UNIVERSIDAD DE CAMAGEY INSTITUTO DE SUELOS

Efecto de un inoculante microbiano a partir de cepas nativas de Azotobacter chroococcum sobre el rendimiento en secuencias de cultivos hortcolas

Tesis presentada en opcin al grado de Mster en Fertilidad del Suelo

Autor: Ing. Maril Gonzlez Parra Tutor: D. Sc. Julio Gandarilla Bentez Cotutor: D. Sc. Rafael Martnez Viera

Camagey 2000

INDICE Contenido Introduccin Revisin bibliogrfica

1. Los microorganismos biofertilizantes en el suelo. 1.1. Generalidades. 1.2. Conceptos. 1.3. Importancia. 1.4. Papel de la rizosfera en la efectividad de los biofertilizantes. 2. La fijacin biolgica del nitrgeno atmosfrico. 2.1. La fijacin simbitica del nitrgeno. 2.2. La fijacin asociativa del nitrgeno. 3. Gnero Azotobacter. 3.1. Generalidades. 3.2. Taxonoma. 3.3. La accin del Azotobacter en la filosfera. 3.4. Efecto del Azotobacter sobre el rendimiento de las plantas.

4. La agricultura urbana, consideraciones y perspectivas.

4.1. Los organopnicos.

Materiales y mtodos
Prospeccin de los aislados. Experimentos en condiciones controladas. Experimentos en condiciones de organopnico.

Resultados y discusin
Prospeccin y caracterizacin de los aislados Condiciones controladas. Condiciones de Organopnico.

Conclusiones Recomendaciones Bibliografa

Pgina 1 3 3 3 4 4 6 9 11 13 14 14 17 18 19 21 22 25 25 25 27 31 31 32 35 46 47 48

TITULO: Uso de inoculantes microbianos y su impacto en la sostenibilidad de

las producciones hortcolas.

AUTORES: Maril Gonzlez* ; I. Corrales* ; R. Martnez** y R. Alonso y V. Mndez *.

Resumen
Para ayudar a mantener la estabilidad en las producciones hortcolas as como mejorar la proteccin del medio ambiente y la salud humana se condujeron experimentos con el propsito de conocer el efecto de diferentes cepas nativas de Azotobacter chroococcum para lo cual se llev a cabo la prospeccin de las mismas en cuatro zonas edafoclimticas de la provincia de Camagey. Se realiz la seleccin por el mtodo de screening en condiciones controladas; las cuatro cepas seleccionadas se evaluaron y compararon con el testigo de referencia (cepa INIFAT-12) y un testigo absoluto (plantas sin inocular). Por el buen comportamiento que las mismas alcanzaron en todos los parmetros evaluados frente al testigo sin inocular, se estudi la influencia de estas cepas en secuencia de cultivos en organopnicos (tomate, pepino y lechuga). Los resultados evidencian en general una estimulacin en los parmetros evaluados (rendimiento, altura de la planta, porcentajes de materia seca, vitamina C, slidos solubles totales, N, P y K en el fruto y el follaje) as como los contenidos de fsforo, potasio y materia orgnica en el sustrato. Se destaca por sus efectos positivos, estimuladora del desarrollo y rendimiento de los cultivos evaluados, la cepa nativa FS-2 (aislada de un suelo Fersialtico Pardo Rojizo) por cuyo concepto se obtuvo una ganancia de $ 29.56 m-2, con un incremento en los rendimientos de 53 % respecto a la cepa de referencia INIFAT-12.

* Direccin Provincial de Suelos Camagey. Inst. de Suelos. MINAG. ** Instituto Nacional de Investigaciones Fundamentales de

Agricultura Tropical. (INIFAT).

Dedicatoria
A mis padres que con amor y esmero han sabido ayudarme a seguir adelante. A mi hija que ha sabido ocupar mi lugar en las tareas del hogar a pesar de su corta edad, a comprender la ausencia de su madre en muchos das y obtener los mejores resultados en sus estudios an sin mi apoyo. A mi Centro de trabajo, que tanto deseo avance y obtenga cada vez mejores y mayores resultados. A mi Patria, tierra que amo. A la Revolucin, con la cul me siento en deuda.

Agradecimiento
Deseo expresar mis ms profundos agradecimientos al MS. c Rafael Barroso Grasa, quien nos impuls y contribuyo con su abnegado e incondicional esfuerzo a la realizacin de esta maestra. Al Tutor Dr. Julio Gandarilla Bentez y Cotutor Dr. Rafael Martnez Viera por sus sabios consejos, sugerencias y valioso apoyo, a la M.Sc. Denia Prez Gusmn y la Ing. Gilda Jimnez Montejo por la contribucin y apoyo a la Bibliografa consultada y consultas personales que ayudaron a que el resultado del trabajo fuese mejor. Al MS. c Ignacio Corrales Garriga que desde un inicio colabor en el desarrollo del trabajo, al Ing. Roberto Curbelo Rodrguez por su valiosa ayuda en la evaluacin estadstica y apoyo en la culminacin de la tesis. Mis ms profundos agradecimientos a la tcnico. Virgina Mndez Manso y a los estudiantes vinculados en el trabajo, quienes colaboraron en los experimentos desde un inicio, a los tcnicos Emelina Pea, Teresa Hartman, Deisy Rodrguez a nuestra

Bibliotecaria Aleida Casaola y Secretaria Maura Velazco, las cules colaboraron a la realizacin de esta Tesis. Quiero reconocer el trabajo de todos los tcnicos analistas del laboratorio que realizaron con dedicacin y amor los anlisis incluidos en el presente trabajo, en especial al Ing. Ramn Lamadrid Mandado y la Ing. Lourdes Prez de Quesada. Agradezco a las Oponentes M.Sc. Luisa Mendoza, M.Sc. Lisbet Font Vila y M.Sc.. Denia Prez Guzmn, quienes dedicaron su tiempo en la revisin de la tesis y sugerencias ofrecidas . A la Directora Ing. Angela Npoles Ferr y al Sub Director Cientfico MS. c Alden Francisco Cervantes, los cules en todo momento comprendieron la importancia de estas Maestras para nuestro Centro y han colaborado abnegadamente a que las mismas se ejecuten. Por ltimo quiero agradecer a todos los que de una forma u otra aportaron un granito de conocimiento y apoyo a la realizacin de esta Tesis y agradezco a aquellos que encuentren en ella una fuente de conocimiento.

Tesis de maestra

Introduccin
El modelo de agricultura intensiva moderna ha presentado en Cuba y el resto del mundo serios problemas econmicos y ecolgicos, es por ello que en los ltimos aos han cobrado fuerza diversas corrientes de agricultura orgnica, que sobre una base agroecolgica, promueven una nueva concepcin y modelos de produccin agropecuaria para lograr una agricultura de bajos insumos, inversiones y costos ecolgicamente equilibrada, autosustentable y productiva segn platean Garca et al. (1992). En nuestro pas la Agricultura Urbana alcanza su mayor desarrollo y consolidacin debido, segn Guzmn et al. (1995) a que la situacin econmica por la que atravesaba el pas oblig a buscar alternativas de produccin de alimentos, fundamentalmente vegetales en cualquier poca del ao, por lo que surgieron diferentes modalidades productivas dentro de las ciudades, entre ellas los organopnicos, los cuales se han convertido en el mtodo hortcola ms productivo y extendido por todo el pas (Carrin et al., 1995 y Companioni et al., 1996). La sustentabilidad de los sistemas agrcolas a largo plazo debe fomentar el uso y manejo efectivo de los recursos internos de los agroecosistemas. En este sentido, los biofertilizantes e inoculantes microbianos son un componente vital de los sistemas sustentables, ya que constituyen un medio econmicamente atractivo y ecolgicamente aceptable de reducir los insumos externos y de mejorar la cantidad y calidad de los recursos internos. Dentro de estos biofertilizantes se encuentran las bacterias del gnero Azotobacter, las cuales estn presentes en el suelo y al encontrarse en elevadas poblaciones en el agroecosistema se asocian al sistema radical de algunas especies vegetales y ocasionan una aceleracin del desarrollo y un aumento del rendimiento en los cultivos, debido 1

Tesis de maestra fundamentalmente a su capacidad de sintetizar sustancias biolgicamente activas como auxinas, citoquininas, giberelinas, aminocidos y vitaminas (Vancura, 1961; Brown et al., 1968; Dibut, 1988 y Martnez et al., 1997). Esta propiedad unida a la funcin de fijar el nitrgeno atmosfrico, ha despertado el inters de numerosos investigadores por elevar el valor de poblaciones autctonas de cada suelo. Al respecto, Dibut et al. (1997), Hernndez (1997) y Martnez et al. (1997), han desarrollado biopreparados a partir de cepas cubanas de Azotobacter chroococcum aisladas de diferentes regiones y suelos del pas, seleccionando las ms eficientes y efectivas. Precisamente este aspecto ha sido la causa de las grandes variaciones que han ocurrido en la efectividad del biopreparado en condiciones de produccin y que se deben a errores cometidos en la seleccin de las cepas, por haberse escogido un grupo reducido de estas, las cuales no pueden tener la misma capacidad de adaptacin para todos los suelos y cultivos, motivo por lo cual se condujo esta investigacin, con el objetivo de obtener la cepa nativa mas eficiente y promisoria que logre mantener los rendimientos en los organopnicos.

