los animales es idntico, que constituye el componente primario de la actividad vital. Franz Unger consider al protoplasma como una sustancia proteica compuesta por sustancias nitrogenadas presente en cada animal, sin embargo Cohn y Unger no trataron de reemplazar el nombre sarcode, derivado del estudio de clulas animales con el de protoplasma, derivado del estudio de clulas de plantas. Robert Remak (1852) acua el trmino protoplasma para referirse a la sustancia gelatinosa viviente de clulas animales y plantas. (Ling, 1994) Purkinje () consider esta sustancia como la que sirve para la formacin de los embriones animales mas jvenes. Mientras que Bonaventura Corti (1772) y Treviranus (1807) descubrieron el movimiento peculiar del citoplasma (ver: http://www.cellprotocols.com/history-protoplasmictheory/). Ncleo.- Organela celular que dirige casi todas las actividades celulares que fue observada vagamente por Felice Fontana (1730-1805) en clulas epiteliales en 1781. Franz Bauer (17581840) descubri y describi el ncleo en 1802, aunque fue Robert Brown (1773-1858) quien hizo el aporte ms significativo (Harris, 1999 en Rafalska, 2005). Brown (1833) observaba hojas de orqudeas a partir de las cuales escribe una areola circular simple, generalmente algo ms opaca que la membrana de la clula Esta areola o ncleo de la clula como quizs se debe llamar, no est confinada a la epidermis, no se encuentra nicamente en la pubescencia de la superficie pero en muchos casos en el parnquima o clulas internas del tejido. (Mazzarello, 1999). Esto indica que el trmino ncleo corresponde a Brown (1833) quien tambin descubri el movimiento libre de las partculas en un fluido que hoy lleva su nombre, movimiento browniano. Nageli (1874) en Teora del idioplasma propone que el ncleo es el vehculo de la herencia. En la actualidad se sabe que el ncleo celular est constituido por una membrana nuclear, cromatina, nucleoplasma y nucleolo.
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Figura 3.15. Nucleo celular, su doble membran http://en.wikipedia.org/wiki/File:NuclearPore_crop.svg.png).
el
sistema
de
poros
(sacado
de:
Despus de este descubrimiento de que Brown (1833) Qu ocurri para determinar su funcin? Rafalska (2005) cita a Lasmond y Earnshaw (1998), Spector (2001), Dundr y Mistela (2001) y Platani y Lamond (2004) para sealar que los estudios ms recientes muestran diferentes compartimientos y un creciente nmero de dominios subnucleares en crecimiento dentro del ncleo celular. El ncleo est rodeado por una doble membrana en donde se nota que la membrana ms externa es contigua con el retculo endoplasmtico granular. Los detalles de respuesta a esta pregunta estn en el captulo IV, Gentica y Biologa Molecular. Cmo surge la hiptesis de que el ncleo dirige casi todas las actividades celulares? Si el material gentico se encuentra en el ncleo; Entonces este dirige casi todas las actividades celulares. Cuando se respondieron las preguntas Qu es el material gentico? De qu est formado? Aunque el ADN es la molcula que puede sacar una copia de si misma en el proceso de replicacin, no puede hacerlo sin la existencia de las enzimas (protenas) que a la vez requieren de ARN. Esto muestra que estas molculas constituyen homologas de los seres vivos (la existencia de ellas es una homologa ya que estn formadas por las mismas unidades moleculares agrupadas mediante un mismo patrn) son interdependientes. El cifrado gentico contribuye significativamente a entender el problema ya que desde su descubrimiento por Miescher (1870) hasta este momento del genoma y la biologa molecular, se han respondido preguntas cuyo significado ha generado muchos conflictos. Para descubrir qu constituye el material gentico se pudo acudir a elementos de la lgica, el pensamiento crtico y objetivo. Se presenta la disyuntiva de que las protenas (formadas por 20
