ESCUELA POLITECNICA DEL EJRCITO

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

ANLISIS Y MEJORA DE LOS PROCESOS BIOLGICOS PARA LA REHABILITACIN DE LA PISCINA DE LODOS ACTIVADOS (PLA) DE LA REFINERA ESTATAL ESMERALDAS (REE)

Previa a la obtencin de Grado Acadmico o Ttulo de:

Ingeniero en Biotecnologa

ELABORADO POR:

SANTIAGO XAVIER MAFLA ANDRADE

SANGOLQU, .. de 2010

HOJA DE LEGALIZACION DE FIRMAS

ELABORADO POR

Santiago Xavier Mafla Andrade

DIRECTOR DE LA CARRERA

_________________________________________ Ing. Rafael Vargas

SECRETARIO ACADEMICO

_______________________________________ Dr. Miguel Ramrez Tello

Sangolqu, del 2010

II

CERTIFICACIN

Certifico que el siguiente trabajo fue realizado en su totalidad por el Sr. SANTIAGO XAVIER MAFLA ANDRADE como requerimiento parcial a la obtencin del ttulo de Ingeniero en Biotecnologa.

Sangolqu, del 2010

_______________________ Ing. Pablo Araujo DIRECTOR

______________________ B.S. Karina Ponce CODIRECTORA

REVISADO POR:

________________________ Ing. Rafael Vargas DIRECTOR DE LA CARRERA

III

DEDICATORIA
Mi tesis la dedico con todo el amor y cario. A ti Dios que me diste la oportunidad de vivir, de ser la persona quien soy con virtudes y defectos, pero sobre todo por darme a todas esas personas que estn conmigo.

Santiago Xavier Mafla Andrade

IV

AGRADECIMIENTO
Con mucho cario a mis padres, Patricio y Fanny; que fueron, son y sern el soporte en mi vida. Gracias por todo, por darme una carrera para mi futuro y ser parte del sueo de un nio que siempre le gusto la biologa y ser un cientfico; aunque hemos pasado momentos difciles siempre han estado aqu para ayudarme con su cario. A mi hermano, Patricio, por su apoyo moral y fe en mi. A mi ta Jaddy por ser como mi hermana mayor. A mi to Vicente y su familia por dejarme entrar en su hogar y ser parte de l. A todos mis tos, tas, primos que son muchos y quisiera nombrarlos, pero cada uno est presente en mi vivir diario. A mis amigos y amigas del colegio que a pesar de todo el tiempo y las vivencias seguimos siendo los mejores amigos. A los amigos y amiga de curso; en especial a Galo, Caro, Chiqui; por todas esas aventuras, malas noches y desmanes que pasamos juntos y hoy comenzamos nuevas metas y sueos. A Anita por ser mi primera supervisora y mi apoyo que me dio animo, cario y comprensin en todo este trabajo. Y a todas esas personas que si las nombro no terminara pero son una base en mi vivir. A mis directores de tesis, Ing. Pablo Araujo y BS. Karina Ponce que con su apoyo profesional y acadmico, me asesoraron y acompaaron a lo largo de la tesis y en este camino que culmina hoy con el presente proyecto, gracias por compartir su conocimiento y amistad e inspirar admiracin en m. A Petroecuador por darme la oportunidad de expresar mis conocimientos como Ingeniero en Biotecnologa, en especial a las personas que trabajaron conmigo en el laboratorio de control, Paul, Loti y Lupita; por su colaboracin en este trabajo. Pero sobre todo gracias especiales aquellas personas que no estn presentes pero desde el cielo s que me cuidan y me protegen.

Les agradezco a todos ustedes con toda mi alma por estar en mi vida y compartir todos estos momentos, que nos hacen sentir vivos. Los quiero mucho y nunca los olvidare. Santiago Xavier Mafla Andrade

VI

INDICE DE CONTENIDOS

LISTADO DE TABLASX LISTADO DE CUADROSXII LISTADO DE FIGURAS.....XIII LISTADO DE ANEXOS..XVI RESUMENXVII ABSTRACT..XIV

CAPTULO 1: INTRODUCCIN1 1.1 Formulacin del problema1 1.2 Justificacin del problema.2 1.3 Objetivos de la investigacin3 1.3.1 Objetivo general..3 1.3.2 Objetivos especficos..3 1.4 Marco Terico.3 1.4.1 Tecnologas de remediacin.3 1.4.2 Tipo de tratamiento.4 1.4.3 Tecnologas de remediacin biolgicas (biorremediacin)5 1.4.3.1 Tecnologas in situ...6 1.4.3.1.1 Bioventeo...6 1.4.3.1.2 Bioestimulacin.7 1.4.3.1.3 Bioaumentacin7 1.4.3.1.4 Fitorremediacin8 1.4.3.2 Tecnologas ex situ..9 1.4.3.2.1 Biorremediacin en fase slida (composteo).10 1.4.3.2.2 Biorremediacin en fase de lodos (biorreactores)....10 1.4.4 Piscina de lodos activados...11 1.4.5 Bacterias.14 1.4.5.1 Factores que afectan a la degradacin..15 1.4.5.2 Temperatura15 1.4.5.3 Concentracin de contaminante..16 1.4.5.4 pH..16 1.4.5.5 Concentracin de oxigeno disuelto.17
VII

1.4.6 Desechos de la refinacin de crudo18 1.4.7 Efectos en la salud humana.18 1.4.8 Formacin de Hiptesis.19 1.4.8.1 Hiptesis nula..19 1.4.8.2 Hiptesis alternativa...19 CAPITULO 2: MATERIALES Y METODOS...20 2.1 Localizacin geogrfica20 2.2 Fase de laboratorio...20 2.2.1 anlisis fsico-qumico del agua de la piscina de lodos activados.20 2.2.1.1 Medicin de pH...21 2.2.1.2 Medicin de Oxigeno disuelto (OD).22 2.2.1.3 Medicin de Conductividad ..23 2.2.1.4 Medicin de Slidos totales suspendidos...24 2.2.1.5 Medicin de TPHs.26 2.2.1.6 Medicin de fenol en las muestras27 2.2.2 Anlisis cuantitativo de la microfauna de la piscina de lodos activados...30 2.2.2.1 Preparacin de medios..30 2.2.2.2 Preparacin de agua para diluciones..30 2.2.2.3 Sembrado para la cuantificacin..31 2.2.2.4 Aislamiento de colonias y establecimiento de cultivos puros.33 2.2.2.5 Identificacin de cepas..34 2.3 Pruebas de antagonismo de la microfauna...38 2.3.1 Anlisis de seleccin y mejora en los nutrientes de los microorganismos.39 2.3.1.1 Frmula 1 (F1).40 2.3.1.2 Frmula 2 (F2).40 2.3.1.3 Frmula 3 (F3).40 CAPITULO 3: RESULTADOS...43 3.1 anlisis fsico-qumico iniciales del agua de la piscina de lodos activados.43 3.2 Anlisis cuantitativo de la microfauna de la piscina de lodos activados..48 3.3 Resultados de la prueba de identificacin.48 3.4 Anlisis de las pruebas de antagonismo...49 3.5 Anlisis de frmula para bioestimulacin en la piscina de lodos activados.52
VIII

3.5.1 Demanda biolgica de oxgeno (DBO)...52 3.5.2 Demanda qumica de oxgeno (DQO)53 3.5.3 Oxgeno disuelto (OD)..55 3.5.4 Fenoles56 3.5.5 TPHs...58 3.5.6 pH.....60 3.5.7 Conductividad elctrica (CE)61 3.5.8 Nitrgeno (N)..63 3.5.9 Slidos totales (ST)65 3.5.10 Conteo bacteriano a 14 das de iniciado el tratamiento66 CAPITULO 4: DISCUSIN68 4.1 Anlisis fsico-qumico inicial del agua de la piscina de lodos activados...68 4.2 Anlisis cuantitativo de la microfauna de la piscina de lodos activados.68 4.3 Identificacin de bacterias69 4.4 Anlisis de frmulas para bioestimulacin de la piscina de lodos activados...71 CAPITULO 5: CONCLUSIONES..74 CAPITULO 6: RECOMENDACIONES.75 CAPITULO7: BIBLIOGRAFIA..76 ANEXOS85

IX

LISTADO DE TABLAS Tabla 1.1 Ventajas y desventajas de las tecnologas de remediacin, clasificadas de acuerdo al tipo de tratamiento..4 Tabla 2.1 Pruebas de antagonismo realizadas a los 5 tipos de cepas..39 Tabla 2.2 Caudal de oxigeno suministrado a cada reactor etiquetado segn su formulacin ..41 Tabla 3.1 resultados de las pruebas bioqumicas impuestas a las diferentes muestras bacterianas de la piscina de lodos activados.49 Tabla 3.2 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para DBO..52 Tabla 3.3 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para DQO.53 Tabla 3.4 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de DQO de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa....54 Tabla 3.5 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para OD.55 Tabla 3.6 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para FENOLES56 Tabla 3.7 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de FENOLES de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa.57 Tabla 3.8 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para TPHs58 Tabla 3.9 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de TPHs de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa59 Tabla 3.10 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para pH60 Tabla 3.11 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para CE61 Tabla 3.12 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de FENOLES de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa.62 Tabla 3.13 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para N..63 Tabla 3.14 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de FENOLES de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa.64 Tabla 3.15 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para ST65

Tabla 3.16 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para Cepas bacterianas66 Tabla 3.17 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de UFC despus de 14 das de usado el tratamiento de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa..67

XI

LISTADO DE CUADROS Cuadro 1.1 Clasificacin de bacterias segn su temperatura de crecimiento...16

Cuadro 1.2 rangos de concentracin de oxigeno disuelto [OD], condicin y consecuencias para los organismos vivos..17

XII

LISTADO DE FIGURAS Figura1.1 Exigencias principales de un flujo pistn (Cumbal, 2007).12 Figura 1.2 Esquema de la planta de tratamiento de aguas de la REE. (Mafla, 2009)..13 Figura 2.1 Diagrama de la piscina de lodos activados, dimensiones y puntos de toma de muestra. ES: entrada de efluente, PM1: punto medio 1, PM2: punto medio 2, SE: salida del efluente21 Figura 2.2 pH-meter Toledo usado para medicin...................22 Figura2.3 medidor de OD 3 star-plus22 Figura 2.4 medidor de conductividad 3 star-plus23 Figura 2.5 equipo de filtracin para prueba de slidos suspendidos..25 Figura 2.6 Desecador para el papel filtro, de la prueba de slidos totales disueltos.25 Figura 2.7 Prueba de TPHs insercin de acido clorhdrico dentro de la muestra..26 Figura 2.8 Prueba de TPHs formacin de las dos fases, polar y apolar, en la mezcla27 Figura 2.9 Prueba de fenoles, equipo de destilacin para la extraccin de fenoles por arrastre..29 Figura 2.10 anlisis espectrofotomtrico de fenoles..29 Figura 2.11 sembrado para cuantificacin. a) Toma de muestra de agua b) dilucin de la muestra c) sembrada de la dilucin d) expansin de la muestra de agua..32 Figura 2.12 Equipo UFC counter para conteo de colonias en agar nutriente33 Figura 2.13 identificacin de colonias por su morfologa..33 Figura 2.14 formas de estras para aislamiento de colonias en caja petri.34 Figura 2.15 cepas de colonias aisladas en agar inclinado TSA. a) Muestra 1: cdigo M1, b) Muestra 2: cdigo M2, c) Muestra 3: cdigo M3, d) Muestra 4: cdigo M4, e) Muestra 5: cdigo T1.35 Figura 2.16 Prueba de TSI. a) muestra M1, b) muestra M2, c) muestra M3, d) muestra M4, e) muestra T136 Figura 2.17 esquema de resultados positivos o negativos de las pruebas API..37 Figura 2.18 Pruebas API de las diferentes cepas a) M1 b) M2 c) M4 d) T1.38
XIII

Figura 2.19 reactores aireados con agua de la piscina de lodos activados y formulas. ..42 Figura 2.20 Medicin de caudal de oxigeno de los motores de pecera.42 Figura 3.1 promedio de pH de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH.44 Figura 3.2 promedio de Conductividad elctrica de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. 44 Figura 3.3 promedio de slidos totales de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH.45 Figura 3.4 promedio de nitrgeno global de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH.45 Figura 3.5 promedio de TPH de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH.46 Figura 3.6 promedio de DQO de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH.46 Figura 3.7 promedio de Fenoles de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH.47 Figura 3.8 promedio de oxigeno disuelto de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. ..47 Figura 3.9 promedio de UFC tomados en los 4 puntos de la piscina.48 Figura 3.10 promedios de halos de inhibicin, en mm, de 1M vs 2M, 3M, 4M y T1 realizado en las pruebas de antagonismo..49 Figura 3.11 promedios de halos de inhibicin, en mm, de 2M vs 1M, 3M, 4M y T1 realizado en las pruebas de antagonismo..50 Figura 3.12 promedios de halos de inhibicin, en mm, de 3M vs1M, 2M, 4M y T1 realizado en las pruebas de antagonismo.50 Figura 3.13 promedios de halos de inhibicin, en mm, de 4M vs1M, 2M, 3M y T1 realizado en las pruebas de antagonismo.51 Figura 3.14 promedios de halos de inhibicin, en mm, de T1 vs1M, 2M, 3M y 4M realizado en las pruebas de antagonismo51
XIV

Figura 3.15 grafico de cajas y bigotes de DBO para cada frmula y control.52 Figura 3.16 grafico de cajas y bigotes de DBO para cada frmula y control.53 Figura 3.17 grafico de cajas y bigotes de OD para cada frmula y control55 Figura 3.18 grafico de cajas y bigotes de DBO para cada frmula y control.56 Figura 3.19 grafico de cajas y bigotes de TPHs para cada formula y control.58 Figura 3.20 grafico de cajas y bigotes de DBO para cada frmula y control.60 Figura 3.21 grafico de cajas y bigotes de DBO para cada frmula y control.61 Figura 3.22 grafico de cajas y bigotes de N para cada frmula y control.63 Figura 3.23 grafico de cajas y bigotes de ST para cada frmula y control.65 Figura 3.24 grafico de cajas y bigotes para conteo bacteriano a 14 das de iniciado el tratamiento con las frmulas y el control...66

XV

LISTADO DE ANEXOS

ANEXO

CLASIFICACIN

DE

DESECHOS

PELIGROSOS

EN

LA

INDUSTRIA PETROQUMICA SEGN EL MINISTERIO DEL AMBIENTE DE ECUADOR...85 ANEXO 2FIGURAS DE A) DESBASTADOR B) PISCINA DE

HOMOGENIZACIN C) PISCINA DE LODOS ACTIVADOS.86 ANEXO 3 PH-METRO DE BANCO METTLER TOLEDO S20 SEVEN EASY PH METTLER TOLEDO S20 SEVEN EASY PH.87 ANEXO 4 MEDIDOR DE MESA ORIN 3-STAR PLUS DE DO NO. 111300089 ANEXO 5 MEDIDOR DE MESA ORIN 3-STAR PLUS DE

CONDUCTIVIDAD..91 ANEXO 6 ESQUEMA PARA MEDICIN DE SLIDOS SUSPENDIDOS.93 ANEXO 7 LISTA DE PRECIOS DE LOS REACTIVO POR FORMULA94

XVI

Resumen

El recurso hdrico es uno de los ms importantes en el uso industrial adems del uso domestico; el agua que es tomada de ros y vertientes es usada con fines de limpieza, consumo, y reacciones qumicas; pero al ser sobre utilizada y no reconstituida, este recurso est escaseando de forma alarmante, haciendo que seres vivos, cosechas, y el consumo mismo de hombre se vea limitado y en algunos casos eliminado. Por ello el uso de tcnicas de rehabilitacin de aguas y descontaminacin, como el uso de piscinas de lodos activados, es una de las medidas que se deben tomar en cuenta para todo los tipos de industria, adems de su correcto funcionamiento, para una adecuada rehabilitacin del agua y que esta sea reutilizada o devuelta a su cauce natural.