Tesis de maestra

Tesis de maestra

Revisin bibliogrfica
1. Los microorganismos biofertilizantes en el suelo. 1.1. Generalidades. Uno de los elementos ms importantes que puede utilizar la agricultura ecolgica o sostenible, que de acuerdo con la definicin del Comit Internacional sobre la Investigacin Agrcola, la agricultura sustentable consiste en el manejo exitoso de los recursos agrcolas para satisfacer las necesidades humanas, mientras se mantiene la calidad del ambiente y se conservan los recursos naturales (TAC.C.GIAR, 1988), lo constituye el uso de los biofertilizantes o inoculantes microbianos, los cuales Izquierdo et al. (1995), los consideran como biotecnologas apropiables trmino creado para las herramientas biotecnolgicas que contribuyen al desarrollo sustentable al ser tcnicamente factibles dentro del nivel cientfico- tcnico de un pas y que proveen beneficios tangibles a los destinatarios, son ambientalmente seguras y socioeconmica y culturalmente aceptables Tambin responden a las exigencias de la Agenda 21, firmada por los jefes de Estado de todos los pases del mundo como parte de la reunin sobre medio ambiente y desarrollo, llamada tambin La Cumbre de la Tierra, celebrada en Ro de Janeiro (Brasil ) en 1992. Martnez et al. (1995) y Martnez y Dibut (1996) informan que en Cuba se han efectuado profundos estudios sobre la microflora de los suelos en los ltimos 30 aos. Se organizaron colecciones de especies microbianas con caractersticas de biofertilizantes o estimuladores del crecimiento vegetal, mediante aislamientos realizados en gran nmero de regiones y suelos del pas. Se ha hecho una seleccin de las cepas ms eficientes y efectivas basado en diferentes estudios y se investigan nuevos medios de cultivos que permiten una rpida multiplicacin de las bacterias e incrementan la sntesis de sustancias activas, ello ha propiciado que el uso de estos microorganismos haya tomado auge y se desarrollen estudios sobre su aplicacin en gran nmero de cultivos. En los ltimos aos se han realizado pruebas con fertilizantes mixtos con notable xito, porque se hace ms econmica y efectiva la aplicacin de estos bioproductos y se elevan los incrementos del 4

Tesis de maestra rendimiento que se logran con los biofertilizantes simples. Hernndez et al. (1998) y Bustamante et al. (1998) ponen como ejemplo, que la aplicacin conjunta de micorrizas o de bacterias Azotobacter permite que las cantidades fijadas de nitrgeno

solubilizadoras de fsforo con atmosfrico

sean mayores, porque las bacterias disponen de mayores cantidades de fsforo por la actividad de los organismos

(elemento esencial para la fijacin) suministrado solubilizadores. 1.2. Conceptos.

Los biofertilizantes pueden definirse, segn Martnez y Dibut (1986 a y b) como productos a base de microorganismos que viven normalmente en el suelo, aunque en poblaciones bajas y que al incrementar sus poblaciones por medio de la inoculacin artificial, son capaces de poner a

disposicin de las plantas, mediante su actividad biolgica, una parte importante de las sustancias nutritivas que necesitan para su desarrollo, as como suministrar sustancias hormonales o promotoras del crecimiento. Ferrer y Herrera (1991), Ruz et al. (1993) y Hernndez (1997), agrupan en este concepto a todos los organismos vivos capaces de brindar algn beneficio a las plantas y los clasifican en dos grandes grupos: los de accin directa, entre los que se encuentran los microorganismos fijadores simbiticos de nitrgeno y las Micorriza Vesculo Arbuscular (MVA) y las de accin indirecta que incluyen los solubilizadores de fsforo, los fijadores de nitrgeno atmosfrico de vida libre y los estimuladores de crecimiento vegetal, representados por varios gneros. 1.3. Importancia. La importancia segn Hernndez et al. (1994) y Martnez et al. (1995), de estos bioproductos radica en su capacidad para suplementar o movilizar nutrientes con un mnimo uso de recursos no renovables; adems, tiene las ventajas de que los procesos microbianos son rpidos y los

biopreparados pueden aplicarse para solucionar problemas locales especficos, al mismo tiempo que

Tesis de maestra se reducen los problemas econmicos y ecolgicos que se derivan de la aplicacin indiscriminada de los fertilizantes industriales. En realidad, los nicos biofertilizantes que son extensamente utilizados segn reportan Martnez et al. (1999a) son aquellos que contienen bacterias de los gneros Rhizobium y Bradyrhizobium, que establecen la fijacin simbitica de nitrgeno atmosfrico en las leguminosas. El mecanismo de esta fijacin ha sido profundamente estudiado, as como las propias bacterias simbiticas y la influencia de los factores ecolgicos en el establecimiento de la simbiosis. Pero no se est aprovechando la actividad de los fijadores asociativos, ni de los organismos solubilizadores de fsforo o de las micorrizas, que tanto beneficios pueden reportar, especialmente en las regiones tropicales, donde se encuentran los pases que ms necesitan estos beneficios. Herrera (1998), Almaguer et al. (1996), Alfonso y Mrquez (1997) y Planes et al. (1998), exponen las ventajas de los preparados a base de diferentes de cepas de microorganismos biofertilizantes y expresan los beneficios en las condiciones de produccin agrcola del pas, haciendo referencia de los que hoy se utilizan en Cuba en mayor o menor grado: Rhizobium: especficos para frijol, man, Vigna y abonos verdes, estos pueden sustituir 75-80% del fertilizante nitrogenado mediante su actividad de nitrgeno atmosfrico. Bradyrhizobium: utilizados en el cultivo de la soya y leguminosas forrajeras, que permiten sustituir hasta el 80% de las necesidades de nitrgeno de estos cultivos. Azotobacter: Se aplica sobre todas las hortalizas, yuca, boniato, maz, arroz, pltano, ctricos, entre otros cultivos y son capaces de suministrar a las plantas entre el 15-50% de sus necesidades de nitrgeno, mediante su capacidad para fijar nitrgeno atmosfrico; adems sintetizan sustancias biolgicamente activas que permiten acortar los perodos del cultivo y estimular el rendimiento. 6

Tesis de maestra Azospirillum: pueden sustituir hasta un 25% del fertilizante nitrogenado en el arroz y ligero incremento del rendimiento. Tambin es de gran utilidad como caa de azcar y pastos. Micorriza Vesculo Arbusculares: generalizados en viveros de caf, que hacen innecesaria la aplicacin de fertilizantes fosfrico y reducen las necesidades de fertilizantes nitrogenado y potsicos en muchos suelos cubanos, tambin se acorta el perodo necesario para el trasplante. Solubilizadores de fsforo: aislados de suelos cubanos, que se aplican en hortalizas, yuca, boniato, viveros de caf, viveros de plantaciones de ctricos entre otros, y permiten reducir entre 50-80% las necesidades de fertilizantes fosfricos, al mismo tiempo que son capaces de estimular los rendimientos La capacidad de los microorganismos para suministrar nutrientes y estimular el crecimiento de las plantas dependen de su exitoso establecimiento sobre las races (Zuberer, 1990). Por ests razones se hace necesario explicar el papel que desempea la rizosfera y su gran importancia para lograr resultados efectivos con la aplicacin de los biofertilizantes. 1.4. Papel de la rizosfera en la efectividad de los biofertilizantes. La primera definicin de la rizosfera fue dada por Hitner en 1904 y se limita a la interaccin existente entre bacterias y races de plantas leguminosas. Hoy el concepto es mucho ms amplio. Lynch (1990) propuso la divisin de la rizosfera en endorizosfera (tejidos conductores como xilema y floema, endodermis, epidermis y extremo de la raz) y ectorizosfera (pelos radicales, muclagos exudados por la planta y los microorganismos, restos de clulas de la raz y la superficie de la raz o rizosfera). Se concibe tambin el trmino espermosfera para nombrar a la zona que rodea a la semilla en estado de germinacin, donde los microorganismos desarrollan una intensa actividad que afecta el futuro desarrollo de la planta; en los ltimos tiempos se considera que en esta fase comienza realmente la actividad rizosfrica. Por otra parte, el concepto de colonizacin microbiana de la rizosfera comprende dos fases (Merck et al., 1993): una primera etapa, donde los microorganismos comienzan a distribuirse paralelamente

Tesis de maestra al crecimiento de la raz, disminuyendo la poblacin a medida que la raz se aleja de la zona germinada. Una segunda fase en la que se produce la multiplicacin y la supervivencia de las poblaciones microbianas hasta el lmite del nicho ecolgico y que tiene lugar durante y despus de la primera fase; los microorganismos no estn distribuidos de manera uniforme sobre la superficie de la raz, sino que se localizan en determinados puntos (microambiente) de la misma, que poseen mayor actividad segregante de materia orgnica (exudados radicales). En general, se considera que solo entre el 4 y 10 % de la superficie de la raz esta colonizada por microorganismos (Mettingm, 1993). El sistema radical de las plantas ejerce varios efectos sobre la micropoblacin edfica; as hay efectos indirectos, producidos por la actividad de las races al modificar la estructura del suelo, el rgimen hdrico, el pH, la concentracin de elementos nutritivos y la composicin de la atmsfera del suelo. Tambin hay efectos directos causados por la exudacin de diversas sustancias (azcares, fenoles, vitaminas, aminocidos, cidos orgnicos y grasos, nucletidos, esteroides, etc.) que, junto con la decamacin de clulas y tejidos, estimulan la microflora actuando como fuentes de energa , carbono, nitrgeno, fsforo, etc., o la inhiben por la liberacin de sustancias txicas (Martnez et al., 1999b) La cantidad y tipo de exudados producidos por las plantas estn estrechamente relacionados con los factores que afectan su propio desarrollo (temperatura, intensidad y calidad de la luz, contenido de nutrientes en el suelo); tambin existe cierta selectividad por parte de la especie vegetal en la secrecin de sustancias como, por ejemplo, el caso del maz, donde los exudados que predominan son azcares (65%), cidos orgnicos (33%) y aminocidos (2%), aunque la diversidad es amplia y se han encontrado en el maz ms de 10 tipos de cidos orgnicos y 4 tipos de azcares (Kraffczyk et al.,1984).Todas estas interacciones entre las plantas y los microorganismos estn gobernados por las condiciones del ambiente, por la naturaleza, estado fisiolgico y vigor de las plantas en desarrollo, por las caractersticas del suelo, el rgimen hdrico y el manejo agronmico; igualmente, 8

Tesis de maestra los microorganismos interaccionan entre ellos, dando lugar a procesos de naturaleza antagnico o sinrgica, muy importantes para las plantas. Todo lo que se ha expuesto anteriormente es el fruto de las investigaciones realizadas en las condiciones de clima templado pero, en las regiones tropicales, las excreciones de las races y las hojas tienen mayores concentraciones de compuestos carbonados que en las regiones templadas, lo cual trae como consecuencia la presencia de poblaciones ms altas de microorganismos en la rizosfera y en la filosfera (zona de las hojas) de las plantas en el trpico. Al comparar las condiciones de los climas templados y tropicales, adems de las constantes temperaturas favorables hay que tomar en cuenta que la fijacin de carbono en el trpico alcanza hasta 20 t ha-1 ao-1 (Debinstein, 1970), mientras que Becking 1977 plantea que la ms baja concentracin de compuestos carbonados puede deberse al hecho de que las races de las plantas en las regiones templadas tengan menor influencia sobre el desarrollo de algunos organismos fijadores de nitrgeno de forma asociativa, como es el caso de las especies de Azotobacter, ya que estas bacterias se encuentran ausentes, en muchos casos, de la rizosfera de especies vegetales de tanta importancia econmica como avena y trigo, y ni siquiera mediante la inoculacin es posible lograr que se

establezcan en la zona rizosfrica de estas especies. Rovira, (1965) report que, en los suelos cultivados de las regiones templadas, se encuentra el Azotobacter en niveles muy bajos y frecuentemente son eliminados de la rizosfera, especialmente de la superficie de las races. La pobre incidencia de estas bacterias se atribuye a la falta de sustratos utilizables y a la acumulacin de sustancias bacteriostticas. En cambio los reportes de las zonas ridas calientes indican una alta incidencia, con poblaciones de hasta 100 millones de clulas por gramo de suelo rizosfrico de trigo, algodn y leguminosas (Abd-El-Malek,1971). Las plantas xerofticas tambin estimulan las poblaciones de Azotobacter, desde 10 clulas por gramo en los suelos desrticos hasta 1 milln en la rizosfera de esas plantas (Wullstein et al., 1979).