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aminocidos) eran ms complejas que el ADN (compuesto montono con cuatro bases nitrogenadas.). Se vio la importancia que represent el ensayo de Griffith (1928) con Pneumcocus, cepa infecciosa y no infecciosa. Avery et al (1944) consideraron que podan dar respuesta a este problema y decidieron aislar ambos compuestos (ver Captulo V). En 1963 se descubre que la membrana nuclear est constituida por una doble membrana yuxtapuestas de lpidos (Tzfira y Citovsky, 2005) con una serie de poros (en clulas animales hay unos 2000 poros) denominados complejo de poros nucleares. Estos poros sirven para el intercambio ce sustancias entre el ncleo y el resto de la clula. Estn formados por dos protenas de membrana integrales (Vasu y Forbes, 2001) y tienen un dimetro funcional (dimetro de apertura) de unos 9nm (Daniel Stoffer: http://www.scripps.edu/~stoffler/proj/NPC/npc.html consultado 4 de septiembre de 2009) de ancho, para permitir el flujo de iones y pequeas molculas y mediar en el transporte selectivo de protenas nucleares, ARN y ribonucleoprotenas particuladas por mecanismos dependientes de energa y una profundidad de unos 200nm. Esto es que son la compuerta del trfico entre el ncleo y el citoplasma de la clula. Vasu, Sanjay K y Douglas J. Forbes. 2001.Nuclear pores and nuclear assembly. Current Opinion in Cell Biology 13: 363-375. Tzfira, Tzvi y Vitaly Citovsky. 2005. Nuclear import and export in plants and animals. Kluwer Academic/Platinun Publishers (http://www.wkap.nl). Landes Bioscience, Texas, USA. Xi+229pp. Moor, H., and Mu hlethaler, K. (1963). Fine structure in frozenetched yeast cells. J. Cell Biol. 17, 609623. Rout, M., and Blobel, G. (1993). Isolation of the yeast nuclear pore complex. J. Cell Biol. 123, 771783. Rout, M., and Wente, S. (1994). Pores for thought: nuclear pore complex proteins. Trends Cell Biol. 4, 357365. Maul, G.G., Price, J.W., and Lieberman, M.W. (1971). Formation and distribution of nuclear pore complexes in interphase. J. Cell Biol. 51, 405418. Jordan, E.G., Severs, N.J., andWilliamson, D.H. (1977). Nuclear pore formation and the cell cycle in Saccharomyces cerevisiae. Exp. Cell Res. 104, 446449. Davis, L.I. (1995). The nuclear pore complex. Annu. Rev. Biochem. 64, 865896. Mitochondria.- Albert von Kolliker (1817-1905) describe las mitochondria (Koliker, 1857) en clulas musculares como grnulos conspicuos alineados entre las miofibrillas de msculo estriado. Altmann descubri un mtodo para teir las mitocondrias con el colorante fusina, lo que permiti descubrir su presencia en casi todo tipo de clula. Las interpret como partculas elementales vivas o bioblastos, presentes en todas las clulas que estudi. Las consider similares a bacterias capaces de vivir de manera independiente. Carl Benda (1857-1933) introdujo el trmino mitochondrion (Benda, 1898) dada su forma de envoltura filamentosa, e hizo observaciones detalladas en torno a la forma y distribucin de esta organela en la clula. Lewis (1914) y Strangeways y Canti (1921) determinaron que las mitocondrias son estructuras muy plsticas que realizan movimientos sinuosos lentos que algunas veces determinan cambios significativos en su forma. Las mitochondria fueron aisladas de la clula mediante centrifugacin diferencial por Hoerr y Bansley (1934), mientras que Claude (194-), Hogeboom, Schneider y Palade (1948), perfeccionaron el mtodo para su aislamiento. Kennedy y Lehninger (1949) estudiaron mitochondria separadas de
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la clula, mientras Green et al. (19) establecieron la composicin qumica de estas adems de que descubrieron que esta es el sitio principal de reacciones oxidativas para poner a disposicin de la clula la energa contenida en los nutrientes para fines metablicos. La estructura bsica de las mitochondria, sus membranas internas, fue establecida por Palade (1953) y Sjostrand (1953). (
https://notes.utk.edu/bio/bcmb421.nsf/f5b2cbf2a827c0198525624b00057d30/217c10a4bee dc0298525651300613209?OpenDocument). Para la fisiologa de las mitochondria ver captulo