En este proyecto se investiga cmo mejorar los procesos de descontaminacin de la piscina de lodos activados de la refinera estatal Esmeraldas, mediante la bioestimulacin de los microorganismos autctonos de la piscina, para lo cual se realizo un anlisis cuantitativo de parmetros fsico-qumicos como son: DBO, DQO, slidos totales, fenoles, TPHs, nitrgeno, pH, conductividad elctrica y UFC dentro de la piscina. Una vez ya identificados los parmetros afectados y realizados las pruebas de antagonismo se aplico tres tipos de formulaciones a escala piloto y se observo cul de ellas logro una mejor adaptacin con los microorganismos y cual ayudo a una mejora en la degradacin de contaminantes.

Por medio de clculos estadsticos aplicados a los datos que arrojaron las diferentes repeticiones, en las diferentes pruebas de ensayo que se aplico al agua de la piscina de lodos activados a escala piloto (5 litros de agua), se obtuvo como resultado que las formulaciones F2 y F3 son las ms idneas en la degradacin de TPHs, Fenoles, DQO y DBO; adems de un crecimiento adecuado de UFC en el agua. Lo que indica que el proceso de bioestimulacin dio resultados excelentes con estas formulaciones al rebajar de 28 a 14 das el tiempo de retencin del agua; pero al ser comparadas entre si no existe
XVII

diferencia estadstica significativa que indique que la formulacin F3 es mejor que F2. Por ello y por los valores que diferencian a F2 de F3; F2 es la frmula de uso apropiado.

XVIII

Abstract

The water resource is one of the most important industrial use in addition to domestic use, the water that is taken from rivers and springs is used for cleaning purposes, consumption, and chemical reactions, but used to be on and not reconstituted, this resource is alarmingly scarce, making living things, crops, and consumption of man himself will be limited and in some cases eliminated. Therefore the use of rehabilitation techniques and decontamination water, such as using activated sludge pools, is one of the measures to be taken into account for all types of industry, in addition to function, for proper rehabilitation water and that it be reused or returned to its natural course.

This project investigates how to improve detoxification processes of activated sludge pool of the state refinery Esmeraldas through biostimulation of indigenous microorganisms in the pool, for which a quantitative analysis of physicochemical parameters such as: BOD, COD, total solids, phenols, TPH's, nitrogen, pH, electrical conductivity and UFC in the pool. Once identified and the parameters involved and in the tests of antagonism was applied three types of formulations to pilot scale and we observe which of them achieving a better match with the microorganisms and which helped to improved degradation of pollutants.

Through statistical calculations applied to the data yielded different repetitions in the different tests that test was applied to water from the pool of activated sludge at pilot scale (5 liters of water) was obtained as a result, the formulations F2 and F3 are best placed in the degradation of TPH's, Phenols, COD and BOD in addition to adequate growth of CFU in the water. This indicates that the process of biostimulation gave excellent results with these formulations to reduce from 28 to 14 days retention time of water, but when compared to each other there a statistically significant difference indicating that the F3 formulation is better than F2. Therefore, and for differing values of F3 to F2, F2 is the formula for proper use.
XIX

CAPTULO 1: INTRODUCCIN

1.1 Formulacin de problema

La unidad de Efluentes recoge todas las aguas que se desechan de los mltiples procesos de Refinera Esmeraldas y de todas las actividades colaterales que se desarrollan. Para ello, se ha clasificado las aguas en cuatro corrientes: agua reciclable, agua salada, agua lluvia y agua servida.

El agua reciclable est formada por los drenajes de procesos y de los tanques de crudo; el diseo prev recircular esta corriente a la torre de enfriamiento y desaladores. El agua salada est formada por los drenajes de los desaladores, torres de enfriamiento y agua de desecho de la desmineralizadora. Las aguas lluvias son aguas no contaminadas procedentes de la recoleccin de agua de canales perimetrales y cubetos de tanques de almacenamiento. Las aguas servidas recogen las aguas de todos los servicios sanitarios de las instalaciones de Refinera. Todas las aguas tratadas se envan al ro Teaone previo su aireacin y estabilizacin.

Para tratar las dos primeras corrientes se ha instalado dos sistemas paralelos de procesamiento que comprende tres partes principales: tratamiento primario (API y UFA o DAF), tratamiento biolgico (piscinas de

homogenizacin, fangos activos y clarificador) y tratamiento terciario (biofiltros y filtros de arena para el agua reciclable). Las aguas lluvias corren por los canales perimetrales hacia el ro Teaone, en caso de contaminarse con aceite, stas aguas se desvan hacia la piscina de aguas lluvias y se reprocesan mediante un tratamiento primario similar al descrito anteriormente y se suman al tratamiento de agua reciclable.

La calidad del agua efluente no es satisfactoria debido a que no se logra estabilizar la operacin de la unidad completa. Tngase en cuenta que los procesos de fangos activos requieren de tres meses de operacin continua para su estabilizacin y cada parada implica el reinicio total de las actividades.
1

La baja calidad del agua efluente y la incertidumbre operativa no permiten trabajar conforme al diseo en el sistema de agua reciclable, es decir, no se puede recircular el agua efluente hacia los centros de consumo. El proyecto se enfocara en el estudio y mejoramiento de los procesos biolgicos de la piscina de lodos activados empleando la microfauna nativa. Actualmente la calidad del agua el Sistema de Efluentes de la refinera Estatal de Esmeraldas no se encuentra en condiciones aptas ni satisfactorias debido al mal manejo y control de todos los desechos lquidos provenientes de los diferentes procesos de la REE. La piscina de lodos activados es una parte esencial en el sistema de efluentes siendo esta la que mejorara notablemente la calidad del agua reduciendo y haciendo viables todos los parmetros y estndares que exigen las normas ambientales vigentes.

1.2 Justificacin del problema.

Realizando diagnsticos de la planta de lodos activados se ha descubierto que varios parmetros qumicos estn alterados, llegando a la conclusin que la microfauna est afectada en su crecimiento y por ende en la biodegradacin de ciertos compuestos dando como tal una pobre calidad.

Adems, el incremento en las operaciones de elaboracin de derivados de petrleo y un mal mantenimiento constante de la planta ha llevado al deterioro de la misma encontrando al agua de tratamiento fuera de los lmites permisibles establecidos en las normas RAOH.

El problema ser enfocado en diferentes etapas las cuales consisten en: una primera etapa se analizar los parmetros que la norma RAOH exige para el desecho de efluentes. Con estos parmetros se tendr una pauta para la segunda etapa, en la que se identificar las cepas microbianas afectadas. Seguidamente se cuantificar y seleccionar a la poblacin microbiana, lo cual nos dar los trminos para realizar una bioestimulacin de los microorganismos degradadores de los contaminantes adems del antagonismo entre especies nativas.
2

1.3 Objetivos de la investigacin

1.3.1 Objetivo general

Analizar y mejorar los procesos biolgicos para la rehabilitacin de la piscina de lodos activados de la Refinera Estatal Esmeraldas, mediante su

caracterizacin fsico-qumica y microbiolgica.

1.3.2 Objetivos especficos

Realizar un anlisis fsico-qumico de la piscina de lodos activados;

tomando en cuenta los parmetros principales que exige la normativa RAOH para procesos hidrocarburferos. Elaborar un anlisis cuantitativo de la microfauna de la piscina de lodos

activados. Identificar las cepas microbianas principales, y realizar pruebas de

antagonismo entre ellas para los procesos de degradacin de la piscina de lodos activados. Plantear un mtodo de bioestimulacin para las cepas seleccionadas en las

pruebas de antagonismo, para provocar su crecimiento y mejorar la calidad del efluente.

1.4 Marco Terico

1.4.1 Tecnologas de remediacin El trmino tecnologa de tratamiento implica cualquier operacin unitaria o serie de operaciones unitarias que altera la composicin de una sustancia peligrosa o contaminante a travs de acciones qumicas, fsicas o biolgicas de manera que reduzcan la toxicidad, movilidad o volumen del material contaminado (EPA, 2001). Las tecnologas de remediacin representan una alternativa a la disposicin en tierra de desechos peligrosos que no han sido
3

tratados, y sus capacidades o posibilidades de xito, bajo las condiciones especficas de un sitio, pueden variar ampliamente.

1.4.2 Tipo de tratamiento.

Esta clasificacin se basa en el principio de la tecnologa de remediacin y se divide en tres tipos de tratamiento:

Tratamientos biolgicos (biorremediacin). Utilizan las actividades metablicas de ciertos organismos (plantas, hongos, bacterias) para degradar (destruccin), transformar o remover los contaminantes a productos

metablicos inocuos.

Tratamientos fisicoqumicos. Este tipo de tratamientos, utiliza las propiedades fsicas y/o qumicas de los contaminantes o del medio contaminado para destruir, separar o contener la contaminacin.

Tratamientos trmicos. Utilizan calor para incrementar la volatilizacin (separacin), quemar, descomponer o fundir (inmovilizacin) los contaminantes en un suelo. Tabla 1.1 Ventajas y desventajas de las tecnologas de remediacin, clasificadas de acuerdo al tipo de tratamiento.

Ventajas Son efectivos en cuanto a Son Tratamientos biolgicos tecnologas para

Desventajas

costos Requieren ms tratamiento

mayores

tiempos

de

benficas ambiente Los

el Es necesario verificar la toxicidad de intermediarios y/o productos

contaminantes No pueden emplearse si el tipo de son medio (suelo, agua, etc.) no

generalmente destruidos

favorece el crecimiento microbiano

Se requiere un mnimo o
4

ningn posterior

tratamiento

Son efectivos en cuanto a Tratamientos fisicoqumicos Pueden periodos costos realizarse en

Los

residuos de

generados separacin,

por deben

tcnicas

tratarse o disponerse: aumento en costos y necesidad de permisos Los fluidos de extraccin pueden aumentar la movilidad de los de

cortos

El equipo es accesible y no se necesita de mucha energa ni ingeniera

contaminantes:

necesidad

sistemas de recuperacin Es el grupo de tratamientos ms costoso

Tratamientos trmicos

Permite tiempos rpidos Los costos aumentan en funcin del de limpieza empleo de energa y equipo Intensivos en mano de obra y capital

1.4.3 Tecnologas de remediacin biolgicas (biorremediacin)

El trmino biorremediacin se utiliza para describir una variedad de sistemas que utilizan organismos vivos (plantas, hongos, bacterias, etc.) para degradar, transformar o remover compuestos orgnicos txicos a productos metablicos inocuos o menos txicos. Esta estrategia biolgica depende de las actividades catablicas de los organismos, y por consiguiente de su capacidad para utilizar los contaminantes como fuente de alimento y energa (Van Deuren et al, 1997).

Las rutas de biodegradacin de los contaminantes orgnicos, varan en funcin de la estructura qumica del compuesto y de las especies microbianas degradadoras. El proceso de biorremediacin incluye reacciones de oxidoreduccin, procesos de sorcin e intercambio inico, e incluso reacciones de acomplejamiento y quelacin que resultan en la inmovilizacin de metales (Eweis et al, 1998).
5

La biorremediacin puede emplear organismos propios del sitio contaminado (autctonos) o de otros sitios (exgenos), puede realizarse in situ o ex situ, en condiciones aerobias (en presencia de oxgeno) o anaerobias (sin oxgeno) (Eweis et al, 1998). Aunque no todos los compuestos orgnicos son susceptibles a la biodegradacin, los procesos de biorremediacin se han usado con xito para tratar suelos, lodos y sedimentos contaminados con hidrocarburos del petrleo (HTPs), solventes (benceno y tolueno), explosivos (TNT), clorofenoles (PCP), pesticidas (2,4-D), conservadores de madera (creosota) e hidrocarburos aromticos policclicos (HAPs) (Van Deuren et al, 1997; Semple et al, 2001).

1.4.3.1 Tecnologas in situ

Las tcnicas in situ buscan estimular y crear un ambiente favorable para el crecimiento microbiano a partir de los contaminantes. Este objetivo generalmente puede lograrse con el suministro de aire u oxgeno (bioventeo), nutrientes (bioestimulacin), microorganismos (bioaumentacin) y/o humedad, adems del control de temperatura y pH (EPA, 2001).

1.4.3.1.1

Bioventeo

El bioventeo es una tecnologa relativamente nueva, cuyo objetivo es estimular la biodegradacin natural de cualquier compuesto biodegradable en condiciones aerobias. El aire se suministra en el sitio contaminado a travs de pozos de extraccin, por movimiento forzado (extraccin o inyeccin), con bajas velocidades de flujo, con el fin de proveer solamente el oxgeno necesario para sostener la actividad de los microorganismos degradadores (Van Deuren et al, 1997).

Aplicaciones:

Se

utiliza

para

tratar

compuestos

orgnicos

biodegradables semivoltiles (COSs) o no voltiles. Adems de favorecer la degradacin de contaminantes adsorbidos, pueden degradarse COVs, por medio de su movimiento a travs del suelo biolgicamente activo (Eweis et al,
6

1998). Se ha utilizado con xito para remediar suelos contaminados con HTPs, solventes no clorados, pesticidas y conservadores de la madera, entre algunos otros qumicos (Van Deuren et al, 1997).

Limitaciones: Algunos factores que pueden limitar la efectividad del bioventeo son: (i) el tipo y la concentracin del contaminante, (ii) falta de nutrientes; (iii) bajo contenido de humedad; y (iv) dificultad para alcanzar el flujo de aire necesario (Eweis et al, 1998).