Tesis de maestra No todas las cepas de una especie microbiana se comportan de la misma forma en cuanto a su atraccin por los exudados de las races de una especie vegetal. Estas diferencias se deben tanto a las peculiaridades de las plantas como a las de la cepa microbiana; as, la cantidad y calidad de las fuentes de carbono que segregan las races desempean un papel fundamental en este establecimiento (Boddey y Dberciner, 1988). Esto debe ser comprendido por los investigadores y fabricantes de biofertilizantes, y la no comprensin de este principio fundamental ha sido la causa de la inconsistencia de los resultados obtenidos por distintos investigadores, y hasta el fracaso de una poltica racional de aplicacin de biofertilizantes, como ocurri en la antigua URSS y en otros pases. 2. La fijacin biolgica del nitrgeno atmosfrico. La fijacin de nitrgeno es el proceso mediante el cual el N2 libre se combina qumicamente con otros elementos para formar compuestos orgnicos, lo cual se realiza a travs de las enzimas de los microorganismos (Burges, 1968 y Frobisher, 1969) y la idea de utilizar ese mecanismo para incrementar el rendimiento de los cultivos por medio de la inoculacin del suelo con bacterias fijadoras de nitrgeno, data de finales del siglo pasado, segn afirman Martnez (1986) y Martnez y Dibut (1986 b). Muchos microorganismos tienen gran importancia en la fijacin biolgica del nitrgeno, si se tienen en cuenta criterios de la FAO (1985) de que en la atmsfera que rodea cada hectrea de la superficie terrestre hay 80000 t de N2 en forma molecular que no es accesible para las plantas hasta que no es fijado por un grupo especializado de organismos vivos. La importancia agronmica de este

proceso, considerado como uno de los fundamentales que ocurren en la naturaleza, es tan grande que se considera que si la fijacin biolgica no se hubiera realizado continuamente en el transcurso de la explotacin agrcola durante milenios, el suelo habra perdido su capacidad de producir hace ya mucho tiempo. Adems de su importancia en la fertilidad del suelo, es uno de los mecanismos de reposicin del N que se pierde mediante la desnitrificacin, absorcin por los cultivos, percolacin

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Tesis de maestra y erosin, por lo tanto es un proceso bsico para que la vida contine en la tierra, (Echegaray, 1995). En los sistemas agrcolas tradicionales, el fertilizante nitrogenado constituye el principal insumo externo para optimizar los rendimientos, pero la eficiencia de ste es una de las ms bajas entre los nutrientes de las plantas y contribuye sustancialmente a la contaminacin ambiental (Peoples y Craswoll, 1992), e incluso se ha encontrado que los rendimientos de los cultivos tienden a disminuir con el uso continuo del fertilizante nitrogenado; as, en el Estado de Georgia (USA) se report que el rendimiento de los cultivos se cuadriplic entre las dcadas del 70 y 80, mientras que las aplicaciones de nitrgeno aumentaron 11 veces (Odum, 1989). Un anlisis de los rendimientos del arroz en Filipinas, Indonesia y Tailandia mostr que declinaban, a pesar de los incrementos de fertilizantes nitrogenados (Pingali et al.,1992). En contraste, la fijacin biolgica del nitrgeno constituye un componente primordial de la sustentabilidad agrcola. La escala de microorganismos fijadores de nitrgeno cubre la mayora de los diferentes sistemas de energa biotrfica, incluyendo bacterias fotosintticas (Rhodos-pirillum rubrum), bacterias anaerbicas (Clostridium pasteorianum), bacterias microaerobias (Azozpirillum, Herbaspirillum, Acetobacter, Rhizobium, Burzholderia y otras) y bacterias aerobias (Azotobacter, Derxia) segn investigaciones realizadas por Dobereinier et al. (1976). Numerosos factores ambientales, incluyendo disponibilidad de nutrientes orgnicos e inorgnicos, humedad, aireacin, temperatura y pH afectan la supervivencia y el crecimiento de las bacterias en el suelo. Los ms relevantes para los fijadores de nitrgeno son el suministro de carbono orgnico, la humedad y la aireacin, ya que deben tener acceso a abundantes suministros de carbono para el crecimiento y la produccin de energa. La fijacin de una molcula de N2 requiere aproximadamente l6 molculas de ATP, por lo que los organismos fijadores deben disponer de abundante cantidad de sustrato (Postgate, 1987). Por otra parte, Newman (1985) calcul que el total

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Tesis de maestra de exudados solubles alcanza 10-100 mg por gramos de races y se conoce que Azotobacter fija 1015 mg de N2 g-1 de sustrato carbonado consumido (Postgate, 1974). Utilizando la tcnica de reduccin de acetileno, se han reportado ganancias de nitrgeno en los pases templados de 34 kg N ha-1 ao-1 en el trigo (Jenkinson, 1976), mientras que en el trpico se obtuvieron valores de 876 kg N ha-1 ao-1 en races de maz y de Digitaria decumbens, Dbereiner y Day, 1976). Estos datos demuestran la importancia que tiene el proceso para la agricultura tropical. 2.1. La fijacin simbitica del nitrgeno. Entre los distintos sistemas biolgicos que son capaces de fijar nitrgeno, la simbiosis Rhizobium leguminosa contribuye con la mayor cantidad de nitrgeno al ecosistema y a la produccin de alimentos. Esta simbiosis constituye la asociacin ms elaborada y eficiente entre las plantas y las bacterias y por esta razn ha sido la ms estudiada hasta el momento (Hernndez et al.,1991). Hoy se conoce que la contribucin de la fijacin simbitica al suministro de nitrgeno a las plantas cultivadas depende de la eficiencia de la asociacin y de la disponibilidad del elemento en el suelo cuando los factores ambientales son adecuados (Pagan et al., 1975). Segn Pate (1977), el efecto de la temperatura se ejerce principalmente sobre la cantidad de nitrgeno fijado, aunque temperaturas muy elevadas pueden tambin causar pobre nodulacin en el frijol. La actividad fijadora del ndulo tambin es afectada rpidamente por las condiciones de la humedad del suelo, como lo demuestran algunos estudios realizados en cultivos de soya (Cleyetmarel et al, 1995). Una delgada capa de agua alrededor del ndulo disminuye la fijacin, debido a que hay un suministro de oxigeno. De la misma manera, una ligera disminucin del contenido de agua del ndulo conduce a una fuerte inhibicin de la respiracin y de la fijacin (Carroll et al., 1987; Schuller et al., 1988 y Minchin et al., 1989). La multiplicacin de las bacterias del suelo es favorecido por la humedad, pero no por las condiciones de inundacin; perodos alternos de sequa e inundacin tienen un efecto negativo sobre la poblacin bacteriana.

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Tesis de maestra Cantidades elevadas de nitrgeno combinado inhiben la actividad nitrogenasa; en la zona de las races el efecto se ejerce sobre la nodulacin; dentro de las plantas, los altos niveles de nitrgeno producen una mayor retencin de fotosintatos en las races, limitando el suministro al ndulo; diferentes autores han obtenido respuesta de este fenmeno en el cultivo de la soya (Heckmann et al., 1987; Kimou et al., 1985 y Kimou et al., 1993) y en el frijol (Salsac et al., 1984; Hernndez et al., 1991; Hernndez et al., 1993 y Vesse y et al., 1992). La cantidad de fotosintatos utilizables constituye uno de los principales factores que controla la magnitud de la fijacin; experimentos en los que se utiliz la reduccin del acetileno han mostrado que ocurre una rpida declinacin en la actividad nitrogenasa despus de colocar las plantas en la oscuridad y luego de su defoliacin o decapitacin; la mayor actividad, se encontr durante el da en comparacin con la noche, an en temperatura constante (Burris, 1978, Drevon et al., 1988 y Minchin et al., 1990). La nodulacin y la fijacin de nitrgeno depende de las interacciones entre una determinada leguminosa y las cepas de una especie de Rhizobium. Estas interacciones constituyen el resultado de la variacin gentica en la planta hospedera y en la bacteria y las relaciones entre los dos sistemas genticos no son constantes, sino que dependen de los factores ambientales (Martnez, 1986). Los exudados radicales estimulan la multiplicacin de la bacteria, ya que suministran biotina y tiamina, homogenina y cido glutmico, necesarios para el desarrollo de estas especies, pero son indispensables determinadas condiciones del suelo para que puedan sobrevivir las bacterias (Ledgard et al., 1998) y los aumentos ms espectaculares de nitrgeno procedente de la fijacin simbitica son obtenidos manipulando el sistema total suelo- planta- bacteria. Existen varias especies de Rhizobium eficientes para cada tipo de leguminosa. Entre las

leguminosas Forrajeras, Centrocema pubescens nodula profusamente; en esta especie, apropiada para pastos bajos y resistentes a la sequa, se han reportado fijaciones anuales que ascienden a 320 kg de N ha-1. Pero las fijaciones ms elevadas se han encontrado en Leucaena leucocephala, usada