V, Fisiologa. Altman (1890) not que la estructura y tamao de las mitochondria era similar al de bacteria, por esto propuso como hiptesis que la misma era el producto de la colonizacin de la clula que permiti a las mitochondria colonizar la clula y a la clula adquirir las caractersticas vivas (Tzagoloff, 1982) (ver discusin teora endosimbitica Captulo IX. Evolucin). Esta es una aseveracin importante en la teora endosimbitica. Retculo Endoplasmtico.- Emilio Verati (1872-1967) describi el retculo sarcoplasmtico en las fibras del msculo esqueltico, el cual constituye una red en el citoplasma de clulas eucariticas que conecta tubulos, vesculas y cisternas. Este sistema de membranas fue observado por primera vez por Porte et al (1945). El retculo endoplasmtico realiza diversas funciones en la clula como son la traduccin de protenas, empaquetamiento y transporte de protenas a ser utilizadas en la membrana celular (e.g. receptores transmembrana y otras protenas integrales de la membrana), tambin protenas secretadas por la clula, acumulacin de calcio y produccin y almacenamiento de glucgeno, esteroides y otras macromolculas. Existen tres variantes de retculo endoplasmtico, liso, granular y sarcoplasmtico. Aparato o Complejo de Golgi.- Camilo Golgi (1843-1926) desarroll tcnicas de tincin que report en Sobre la Estructura de la Materia Gris del Cerebro (Golgi, 1873) en donde describe que pudo observar los elementos del tejido nervioso estudiando impregnaciones metlicas. Es importante destacar que haba realizado una serie de intentos antes de conseguir aplicar con xito esta tcnica que se basa en el endurecimiento del tejido en bicromato de potasio y luego se impregna con nitrato de plata, denominada hoy como tincin o impregnacin de Golgi. Esto permiti poner en evidencia determinado nmero de clulas nerviosas, teidas al azar, y ver con algunos detalles estas neuronas. El trmino neurona fue acuado en 1891 por Wilhelm Waldeyer (1836-1921). Esta tcnica fue muy relevante en el entendimiento de la organizacin del tejido nervioso ya que con la misma descubri las clulas nerviosas denominadas de Golgi tipo I y II. Las neuronas `Golgi tipo I`, extienden sus axones a cierta distancia del cuerpo celular y son denominadas actualmente proyecciones neuronales. Las neuronas `Golgi tipo II`, ramifican sus axones en las clulas que estn a su alrededor y son denominadas actualmente neuronas del circuito local e interneuronas (Life and Discoveries of Camillo Golgi.htm) Golgi not en las neuronas una estructura intracelular, cuya existencia report oficialmente en abril de 1898 como aparato reticular interno (Golgi, 1898) o dictiosoma, mas tarde nombrada Aparato de Golgi, complejo de Golgi o simplemente el Golgi en su honor. A pesar de su importancia en la fisiologa celular, esta estructura fue motivo de grandes debates ya que se alegaba que esto constitua un artefacto de la tincin. Esto pone en evidencia que en ciencia el cuestionamiento es constante y que el cientfico est sujeto a que si no se puede evidenciar convincentemente los descubrimientos que se aleguen, la comunidad cientfica no reconocer el aporte hecho, que muchas veces tiene que esperar hasta mucho tiempo despus de la desaparicin del cientfico. Este es uno de los mritos de la ciencia, aunque como individuo se puede desaparecer sin muchas
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veces saber cuan relevante ser el aporte para beneficio de la humanidad. El Golgi debi esperar ser confirmado a mitad de la dcada de 1950 mediante el uso del microscopio electrnico. El aparato de Golgi se encuentra en casi todas las clulas eucariticas. La funcin fundamental de esta organela es procesar y empacar macromolculas como protenas, lpidos que son sintetizados dentro de la clula. Es importante en el procesamiento de protenas para secrecin. Forma parte del endosistema de membranas de las clulas eucariticas. Por sus estudios del sistema nervioso, Golgi gan el Premio Nobel en Medicina o Fisiologa de 1906 junto con Santiago Ramn y Cajal (1852-1934). Centrosoma.- Comprende un par de centrolos rodeados por material pericentriolar de material electrn denso que concentra la mayora de los microtubulos de la clula (Delattre y Gnczy, 2004) De acuerdo con la revisin realizada por Wilson (1925), Theodor Boveri (1862-1915) utiliz los trminos centrolo o centrosoma para referirse a esta organela celular (Stemas y Winey, 1997), descrita por Boveri (1888) como el rgano especial de la divisin celular, cosa que tambin hizo van Beneden (1887). Sin embargo, el centrosoma fue detectado por A. Flemming (1875) y van Beneden (1876). Su funcin se torn ms relevante hacia la dcada de 1990 cuando dos descubrimientos hicieron centrar la atencin en este, primero porque sus protenas se empezaron a identificar y esto trajo como consecuencia un entendimiento desde el punto de vista molecular de su funcin y segundo, la conexin entre el centrosoma y el cncer (Wong y Stearns, 2003). El centrosoma es el organizador del microtbulo de la clula animal y regulador del ciclo celular (Soifer, 1986). Una publicacin sobre los aspectos dinmicos de la biologa del microtbulo fue realizada en el Anuario de la Academia de Ciencias de New York en 1986. Lisosoma.