1.4.3.1.2

Bioestimulacin

La bioestimulacin implica la circulacin de soluciones acuosas (que contengan nutrientes y/u oxgeno) a travs del suelo o aguas contaminadas, para estimular la actividad de los microorganismos autctonos, y mejorar as la biodegradacin de contaminantes orgnicos o bien, la inmovilizacin de contaminantes inorgnicos in situ (Van Deuren et al, 1997).

Aplicaciones: Se ha usado con xito para remediar suelos o aguas contaminadas con gasolinas, COVs, COSs, y pesticidas (Alexander, 1994). Estudios a escala piloto, han mostrado la biodegradacin de suelos contaminados con desechos de municiones.

Limitaciones: Esta tecnologa no es recomendable para suelos arcillosos, altamente estratificados o demasiado heterogneos, ya que pueden provocar limitaciones en la transferencia de O2. Otros factores que pueden limitar su aplicacin, incluyen: (i) que el tipo del suelo no favorezca el crecimiento microbiano; (ii) incremento en la movilidad de los contaminantes; (iii) obstruccin en los pozos de inyeccin provocada por el crecimiento microbiano.

1.4.3.1.3

Bioaumentacin

Esta tecnologa se utiliza cuando se requiere el tratamiento inmediato de un sitio contaminado, o cuando la microflora autctona es insuficiente en
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nmero o capacidad degradadora. Consiste en la adicin de microorganismos vivos, que tengan la capacidad para degradar el contaminante en cuestin, para promover su biodegradacin o su biotransformacin. El tamao del inculo a utilizar, depende del tamao de la zona contaminada, de la dispersin de los contaminantes y de la velocidad de crecimiento de los microorganismos degradadores (Riser-Roberts, 1998).

Aplicaciones: Se ha usado para tratar suelos contaminados con herbicidas (2,4-D, clorofam), insecticidas (lindano, clordano, paratin),

clorofenoles (PCP) y nitrofenoles, BPCs, HTPs y HAPs (Alexander, 1994). Tambin se ha aplicado efectivamente para tratar desechos con

concentraciones relativamente altas de metales (Eweis et al, 1998).

Limitaciones: Antes de llevar a cabo la bioaumentacin en un sitio, deben realizarse cultivos de enriquecimiento, aislar microorganismos capaces de cometabolizar o utilizar el contaminante como fuente de carbono, y cultivarlos hasta obtener grandes cantidades de biomasa (Alexander, 1994).

1.4.3.1.4 Fitorremediacin

La fitorremediacin es un proceso que utiliza plantas para remover, transferir, estabilizar, concentrar y/o destruir contaminantes (orgnicos e inorgnicos) en suelos, lodos y sedimentos, y puede aplicarse tanto in situ como ex situ. Los mecanismos de fitorremediacin incluyen la rizodegradacin, la fito-extraccin, la fitodegradacin y la fitoestabilizacin (Van Deuren et al, 1997; Hutchinson et al, 2001).

La rizodegradacin se lleva a cabo en el suelo que rodea a las races. Las sustancias excretadas naturalmente por stas, suministran nutrientes para los microorganismos, mejorando as su actividad biolgica. Durante la fitoextraccin, los contaminantes son captados por las races (fitoacumulacin), y posteriormente stos son traslocados y/o acumulados hacia los tallos y hojas (fitoextraccin). En la fitoestabilizacin, las plantas limitan la movilidad y biodisponibilidad de los contaminantes en el suelo, debido a la produccin en
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las races de compuestos qumicos que pueden adsorber y/o formar complejos con los contaminantes, inmovilizndolos as en la interfase races:suelo (Sellers, 1999). La fitodegradacin consiste en el metabolismo de

contaminantes dentro de los tejidos de la planta, a travs de enzimas que catalizan su degradacin.

Aplicaciones: Puede aplicarse eficientemente para tratar suelos contaminados con compuestos orgnicos como benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos (BTEX); solventes clorados; HAPs; desechos de nitrotolueno; agroqumicos clorados y organofosforados; adems de compuestos

inorgnicos como Cd, Cr (VI), Co, Cu, Pb, Ni, Se y Zn (Sellers, 1999). Se ha demostrado tambin su eficiencia en la remocin de metales radioactivos y txicos de suelos y agua.

Limitaciones: Existen varias limitaciones que deben considerarse para su aplicacin: (i) el tipo de plantas utilizado determina la profundidad a tratar; (ii) altas concentraciones de contaminantes pueden resultar txicas; (iii) puede depender de la estacin del ao; (iv) no es efectiva para tratar contaminantes fuertemente sorbidos; (v) la toxicidad y biodisponibilidad de los productos de la degradacin no siempre se conocen y pueden movilizarse o bioacumularse en animales.

1.4.3.2

Tecnologas ex situ

Los procesos de biorremediacin ex situ, incluyen: (i) procesos de biodegradacin en fase de lodos, en donde el suelo se mezcla con agua (para formar un lodo), microorganismos y nutrientes; y (ii) de biodegradacin en fase slida, en donde los suelos colocan en una celda de tratamiento (composteo) o sobre membranas impermeables (biolabranza), en donde se agrega agua y nutrientes (EPA, 2001).

1.4.3.2.1

Biorremediacin en fase slida (composteo)

El composteo es un proceso biolgico controlado, por el cual pueden tratarse suelos y sedimentos contaminados con compuestos orgnicos biodegradables, para obtener subproductos inocuos estables. El material contaminado se mezcla con agentes de volumen (paja, aserrn, estircol, desechos agrcolas), que son sustancias orgnicas slidas biodegradables, adicionadas para mejorar el balance de nutrientes, as como para asegurar una mejor aireacin y la generacin del calor durante el proceso. Los sistemas de composteo incluyen tambores rotatorios, tanques circulares, recipientes abiertos y biopilas (Alexander, 1994; Eweis et al, 1998; Semple et al, 2001).

Las pilas estticas (biopilas) son una forma de composteo en el cual, adems de agentes de volumen, el sistema se adiciona con agua y nutrientes, y se coloca en reas de tratamiento (que incluyen alguna forma de aireacin y sistemas para colectar lixiviados). Las pilas de suelo generalmente se cubren con plstico para controlar los lixiviados, la evaporacin y la volatilizacin de contaminantes, adems de favorecer su calentamiento (Eweis et al, 1998).

Aplicaciones: El composteo se ha usado con xito para remediar suelos contaminados con PCP, gasolinas, HTPs, HAPs. Se ha demostrado tambin la reduccin, hasta niveles aceptables, en la concentracin y toxicidad de explosivos (TNT). El uso de estrategias de composteo, se ha adoptado seriamente hasta los ltimos 3 a 5 aos (Van Deuren et al, 1997; Semple et al, 2001).

Limitaciones: Algunas limitaciones del proceso son: (i) necesidad de espacio; (ii) necesidad de excavar el suelo contaminado, lo que puede provocar la liberacin de COVs; (iii) incremento volumtrico del material a tratar; (iv) no pueden tratarse metales pesados (Van Deuren et al, 1997).

1.4.3.2.2 Biorremediacin en fase de lodos (biorreactores)

Los biorreactores pueden usarse para tratar suelos heterogneos y poco

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permeables, o cuando es necesario disminuir el tiempo de tratamiento, ya que es posible combinar controlada y eficientemente, procesos qumicos, fsicos y biolgicos, que mejoren y aceleren la biodegradacin (Reiser-Roberts, 1998). Es la tecnologa ms adecuada cuando existen peligros potenciales de descargas y emisiones.

Uno de los reactores ms utilizados para biorremediar suelos es el biorreactor de lodos, en el cual el suelo contaminado se mezcla

constantemente con un lquido, y la degradacin se lleva a cabo en la fase acuosa por microorganismos en suspensin o inmovilizados en la fase slida. El tratamiento puede realizarse tambin en lagunas construidas para este fin o bien en reactores sofisticados con control automtico de mezclado (Alexander, 1994).

Aplicaciones:

Los

biorreactores

de

lodos

aerobios,

se

utilizan

principalmente para tratar HTPs, COSs no halogenados y COVs. Se utilizan tambin reactores secuenciales de lodos aerobios/anaerobios para tratar BPCs, COSs halogenados, pesticidas y desechos de artillera (Van Deuren et al, 1997).

Limitaciones: Algunos factores que pueden limitar el uso y efectividad de los biorreactores son: (i) el suelo debe tamizarse; (ii) suelos heterogneos y arcillosos pueden generar problemas de manipulacin; (iii) los productos intermediarios pueden ser ms txicos que el contaminante original (en caso de explosivos o solventes clorados); (iv) los residuos pueden requerir de tratamiento o disposicin final (Van Deuren et al, 1997; Riser-Roberts, 1998).

Costos y tiempos de remediacin. Los biorreactores de lodos pueden clasificarse como una tecnologa de corto a mediano plazo. El uso de biorreactores de lodos oscila entre 130 y 200 USD/m3.

1.4.4 Piscina de lodos activados

La piscina de lodos activados es un tratamiento en el cual el agua

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contaminada, en este caso con hidrocarburo, es mezclada con el lodo biolgico (microorganismos) y aireada en un tanque llamado reactor. (Soluciones ambientales, 2007) En nuestro caso tenemos un reactor tipo flujo pistn, el cual consiste en un sistema de mezcla en direccin radial, no axial; y por ende la degradacin de los contaminantes es por lotes es decir que mientras una seccin del agua sigue el camino, esta ira rebajando su contaminacin. (Cumbal, 2007). Una vez reducido el contaminante los flculos bacterianos precipitan, parte recircularn al reactor y el resto ser llevado para su posterior estabilizacin y desechos.

Figura1.1 Exigencias principales de un flujo pistn (Cumbal, 2007)

En el proceso de lodos activados los microorganismos son completamente mezclados con la materia orgnica en el agua residual de manera que sta les sirve de sustrato alimenticio. Es importante indicar que la mezcla o agitacin se efecta por medios mecnicos superficiales o sopladores
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sumergidos, los cuales tiene doble funcin 1) producir mezcla completa y 2) agregar oxgeno al medio para que el proceso se desarrolle. (Wetland, 2007)

Elementos bsicos de las instalaciones del proceso de lodos activados:

Tanque de aireacin. Estructura donde el desage y los microorganismos

(incluyendo retorno de los lodos activados) son mezclados.

Tanque sedimentador. El desage mezclado procedente del tanque es separando los slidos suspendidos (lodos activados),

sedimentado

obtenindose un desage tratado clarificado. (Soluciones ambientales, 2007) Equipo de inyeccin de oxgeno. Para activar las bacterias heterotrficas. Sistema de retorno de lodos. El propsito de este sistema es el de

mantener una alta concentracin de microorganismos en el tanque de aireacin. (Wetland, 2007)

Figura 1.2 Esquema de la planta de tratamiento de aguas de la REE. (Mafla, 2009)

Tratamiento biolgico de aguas residuales produce distinto tipo de lodos dentro de cada uno de los procesos individuales. Lodo crudo, es aquel que no ha sido tratado ni estabilizado, que puede extraerse de plantas de tratamiento de aguas residuales. Tiene a producir la acidificacin de la digestin y produce olor. (Eweis, J et al, 1999)

El lodo primario es producido en el fondo de tanque primario de sedimentacin. El lodo primario contiene generalmente una gran cantidad de
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material orgnica, vegetales, frutas, papel, etc. La consistencia se caracteriza por ser un fluido denso con un porcentaje en agua que vara entre 93 % y 97 %. (Miranda, J; 2000.)

La eliminacin de materia orgnica disuelta y los nutrientes de las aguas residuales tiene lugar durante el tratamiento biolgico del agua. Normalmente se caracteriza por la interaccin de distintos tipos de bacterias y microorganismos, que requieren oxigeno para vivir, crecer y multiplicarse y consumen materia orgnica. El lodo resultante llama lodo activo. Normalmente este lodo esta en forma de flculos que contienen biomasa viva y muerta adems de partes minerales y orgnicas adsorbida y almacenada.

El lodo activo de retorno que proviene del tanque de aireacin biolgica al clarificador final. Los flculos de lodo activo sedimentan al fondo y pueden separarse del agua limpia residual. La mayora del lodo que se lleva de nuevo a tanque de aireacin e llama lodo activo de retorno. (Cunningham y Philp, 2000.)

1.4.5 Bacterias

Las bacterias, son organismos unicelulares, simples y sin color, que utilizan los nutrientes para su propia reproduccin sin la necesidad de energa solar. Son bioreductores y su papel ecolgico indispensable para la degradacin de materia orgnica permite la estabilizacin de residuos orgnicos existentes en las plantas de tratamiento. Son responsables de el crecimiento de los lodos activos en plantas domesticas de tratamiento de aguas. (Lentch, 2001)

Las bacterias metanognicas, homoacetognicas o reductoras de sulfatos, consumen inmediatamente cualquier H2 producido en procesos fermentativos primarios. Los organismos claves en la conversin de sustancias orgnicas complejas en metano, son bacterias productoras de H 2 y oxidantes de cidos grasos, por ejemplo Syntrophomonas y Syntrophobacter, las primeras oxidan los cidos grasos produciendo acetato y CO2 y las ultimas se
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especializan en la oxidacin de propionato y genera CO 2 y H2. En muchos ambientes anaerbicos los precursores inmediatos del metano son el H2 y CO2 por parte de las bacterias metanognicas: Metanosphaera, Stadtmanae, Metanopinillum, Metanogenium, Metanosarcina, Metanosaeta y Metanococcus. (Miliarum, 2004)

El numero de bacterias de los fangos activados asciende a muchos miles de millones por ml, entre ellas aparece regularmente la bacteria mucilaginosa Zooglea ramigera, que forma grandes colonias con numerosas clulas encerradas en una gruesa cubierta mucilaginosa comn, las clulas individuales libres se mueven con ayuda de flagelos polares. Entre las bacterias de los flculos predominan las representantes de gneros con metabolismo aerobio-oxidativo como Zooglea, Pseudomonas, Alcaligenes, Arthrobacter, Corynebacterium, Acinetobacter, Micrococcus y Flavobacterium. Pero tambin se presentan bacterias anaerobias facultativas, que son fermentativas en ausencia de sustratos oxigenados, de los gneros Aeromonas, Enterobacter, Escherichia, Streptococcus y distintas especies de Bacillus. Todas las bacterias contribuyen con las cpsulas de muclago y con las microfibrillas al crecimiento colonial y a la formacin de los flculos. (Ahumada y Gmez, 2009)

1.4.5.1 Factores que afectan a la degradacin

Los principales factores que afectan al crecimiento celular y por ende a la degradacin de los contaminantes son: la temperatura, la concentracin del contaminante, el pH, y la concentracin de oxigeno disuelto (OD). (Ahumada y Gmez, 2009)

1.4.5.2 Temperatura

Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de crecimiento es decir que su velocidad de duplicacin es mayor. La temperatura de crecimiento y mantencin de las cepas bacterianas se encuentra entre 20 y 24 C (Weng, et al. 2005). Este es un factor que afecta la estabilidad de las
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protenas celulares porque induce cambios conformacionales que alteran la actividad biolgica de estos compuestos, especialmente la de enzimas (Ahumada y Gmez, 2009) como adems de afectas a los hidrocarburos y su forma de ser metabolizada por la bacteria. (Mayo & Noike, 1999) El crecimiento adecuado para todo tipo de bacteria se encuentra a los 37C, siendo este un referente para los procesos de descontaminacin.