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Tesis de maestra extensamente en muchos pases, que crece en perodos prolongados de sequa y suministra forraje con 30% de protenas todo el ao, la cual puede fijar anualmente 800 mg de N ha-1. (Norris, 1972). Entre las leguminosas de grano y aceite, la soya fija entre 40 y 206 kg de N ha-1, el frijol entre 60 y 180; el cacahuete 49; el garbanzo entre 91 y 270 kg de N ha-1 (Franco,1978). La respuesta a la inoculacin del frijol en cuanto al rendimiento en condiciones de campo es variable, esta es la leguminosa ms importante para el consumo humano en Amrica Latina y Brasil es el principal productor, por lo que se utiliza extensamente la inoculacin con Rhizobium; pero son frecuentes las respuestas negativas. En Brasil se han obtenido aumentos en el rendimiento hasta el 98% mediante la inoculacin y las cifras de reduccin del acetileno en la planta han llegado hasta 38 n moles C2H4 /h considerndose comunes en la simbiosis efectivas cantidades superiores a 20 n moles C2H4/h (Dbereiner et al., 1961 y Franco, 1978). En China se cultivan 6,6 millones de t de soya, las cuales se inoculan con Bradyrhizobium japonicun, logrndose incrementar del 12 % en el rendimiento en grano, entre 1981 y 1993, la superficie total de leguminosas forrajeras inoculadas fue de 700000 ha en 25 provincias para un promedio anual de 58000 ha (Chen tin wey,1997). En la India se produjeron 896, 1107 y 1102 t de inoculante de rhizobium en los aos 1993, 1994 y 1995, con lo cual se inocularon todas las leguminosas que se sembraron (Kannaiyar, 1997). En Australia se inoculan prcticamente todas las leguminosas que se siembran y este pas es actualmente el que mejor maneja en el mundo los sistemas simbiticos, lo cual ha hecho que las cantidades de fertilizantes industriales que utilizan sean muy bajas (Hernndez, 1997). Todo lo que se ha sealado indica la gran importancia que se concede a los sistemas fijadores simbiticos, Rhizobium- Leguminosas y los grandes beneficios que se obtienen con su correcta utilizacin. 2.2. La fijacin asociativa del nitrgeno. La fijacin biolgica del nitrgeno puede ser realizada por microorganismos que no requieren la cooperacin de otras formas vivas para fijar nitrgeno atmosfrico, aunque la

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Tesis de maestra mayor actividad ocurre cuando estos microorganismos se encuentran asociados a las plantas en las zonas de la rizosfera y filosfera, aprovechando la excrecin de notables cantidades de compuestos carbonados y de otras sustancias por las races y las hojas. ( Martnez et al., 1999a). La Rue (1977) clasific estas bacterias como se describe en el cuadro 1.

Cuadro 1. Clasificacin de las bacterias asociativas del nitrgeno

FAMILIA TIORODCEAS (CROSMATEACEAS) ATIRODCEAS (RODOESPIRILCEAS) HIPOMICROBICEAS CHLOROBACTERCEAS ESPINLCEAS AZOTOBACTERICEAS ENTROBACTERICEAS CORIBACTERICEAS BACILCEAS GENERO THIOCAPSA, CHROMATIUM RHODOSPIRILLUM, RHODOPSEUMONAS RHODOMICROBIUM CHLOROBIUM DESULFUVIBRIO, DESULFOTOMACULUM AZOTOBACTER, BERJENNEKI, DERXII KLEBSIELLA, ESCHENICHIA, ENTEROBACTER CORINEBACTERIM BACILLO, CROSTRIDIUM

Martnez, (1999b), informa que en los ltimos aos se han descubierto nuevos organismos de importancia potencial para cultivos de gran valor econmico, como por ejemplo, la caa de azcar, por ser tan reciente su descubrimiento, an es necesario realizar profundos estudios antes de que puedan ser aplicados en gran escala Entre las bacterias asociativas con ms posibilidades de ser aplicadas en estos momentos en la agricultura sustentable o sostenible se encuentran las del gnero Azotobacter, las que por tal motivo fueron el objeto de la presente investigacin, el cual ser tratado en el epgrafe 3. 3. Gnero Azotobacter. 3.1. Generalidades. Frobisher (1969) seala que el gnero Azotobacter fue descubierto por Beijerink en 1901 y desde entonces se ha desplegado un enorme inters en estudiar estos organismos debido a la contribucin que pueden hacer a la nutricin nitrogenada de las plantas superiores, como plantea Brown et al. (1992).

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Tesis de maestra El Azotobacter es uno de los primeros gneros conocidos como fijadores asociativos de nitrgeno, siendo el ms estudiado en el mbito mundial a juicio de Martnez y Dibut (1996a). Su nombre proviene de la palabra francesa asoto que significa nitrgeno y del griego bacter que significa bacilo (Hernndez et al., 1994) y segn esos autores son microorganismos de vida libre de suelo que requieren de sustancias orgnicas como fuente de energa, pero si hay abundancia de NO3 - y NH4, lo emplean con facilidad y no fijan nitrgeno. Son bacterias gram negativas, mtiles; las colonias son viscosas, convexas, lisas o arrugadas y poseen pequeas inclusiones granulares, el color se presenta en diferente matices de pardo, producen pigmentos que en ocasiones se difunden en el medio de cultivo ( Agar-Asbhy) selectivo para este gnero (Rubenchik, 1960). Abundan en suelos bien aireados, neutros o ligeramente alcalinos (pH de 6,0 a 7,5) pero hay formas cido existentes que crecen a pH inferiores a 5,0; sin embargo, en Cuba, aunque segn Martnez et al. (1985) el gnero est representado en los principales suelos, no se desarrolla bien en los muy cidos y con limitantes nutricionales. En la dcada de los 30, se realizaron numerosas investigaciones en Rusia, las cuales en su mayora fueron positivas, lo que trajo como consecuencia la preparacin de un inoculante comercial, llamado Azotobacterin, que se aplic durante muchos aos, con respuestas positivas en una localidades y negativas en otras, en algunos cultivos (Mishustin y Silnikova, 1971). Estas grandes variaciones en la efectividad del biopreparado en condiciones de produccin se debieron a errores cometidos en la seleccin de cepas, por no haber tomado en cuenta la influencia del quimiotaxismo de las bacterias frente a las secreciones radicales y por haberse seleccionado un grupo muy reducido de cepas que como es lgico, no podan tener una capacidad igual de adaptacin para todos los tipos de suelo existentes. Raznitzina (1938) detect en cultivos de estas bacterias la presencia de auxinas, Bukatsch et al. (1956) identifican al cido indolactico y Vancura (1961) encontr cido giberlico, en tanto que Coppola et al. (1971) y Barea y Brown (1974) hallaron citoquininas

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Tesis de maestra en cultivos de bacterias de ese gnero. Ms reciente en Cuba, Gonzlez et al. (1986) mencionan la presencia de auxinas, giberelinas y citoquininas, en tanto que Dibut et al. (1992) detectaron aminocidos y citoquininas al aislar cepas de A. chroococcum, Martnez y Dibut (1996a y b) mencionan la presencia de cido indolactico y giberlico y adems citoquinina y Dibut (1988) encontr que las cepas cubanas seleccionadas sintetizan una variedad de sustancias biolgicamente activas que estimulan el desarrollo y el rendimiento de los cultivos econmicos en un porcentaje superior al que se obtuvo en Rusia. ,Dibut (1988) estudi el efecto quimiotxico de distintas cepas cubanas de Azotobacter chroococcum frente a los exudados radicales de la cebolla, seleccionando dos cepas, como las ms promisorias, siguiendo este procedimiento se evaluaron varias cepas con fines comerciales, las cuales de acuerdo a los diferentes estudios realizados como los efectos quimiotxicos, la prueba de ARA (reduccin del acetileno), evaluacin agronmica, entre otras resultaron eficientes para una amplia gama de cultivos, lo que se muestra en el cuadro 2.

Cuadro 2. Uso en Cuba de inoculantes a partir de Azotobacter chroococcum.

NOMBRE DEL PRODUCTO BIOSTIN ONIOBIOSTIN AZOTORRIZA AZOSTIN CEPA CULTIVO

INIFAT-12 TOMATE, PIMIENTO, CUCURBITACEAS, HORTALIZAS DE HOJA INIFAT-9 CEBOLLA, AJO, COL INIFAT-17 PLATANO, ARROZ INIFAT-6 MALANGA

Aunque el mecanismo de fijacin de esta bacteria es no simbitico, existe una estrecha relacin entre la misma y las plantas a travs de la rizosfera, en la cual, stas proporcionan al microorganismo fuentes de carbono como exudados radicales, clulas

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Tesis de maestra desprendidas, etc. a la vez que las bacterias al morir ceden a la planta el nitrgeno fijado en sus clulas, lo que resulta de suma importancia en este proceso, segn Garca (1993). Barea et al. (1977), afirman que el poder fertilizante nitrogenado del Azotobacter ejercido de forma directa, en el sentido estricto, es bastante bajo y por tanto el uso de dicha bacteria como abono no lo justifica; no obstante, el beneficio que reporta su uso puede estar originado por mecanismos de otros tipos, lo que es confirmado por Gonzlez et al. (1986), Ferrer y Herrera (1991), Acosta et al. (1992), Gonzlez et al. (1992), Abbass y Okon (1993), Carletti et al. (1994), Dibut et al. (1995) y Hernndez et al. (1998), quienes plantean que adems del efecto nitrofijador del inoculante en su proceso de produccin se origina un nmero grande de sustancias bioestimuladoras tales como auxinas, giberelinas citoquininas, fosfolpidos, cidos grasos, cido indolactico y otros, as como sustancias fungistticas que promueven el crecimiento de las plantas y muchas veces son las responsables, ms que el nitrgeno, de su efecto sobre la germinacin, floracin y vigor de ellas, todo lo cual contribuye a la elevacin en los rendimientos. Estas sustancias no slo incrementan el desarrollo de las plantas, si no que aseguran el establecimiento competitivo de una especie de bacteria particular en la rizosfera (Elmerich, 1992). En Cuba, el aislamiento y evaluacin de cepas de A. chroococcum comenz en la dcada de los 80, como muestran los trabajos publicados por Martnez (1986), Dibut et al. (1993) y Martnez et al. (1997), encontrndose la presencia del microorganismo en una gran cantidad de suelos del pas como se representa en el cuadro 3.