- Estructura relacionada con la digestin celular. Fue descubierto por Christian de Duve (1949) utilizando mtodos bioqumicos. Alex Novikoff (1955) utilizando el microscopio electrnico de transmisin identific fosfatasa dentro de fragmentos de esta organela, a la vez que de Duve (1955) lo nombr lisosoma, derivado del griego lisis que significa disolucin y soma que significa cuerpo. La fosfatasa acida constituye la enzima marcadora para el lisosoma (http://lifesci.rutgers.edu/~fong/6.htm consultado 20 de mayo de 2008). El control de la digestin enzimtica lo hace por medio de las enzimas hidrolasas cidas, de las cuales se han encontrado unas 50 en el interior de esta organela. Cuando el lisosoma se desprende del aparato de Golgi, posee las enzimas respiratorias pero para tener qu digerir, necesita asociarse a una vacuola producto de la fagocitosis y formar una vacuola digestiva a la que tambin se llama lisosoma digestivo. Peroxisomas.- Organelas celulares descubiertos por de Duve (1965). Tienen como funcin la eliminacin de sustancias toxicas como lo perxidos de la clula. Govindjee y Krogmann (2004) sealan que Goyal (2000) reportan que N. Ed Tolbert (1918-1998) descubri los peroxisomas en hojas. Ribosomas.- Organelas celulares no cubiertas por membranas cuya funcin es la de ejecutar la sntesis de protenas. Fueron descubiertos por Palade (?), denominados microsomas y se crey que eran fragmentos de mitochondria. Ms tarde se les llam ribosomas, En las clulas eucariticas se encuentra asociado al retculo endoplasmtico granular. El ribosoma es entonces una homologa de la clula ya que se encuentra en todas las clulas, i.e. Bacteria, Archaea y Eukarya. La secuencia de nucletidos en el ribosoma fue utilizada por Woese para agrupar a todos los seres vivos en estos tres clado o grupos monofilticos.
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Cloroplasto.- Organelas celulares encargadas de captar la energa luminosa y transformarla en energa qumica. Fue reportada por primera vez por Leeuwenhoek (1674) en espirogira (Spirogyra); Nehemiah Grew (1682) en su libro The Anatomy of Plants tambin observ cloroplastos y menciona los observados por Leeuwenhoek en espirogira. Aunque Govindjee y David Krogmann (2004) le atribuyen el descubrimiento de los cloroplastos a Hugo von Mohl (1805-1872), lo que este hizo fue asignarle el nombre de grnulos de clorofila (Chlorophyllkrnem). En el cloroplasto se distinguen varias partes que se detallan en la figura 3.22. Granas, tilacoides, otros plastos (cromoplastos y leucoplastos)
Fig. 3.16.- Esquema de un cloroplasto: 1) membrana externa; 2) espacio intermembrana; 3) membran interna; 4) estroma (fluido acuoso); 5) lumen del tilacoide; 6) membrana del tilacoide; 7) grana (pila de tilacoides); 8) tilacoide (lmina); 9) almidn; 10) ribosoma; 11) DNA del plastidio; 12) glbulos del plasto (gotas de grasa).
Sacado de Wikipedia: http://en.wikipedia.org/wiki/Chloroplast
Divisin Celular.- El proceso de divisin celular denominado mitosis, fue descrito por Walter Flemming () en 1882 quien tambin utiliz por primera vez el trmino cromosoma (1879) al cual se refiri como corpsculo teido. Trabaj con Eduard Strasburger, juntoal que propuso los nombres de los estadios de la mitosis como profase, metafase, anafase y telofase en 1884. Meiosis.- J. B. Farmer y J. E. Moore (1905) propusieron aplicar los trminos fase maiosis y maiotica para describir cambios relevantes que se producan en el ncleo que implicaban dos divisiones denominadas por Flemming Heterotipo y homotipo (Farmer, J.B., & Moore, J.E. in Q. Jrnl. Microsc. Sci. XLVIII: 489), sin embargo dentro de un par de aos se cambi a meiosis para que reflejara mejor, en base al trmino griego de reduccin.
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Captulo III DESARROLLO HISTORICO; MICROSCOPISTAS Y CLULA Rodriguez-Pea

CAPITULO III Los Microscopistas y La Clula

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http://www.euronet.nl/ users/ warnar/leeuwenhoek.html#eel)

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Fig. 3.10.- Ernst Abbe (1840-1905).

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dmin =1.22 0/NAobj + NAcond

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http://www.physics.leidenuniv.nl/sections/cm/ip/group/Principle _of_SPM.htm Tip, punta de la aguja; trajectory, trayectoria; specimen, la

MICROSCOPIA DE MUY ALTA RESOLUCIN, SISTEMA CONFOCAL

Captulo III DESARROLLO HISTORICO; MICROSCOPISTAS Y CLULA Rodriguez-Pea

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TCNICAS Y ACCESORIOS PARA MICROSCOPIA

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Pared y Membrana Celular

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Figura 3.15. Nucleo celular, su doble membran http://en.wikipedia.org/wiki/File:NuclearPore_crop.svg.png).

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https://notes.utk.edu/bio/bcmb421.nsf/f5b2cbf2a827c0198525624b00057d30/217c10a4bee dc0298525651300613209?OpenDocument). Para la fisiologa de las mitochondria ver captulo

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