Cuadro 1.1 Clasificacin de bacterias segn su temperatura de crecimiento Clasificacin Termfilos Mesfilos Psicrfilo Rango Optima

25 - 80 C 50 - 60 C 10 - 45 C 20 - 40 C -5 - 30 C 10-20 C

1.4.5.3 Concentracin de contaminante

La concentracin del contaminante tambin es un punto relevante, ya que este ser el alimento para el desarrollo de las bacterias; ya seas este de origen orgnico, como los hidrocarburos, o sea inorgnico, como son los qumicos aumentados para la refinacin del petrleo. Si la carga de contaminante es demasiada alta puede producir un efecto inverso al crecimiento, siendo este un factor para la muerte de las bacterias; por ello la biodisponibilidad del mismo debe ser regulada antes de entrar en la piscina de lodos los contaminantes debes ser estandarizado en una piscina de homogenizacin para su posterior ingreso.

1.4.5.4 pH

Las bacterias tienen un pH ptimo en el que el crecimiento es mximo, suele estar en torno a 7, aunque hay bacterias adaptadas a otros rangos. (Miliarum, 2004) En su metabolismo, las bacterias suelen modificar el pH del medio mediante la adicin de sustancias producto de su metabolismo, por lo
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que para un correcto desarrollo biolgico. El pH afecta al metabolismo de las bacterias y al mismo tiempo la solubilidad de diversas molculas y si disposicin. (Mayo & Noike, 1999)

Para hidrocarburos y especies inorgnicas se reporta un rango de pH de 6-8 para su biodisponibilidad, siendo el ms favorable de 6,8. (Ahumada y Gmez, 2009)

1.4.5.5 Concentracin de oxigeno disuelto.

Las aguas superficiales limpias suelen estar saturadas de oxgeno, lo que es fundamental para la vida. Si el nivel de oxgeno disuelto es bajo (ver cuadro 1.1), indica contaminacin con materia orgnica, septicizacin, mala calidad del agua e incapacidad para mantener determinadas formas de vida. (Goyenola, 2007)

Cuadro 1.2 rangos de concentracin de oxigeno disuelto [OD], condicin y consecuencias para los organismos vivos. (Goyenola, 2007) [OD] mg/L 0 Condicin Anoxia Consecuencias Muerte masiva de

organismos aerobios 0-5 Hipoxia Desaparicin de

organismos y especies sensibles 5-8 8-12 Aceptable Buena [OD] adecuadas para la vida de la gran mayora de especies de peces y otros acuticos organismos

>12

Sobresaturada

Sistemas

en

plena

produccin fotosinttica

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1.4.6 Desechos de la refinacin de crudo

Los desechos de hidrocarburo y la refinacin del mismo, es un contaminante importante que afecta en gran medida la calidad del agua, formando una pelcula impermeable que impide el intercambio gaseoso y la penetracin de la luz solar. La refinacin del crudo emplea grandes cantidades de agua, ya sea para el enfriamiento, produccin de vapor, procesos de reaccin y limpieza de reactores. Entre los principales contaminantes (anexo 1) de estos procesos se encuentran, adems del crudo de petrleo, aceites, grasa, agua con elevados niveles de temperatura, compuestos fenlicos, sulfuros, cidos, benceno, plomo, benzopierenos. Estos son los principales contaminantes que terminan en las cuencas del rio Teaone, generando as una muerte paulatina del plancton y de la vida en el mismo, debido al aumento de pH, conductividad y temperatura del rio. (Torres y Castro. 2002)

1.4.7 Efectos en la salud humana

El petrleo tiene un coctel de sustancias qumicas que son dainas tanto para el hombre como para la fauna que se encuentre a su alrededor. Las principales afecciones debido al contacto son irritacin en las mucosas y piel, vomito, dolor de cabeza. Uno de los contaminante son los HAPs, estos ocasionan daos genotxicos adems de ser bioacumulativos, es decir que producen mutaciones a nivel del ADN y carcinognesis, formacin de tumores, debido a su acumulacin en las clulas. (ATSDR, 1995)

En estudios realizados con ratonas que fueron alimentadas con bensopirenos se demostraron afecciones en las etapa de desarrollo fetal dando como resultado abortos espontneos, as como problemas de dficit de peso en las cras, haciendo una comparacin a la salud humana se puede decir que tiene los mismos efectos, tal es el caso de los testimonios tomados de las comunidades indgenas del rio Coca cuando este sufri de un derrame. (Maippa, 2009)

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La vida silvestre tambin es afectada, ya sea por los altos niveles de conductividad, o su alta temperatura, el plancton, crustceos y peses del rio estn expuestos a una contaminacin severa, no solo por el crudo en si sino por sus derivados que son aun ms dainos, afectando a su reproductividad, daos pulmonares, dao heptico entre otros. (Amsa, 2003)

1.4.8 Formacin de Hiptesis

1.4.8.1 Hiptesis nula

Los procesos biolgicos de degradacin la piscina de tratamiento de lodos posterior al estudio del mismo no tendr diferencias significativas

1.4.8.2 Hiptesis alternativa

Los procesos biolgicos de degradacin la piscina de tratamiento de lodos posterior al estudio del mismo si tendr diferencias significativas

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CAPTULO 2: MATERIALES Y METODOS

2.1 Localizacin geogrfica

El proyecto se desarroll en la Refinera Estatal de Esmeraldas de Petroindustrial REE. En la ciudad de Esmeraldas, Provincia de Esmeraldas, localizada 31 en sentido anti horario con respecto al norte geogrfico a una altitud de 24.5 metros sobre el nivel del mar. La identificacin de las cepas se las realizo en los laboratorios de microbiologa de la facultad de biotecnologa ESPE.

A cada una de las muestras se le realizo un tratamiento especial dependiendo del tipo de prueba. En el caso de las muestras para anlisis fsico qumicos se tomaron muestras en envases de vidrio, Para los exmenes de microfauna se realizaron toma de muestras en frascos plsticos estriles para muestreo de orina. Todas las pruebas se realizaron a temperatura ambiente, un promedio de 29C dentro del laboratorio.

2.2 Fase de Laboratorio

2.2.1 Anlisis fsico-qumicos del agua de la piscina de lodos activados

Los anlisis fsico-qumicos que se realizaron en la fase inicial, fueron: pH, conductividad, TPH, fenol, slidos totales disueltos, slidos voltiles, oxigeno disuelto; adems de DBO (demanda bilgica de oxigeno) y DQO (demanda qumica de oxigeno) los cuales se realizaron en el laboratorio particular LABANSY. Todos los protocolos se realizaron segn el manual de laboratorio de aguas de la refinera que se basa en el libro standard methods for the examination of wter and wastewater.

La toma de muestras se la realizo mediante un muestreo aleatorio estratificado (MAE). Ya que la piscina trabaja en forma de flujo pistn, es decir que mientras el contamnate recorre el trayecto de la piscina este reduce su
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carga, se dividi a la piscina en 4 sectores, siendo estos en la parte de entrada del agua, dos partes medias y en la parte final de la misma. Figura 2.1

Figura 2.1 Diagrama de la piscina de lodos activados, dimensiones y puntos de toma de muestra. ES: entrada de efluente, PM1: punto medio 1, PM2: punto medio 2, SE: salida del efluente.

2.2.1.1

Medicin de pH

Para esta medicin se utiliz un pH-Metro Mettler Toledo S20 Seven Easy. (Anexo 3) Inicialmente se calibra el pH-meter. Se introduce el diodo en una solucin buffer para calibrar y se presiona , luego el pH meter

alcanza automticamente el punto de calibracin final. A temperatura ambiente, se coloca 100ml de muestra en un vaso de precipitacin, para luego insertar el diodo del pH-metro dentro de la muestra, se presiona READ, se espera a que se estabilice la lectura y se toma datos.

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Figura 2.2 pH-meter Toledo usado para medicin.

2.2.1.2 Medicin de Oxigeno disuelto (OD)

Calibracin de oxigeno disuelto (manual 3 star-plus)

Figura2.3 medidor de OD 3 star-plus Se selecciona un modo de calibracin en el men de configuracin. En este caso Se realiza una calibracin de agua utilizando agua saturada

al 100% con aire. Forme burbujas de aire en una muestra de agua y agite la muestra suavemente para evitar la acumulacin de burbujas de aire en la membrana de la sonda de oxigeno disuelto. Se introduce el diodo y se espera un momento, luego en modo de medicin, se presiona de flecha apunte a la lnea inferior, presionar
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hasta que el icono

hasta que aparezca el icono

% sat o mg/L y presionar

para iniciar la calibracin; se espera a que la

lectura de oxigeno disuelto se estabilice, el medidor mostrara 100.0% y pasara automticamente al modo de medicin.

Lectura de Oxigeno disuelto El Oxigeno disuelto de midi en un medidor de mesa de OD Orin 3-star plus (Anexo 4), se retira el capuchn del diodo, el cual contiene agua destilada, se coloca el diodo dentro de la muestra, se presiona READ y se aguarda por 1 minuto hasta que se estabilice y tomamos datos de OD; se lava el diodo con agua destilada y se inserta nuevamente el capuchn.

2.2.1.3 Medicin de Conductividad.

De igual forma esta prueba se realizo mediante un medidor de conductividad Orin 3-star plus. (Anexo 4) Se enciende el medidor, se extrae el diodo de un vaso que contiene agua destilada, se coloca el diodo dentro de la muestra, se procede a leer y registrar los datos. Se enjuaga el diodo y se coloca nuevamente en el agua destilada.

Figura 2.4 medidor de conductividad 3 star-plus.

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Calibracin de Conductividad. (Manual 3 star-plus) En modo de medicin, presionar lnea intermedia, presionar mS/cm y presionar hasta que el icono de flecha apunte a la hasta que aparezca el icono S/cm o

para iniciar la calibracin. Enjuagar la sonda con

agua desionizada o destilada y colocarla en el estndar de conductividad. Para realizar una calibracin manual, la pantalla de calibracin manual mostrara la constante de celda en la lnea superior, el valor de conductividad del estndar de calibracin en la lnea intermedia y la constante de celda, se presiona intermitente y se presiona en la lnea inferior. Para cambiar hasta que el primer digito cambie a para cambiar el valor del digito

intermitente y continuar cambiando los dgitos hasta que el valor de conductividad mostrado coincida con el valor del estndar a la temperatura medida. Cuando el valor este definido, se presiona decimal este en el lugar correcto. Presionar calibracin. hasta que el punto

para guardar y finalizar la

2.2.1.4 Medicin de Slidos totales suspendidos

En este paso hay que tener mucho cuidado en la manipulacin del papel filtro, ya que este solamente debe ser manipulado por medio de las pinzas metlicas y nunca ser operado con las manos, caso contrario puede producir falsos positivos en la medicin de su peso. Inicialmente se pesa el papel filtro en la balanza analtica para luego colocarlo en el equipo de succin al vacio (anexo 6). Se homogeniza la muestra de agua y se colocan 100 ml de la muestra dentro del embudo, se enciende la bomba y se deja extraer toda el agua.

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Figura 2.5 equipo de filtracin para prueba de slidos suspendidos

Se desmonta el embudo del equipo de vaco, con una pinza metlica se extrae el papel filtro y se lo coloca en una base de vidrio la cual ira a la estufa durante una hora a 105C, seguidamente se colocar la base de vidrio en un desecador por 45 minutos para finalmente tomarlos con la pinza metlica y pesarlos nuevamente en la balanza analtica. Los ppm de slidos totales suspendidos se miden segn la siguiente frmula:

Figura 2.6 Desecador para el papel filtro, de la prueba de slidos totales

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disueltos. ppm de slidos totales suspendidos= (A B) x 1000 ml de la muestra Donde: A = el peso del filtro+ los residuos secados en mg B = el peso inicial del filtro

2.2.1.5 Medicin de TPHs (Hidrocarburos totales de petrleo)

Se toma una muestra de 200ml y se coloca en un separador, en el cual aadimos 25ml de cloroformo y 5 ml de acido clorhdrico 1 N, se tapa el separador y se agita vigorosamente 3 veces cada una por 10 segundos, entre cada agitacin se hace expulsar el gas, que se forma dentro del separador, apuntando siempre al interior de la cmara de flujo.

Figura 2.7 Prueba de TPHs insercin de acido clorhdrico dentro de la muestra

Luego se deja reposar hasta que se forme las dos zonas definidas, una zona polar y otra apolar, decantaremos la zona apolar filtrando por papel celulosa y recolectando en un vaso de precipitacin. Este vaso de precipitacin previamente debe ser lavado, secado en la estufa a 120C durante una hora y colocado en el desecador durante otra hora, para posteriormente ser pesado en una balanza analtica, cabe destacar que este debe ser manipulado siempre
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con unas pinzas metlicas.

Figura 2.8 Prueba de TPHs formacin de las dos fases, polar y apolar, en la mezcla.

En una manta trmica colocamos el vaso con el cloroformo y dejamos que este ltimo se evapora por completo, dejamos enfriar y pesamos en la balanza analtica, nuevamente el vaso de precipitacin debe ser manipulado con la pinza metlica. La diferencia entre el peso inicial del vaso y el peso final ser los ppm de THPs. ppm de TPHs= (A - B) Donde A= peso final de vaso, luego de la evaporacin del cloroformo B= peso inicial del vaso, sacado del desecador.

2.2.1.6 Medicin de Fenoles

Realizacin de la curva de calibracin Se preparan estndares de 100 ml con concentraciones de 50, 40, 30, 20, 10 y 5 ug de fenol diluido en agua destilada, adems de un blanco de 100 ml de agua destilada. Se tratan los estndares y el blanco con 12 ml de NH 4OH a 0,5N y se ajusta el pH a 7,9+0,1 con una solucin buffer de fosfato. Se
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agrega 1,0 ml de 4-aminoantipiryne, se mezcla bien, adicionalmente se agrega 1,0ml de K3Fe (CN)6 y se agita bien. Se espera 15 minutos hasta que se estabilice la muestra y tome un color amarillento, finalmente se lee la absorvancia a 500nm. Se realiza la curva absorvancia vs la concentracin de fenol. En este caso se calibro el espectrofotmetro para que este arroje los resultados directamente en ppm de fenol con la formula siguiente:

ppm.de. fenol
Donde: B = ml de la muestra

C * D* 1000 E*B

C = mg de la solucin estndar de fenol D = absorvancia de la muestra E = absorvancia del estndar de fenol.