Cuadro 3. Presencia de Azotobacter en algunos suelos cubanos

Tipo de suelo Pardo sin Carbonatos Tpico Ferraltico Rojo Tpico Oscuro Plstico Gleyzoso Gley Hmico Tpico Hmico Carbontico Tpico Sin cultivar (%) 72.06 54.65 92.16 95.35 95.35 Cultivado (%) 95.00 70.80 95.61 96.25 96.25 18

Tesis de maestra Ferraltico Cuarctico Amarillento Ferraltico Arenoso Cuarctico 3.2. Taxonoma. Segn Becking (1974), la familia de las Azotobactericeas comprende cuatro gneros: Azotobacter, Azomonas, Beijennckia y Derxia. Cada uno de estos gneros comprende a su vez, las siguientes especies: Q Gnero Azotobacter: A. chroococcum, A. beijennckia, A. vinelandii, A. paspali Q Gnero Azomonas: A. agilis, A. insigne, A. macrocytogenese Q Gnero Beigerinckia: B. indica, B. mobilis, B. fluminensis, B. derxii. Q Gnero Derxia: D. glummosa. No se encontr No se encontr

3.3. Accin del Azotobacter en la filosfera. De acuerdo con estudios realizados por Debinstein (1970), la abundante poblacin microbiana que se encuentra en las hojas es por s misma, prueba de un ambiente que posee considerable valor nutritivo; la humedad contribuye tambin al desarrollo y supervivencia de esta poblacin, ofrecindole espacio y estimulando el intercambio de productos metablicos. Esta propiedad y la habilidad para concentrar materia resuspendida o disuelta en la atmsfera con gran rapidez , hace que las hojas tengan una gran importancia en los agroecosistemas agrcolas ( Bhat et al.,1971). Ruinen (1975), nombr la zona de crecimiento del microorganismo en la superficie de las hojas de las plantas como filosfera. Segn datos reportados por Martnez et al. (1999a) en condiciones tropicales, ocurre tambin fijacin de nitrgeno en la filosfera, zona que est en contacto con la hoja y la atmsfera, sometida a la actividad reguladora de ambas. El mismo autor seala que los microorganismos que viven en las hojas, entre las cuales se encuentran las bacterias del gnero Azotobacter, toman el agua, los gases disueltos de la atmsfera y los nutrientes a partir de los exudados de las hojas vivas las cuales estn reguladas por el estado nutricional de las plantas, el follaje funciona como soporte, trampa de agua y centro de produccin de nutrientes y condiciona al 19

Tesis de maestra medio para el crecimiento microbiano; adems, procesa y distribuye compuestos nitrogenados en flujo a travs de la planta hacia las partes ms jvenes. En la India se encontr una fijacin de 10 mg de N g-1 de manitol oxidado sobre hojas de jacinto de agua (Eichhornia Crassipes), con un abundante crecimiento de A. chroococcum, incluso en el tejido interior de las hojas (Iswaran et al., 1943). En Egipto se estudiaron 58 muestras de arboles, cultivos de campo, vegetales, plantas ornamentales, silvestres, acuticas y solamente dos de las muestras no contenan Azotobacter (Abd-Elmalek, 1971), mientras que Ruinen (1974) report la presencia permanente de las bacterias fijadoras de nitrgeno sobre la filosfera de distintas plantas de Java y Sumatra, donde aisl esta bacteria en 192 y 198 muestras de hojas de rboles, arbustos, enrredaderas, epfitas y vegetacin costera. 3.4. Efecto del Azotobacter sobre el rendimiento de las plantas Se conoce el importante papel que desempea el Azotobacter en el crecimiento y desarrollo de las plantas, incluso son capaces de incrementar el rendimiento de los cultivos, los valores varan de acuerdo con la bacteria y su afinidad por el cultivo, lo que indica especificidad del microorganismo e incluso de las cepas (Larson y Neal,1978). Rubenchick (1960) estudi los 1 095 experimentos realizados en Rusia sobre la respuesta en rendimiento al Azotobacter, de ellos en el 81 por ciento se observ un aumento del rendimiento de los cereales, hortalizas y cultivos industriales, adems informa que los experimentos efectuados en Checoslovaquia sobre la azotobacterina en 1954, demostraron que los rendimientos de la remolacha azucarera, el maz la zanahoria y la col , haban aumentado el 39; 15,4; 19.2 y 2.9 por ciento, respectivamente, y los estudios efectuados en Rumania en 1954 mostraron un aumento del 50% en el rendimiento de la corona de girasol. Ridge y Rovira (1968), demostraron que con la inoculacin de la azotobacterina haba mucha ms tendencia al aumento del rendimiento en el grano del trigo que a la disminucin. Burges (1968) plantea que en la aplicacin 20

Tesis de maestra del biofertilizante con la dosis completa de fertilizante nitrogenado no hay fijacin de nitrgeno, porque las bacterias utilizan el que abundantemente tienen a su alcance y no gastan energa en la fijacin (que tiene un alto costo de energa biolgica), pero se observa el incremento del rendimiento por la accin de las sustancias activas de la bacteria. Segn Hamdi (1985), muchos de los resultados encontrados fuera de Rusia sobre la respuesta en varios cultivos a la azotobacterina carecen de uniformidad, en Alemania se observaron aumentos del 11% en el rendimiento de la zanahoria, 6.25% en la patata y el 13% en la sustancia verde de la mostaza. En otros casos , por ejemplo en Suiza, Dinamarca, Finlandia y Estados Unidos de Amrica, los resultados han sido negativos En Cuba se desarrolla, desde 1990, un programa de fabricacin y aplicacin de Azotobacter a base de cepas seleccionadas que son capaces de suministrar hasta 50% de los requerimientos de

nitrgeno de las plantas mediante la fijacin biolgica, lo que permite ahorros considerables de fertilizantes qumicos, al mismo tiempo que se reduce la contaminacin ambiental y los daos a la salud humana ya que se disminuyen las elevadas proporciones de nitratos en los cultivos agrcolas (Bohlool et al 1999). Muchas de las cepas seleccionadas han sido probadas con gran xito, tanto en investigaciones como en la produccin de posturas o en fase de semillero. Varios autores (Dibut et al., 1990; Acosta et al., 1992; Corrales et al., 1994; Medina, 1994; Tern et al., 1994; Martnez et al., 1997 y Snchez et al., 1998) reportan el papel estimulador de A. chroococcum en el crecimiento de races, rea foliar, altura y desarrollo de las plntulas en general, en cultivos como caf, tomate, frutales y cebolla. A la vez, se ha informado reduccin entre un 25 y un 50% del fertilizante nitrogenado, as como un efecto estimulador en el rendimiento, floracin y fructificacin de algunas hortalizas, en especial tomate y otros cultivos cuando se inocul el suelo o la raz con estas bacterias (Dibut et al., 1989;

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Tesis de maestra Gonzlez et al., 1992; Martnez y Dibut, 1996b; Alarcn et al., 1998; Alarcn y Rodrguez, 1998 y Ravelo et al., 1998). Martnez et al. (1996) comprob que las aplicaciones foliares de Azotobacter en las extensas plantaciones de ctricos del pas, eran de gran efectividad no slo en la sustitucin del fertilizante, sino en la estimulacin de la floracin y fructificacin, lo que se traduce en rendimientos ms altos. En el caso de la yuca y el camote se aprovecha, adems de la actividad fijadora de nitrgeno, la capacidad que tienen las sustancias activas sintetizadas por las bacterias de estimular la fotosntesis (acumulacin de compuestos) y reducir la respiracin (gastos compuestos) de las plantas, lo que permite el almacenamiento de fotosintatos, que constituye la base de la formacin de tubrculos y races, constituida por material de reserva (Martnez, 1998). En el caso del pltano puede sustituirse el 30% del fertilizante nitrogenado y se produce una aceleracin de las distintas variedades fenolgicas y de productividad agrcola (Dibut et al., 1996). De igual modo, en organopnico, Gonzlez et al. (1998) lograron incrementar el rendimiento y la calidad de una sucesin de hortalizas al emplear algunas cepas nativas aisladas de suelos de la provincia de Camagey, en esta misma provincia, Prez (1999) obtiene incrementos en el

rendimiento de las hortalizas al aplicar 4,5 ml de biostn en combinacin con otros biofertilizantes y abonos orgnicos en secuencias de cultivos en organopnicos, al igual, Heredia et al. (1998) se refieren al efecto beneficioso del biopreparado al aplicarlo en organopnicos de la Habana conjuntamente con otros biofertilizantes.

4. La agricultura urbana: Consideraciones y Perspectivas.

La etapa denominada revolucin agrcola, comenz a criterios de Ribeiro (1992), hace 10 000 aos entre los pueblos de Mesopotamia y Egipto y posteriormente se expandi por la India, China, Europa, Africa Tropical y en las civilizaciones americanas, por orden cronolgico. Para Mougeot (1993), la agricultura no desaparece completamente del entorno urbano y con posterioridad alcanza un gran desarrollo en las ciudades asiticas, pero no es hasta la dcada de los 22

Tesis de maestra aos70 que cobra importancia en el mbito mundial y se incrementa vertiginosamente de acuerdo al nmero de personas involucradas, espacio utilizado y beneficios econmicos recibidos, tal y como coinciden en afirmar Guzmn et al. (1995), FAO (1996) y Companioni et al. (1997). En los ltimos aos en Cuba se ha desarrollado un fuerte movimiento productivo agrcola en las ciudades y asentamientos poblacionales, extendidos en mayor o menor grado por su periferia, al cual se le denomina Agricultura Urbana ( Martnez, 1998), basada fundamentalmente, como sealan Rosset y Benjamn (1993 y 1995) y Carrin (1998) en sistemas de manejo biolgico del agroecosistema urbano, en el que la sostenibilidad de este se logra por el empleo de abonos orgnicos, pues como afirman Prez (1995) y Guzmn et al. (1995), dentro de las ciudades, cualquier sistema que se emplee debe sustentarse en el uso de medios naturales o biolgicos durante todo el proceso productivo, ya que el riesgo del uso de productos qumicos, tiene por su localizacin, mayores implicaciones para el medio ambiente que en cualquier otro lugar, por lo que no basta con que la produccin sea econmicamente sostenible, sino que adems debe serlo desde el punto de vista ecolgico y social, lo que segn la FAO (1996) puede compensar en parte los destrozos causados por los sistemas urbanos. Segn Companioni et al. (1998) la agricultura urbana en Cuba es una agricultura participativa, popular en la cual la gran heterogeneidad en las condiciones en que se desarrolla, obliga al productor a realizar constantes ajustes en las tcnicas a utilizar, para poder crear las mejores condiciones. As mismo sealan que la Agricultura Urbana es, por su ubicacin geogrfica, una agricultura de bajos insumos, que no permite agrotxico , con extrema economa en el uso del agua, y exquisitez en el cuidado de la fertilidad de sus tierras, en el manejo de los cultivos y de los animales. De acuerdo con estos autores, uno de los programas ms extendidos hasta el momento es el de hortalizas, en el que intervienen diversas modalidades productivas entre las que se destacan los organopnicos, los huertos intensivos, parcelas y patios, hidropnicos y zeopnicos, entre otros. 4.1. Los organopnicos.