Medicin de fenol en las muestras

Debido a que la muestra contiene muchas impurezas, se debe realizar una volatilizacin del fenol de la muestra. Ya que la volatilizacin del fenol es gradual, el volumen de destilado ser igual a la muestra original quedando, solamente las impurezas no voltiles. Medir un volumen de 100ml dentro de un baln para destilacin, el cual contendr 3ml de una solucin de indicador naranja metil y ncleos de ebullicin; ajustar el pH a 4,0 con H3PO4, hasta que el indicador cambie a un color amarillo.

Luego de esto iniciar la destilacin y recolectar la muestra. Con la muestra recolectada de la destilacin se procede de igual forma como en la curva de calibracin. Se colocan en erlenmeyer el blanco y las muestras luego de la destilacin.

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Figura 2.9 Prueba de fenoles, equipo de destilacin para la extraccin de fenoles por arrastre

Se tratan las muestras y el blanco con 12 ml de NH4OH a 0,5N y se ajusta el pH a 7,9+0,1 con una solucin buffer de fosfato. Se agrega 1,0 ml de 4-aminoantipiryne, se mezcla bien, adicionalmente se agrega 1,0ml de K3Fe(CN)6 y se agita bien. Se espera 15 minutos hasta que se estabilice la muestra y tome un color amarillento, finalmente se lee la absorvancia a 500nm.

Figura 2.10 anlisis espectrofotomtrico de fenoles.

29

2.2.2 Anlisis cuantitativo de la microfauna de la piscina de lodos activados

De igual forma que en el anlisis qumico los puntos de referencia para la toma de muestras fueron los mismos.

2.2.2.1 Preparacin de medios.

Para el anlisis cuantitativo se prepararon cajas petri con agar conteo (PCA), este es un medio minimo de crecimiento, el cual ofrece los requerimientos bsicos para el desarrollo de las colonias de diferentes tipos de bacterias.

Se suspende 23,5 gr de agar conteo, previamente pesados, en un litro de agua destilada, calentar y agitar constantemente hasta que llegue a su punto de ebullicin; el medio estar listo si este cambia de un color turbio a un transparente, dejar enfriar y llevar el medio a un pH de 7,0 + 0,2 a 25C usando acido clorhdrico 1N o hidrxido de sodio 1M. Colocar un capuchn de papel aluminio en la boca del erlhenmeryer adherirlo con cinta y autoclavar el medio durante 15 minutos a una temperatura de 121C. Se esterilizaras las cajas petri ya sea por medio de la autoclave, a 121 C durante 15 minutos, o por medio de la estufa mediante calor seco a 170C por una hora. Ya autoclavado el medio se deja reposar y enfriar para luego ser dispensado en las cajas petri; este debe ser dispensado junto a un mechero de bunsen y la cmara de flujo debe ser desinfectada con alcohol al 70%, esto servir para que no exista contaminacin cruzada. Se deja enfriar a temperatura ambiente hasta el da siguiente, y se observa si existi o no contaminacin.

2.2.2.2Preparacin de agua para diluciones

Se preparan tubos de ensayo de 15ml con 9 ml de agua destilada, se colocan en un vaso de precipitacin de litro y se autoclava a 121C durante 15 minutos. Se deja enfriar a temperatura ambiente y se refrigera. Se tomara una muestra de agua y ser sembrada en una caja de medio conteo a 37C durante un da, para verificar si no existe contaminacin alguna.
30

2.2.2.3 Sembrado para la cuantificacin

La muestras de agua de la piscina de lodos fue tomada directamente con un frasco estril para muestreo de orina etiquetado con fecha, hora, punto de la toma de muestra y temperatura. Para el sembrado se necesitaran puntas de pipetas de 1ml, las cuales tambin sern autoclavadas a 121C durante 15 minutos para lograr su esterilidad. Ya una vez enfriadas las cajas y observadas que no tienen contaminacin alguna se procede a realizar el sembrado. Inicialmente se toma una caja para el control. Esta ser expuesta al medio ambiente dentro de la cmara de flujo, para cuando se finalice el sembrado, esta ser colocada en la incubadora para verificar si existe o no contaminacin cruzada.

Se calibra la pipeta a 1ml para luego tomar la punta estril y absorber 1ml de la muestra inicial, previamente homogenizada, se coloca el 1ml de la muestra inicial en el tubo que contiene 9ml de agua estril; en ese momento tendremos una dilucin 1:10; se toma nuevamente una punta nueva, se absorbe 1ml de la dilucin 1:10 y se procede a colocar en un tubo nuevo que contiene 9ml de agua estril, as tendremos una dilucin 1:100. Finalmente repetimos los mismos pasos hasta conseguir la dilucin adecuada para el conteo llegando hasta 1:106

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Figura 2.11 sembrado para cuantificacin. a) Toma de muestra de agua b) dilucin de la muestra c) sembrada de la dilucin d) expansin de la muestra de agua

Una vez lista las diluciones, se toma una punta nueva y se coloca 1ml de cada dilucin, desde la ms diluida hasta la ms concentrada, en cada caja, se expande la muestra con una barrilla de vidrio anteriormente esterilizada por medio del mechero y se etiquetan las cajas. Se deja incubar a 37C por 24 horas y contabilizan las colonias. Las colonias sern contabilizadas en un UFC counter, se coloca la caja petri dentro del equipo y se va pintando cada una de las colonias o puntos que se encuentran en la caja con un marcador, el contador ira sumando automticamente debido a la presin que se proporciona al momento de marcar las colonias. El nmero de colonias debe estar entre 30300 colonias para que el resultado sea aceptable.

32

Figura 2.12 Equipo UFC counter para conteo de colonias en agar nutriente.

2.2.2.4 Aislamiento de colonias y establecimiento de cultivos puros

Debido a que el conteo bacteriano se realizo de manera superficial en caja petri se presentaron en las mismas diferentes colonias las cuales fueron seleccionadas por su morfologa. (Figura 2.13)

Figura 2.13 identificacin de colonias por su morfologa.

Se realiza un punzado en la zona donde se localiza la colonia y se procede a sembrar en un tubo con agar nutritivo inclinado a 37C durante 24 horas para luego realizar un aislamiento en placa.

Se esteriliza a fuego del mechero el asa bacteriolgica se deja enfriar, se toma una muestra del tubo inclinado, para luego ser esparcida en un cuarto de la caja petri, con la misma asa se procede a realizar estras de forma cuadrante en toda la superficie de la caja, como indica la figura 2.14

33

Figura 2.14 formas de estras para aislamiento de colonias en caja petri.

Las cajas se incubaron a temperatura ambiente por 24 horas. Luego con un mondadientes esterilizado se toma un punto aislado para ser sembrados en tubos con agar inclinado TSA (Tripticasa soya agar). Para identificar si las cepas fueron aisladas perfectamente se toma una muestra del tubo TSA y se realiza una tincin Gram, en el cual debe aparecer un solo tipo de bacteria, caso contrario se repite el proceso desde la formacin de estras en caja. Este proceso se realizo para cada una de las cepas identificadas

2.2.2.5 Identificacin de las cepas

De la aislacin anterior se obtuvieron 5 cepas; M1, M2, M3, M4, T1.

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Figura 2.15 cepas de colonias aisladas en agar inclinado TSA. a) Muestra 1: cdigo M1, b) Muestra 2: cdigo M2, c) Muestra 3: cdigo M3, d) Muestra 4: cdigo M4, e) Muestra 5: cdigo T1

A estas muestras se les someti a diferentes pruebas, tales y como son sembrado en agar King B, tincin Gram, prueba de oxidasa, siembra en agar TSI, y pruebas API.

Inicialmente se realiz una tincin gran, la cual consiste en hacer un frotis de la muestra en un porta objetos y se lo hace secar y fijar al calor flamendola 4 veces, a este se le adiciona unas gotas de cristal violeta, se deja tomar el color por 60 segundos y se enjuaga con agua, se coloca yodo durante 60 segundos y se enjuaga nuevamente; se colocan unas gotas de alcoholcetona durante 30 segundos y se enjuaga y finalmente se adiciona safranina durante 60 segundos se enjuaga y se observa al microscopio. Si la muestra presenta un color violeta es una bacteria Gram positiva, caso contrario si la bacteria presenta un color rojizo es una bacteria Gram negativa. De igual forma
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se identificara si la bacteria tiene forma redondeada ser un coco, si la bacteria alargada en forma de bastn es un bacilo.

De este procedimiento se pudo identificar que las muestras M1, M2, M4 y T1 son bacilos gran negativos y la muestra M3 es un bacilo gran positivo. Tambin se realizo una siembra en agar King B, este sirve para la identificacin de Pseudomonas. Si existe la presencia de Pseudomonas estas tomaran un color verde metlico. Este agar es un medio selectivo y conformado por 20,0g de mezcla de peptona; 1,5g de sulfato de magnesio; 1,5g de fosfato di potsico; 15,0 g de agar-agar todo esto mezclado en un litro de agua destilada, adems se aade 10,0g de glicerina, calentar hasta que hierva. Luego autoclavar a 121C durante 15 minutos y dispensar en cajas petri estriles. Es estos platos tambin se realizo una aislacin de las bacterias.

En el caso de la prueba TSI, se sembr cada una de las muestras en un tubo con agar inclinado TSI haciendo un zigzag en la superficie del mismo y en el final una puncin hasta el fondo del tubo. De esta prueba se pudo identificar que M2, M3, M4 y T1 son fermentadoras de glucosa y M1 fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa figura 2.16

Figura 2.16 Prueba de TSI. a) muestra M1, b) muestra M2, c) muestra M3, d) muestra M4, e) muestra T1

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Pruebas de oxidasa

Esta prueba se realiza mediante un papel identificador de oxidasa, se toma una muestra de la cepa con un palillo estril y se realiza un frotis en el papel si este toma un color violeta existe la presencia de oxidasa. Pruebas API

Figura 2.17 esquema de resultados positivos o negativos de las pruebas API.

Las pruebas API20E, consiste en un sistema de pruebas de identificacin rpida para bacterias gran negativas. Consta de 20 test bioqumicos numerados y codificados para una identificacin numrica en la base de datos de la misma. Es un test rpido, eficaz y seguro el cual se encuentran 20 pocillos cada uno con una prueba diferente. A partir de una muestra pura y aislada se hace una suspensin con 5ml de agua estril y se coloca en cada uno de los pocillos, no la cpula, esta sirve para dar la parte aerobia al medio. Se llena la cpula de los pocillos CIT, VP y Gel con la suspensin; adems de colocar parafina en las cpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE y H2S, para su parte anaerobia.se incuba a temperatura ambiente durante 24 horas, y se toma resultados en las papeletas que API entrega con la prueba para su codificacin. Para pruebas como VP se aade una gota de reactivo 1 (KOH 40%) y dos gotas del reactivo 2 (C2H5OH) y para la prueba IND se aade una gota del reactivo de kovac. La prueba de oxidasa anteriormente nombrada se usa para la el resultado final y la identificacin de la bacteria.

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Figura 2.18 Pruebas API de las diferentes cepas a) M1 b) M2 c) M4 d) T1

2.3 Pruebas de antagonismo de la microfauna

Las cepas aisladas fueron sometidas a pruebas de antagonismo entre s, es decir, que fueron enfrentadas dos cepas diferentes entre s para observar si existe una inhibicin del crecimiento una de la otra, tomando como antagonismo positivo a las cepas que presentan un halo de inhibicin mayos al de 5mm y antagonismo negativo si el halo de inhibicin en menor a 5 mm.

Se plantearon 2 hiptesis para descartar las cepas que presentaban un alto grado de antagonismo, teniendo en cuenta el halo de inhibicin: Ho: Halo de inhibicin de cada una de las cepas es < a 0.5 cm de dimetro. HA: Halo de inhibicin de cada una de las cepas es > a 0.5 cm de dimetro.

Para esta prueba se necesito tubos con caldo Tripticasa soya, en los cuales se cultivaron las cepas M1, M2, M3, M4 y T1 en tubos por separado; discos de papel filtro e hisopos estriles, cajas petri con agar nutriente y agar PLA.
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Las cajas petri con agar PLA constan de agua filtrada y estril de la piscina de lodos activos y 15g de agar-agar por litro de agua, se mezclan y se calienta hasta su primer hervor, se autoclava a 120C durante 15 minutos y se dispensa en cajas petri estriles.

Se toma una muestra de la cepa M1 en caldo soya con un hisopo estril para luego realizar una siembra para crecimiento masivo en la caja petri de agar nutriente. Con pinzas estriles, flameadas en fuego del mechero, se toma un disco de papel filtro y se empapa con la muestra de la cepa M2 en caldo soya y se coloca en un cuadrante del agar nutriente, se repite este ltimo paso para los tres ltimos cuadrantes y se deja cultivar a temperatura ambiente durante 24 horas. Todo este proceso se lo realiza para cada una de las combinaciones como indica la tabla 2.1; adems de hacerlas por triplicado en agar nutriente y en agar PLA.

Tabla 2.1 Pruebas de antagonismo realizadas a los 5 tipos de cepas

CAJAS CON CEPAS SEMBRADAS VS DISCOS CON CEPAS INOCULADAS 1M-2M 1M-3M 1M-4M 1M-T1 2M-1M 2M-3M 2M-4M 2M-T1 3M-1M 3M-2M 3M-4M 3M-T1 4M-1M 4M-2M 4M-3M 4M-T1 T1-1M T1-2M T1-3M T1-4M

2.3.1 Anlisis de seleccin y mejora en los nutrimentos de los microorganismos para bioestimulacin

En esta etapa se utilizaron tres tipos de formulas a probarse. Cada una fue probada agregando la mezcla de formula, agua de la piscina de lodos en un reactor de 5 litros y siendo mezcladas por medio de oxigeno.

Se plantearon 2 hiptesis para identificar que formula es la mejor, teniendo

39

en cuenta los resultados por triplicado y realizando un anlisis de varianza para cada prueba qumica vs las formulaciones: Ho: F1=F2=F3=C=0. HA: F1=F2=F3=C=0.

2.3.1.1 Frmula 1 (F1)

Esta frmula es bsica para el crecimiento y estimulacin de bacterias (Cumbal 2008), consiste en una relacin entre la carga orgnica, nitrgeno y fosforo. DBO: N: 100: 5: P 1

Para lo cual se uso 5gr de nitrato de amonio y 1 gramo de fosfato cido di sdico

2.3.1.2 Frmula 2 (F2)

Esta es una modificacin de la formula King B, en la cual se agreg 5g de nitrato de amonio. La formula King B tiene como ingredientes 2g sulfato de magnesio y 2g fosfato di bsico de potasio, adems de una mezcla de peptona que es reemplazada con la carga orgnica que ofrecen los hidrocarburos y 4g de glucosa como fuente de carbono adicional y de fcil degradacin. La nueva frmula tiene una nueva proporcin siendo la siguiente: N: 5: P: 2 S: 2 C 4

El azufre es usado como fuente energtica, en algunos tipos de bacterias gram negativas, haciendo reducir a este hasta el sulfuro de hidrogeno como producto final y estable.

2.3.1.3 Frmula 3 (F3)

Este es un medio mineral mnimo usado para la estimulacin de crecimiento bacteriano en la degradacin de hidrocarburo. (Foght, Gutnick y Westlake, 1989) A esta formulacin se le hizo un cambio en el cual consista bajar las
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concentraciones en un 70%, ya que este es un medio enriqueci para la proliferacin masiva de bacterias descontaminadoras. La formulacin es la siguiente: Cloruro de sodio Cloruro de potasio Fosfato di bsico de potasio Sulfato de magnesio heptahidratado Fosfato cido disdico Nitrato de amonio Agua 1000 ml 1,5 g 5g 6g 0,35 1,0 g 1,5g

Una vez ya tomado los pesos adecuados se procedi a mezclar cada una de las formulas en recipientes de 5 litros de capacidad, estos fueron aireados y mezclados mediante un sistema de flujo de aire que se utiliza en la aireacin de peceras. (Figura 2.19) Para lo cual se midi el caudal de oxigeno que produca cada uno de los motores de pecera. Se inserto la manguera dentro de una probeta graduada la cual estaba invertida y contena agua; se observa la cantidad inicial de agua que contiene la probeta y en un intervalo de tiempo de 10 segundo tomados por cronometro se enciende el motor de pecera para luego observar el valor final de agua, la diferencia entre estos valores ser los ml de oxigeno dispuestos por el motor durante 10 segundos. (Figura 2.20) extrapolando los datos a un minuto tendremos los valores de la tabla 2.2 este proceso se repiti tres veces para cada motor.

Tabla 2.2 Caudal de oxigeno suministrado a cada reactor etiquetado segn su formulacin Caudal de oxigeno ml/min F1 5.7 F2 5.3 F3 5.6 F4 5.7

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Figura 2.19 Medicin de caudal de oxigeno de los motores de pecera

Figura 2.20 reactores aireados con agua de la piscina de lodos activados y formulas. C= control, F1=formula 1, F2= formula 2, F3= formula 3.

42

CAPTULO 3. RESULTADOS

3.1 Anlisis fsico qumicos iniciales del agua de la piscina de lodos activados

Los datos se obtuvieron mediante un muestreo aleatorio estratificado (MAE) dividiendo la piscina en 4 puntos de toma de muestras, como indica la figura 3.1.

Durante esta etapa se tomaron muestras durante 27 das seguidos, de estos datos se sacaron las medias, figuras 3.1 3.8, y se compararon versus los mximos y mnimos permitidos por la norma RAOH, dando como resultado que TPHs, DQO, Fenoles y OD son los parmetros afectados figuras 3.5, 3.6, 3.7, 3.8 respectivamente. Estos fueron los parmetros estudiados

primordialmente en el proceso de bioestimulacin.

TPHs tiene como promedio valores mximos de 264 ppm y como mnimo 123 ppm, teniendo que reducir sus valores a un mximo de 20 ppm. Figura 3.5. En este parmetro podemos observar un patrn de decrecimiento natural siendo el valor mayor en la entrada de la piscina de lodos, luego de la homogenizacin, y reducindose en el recorrido de la piscina como es de esperar.

DQO tiene como promedio valores mximos de 390 ppm y como mnimo 373 ppm, teniendo que reducir a un mximo de 120 ppm. La Figura 3.6 muestra este parmetro indicando como flucta los valores altos y bajos dentro de la misma, lo que indica que los niveles de crecimiento bacteriano estn afectados.

Fenoles tiene como promedio mximos de 6,6 ppm y como mnimo 1,3 ppm, teniendo que reducir a un mximo de 0,15 ppm. Figura 3.7, este parmetro de igual forma que los TPHs decrecen segn transita el agua dentro de la piscina, pero aun as los valores siguen siendo altos para su desecho.

43

OD tiene como promedio valores mximos de 4,6 ppm y como mnimo 3,4 ppm, siendo como valor optimo para el crecimiento bacteriano y para una mejor oxidacin de compuestos inorgnicos valores mnimos de 5 ppm de oxigeno disuelto a nivel del mar y a una temperatura promedio de 30C..

pH
10 8 6 4 2 0 V. ES. V. PM 1 V. PM 2 V. SE V. Max. Per. V. Min. Per. pH

Figura 3.1 promedio de pH de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

CE en uS/cm
3000 2500 2000 1500 1000 500 0 V. ES. V. PM 1 V. PM 2 V. SE V. Max. Per.

CE en uS/cm

Figura 3.2 promedio de Conductividad elctrica de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto
44

medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

ST en mg/l
2000 1500 1000 500 0 V. ES. V. PM 1 V. PM 2 V. SE V. Max. Per. ST en mg/l

Figura 3.3 promedio de slidos totales de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

N en mg/l
25 20 15 10 5 0 V. ES. V. PM 1 V. PM 2 V. SE V. Max. Per. N en mg/l

Figura 3.4 promedio de nitrgeno global de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

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TPH en mg/l
300 250 200 150 100 50 0 V. ES. V. PM 1 V. PM 2 V. SE V. Max. Per.

TPH en mg/l

Figura 3.5 promedio de TPH de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

DQO en mg/l
500 400 300 200 100 0 V. ES. V. PM 1 V. PM 2 V. SE V. Max. Per. DQO en mg/l

Figura 3.6 promedio de DQO de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

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FENOLES en mg/l
8 6 4 2 0 V. ES. V. PM 1 V. PM 2 V. SE V. Max. Per. FENOLES en mg/l

Figura 3.7 promedio de Fenoles de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

OD en mg/l
6 5 4 3 2 1 0 V. ES. V. PM 1 V. PM 2 V. SE V. Min. Per.

OD en mg/l

Figura 3.8 promedio de oxigeno disuelto de los 27 valores tomados en los 4 puntos de la piscina, valores mximos y mnimos permitidos segn normas RAOH. V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

47

3.2

Anlisis cuantitativo de la microfauna de la piscina de lodos activados

De igual forma que los anlisis qumicos, estos fueron hechos en los cuatro puntos que indica la figura 3.1 durante 27 das teniendo como referencia un muestreo estratificado aleatorio (MAE).

Los resultados indican un decrecimiento bacteriano durante el recorrido de la PLA dando un promedio mximo de 8,4 x 10 4 UFC en la entrada y un mnimo de 4,2x 104 UFC a la salida de la piscina; si bien es cierto en una piscina flujo pistn estos valores deben decrecer, estos son muy bajos como para poder realizar un trabajo eficiente.

UFC en la PLA
100000 50000 0 E.S. P.M. 1 UFC en la PLA P.M. 2 S.E.

Figura 3.9 promedio de UFC tomados en los 4 puntos de la piscina, V.ES = Valor de entrada de la piscina, V. PM 1 = valor punto medio 1, V. PM 2 = valor punto medio 2, V. Max. Per.= valor mximo permitido, V. Min. Per.= valor mnimo permitido.

3.3

Resultado de la pruebas de identificacin.

De las diferentes pruebas bioqumicas se obtuvo los resultados mostrados en la Tabla 3.1. Se seguir tomando la codificacin indicada en este escrito para los subsecuentes pronunciamientos de para cada una de las especies.

48

Tabla 3.1 resultados de las pruebas bioqumicas impuestas a las diferentes muestras bacterianas de la piscina de lodos activados. MUESTRAS PRUEBAS Tincin Gram Oxidasa TSI Nombre M1 Bacilo negativo (-) A/A E. coli M2 Bacilo negativo (+) K/A Aeromona hydrophila M3 Bacilo positivo (+) k/A B. subtilis M4 Bacilo negativo (+) K/A K/A T1 Bacilo negativo

Pseudomona Chromobacterium luteola violaceum

3.4

Anlisis de las pruebas de antagonismo

Cada cepa fue contrapuesta, ya sea de forma principal siendo sembrada de forma completa en el agar o de forma secundaria en discos de papel para ser colocados en las cajas. Dando como resultado que no existe antagonismo entre las diferentes cepas, como se puede observar en las figuras 3.10- 3.12 no existe halos representativos entre todas las cepas ya que su dimetro es menor a 5mm. Y esto es considerado como simbiosis entre las cepas.

Crecimiento del halo de inhibicin de las cepas 2M, 3M, 4M y T1 vs 1M

2,00 1,00 0,00 1M-2M 1M-3M mm de halos 1M-4M 1M-T1

Figura 3.10 promedios de halos de inhibicin, en mm, de 1M vs 2M, 3M, 4M y T1 realizado en las pruebas de antagonismo.

49

Crecimiento del halo de inhibicin de las cepas 1M, 3M, 4M y T1 vs 2M

2,50 2,00 1,50 1,00 0,50 0,00 2M-1M 2M-3M 2M-4M 2M-T1

mm de los halos

Figura 3.11 promedios de halos de inhibicin, en mm, de 2M vs 1M, 3M, 4M y T1 realizado en las pruebas de antagonismo.

Crecimiento del halo de inhibicin de las cepas 1M, 2M, 4M y T1 vs 3M

1,50 1,00 0,50 0,00 3M-1M 3M-2M 3M-4M 3M-T1

mm de los halos

Figura 3.12 promedios de halos de inhibicin, en mm, de 3M vs1M, 2M, 4M y T1 realizado en las pruebas de antagonismo.

50

Crecimiento del halo de inhibicin de las cepas 1M, 2M, 3M y T1 vs 4M

1,50 1,00 0,50 0,00 4M-1M 4M-2M 4M-3M 4M-T1

mm de los halos

Figura 3.13 promedios de halos de inhibicin, en mm, de 4M vs1M, 2M, 3M y T1 realizado en las pruebas de antagonismo.

Crecimiento del halo de inhibicin de las cepas 1M, 2M, 4M y T1 vs 3M

1,50 1,00 0,50 0,00 T1-1M T1-2M mm de los halos T1-3M T1-4M

Figura 3.14 promedios de halos de inhibicin, en mm, de T1 vs1M, 2M, 3M y 4M realizado en las pruebas de antagonismo.

51

3.5 Anlisis de frmula para bioestimulacin en la piscina de lodos activados

Para la identificacin de una formulacin adecuada para la estimulacin, se realizo anlisis de varianza para cada uno de los parmetros estudiados, adems de un grafico de cajas y bigotes para una identificacin ms visible.

3.5.1 Demanda biolgica de oxigeno (DBO)Cajas y Bigotes Grfico de

F1

form ul a s

F2 F3

M 0 10 20 30 40 50 60

ppm de DBO
Figura 3.15 grafico de cajas y bigotes de DBO para cada frmula y control.

Tabla 3.2 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para DBO. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 3668,32 11 35,3 8 4,4125 3633,02 3 de Gl Cuadrado medio 1211,01 274,45 0,0000 Cociente-F P- valor

La tabla 3.2 de ANOVA descompone la varianza de los datos de DBO en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 274,449 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es inferior a 0,05, indica
52

una diferencia estadsticamente significativamente entre las medias de los datos de cada una de las formulas y el control a un nivel de confianza del 95,0%

3.5.2 Demanda qumica de oxigeno (DQO) En el caso de DQO los valores de F1 aumentaron un 38% ms del valor permitido, en el caso de F2 disminuyo en un 45% y finalmente F3 aumento en un 116%

Grfico de Cajas y Bigotes

F1
F O R MU L A S

F2

F3 M 0 50 100 150 200 250 300

ppm de DQO
Figura 3.16 grafico de cajas y bigotes de DBO para cada frmula y control.

Tabla 3.3 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para DQO. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 77805,7 11 140,227 8 17,5283 77665,5 3 de Gl Cuadrado medio 25888,5 1476,95 0,0000 Cociente-F P- valor

La tabla 3.3 de ANOVA descompone la varianza de los datos de DQO en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 1476,95 es el cociente de la estimacin entre grupos y la

53

estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es inferior a 0,05, indica una diferencia estadsticamente significativamente entre las medias de los datos de cada una de las formulas y el control a un nivel de confianza del 95,0%

Tabla 3.4 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de DQO de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa. Formulas Frecuencia Media Grupos homogneos F2 M F1 F3 Contraste F1-F2 F1-F3 F1-M F2-F3 F2-M F3-M 3 3 3 3 Diferencias *110,167 *-94,1 *86,8667 *-204,267 *-23,3 *180,967 56,0667 79,3667 166,233 260,333 +/- Lmites 10,9431 10,9431 10,9431 10,9431 10,9431 10,9431 X X X X

En

la

tabla

3.4

podemos

determinar

que

las

medias

son

significativamente diferentes unas de otras.

La mitad inferior

muestra la

diferencia estimada entre cada par de medias. El asterisco que se encuentra al lado de los 6 pares, indica que stos muestran diferencias estadsticamente significativas a un nivel de confianza al 95,0%. El mtodo actualmente utilizado para discernir entre las medias es el procedimiento de la diferencia ms francamente significativa de Tukey (HSD). Con este mtodo, hay un 5,0% de riesgo de considerar uno o ms pares como significativamente diferentes cuando su diferencia real es igual a 0.

54

3.5.3 Oxgeno disuelto (OD) Los valores en el caso de OD llegaron alde Cajas y Bigotes Grfico minimo permitido que es de 5 ppm.
F1 F2

C o l_ 1

F3 M 5 5,1 5,2 5,3 5,4 5,5 5,6

Col_5
Figura 3.17 grafico de cajas y bigotes de OD para cada frmula y control.

Tabla 3.5 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para OD. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 0,189167 11 0,146667 8 0,018333 0,0425 3 de Gl Cuadrado medio 0,0141667 0,77 0,5410 Cociente-F P- valor

La tabla 3.5 de ANOVA descompone la varianza de los datos de OD en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 0,7777 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es superior a 0,05, no hay una diferencia estadsticamente significativa entre los datos de OD

proporcionado a cada formula y el control a un nivel de confianza del 95,0%. Ya que los motores de inyeccin de oxigeno son estndares y vienen con un nivel promedio de suministro de oxigeno de 5mg/l.

55

3.5.4 Fenoles Los fenoles se redujeron de 1,55ppm a 0,09 en el caso de F1 siendo un 94% menor al control, en F2 se redujo a 0,077 ppm siendo una reduccin del 95% y finalmente F3 con una reduccin a 0,023 ppm representada por una reduccin del 98%
Grfico de Cajas y Bigotes
F1 F2 F3 M 0 0,4 0,8 1,2 1,6 2

FO R M UL AS

ppm de FENOLES

Figura 3.18 grafico de cajas y bigotes de Fenoles para cada frmula y control.