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Tesis de maestra En Cuba los primeros organopnicos fueron construidos en el ao 1987 a partir de una iniciativa propuesta por el Ministerio de las Fuerzas Armadas Revolucionarias, General de Ejercito Ral Castro Ruz, con el objetivo de mejorar la alimentacin por medio del cultivo de vegetales en tiempo de guerra o bajo condiciones de serias restricciones econmicas que como se vislumbraba, iban a producirse y posteriormente se consolidaron con mucha rapidez en diversas provincias, llegando al presente como la forma ms popularizada de produccin intensiva de hortalizas ya que su nmero ha ido aumentando en el entorno urbano, como se refiere en el manual para Organopnicos y huertos intensivos, MINAG (1999). El Grupo Tcnico Nacional de Organopnicos (1996), Carrin et al. (1997), Heredia et al. (1997) plantean que los organopnicos son instalaciones donde se practica el cultivo de hortalizas sin suelo y sin fertilizantes qumicos, sobre un sustrato en el que se usa abonos orgnicos en grandes cantidades para garantizar la alta productividad y eficiencia que se requiere. Lee (1998) afirma que los organopnicos y huertos intensivos se han desarrollado con tal fuerza que hoy en da se han convertido en la forma ms barata de producir hortalizas, aprovechando as toda el rea utilizable en el permetro urbano y prueba del auge que han alcanzado es el hecho que si bien en 1994 estas modalidades produjeron como promedio en el pas l,57 kg m-2 ao-1 de vegetales frescos ya en 1998 los rendimientos alcanzaron 19,57 kg m- 2 ao-1. Actualmente en Camagey existen 36 organopnicos cuya produccin a juicio Betancourt (1998) contribuy en gran medida a que la provincia alcanzara la cifra de 1 400 000 quintales de vegetales, mientras que como informa Pages (2000) ya en los primeros cuatro meses del ao , se haban producido ms de 600 000 quintales de estos productos de un plan de 500 000 que tenia la provincia para el primer semestre. En Horticultura segn Abad (1997) y Carrin (1997) el trmino sustrato se aplica a todo material slido distinto del suelo o de sntesis mineral u orgnico, que colocado en un contenedor en forma pura o en mezcla, permite el anclaje del sistema radical, desempeando un papel de soporte para la

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Tesis de maestra planta y aaden que el substrato puede intervenir o no en el complejo proceso de la nutricin vegetal. El instructivo tcnico de huertos y organopnicos (MINAG, 1999) rene la mayor parte de los conocimientos adquiridos hasta la fecha y se dan las proporciones ms adecuadas para preparar las mezclas segn el tipo de material orgnico y suelo de que se disponga. Los sustratos bien preparados, segn criterios del MINFAR (1993), Carrin et al. (1997) y Prez et al. (1998) tienen tericamente capacidad para satisfacer las necesidades nutricionales de varias cosechas de hortalizas tanto por su fertilidad como por sus adecuadas propiedades fsicas, lo que deba permitir un ptimo desarrollo de las races y de la parte area, durante un tiempo bastante largo. No obstante el sistema de explotacin y el manejo intensivo que se le da a los organopnicos hace que en un perodo de 1 a 2 aos aproximadamente estas cualidades comiencen a deteriorarse, en especial en lo referente a los contenidos de fsforo, potasio y materia orgnica. En cuanto a la disminucin de los valores de P2O5 y fundamentalmente de K2O que se observan en los sustratos, Prez et al. (1998) la atribuyen no slo a las grandes extracciones que hacen las hortalizas y que son reportadas por Guenkov (1983) e INPOFOS (1996) sino tambin por el lavado que se produce hacia las partes ms profundas del cantero. El deterioro en la fertilidad del substrato se traduce en un descenso en el rendimiento promedio de cada cosecha en uno o dos aos de explotacin de las instalaciones, que puede llegar segn Carrin (1995) y Prez et al. (1998) a menos del 50 % del obtenido inicialmente. Para evitar llegar a estos lmites de rendimiento y prdida de fertilidad del substrato MINAG (1989, 1995), as como Companioni (1998) afirman que se pueden hacer uso de algunas enmiendas (que deben convertirse en prctica cotidiana), para contribuir a mantener la calidad inicial de las mezclas y sugieren las aplicaciones sistemticas de materia orgnica, biofertilizantes y bioestimuladores como una opcin para el mantenimiento de los rendimientos y a su vez las condiciones de fertilidad y las propiedades fsicas del substrato.

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Tesis de maestra

Materiales y mtodos
Prospeccin de los aislados. Se efectu a partir de encuestas realizadas durante un perodo de un ao en cuatro agroecosistemas en la provincia de Camagey, donde predominan los suelos del tipo: Pardo sin Carbonatos, Pardo con Carbonatos, Fersialtico Pardo Rojizo y Ferrtico Rojo, segn Instituto de Suelos (1994), donde se tomaron muestras de estos suelos a partir de la zona rizosfrica en diferentes puntos de varios campos seleccionados al azar, en los cuales no se haban realizado aplicaciones de este microorganismo, y en ellos se realiz la deteccin segn el mtodo de Vinogradski (1926), modificado por Martnez et al. (1985). La purificacin y caracterizacin de los aislados se llev a cabo sobre el medio Ashby (1907) citado por Rubenchik (1960). De 35 cepas aisladas, segn estudios morfolgicos (apariencia, color mucosidad, motilidad y desarrollo de las colonias), se escogieron 4 aislados (uno de cada tipo de suelo), para determinarles las caractersticas culturales, fisiolgicas y bioqumicas, segn la 26

Tesis de maestra tcnicas microbiolgicas para el gnero Azotobacter descritas por Bergey s (1994)., se utiliz como referencia la cepa INIFAT-12 de Azotobacter chroococcum. A partir de las cepas caracterizadas y seleccionadas del gnero Azotobacter , se realiz la produccin del inoculante microbiano de cada uno de ellos segn Dibut et al. (1990). 2. Experimentos en condiciones controladas. El experimento se desarroll en condiciones de casa de cristal del Centro Provincial de Suelos de la provincia de Camagey. Se estudiaron 6 tratamientos con 5 repeticiones completamente aleatorizadas.

Esquema experimental. Tratamientos: 1. Plantas no inoculadas (testigo absoluto). 2. Cepa Biostn INIFAT-12 (testigo de referencia). 3. Cepa nativa FS-2 (aislada de un suelo Fersialtico Pardo Rojizo). 4. Cepa nativa PS (aislada de un suelo Pardo sin Carbonatos). 5. Cepa nativa PC (aislada de un suelo Pardo con Carbonatos). 6. Cepa nativa FR (aislada de un suelo Ferrtico Rojo). El suelo empleado, Fersialtico Pardo Rojizo con pH ( KCl) de 4.93; fsforo asimilable (Oniani) 7,86 mg 100 g-1, 21,80 kg 100 g-1 de K2O (Oniani) y 2,84 % de materia orgnica, fue esterilizado previo a la siembra (exceptuando al testigo absoluto) en una autoclave 3 das consecutivos a 1,5 atmsfera durante 60 minutos.

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Tesis de maestra La evaluacin agronmica se realiz inoculando el suelo colocado en bandejas de 1m2, segn los tratamientos descritos. Los inculos se aplicaron en dosis de 3 ml m-2, teniendo en cuenta la dosis recomendada de 30l ha-1 (Martnez et al. 1986 a ) a una concentracin de 1011 UFC ml-1 de medio. Para la siembra se emplearon plantas de tomate, variedad Placero. A los 30 das se procedi a la cosecha de las plantas, evalundose los siguientes indicadores: Altura de las plantas (cm), dimetro del tallo (mm), nmero de hojas compuestas, longitud de la raz (cm), peso fresco de la masa verde (g por planta), donde se clculo el incremento de estos parmetros de las cepas promisorias segn resultado respecto a la cepa de referencia y el testigo absoluto, adems se evalu el contenido de nitrgeno, fsforo y potasio en la parte area de las plantas. Se valor el comportamiento poblacional de las cepas estudiadas en la zona rizosfrica, utilizando para ello el mtodo de las disoluciones- suspensiones de suelo, con siembra profunda en placas de petri (Novo,1974) con medio de cultivo Ashby, selectivo para el estudio del gnero Azotobacter.

Se efectu la evaluacin al suelo a los 15 y 30 das despus de la inoculacin. Los datos fueron sometidos a anlisis de varianza de clasificacin simple y se compararon las medias segn la prueba de rango mltiple de Duncan para un nivel de significacin de p 0,05. 3. Experimentos en condiciones de organopnico. Se condujo un experimento en secuencias de 3 cultivos en el organopnico del MININT, ubicado en el poblado de Albaisa en la zona noreste de la provincia de Camagey, sobre un sustrato constituido en base a una mezcla de suelo Pardo sin Carbonatos (50 %) y compost (50 %) y las caractersticas del mismo en los experimentos (cuadro 4) muestra que su fertilidad era media.

Cuadro 4. Composicin inicial del sustrato PH (H2O) 8.32

P2O5 K2O

mg 100 g-1 14.48

(1)

M.O. (2) (%) 18.98

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4.32

Tesis de maestra

1 2

Solucin acuosa. Incineracin.

Se avaluaron las 4 cepas nativas de Azotobacter chroococcum, descritas en el experimento en condiciones controladas, una multicepa (inoculacin mixta de las 4 cepas nativas), la cepa INIFAT12 como testigo de referencia y un testigo sin inocular, el diseo experimental a emplear fue el de parcelas partidas en bloque al azar con 7 tratamientos y 2 subtratamientos con 4 rplicas como se ilustra en el cuadro 5.

Cuadro 5. Esquema experimental

TRATAMIENTOS

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Plantas no inoculadas (testigo absoluto) Cepa INIFAT-12 (testigo de referencia) Cepa FS-2 (aislada de un suelo Fersialtico Pardo Rojizo) Cepa PS (aislada de un suelo Pardo sin Carbonatos) Cepa PC (aislada de un suelo Pardo con Carbonatos). Cepa FR (aislada de un suelo Ferrtico Rojo) Multicepa (inoculacin mixta de 4 cepas nativas)

SUBTRATAMIENTOS

APLICACIN FOLIAR

APLICACIN AL SUELO
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Tesis de maestra

La secuencia de cultivos empleada fue: tomate (Lycopersicum sculentum) utilizando la variedad HC-108, pepino (Cucumis sativum, L.) con la variedad Poinsett y lechuga (Lactuca sativa, L.) con la variedad Blake Simpsom. Las labores de preparacin de los canteros, siembra, riego, atenciones culturales y fitosanitarias, as como las cosechas, se realizaron segn el Instructivo Tcnico de Organopnicos (MINAG, 1999). En el experimento se realizaron las inoculaciones al suelo en el momento de la siembra y la foliar 15 das despus de trasplantadas las plantas de tomate y germinadas el pepino y la lechuga , con las cepas a evaluar a una concentracin de 1011 UFC ml-1 a razn de 4,5 ml m-2 segn Prez et al. (1998). En todos los casos las aplicaciones se realizaron en las primeras horas de la maana y con una adecuada humedad del sustrato. Se tomaron 5 plantas por parcela para evaluar semanalmente la altura de las mismas a partir de los 15 das de trasplantado el tomate y 15 das despus de germinada la lechuga., en cuanto al pepino al ser cultivado sin tutores no se efectu la medicin de la altura. Se le efectuaron los anlisis siguientes: porcentaje de materia seca, N, P y K; en el caso del tomate se determinaron adems los slidos solubles totales (SST) y vitamina C. En cada cosecha se pes la produccin de las hortalizas en 1 m2 en el centro de la parcela experimental (1,2 m2) y luego se calcul el rendimiento de cada variante en kg m-2. Se tomaron muestras del sustrato por parcela al finalizar cada experimento para determinar el pH (H2O, rel. 1: 2,5) y los contenidos de P2O5 y K2O (solucin acuosa) y materia orgnica (incineracin). En cada experimento los datos fueron sometidos a anlisis de varianza de clasificacin doble y donde hubo significacin (p 0,05), las medias se compararon segn la prueba de Rango Mltiple de Duncan, para el mismo nivel de significacin. Para el clculo econmico se tuvo en cuenta el precio de venta de las hortalizas ($ 2,40/kg), el inoculante ya tiene incluido los gastos en transporte desde el centro de produccin (Direccin 30

Tesis de maestra Provincial de Suelos) hasta el organopnico. Adems se tuvo en consideracin el costo de aplicacin en base al salario de los obreros ($ 225,00 mensuales). Fue calculada en base a los rendimientos promedio de las hortalizas, considerando la sucesin de tres cultivos al ao , teniendo en cuenta la fuente de costo variable que se describe en el cuadro 6 y no los gastos comunes tales como preparacin de los canteros, riegos, atenciones culturales y fitosanitarias, cosecha, costo de la semilla, etc. Estos gastos en que se incurre con el empleo del inoculante son muy pequeos en comparacin con los rendimientos y los precios de venta de las hortalizas. Estos clculos se realizaron en base a un estimado y por la experiencia de algunos investigadores en el trabajo en el organopnico, pues an no estn conformadas las fichas de costo de estas actividades.

Cuadro 6. Costo del inoculante

INOCULANTE Azotobacter PRECIO DE VENTA ($/l) 1.00 TRANSPORTE ($/VIAJE) APLICACIN 0.0025

31

Tesis de maestra

Resultados y discusin
1. Prospeccin y caracterizacin de los aislados. Como se puede observar en el cuadro 7, las 4 cepas nativas aisladas de los principales suelos de la provincia de Camagey, no muestran diferencias entre si en cuanto a las pruebas efectuadas y mantienen en general un buen desarrollo., se observa que las mismas se comportan de igual forma que las cepas de produccin nacional INIFAT-12, reportada por Dibut et al. (1989) fundamentalmente para los cultivos del tomate, pimiento, cucurbitaceas y hortalizas de hojas. Estos resultados pudieran indicar tambin respuestas similares en cuanto a su eficiencia, no obstante en experimentos realizados por Zinoveva (1958) y Dibut (1988) demostraron que cultivos de A. chroococcum pueden ser similares o iguales en cuanto a cambios morfolgicos, culturales, fisiolgicos y bioqumicos, mientras propiedades tiles desde el punto de vista agrcola como: supervivencia en la rizosfera , actividad fijadora de nitrgeno, velocidad de crecimiento y efecto beneficioso en los cultivos, pueden empeorar en unas cepas y desarrollarse en otras, lo que sugiere 32

Tesis de maestra entonces la necesidad de realizar las pruebas agronmicas que permitan corroborar estos aspectos y seleccionar de esta manera las mejores cepas.

Cuadro 7. Algunas caractersticas morfolgicas, culturales, fisiolgicas y bioqumicas de las cepas en estudio de A. chroococcum.
CARACTERISTICAS Tincin de Gram Produccin de pigmentos Flagelos Mucosidad Movilidad de las clulas Formacin de quistes Produccin de pigmentos fluorescentes Requerimiento de Calcio por la fijacin N2 Asimilacin de nitratos Utilizacin de Manitol Utilizacin del almidn Condiciones controladas. FS-2 Carmelitaa negro Pertricos Moderada + + No + + + + CEPAS NATIVAS PS-2 PC-2 Carmelita- Carmelitaa negro a negro Pertricos Pertricos Moderada Moderada + + + + No + + + + No + + + + FR-1 Carmelitaa negro Pertricos Moderada + + No + + + +
CEPA NACIONAL INIFAT-12 -

Carmelitaa negro Pertricos Moderada + + No + + + +

En el cuadro 8 se presentan los resultados de la influencia de la inoculacin de diferentes cepas nativas de A. chroococcum sobre algunos parmetros del rendimiento en el cultivo del tomate. Se observa que las plantas inoculadas mostraron en la mayora de los casos una respuesta diferenciada respecto a las plantas no inoculadas. En la altura no hubo diferencia significativas entre las cepas evaluadas, pero se evidencia una ligera tendencia a ser superior en las plantas inoculadas con la cepa FS-2., hubo un incremento de la altura en las plantas inoculadas entre un 53 % y 41 % respecto a las no inoculadas. En cuanto al dimetro del tallo, se aprecian diferencias significativas entre las cepas evaluadas, existiendo un efecto superior cuando fueron inoculadas la cepas FS-2 y PS-2, con un incremento entre 67 y 57 % respectivamente, con relacin al testigo sin inocular, si se comparan con el testigo de referencia (cepa INIFAT-12) existe un incremento entre 19 % (cepa FS-2) y 12 % (cepa PS-2).

33

Tesis de maestra El incremento del vigor de las plantas en sus primeras etapas de desarrollo, mediante la inoculacin de cepas de A. chroococcum ha sido estudiado por Martnez et al. (1997), quienes reportan incremento en la altura del tomate desde un 34 % hasta el 100 %, de acuerdo a la variedad utilizada. Las respuestas que se han obtenido en este estudio coinciden con los autores antes mencionados y son superiores a las logradas por Jackson et al. (1964) que sealaron incrementos hasta el 25 % en dimetro del tallo en plantas de tomate. El nmero de hojas aumenta en las plantas inoculadas; se aprecian diferencias significativas respecto a las no inoculadas, se evidencia una tendencia a ser superior donde se inocul la cepa nativa FS-2., con un incremento del 18 % respecto al testigo sin inocular y 9 % con relacin al testigo de referencia. En cuanto al peso fresco de las plantas y longitud de la raz se observan tambin diferencias significativas entre las cepas evaluadas y las plantas no inoculadas, entre las que se destaca la cepa nativa FS-2, con un incremento en cuanto al peso fresco de 74 % respecto al testigo sin inocular y un 13 % con relacin al testigo de referencia. En cuanto a la longitud de la raz hubo un incremento del 44 y 9 % respectivamente, tomando como referencia a las variantes anteriormente

mencionadas. Estos resultados indican que con la inoculacin pueden obtenerse plantas ms desarrolladas y vigorosas, que cuando no se realiza esta labor., en este caso al utilizar el inoculante a partir de la cepa nativa FS-2 se obtuvo en general una mejor respuesta, superando incluso a la cepa de referencia INIFAT-12, estos resultados pueden estar dado adems porque esta cepa fue obtenida precisamente del tipo de suelo donde se realiz el estudio.