Tabla 3.6 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para FENOLES. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 5,27729 11 0,3192 8 0,0399 4,95809 3 de Gl Cuadrado medio 1,6527 41,42 0,0000 Cociente-F P- valor

La tabla 3.6 de ANOVA descompone la varianza de los datos de FENOLES en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 41,421 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es inferior a 0,05, indica una diferencia estadsticamente significativamente entre las medias de los datos de cada una de las formulas y el control a un nivel de confianza del 95,0%
56

Tabla 3.7 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de FENOLES de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa. Formulas Frecuencia Media Grupos homogneos F3 F2 F1 M Contraste F1-F2 F1-F3 F1-M F2-F3 F2-M F3-M 3 3 3 3 Diferencias *0,01333 *0,06667 *-1,45667 0,05333 *-1,47 *-1,52333 0,023333 0,076667 0,09 1,5467 +/- Lmites 0,522102 0,522102 0,522102 0,522102 0,522102 0,522102 X X X X

En

la

tabla

3.7

podemos

determinar

que

las

medias

son

significativamente diferentes unas de otras.

La mitad inferior

muestra la

diferencia estimada entre cada par de medias. El asterisco que se encuentra al lado de los 5 pares, indica que stos muestran diferencias estadsticamente significativas a un nivel de confianza al 95,0%. En la parte superior de la pgina, se identifican 2 grupos homogneos segn la alineacin del signo X en la columna. El mtodo actualmente utilizado para discernir entre las medias es el procedimiento de la diferencia ms francamente significativa de Tukey (HSD). Con este mtodo, hay un 5,0% de riesgo de considerar uno o ms pares como significativamente diferentes cuando su diferencia real es igual a 0.

57

3.5.5 TPHs En comparacin del control vs las formulaciones los TPHs se redujeron de 112,31 ppm a 35,20 ppm un 69% en el caso de F1; 15,67 ppm en el caso de F2 se redujo en un 86% y un 88% en el caso de F3 que representa a 13,40 ppm.
Grfico de Cajas y Bigotes
F1

FO RMUL A S

F2

F3 M 0 20 40 60 80 100 120

ppm de TPHs

Figura 3.19 grafico de cajas y bigotes de TPHs para cada formula y control

Tabla 3.8 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para TPHs. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 19477,7 11 28,1077 8 3,51347 19449,6 3 de Gl Cuadrado medio 6483,21 1845,24 0,0000 Cociente-F P- valor

La tabla 3.8 de ANOVA descompone la varianza de los datos de TPHs en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 1845,24 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es inferior a 0,05, indica una diferencia estadsticamente significativamente entre las medias de los datos de cada una de las formulas y el control a un nivel de confianza del 95,0%

58

Tabla 3.9 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de TPHs de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa.

Formulas

Frecuencia

Media

Grupos homogneos

F3 F2 F1 M

3 3 3 3

13,4 15,667 35,2 112,313

X X X X

Contraste F1-F2 F1-F3 F1-M F2-F3 F2-M F3-M

Diferencias *19,5333 *21,8 *-77,1133 2,26667 *-96,6467 *-98,9133

+/- Lmites 4,89933 4,89933 4,89933 4,89933 4,89933 4,89933

En

la

tabla

3.9

podemos

determinar

que

las

medias

son

significativamente diferentes unas de otras.

La mitad inferior

muestra la

diferencia estimada entre cada par de medias. El asterisco que se encuentra al lado de los 5 pares, indica que stos muestran diferencias estadsticamente significativas a un nivel de confianza al 95,0%. En la parte superior de la pgina, se identifican 4 grupos homogneos segn la alineacin del signo X en la columna. El mtodo actualmente utilizado para discernir entre las medias es el procedimiento de la diferencia ms francamente significativa de Tukey (HSD). Con este mtodo, hay un 5,0% de riesgo de considerar uno o ms pares como significativamente diferentes cuando su diferencia real es igual a 0.
59

3.5.6 pH Los valores de pH se encuentran dentro de los rangos que son de 5 a 9, siendo los valores de F1, F2 y F3 un promedio de 7,4. Grfico de Cajas y Bigotes
FORMULAS
F1 F2 F3 M 7,2 7,3 7,4 7,5 7,6 7,7 7,8

pH

Figura 3.20 grafico de cajas y bigotes de pH para cada frmula y control.

Tabla 3.10 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para pH. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 0,311691 11 0,110117 8 0,015731 0,201574 3 de Gl Cuadrado medio 0,0671914 4,27 0,0519 Cociente-F P- valor

La tabla 3.10 de ANOVA descompone la varianza de los datos de pH en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 4,27129 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es superior a 0,05, no hay una diferencia estadsticamente significativa entre los datos de pH

proporcionado a cada formula y el control a un nivel de confianza del 95,0%.

60

3.5.7 Conductividad elctrica (CE) En el caso de conductividad los valores de control, F1 y F2 se encuentran bajo el lmite establecido de 2500uS/cm. Solamente F3 est sobre el nivel mximo llegando a un promedio Grfico de Cajas yexcediendo en un 600%. de 16000 uS/cm Bigotes
F1 F2 F3 M 0 4 8 12 16 20 24 (X 1000)

FORMUL AS

CE en uS

Figura 3.21 grafico de cajas y bigotes de CE para cada frmula y control.

Tabla 3.11 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para CE. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 5,24251E8 11 2,49364E7 8 3,11705E6 4,99314E8 3 de Gl Cuadrado medio 1,66438E8 53,40 0,0000 Cociente-F P- valor

La tabla 3.11 de ANOVA descompone la varianza de los datos de CE en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 53,3961 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es inferior a 0,05, indica una diferencia estadsticamente significativamente entre las medias de los

61

datos de cada una de las formulas y el control a un nivel de confianza del 95,0%

Tabla 3.12 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de FENOLES de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa. Formulas Frecuencia Media Grupos homogneos M F2 F1 F3 Contraste F1-F2 F1-F3 F1-M F2-F3 F2-M F3-M 3 3 3 3 Diferencias 13,333 *-14886,3 18,333 0*-14899,7 5,0 *14904,7 1928,67 1933,67 1947,0 16833,3 +/- Lmites 4614,67 4614,67 4614,67 4614,67 4614,67 4614,67 X X X X

En

la

tabla

3.12

podemos

determinar

que

las

medias

son

significativamente diferentes unas de otras.

La mitad inferior

muestra la

diferencia estimada entre cada par de medias. El asterisco que se encuentra al lado de los 3 pares, indica que stos muestran diferencias estadsticamente significativas a un nivel de confianza al 95,0%. En la parte superior de la pgina, se identifican 4 grupos homogneos segn la alineacin del signo X en la columna. El mtodo actualmente utilizado para discernir entre las medias es el procedimiento de la diferencia ms francamente significativa de Tukey (HSD). Con este mtodo, hay un 5,0% de riesgo de considerar uno o ms pares como significativamente diferentes cuando su diferencia real es igual a 0.

62

3.5.8 Nitrgeno (N)

Los valores de ppm de nitrgeno en cada formula estn muy por debajo de los niveles mximos, 80% menos de lo recomendado.
F1

Grfico de Cajas y Bigotes

FO RMUL A S

F2

F3 M 0 2 4 6 8

ppm de N

Figura 3.22 grafico de cajas y bigotes de N para cada frmula y control.

Tabla 3.13 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para N. Fuente Suma de Gl cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 23,7709 11 9,0418 8 1,13022 14,7291 3 Cuadrado medio 4,9097 CocienteF 4,34 0,0429 P- valor

La tabla 3.13 de ANOVA descompone la varianza de los datos de N en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 4,344 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es inferior a 0,05, indica una diferencia estadsticamente significativamente entre las medias de los datos de cada una de las formulas y el control a un nivel de confianza del 95,0%

63

Tabla 3.14 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de FENOLES de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa. Formulas Frecuencia Media Grupos homogneos M F2 F1 F3 3 3 3 3 1,0333 3,32333 3,41667 3,89 X X XX XX

Contraste F1-F2 F1-F3 F1-M F2-F3 F2-M F3-M

Diferencias 0,09333 -0,47333 2,38333 -0,5667 2,29 *2,85667

+/- Lmites 2,77876 2,77876 2,77876 2,77876 2,77876 2,77876

En

la

tabla

3,14

podemos

determinar

que

las

medias

son

significativamente diferentes unas de otras.

La mitad inferior

muestra la

diferencia estimada entre cada par de medias. El asterisco que se encuentra al lado de uno pares, indica que ste muestra diferencia estadsticamente significativa a un nivel de confianza al 95,0%. En la parte superior de la pgina, se identifican 4 grupos homogneos segn la alineacin del signo X en la columna. El mtodo actualmente utilizado para discernir entre las medias es el procedimiento de la diferencia ms francamente significativa de Tukey (HSD). Con este mtodo, hay un 5,0% de riesgo de considerar uno o ms pares como significativamente diferentes cuando su diferencia real es igual a 0

64

3.5.9 Slidos Totales (ST) De igual manera los Solitos totales estn por debajo de la norma.
Grfico de Cajas y Bigotes
F1

FO RMUL A S

F2

F3 M 1100 1140 1180 1220 1260 1300 1340

ppm de ST

Figura 3.23 grafico de cajas y bigotes de ST para cada frmula y control.

Tabla 3.15 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para ST. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 38567,7 11 36782,7 8 4597,83 1785,0 3 de Gl Cuadrado medio 595,0 0,13 0,9399 Cociente-F P- valor

La tabla 3.15 de ANOVA descompone la varianza de los datos de ST en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 0,129409 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es superior a 0,05, no hay una diferencia estadsticamente significativa entre los datos de pH

proporcionado a cada formula y el control a un nivel de confianza del 95,0%.

65

3.5.10 conteo bacteriano a 14 das de iniciado el tratamiento

Carg a bacteriana a 14 das
F1

FO RMUL A S

F2

F3 M 0 2 4 6 8 10

UFC * 10^6

Figura 3.24 grafico de cajas y bigotes para conteo bacteriano a 14 das de iniciado el tratamiento con las frmulas y el control.

Tabla 3.16 Anlisis de varianza de las Frmulas y control para Cepas bacterianas. Fuente Suma cuad. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) 142,793 11 0,757133 8 0,0946417 142,036 3 de Gl Cuadrado medio 47,3452 500,26 0,0000 Cociente-F P- valor

La tabla 3.16 de ANOVA descompone la varianza de los datos de cepas bacterianas en dos componentes, uno entre grupos, es decir una comparacin entre formulas, y un segundo componente dentro de cada formula. El F-ratio, que en este caso es igual a 500,257 es el cociente de la estimacin entre grupos y la estimacin dentro de los grupos. Puesto que el p-valor del test F es superior a 0,05, no hay una diferencia estadsticamente significativa entre los datos de cepas bacterianas proporcionado a cada formula y el control a un nivel de confianza del 95,0%.

66

Tabla 3.17 Contraste Mltiple de Rango Mtodo de Tukey con alta diferencia significativa, 95%(HSD= high significant difference) para los anlisis de UFC despus de 14 das de usado el tratamiento de cada frmula y control. * indica una diferencia significativa. Formulas Frecuencia Media Grupos homogneos M F2 F1 F3 3 3 3 3 0,48 7,83333 8,26667 9,0 X X XX XX

Contraste F1-F2 F1-F3 F1-M F2-F3 F2-M F3-M

Diferencias -*0,43333 *-1,16667 *7,3533 -0,73333 *7,78667 *8,52

+/- Lmites 0,8041 0,8041 0,8041 0,8041 0,8041 0,8041

En

la

tabla

3,17

podemos

determinar

que

las

medias

son

significativamente diferentes unas de otras.

La mitad inferior

muestra la

diferencia estimada entre cada par de medias. El asterisco que se encuentra al lado de los 5 pares, indica que ste muestra diferencia estadsticamente significativa a un nivel de confianza al 95,0%. En la parte superior de la pgina, se identifican 3 grupos homogneos segn la alineacin del signo X en la columna. El mtodo actualmente utilizado para discernir entre las medias es el procedimiento de la diferencia ms francamente significativa de Tukey (HSD). Con este mtodo, hay un 5,0% de riesgo de considerar uno o ms pares como significativamente diferentes cuando su diferencia real es igual a 0

67

CAPTULO 4. DISCUSIN
4.1 Anlisis fsico qumico inicial del agua de la piscina de lodos activados

En la fase inicial del proyecto se realiz los anlisis respectivos que confirmaron que la degradacin de ciertos parmetros estaba afectada; siendo estos DBO, DQO, TPHs, Fenoles y OD.

La alta concentracin en la DQO juntamente con valores bajos en la conductividad elctrica, segn Sandra Bolaos (2008), indican una escasa oxidacin de los compuestos orgnicos, lo que concuerda con los datos de las figuras 3.5 y 3.7 de TPHs y fenoles respectivamente siendo los valores de salida de la piscina superiores a los permitidos.

Estudio realizados por Lorena Ortiz (2002), indican que una baja concentracin de DBO y una alta concentracin de DQO son indicativas de un crecimiento bacteriano pobre y por ende una degradacin de contaminantes baja. Esto es corroborado con las figuras 3.5 y 3.7; en las cuales muestran valores sobre los mximos permisibles para la norma RAOH de procesos hidrocarburferos.

Sebastin Cisneros (2009) menciona,

que

para que exista una

oxidacin eficaz de compuestos orgnicos, adems de un crecimiento bacteriano idneas la concentracin de oxigeno disuelto debe ser de 5ppm. Figura 3.8, cosa que no se est dando en la muestra inicial del estudio.

4.2

Anlisis cuantitativo de la microfauna de la piscina de lodos activados

Los resultados arrojados por los estudios iniciales en la piscina demuestran un crecimiento bacteriano pobre y por ende una baja degradacin de contaminantes. Segn Israel S. y Robert F. (2000) los valores promedio para una adecuada degradacin deberan ser de valores de 10^6. Como se

68

puede observar en la figura 3.9 estos valores no se cumplen ya que tienen un mximo. De 8,4x104 y un mnimo de 4,2x104, valores insuficientes para una piscina de lodos activados

4.3 Identificacin de bacterias

En los resultados de identificacin bacteriana se pudo identificar varias cepas las cuales se detallan a continuacin:

En su escrito Gonzales B (1999) explica Escherichia coli es un bacilo gram negativo, anaerobio facultativo de la familia Enterobacteriaceae, del genero Escherichia; gram negativo fermentador de glucosa y lactosa. Esta bacteria coloniza el intestino del hombre pocas horas despus del nacimiento y se le considera un microorganismo de flora normal, por ello se encuentra en las aguas negras, las mismas que son mezcladas en la piscina de lodos, juntamente con agua proveniente de procesos hidrocarburferos

Hayes J. (2004) dice que Aeromona hydrophila es una bacteria gram negativa en forma de bastn, es un bacilo aerobio facultativo de filo Protobacteria como lo es E. coli; clase Aeromodales; genero Aeromonas. Aisladas de heces humanas y cuerpos de agua como ros, agua potable, aguas residuales, por ello es bsico encontrarlo en la piscina de lodos activados.

Bacillus subtilis es un aerobio facultativo grampositivo. No es patgeno y se encuentra en suelo martimo, no patgeno humano y es un organismo tolerante a condiciones ambientales extremas. De la familia Bacillaceae, genero Bacillus. Bertero M (1999)

Pseudomonas aeruginosa es una bacteria gram-negativa perteneciente a la rama de las proteobacterias, misma a la que pertenecen las enterobacterias, dentro del gnero Pseudomonas, bacilos curvados adems de ser aerobios estrictos aunque en algunos casos usan el nitrato como aceptor de electrones; se puede aislar de muestras de suelo, aguas, piscinas
69

contaminadas, as como de plantas y animales. Todas las cepas son potencialmente patgenas para el hombre.

Chromobacterium violaceum es un bacilo aerobio facultativo gram positivo. Produce un antioxidante llamado violacein que previene la oxidacin de la membrana adems de dar el color violeta caracterstico del mismo. Es parte normal de la flora del agua y en el suelo de las zonas tropicales y subtropicales.

Algunos microorganismos, segn Sharab y Bartha, (1993) pueden utilizar hidrocarburos del petrleo como alimento y fuente de energa; durante la biodegradacin las bacterias oxidan el petrleo a dixido de carbono, agua, energa y el 50% del carbono es usado para biomasa bacteriana. La bioestimulacin, insercin de oxigeno y nutrientes, permiti al consorcio bacteriano E. coli, Aeromona hydrophila, B. subtilis, Pseudomona luteola y Chromobacteriun violaceun; obtener una adaptacin en el medio y una degradacin exitosa en el caso de la formulacin 2 y 3. Torres (2003) en su estudio indica que para que una bacteria sea considerada degradadora, estas deben poseer ciertas caractersticas como las que encontramos en esta investigacin, los microorganismos autctonos deben indicar un crecimiento abundante en la piscina de lodos, estas deben crear una baja considerable en la concentracin de contaminantes en la piscina y una simbiosis entre las especies.

Van Hamme (2000) demuestra que algunos microorganismos aislados como Bacillus subtilis y Pseudomonas, contiene actividades de peroxidasas y oxigenasa, las cuales oxidan algunas fracciones de petrleo, la cual cambia la propiedad de los compuestos haciendo ms susceptible a una degradacin secundaria convirtindola en dixido de carbono y agua. Rich, J. y Heichen (2000) mencionan que las Pseudomonas son las mejores productoras de biosurfactantes como es ramnolipidos y viscosin los cuales ayudan a la remocin de aceites. Otras bacterias como B. subtilis produce surfactin el cual es un biosurfactante extracelular que solubiliza y facilita la penetracin de
70

hidrocarburos a travs de la pared celular hidroflica; juntamente con violacein que es un antioxidante conforman un conglomerado bacteriano para evitar la propia oxidacin y una mejor degradacin de compuestos hidrocarburferos.

Primeramente se oxidan los compuestos hidrocarburferos, estos son introducidos dentro de la bacteria por medio de biosurfactantes; estas son molculas biolgicas que contienen un segmento polar y un apolar, las cuales cuando se aglomeran y forman un conjunto alrededor del hidrocarburo oxidado permiten el paso de este al interior de la bacteria y luego esta procede a una biodegradacin la cual puede ser parcial, simplificando la molcula o la completa destruccin de la estructura molecular de los contaminantes medioambientales por reacciones bioqumicas complejas.

4.4 Anlisis de frmulas para bioestimulacin de la piscina de lodos activados

En el estudio se pudo identificar las mejores formulaciones, tal y como son la formula 2 y la frmula 3, como indican las figuras de barras y bigotes; se puede identificar claramente como los valores de estas dos formulaciones son los ms bajos. En el caso de la formulacin 2 la concentracin de DBO, DQO, TPHs y fenoles son los ms bajos (figuras 3.15, 3.16, 3.18 y 3.19) y tienen igual grado de degradacin que la formulacin 3. Adems de tener una ventaja sobre la formulacin 3 en la concentracin de conductividad elctrica y nitrgeno, ya que en esta se obtiene un incremento en estos parmetros (figura 3.21 y 3.22). Si bien es cierto que la frmula 3 es ideal para una mejor degradacin de contaminantes y un mejor incremento en la poblacin bacteriana, como indican las figuras 3.15, 3.16, 3.18, 3.19 y 3.24, el incremento en conductividad y DQO (figuras 3.21 y 3.16) juntamente con los costos que esta demandara hacen que esta frmula no sea la idnea para su uso.

Para la demanda biolgica de oxgeno se tiene valores muy altos en el caso de F3 debido a que posee gran cantidad de iones en su conformacin; en la tabla3.3 el anlisis de varianza provee una comparacin entre formulas la cual indica que estos son significativamente diferente entre s con un 95% de
71

confiabilidad. En la tabla 34 podemos identificar que todas las relaciones entre formulas son significativamente diferentes, siendo F2 la de mejor uso.

Caso contrario tenemos en el oxigeno disuelto ya que son valores similares y concuerdan con el anlisis de varianza que indica que la relacin entre formulas son sinificativamente igual al 95% de confiabilidad.

Para el caso de fenoles los datos de la figura 3.18 indican que los valores de las formulas 2 y3 son los ms bajos, si bien es cierto que el anlisis de varianza prev una diferencia estadstica entre formulas con un nivel de confianza del 95% tabla 3.6, el contraste mltiple de rango con el mtodo tukey de la tabla 3.7 indica que las formulas 2 y3 son homogneos a pesar de su diferencia entre datos.

El caso de los TPHs es similar al de fenoles, se tiene valores diferentes entre formulas, figura 3.19; pero los resultados arrojados del anlisis de varianza indican una diferencia significativa, siendo ms exhaustivos en el anlisis el contraste mltiple de tukey muestra que F2 y F3 son homogneas a nivel estadstico. Tabla 3.9

El anlisis de varianza de pH indica que todos son homlogos con un nivel de confianza del 95%.

Los valores de conductividad elctrica son significativamente diferentes, tabla 3.11, pero solamente los valores de la formula 3 versus las otras formulaciones son significativamente diferente segn el anlisis de tukey. Lo que demuestra que si bien es visible los valores de la formula 3 sobrepasan los mximos permisibles y que los valores del control, formula1 y 2 estn dentro del rango.

En el caso de los slidos totales tenemos una homogeneidad en todas las formulaciones con un 95% de confiabilidad.

72

Para el conteo bacteriano la diferencia significativa est presente en el anlisis de varianza con un 95% de confiabilidad, tabla 3.13, pero el anlisis de tukey indica un significancia entre todas las relaciones menos entre la relacin de la formula 2 y 3, lo que indica una similitud de crecimiento bacteriano entre estas.

73

CAPTULO 5. CONCLUSIONES
Con el propsito de de tener una mejora en los procesos biolgicas de la piscina de lodos activados de la refinera esmeraldas, se probaron distintas formulaciones y acondicionamientos los cuales arrojaron como conclusiones:

Se obtuvo una degradacin optima con las formulaciones 2 y3, llegando a

tener valores mucho ms bajos que los establecidos por la norma RAOH La oxigenacin del medio debe alcanzar 5ppm como mnimo y tener una

distribucin homognea, ya que con esto se podr oxidar ms fcilmente los contaminantes y tener una mejor biodisponibilidad de los nutrientes agregados al medio. A pesar que la formulacin 3 es la de mejor degradacin, parmetros como

la conductividad elctrica y la DQO sobre pasan los valores de la norma hacindola no idnea, adems de su alto costo. Mediante una bioestimulacin correcta se pudo bajar los tiempos de

retencin del agua a un 50% llegando a una degradacin eficiente a los 14 das de iniciado el tratamiento. La formulacin 2 que contiene 2g sulfato de magnesio y 2g fosfato di

potsico, adems 4g de glucosa como fuente de carbono adicional, alcanz los mejores niveles de degradacin versus las formulas 1, 3 y el control. Si es cierto que la formulacin 3 tiene una mejor degradacin respecto a fenoles y TPHs estos valores son homogneos estadsticamente versus los valores de la formulacin 2. Se encontraron 5 cepas diferentes: E.coli, B. subtilis, Aeromona hidrfila, hydrofila, y Chromobacteriun violaceum, formando un

Pseudomona

conglomerado bacteriano simbiontes entre ellas, ya que debido a las acciones y encimas que cada una producen son aptas para la degradacin de compuestos hidrocarburferos. Debido a que el sistema de piscinas es paralizado con frecuencia ya que

existen problemas de sobre carga o mal manejo, este sufre de daos a nivel de aireadores y un desequilibrio en el crecimiento bacteriano y en la degradacin de compuestos.
74

CAPTULO 6. RECOMENDACIONES

Realizar el tratamiento de las formulas 2 y 3 en escala real para poder

identificar de manera ms precisa la bioestimulacin y como esta afecta a la degradacin de contaminante. Realizar un mantenimiento adecuado a las piezas de oxigenacin, tanto

bombas como aspersores, ya que debido a un mal manejo estas estn perdiendo su potencial de oxigenacin. Capacitar al personal operativo que maneja esta planta, tanto a nivel de

dosificacin de los diferentes nutrientes y el manejo de los mismos; as como el mantenimiento de la piscina en su totalidad. Si se acepta la aplicacin de la frmula 3, construir un intercambiador reducir

inico por el cual pasara el agua tratada, de esta forma se podr significativamente la carga de conductividad elctrica.

Controlar una contina operacin del sistema, favorece a que este pueda

tener una estabilidad idnea y as reducir el riesgo de contaminacin en el efluente. Realizar un control mensual de las condiciones biologas como la cantidad

de UFC al inicio, puntos intermedios y final de la piscina; la adicin de nutrimentos en el afluente de la piscina cada 14 das y nivel de oxigenacin, ya que las bacterias son las responsables en la degradacin de contaminantes. Evaluar cmo trabajan las bacterias a nivel molecular y como estas pueden

trabajar de una forma simbionte entre ellas.

75

CAPITULO 7: BIBLIOGRAFIA.
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84

ANEXOS Anexo 1
Clasificacin de desechos peligrosos en la industria petroqumica segn el ministerio del ambiente de Ecuador.

85

Anexo 2

Figuras de a) desbastador b) piscina de homogenizacin c) Piscina de lodos activados

86

ANEXO 3
pH-Metro de banco Mettler Toledo S20 Seven Easy pH

Especificaciones pH Rango de lectura/Resolucin Descripcin -2.000 a 19.99 o 0 a 14 en soluciones acuosas /0.1/0.01/0.001 Precisin relativa mV Rango mV/RmV ORP 1999.9 Autocalibracin EH en referencia al electrodo normal de hidrgeno Resolucin Precisin Relativa Temperatura Rango/Resolucin -5 a 105 C / 0.01 hasta 99.9 C / 1.0 ms 99.9 C Precisin relativa Energa 0.1 Adaptador Universal de energa y energa de bateras 4 x pilas AA Condiciones de operacin
87

0.002

0.1 0.2 mV o 0.05% , se puede incrementar

ambiental Temperatura ambiente de operacin Humedad relativa Rango IP 5 a 45 C 5 al 85 % sin condensar IP 54 a prueba de salpicaduras y polvo

88

ANEXO 4 Medidor de mesa Orin 3-Star PLUS de DO No. 1113000

Especificaciones DO Concentracin rango/resolucin % de saturacin rango/resolucin Precisin relativa de concentracin / % de saturacin Auto calibracin o entrada manual Agua saturada de aire, aire saturado de agua, winkler Factor de salinidad Rango de presin baromtrica Tipo de sonda Temperatura Rango/Resolucin -5 a 105 C / 0.01 hasta 99.9 C / 1.0 ms 99.9 C Precisin relativa Compensacin de temperatura Energa 0.1 C Auto Adaptador Universal de energa y energa de bateras 4 x pilas AA Condiciones de operacin 0 a 45 ppt 450 a 850 mm de Hg polarogrfica 0.00 a 90.0 mg/L / 0.0 / 0.00 0.0 a 600% /0 /0.0 0.5% 1 cifra

89

ambiental Temperatura ambiente de operacin Humedad relativa Rango IP 5 a 45 C 5 al 85 % sin condensar IP 54 a prueba de salpicaduras y polvo

90

ANEXO 5 Medidor de mesa Orin 3-Star PLUS de Conductividad 1114000

Especificaciones Conductividad Rango Descripcin 0.000 a 3000 mS/cm con resolucin automtica dependiendo de constante de celda Resolucin 4 cifras significativas hasta 0.001 S/cm , dependiendo de la constante de celda Precisin relativa 0.5% 1 cifra o 0.01 S/cm , se puede incrementar Constante de celda Resistividad Rango/Resolucin Precisin relativa Salinidad Rango/Resolucin 0.01 a 80 ppt equivalente a NaCl, 0.01 a 42 ppt de salinidad practica /0.01 Precisin relativa Temperatura Rango/Resolucin -5 a 105 C / 0.01 hasta 99.9 C / 1.0 ms 99.9 C Precisin relativa 0.1C 0.1 1 cifra 0.0001 a 100 Megaohm / Auto resolucin 0.5% 1 cifra 0.001 a 199.9

91

Compensacin de temperatura Energa

nLF, lineal, 0.0 a 10.0% / C Adaptador Universal de energa y energa de bateras 4 x pilas AA

Condiciones de operacin ambiental Temperatura ambiente de operacin Humedad relativa 5 a 45 C 5 al 85 % sin condensar

92

ANEXO 6

Esquema para medicin de Slidos suspendidos

93

ANEXO 7

FORMULAS

COMPONENTES

PRECIO por gr.

CANTIDAD en gr 5 1

PRECIO por litro O,5 0,08 0,58

F1

Nitrato de 0,1 amonio Fosfato cido di 0,08 sdico PRECIO POR FORMULA Nitrato de amonio Sulfato de magnesio heptahidratado Fosfato di bsico de potasio Glucosa PRECIO POR FORMULA Cloruro de sodio Cloruro potsico Fosfato di bsico de potasio Sulfato de magnesio heptahidratado Fosfato cido disdico Nitrato de amonio PRECIO POR FORMULA 0,1 0,12

PRECIO TOTAL (5l.) 2,5 0,4 2,9

F2

5 2

0,5 0,24

2,5 1,2

0,08 0,04

2 4

0,16 0,16 1,06

0,8 0,8 5,3

F3

0,033 0,06 0,08 0,12

6 0,35 1 1,5

0,20 0,02 0,08 0,18

1 0,1 0,4 0,9

0,08 0,1

1,5 5

0,12 0,50 1,10

0,6 2,5 5,5

Lista de precios por formula (proforma de La casa de los qumicos)

94

95