CUADRO 8. Respuesta de algunos parmetros de rendimiento en el tomate inoculado con diferentes cepas de A. chroococcum

Variantes

Altura (cm)

Dimetro del tallo

No. de Hojas

Peso fresco planta

Longitud de la raz 34

Tesis de maestra (mm) 2,948 c 4,122 b 4,928 a 4,644 a 4,021 b 4,022 b 0.168 * 67-57 19-12 (g/planta) 60,016 d 92,596 b 104,678 a 97,090 ab 79,003 c 79,006 c 3.660 * 74 13 (cm) 2,400 3,160 3,460 a 2,280 2,263 2,264 .0147 * 44 9

Plantas no inoculadas INIFAT 12 FS-2 PS-2 PC-2 FR-1 ES Incremento (%) CP/TSI CP/TR

24,764 b 35,038 a 38,034 a 36,434 a 34,952 a 34,950 a 1.135 * 53-41 -

8,340 c 9,100 b 9,920 a 9,740 ab 9,462 ab 9,460 ab 0.285 * 18 9

Medias con letras distintas difieren significativamente entre si para p 0.05 segn la prueba de rango mltiple de Duncan. Leyenda: CP Cepas promisorias en el parmetro evaluado. TSI Testigo sin inocular. TR Testigo de referencia Los contenidos de N, P y K presentes en el follaje se recogen en el cuadro 9. En su mayora las plantas inoculadas se destacan por una mayor acumulacin de estos macroelementos, los cuales se encuentran dentro de los rangos de los anlisis foliares para el tomate en esta etapa de evaluacin de las plantas, segn Prez (1992). Se observa un aspecto interesante en el caso del nitrgeno ya que las plantas inoculadas con la cepa nativa FS-2, presentan los mayores contenidos del elemento con diferencia significativa respecto al resto de las cepas evaluadas incluyendo la cepa de referencia INIFAT-12. Estos resultados pudieran estar dados adems por la accin estimuladora que ejercen estas bacteria sobre la planta, y que al parecer este efecto en el caso de la cepa nativa FS-2 es superior. Segn, Valds (1996) las sustancias bioestimuladoras actan en diferentes procesos metablicos y fisiolgicos de las plantas y traslocacin de diferentes sustancias lo que se resume en una eficiencia metablica que se traduce en un crecimiento y desarrollo ms armnico de las plantas, siendo capaz de asimilar mayor cantidad de elementos minerales del suelo. Tambin es posible inferir que la cepa nativa FS-2, adems de bioestimuladora, tenga una capacidad superior de nitrofijacin que la cepa INIFAT-12, capaz de llegar a los lmites de 10-15 mg de N2 g-1 de sustrato carbonado consumido, planteado por Posgate (1974), para el gnero Azotobacter. 35

Tesis de maestra

CUADRO 9. Efecto de la inoculacin de diferentes cepas de A. chroococcum en los contenidos de algunos macroelementos
Variantes Plantas no inoculadas INIFAT-12 FS-2 PS-2 PC-2 FR-1 E.S. X N (%) 3,682 c 4,360 b 4,668 a 4,354 b 4,180 b 4,184 b 0,102 * P (%) 0,302 c 0,338 bc 0,416 a 0,378 ab 0,327 bc 0,328 bc 0,082 * K (%) 5,488 b 5,972 ab 6,194 a 5,752 ab 5,471 b 5,472 b 0,193 *

Medias con letras distintas difieren significativamente entre si para p 0.05 segn la prueba de rango mltiple de Duncan. La poblacin de las diferentes cepas de A. chroococcum en la zona rizosfrica de las plantas de tomate se muestran en el cuadro 10. En la zona rizosfrica donde no se inocul se observa a los 15 y 30 das que la poblacin no rebasa el orden de 104 UFC g-1 de suelo, lo que se corresponde en gran medida con las poblaciones de Azotobacter presentes de manera natural en los suelos cubanos y que segn Martnez et al. (1989) es del orden de 10 3 10 4 UFC g-1 de suelo. Al efectuarse la inoculacin los resultados varan como es de esperar dado lo que manifiestan Brown et al. (1962) y Shende y Singh (1977) en relacin al mbito de la poblacin por la introduccin de cepas ms eficientes y promisorias, con una mayor supervivencia en el suelo. No obstante se puede apreciar que a los 15 das con la cepa nativa FS-2 la poblacin es un orden superior a la obtenida por el resto de las cepas estudiadas. A los 30 das en la mayora de los casos se mantiene la poblacin alcanzada con la inoculacin a excepcin de la cepa FR-1 y FS-2 que disminuyen un orden, aunque esta ltima se mantiene con altos niveles poblacionales, esto pudiera estar dado por la competencia frente a algn antagonista fundamentalmente saprfitos que proliferaron a altas temperaturas o a otros factores fsicos del suelo que las cepas no rebasaron, como han encontrado Rovira (1965) y Boddey y Dobereiner, (1988) para el gnero Azotobacter. 36

Tesis de maestra Las diferencias marcadas entre poblaciones inoculadas y las encontradas naturalmente en las plantas sin inocular, permite corroborar con diferentes investigadores (Prassad y Singh, 1984 y Martnez et al., 1988) la accin y efecto estimulador del gnero Azotobacter, donde las sustancias que se producen en la zona rizosfrica pueden ser aprovechadas rpidamente por las plantas.

CUADRO 10. Poblacin de Azotobacter A. chroococcum en la zona rizosfrica de plantas de tomate despus de la inoculacin.
VARIANTE Plantas sin inocular INIFAT 12 FS-2 PS-2 PC-2 FR-1 Condiciones de Organopnico. Los resultados que aparecen en el cuadro 11 muestran el efecto de la aplicacin de las cepas evaluadas de Azotobacter chroococcum sobre algunos indicadores de calidad de los cultivos del tomate, pepino y lechuga, se observa un efecto significativo en la mayora de los parmetros evaluados en los tratamientos inoculados con respecto al testigo sin inocular, se destaca el tratamiento donde se aplic la cepa nativa FS-2 en los tres cultivos. En cuanto a los porcentajes de SST y Vitamina C en el cultivo de tomate la cepa antes mencionada obtuvo los mayores valores respecto a la cepa de referencia INIFAT 12, a su vez en los cultivos del pepino y la lechuga se aprecian diferencias significativas entre los tratamientos en cuanto al porcentaje de materia seca, los mejores resultados se obtuvieron con la utilizacin de esta cepa nativa; estos resultados coinciden con los obtenidos por Gonzlez et al (1992), donde despus de efectuado un screening biolgico de cepas de A. chroococcum constataron la influencia que ejerce esta bacteria en los diferentes parmetros evaluados, quedando demostrada la capacidad estimuladora de la misma. 37 Poblacin de A. chroococcum. (UFC g-1 de suelo) 15 das 30 das 4 10 x 10 29 x 103 49 x 108 34 x 108 9 44 x 10 49 x 108 43 x 108 29 x 108 8 25 x 10 12 x 108 22 x 108 17 x 107

Tesis de maestra Las plantas inoculadas se destacan por una mayor acumulacin de los nutrientes (NPK) y se observan en su mayora diferencias significativas con respecto a las plantas no inoculadas. En el tomate el contenido de N y K fue significativamente superior con la inoculacin a partir de la cepa nativa FS-2 respecto a la cepa de referencia INIFAT-12 y al resto de los tratamientos. En el pepino el contenido de P y K fueron mayores en la variante donde se utiliz la misma cepa, superando tambin la cepa de referencia. Estos resultados pudieran estar influenciados por los mecanismos de accin de estas bacterias, que como afirma Barea et al. (1977) son muy variados y entre ellos se encuentra, adems del poder fertilizante y estimulador del rendimiento del que ya se ha mencionado, los cambios en las poblaciones rizosfricas a consecuencia de la inoculacin, la accin fitotxica de estos biopreparados que ha sido mencionada tambin por Miranda et al. (1998) y el aumento en la capacidad de la planta para captar elementos minerales del suelo, lo cual tambin fue demostrado por Prez e t al. (1994), resultados que coinciden con los obtenidos en esta investigacin.

Cuadro 11. Efecto de la inoculacin de diferentes cepas de A. chroococcum en los indicadores de calidad del cultivo del tomate, pepino y lechuga.
Tratamiento Plantas sin inocular Cepa INIFAT- 12 Cepa FS- 2 Cepa PS-2 Cepa PC-2 Cepa FR-1 Multicepa E.S. x Tratamientos Plantas no inoculadas Cepa INIFAT- 12 Cepa FS- 2 Cepa PS- 2 Cepa PC- 2 Cepa FR- 1 S.S.T (%) 5.40 de 6.24 b 6.83 a 5.77 cd 5.87 c 5.65 cde 5.36 e 0.1191 * Vit. C (%/100 g) 12.08 d 17.83 b 21.55 a 16.89 b 16.14 bc 14.55 c 14.63 c 0.7059 * M. S (%) 1.66 c 3.40 b 4.96 a 3.31 b 2.79 b 2.79 b TOMATE M. S Nutrientes en fruto (%) (%) N P K 5.23 1.58 c 0.390 c 3.35 c 5.98 1.89 b 0.414 a 4.15 b a a 6.51 2.50 0.419 4.64 a b ab 5.92 1.81 0.412 4.08 b b bc 5.98 1.87 0.397 3.86 b b ab 5.89 1.89 0.409 3.88 b b ab 5.72 1.82 0.408 3.86 b 0.2403 n.s 0.0766 * 0.0050 * 0.1375 * PEPINO Nutrientes en fruto (%) N P K 2.09 b 0.697 b 3.28 d 2.54 a 0.837 b 4.95 b a a 2.61 1.114 5.81 a a b 2.51 0.805 4.50 bc a b 2.51 0.807 4.46 bc a b 2.50 0.755 4.41 bc

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Tesis de maestra
Multicepa E.S. x Tratamiento Plantas no inoculadas Cepa INIFAT- 12 Cepa FS- 2 Cepa PS- 2 Cepa PC-2 Cepa FR-1 Multicepa E.S. x 2.76 b 0.2449 * M. S (%) 2.41 d 3.71 b 4.38 a 3.20 c 2.74 cd 2.86 cd 2.82 cd 0.1692 * 2.51 a 0.0420 * LECHUGA N 1.16 c 1.92 a 2.03 a 1.67 b 1.69 b 1.71 b 1.70 bc 0.0620 * 0.749 b 0.0488 * Nutrientes en fruto (%) P 0.36 e 1.12 ab 1.20 a 1.04 bc 1.02 bc 0.96 cd 0.86 d 0.0496 * 4.09 c 0.2220 *

K 4.86 c 6.91 a 7.22 a 6.14 b 6.14 b 5.48 bc 5.41 bc 0.2457 *

Medias con letras distintas difieren significativamente entre si para p 0.05 segn la prueba de rango mltiple de Duncan. El efecto de las formas de aplicacin (suelo y foliar) de las cepas de Azotobacter en los indicadores de calidad en los cultivos estudiados se relacionan en el cuadro 12. En el tomate y el pepino no se aprecia significacin en ninguno de los parmetros evaluados en cuanto a la forma de inoculacin. En la lechuga se observa un mayor porcentaje de materia seca y un mayor contenido de fsforo cuando se realiz la aplicacin foliar, con diferencia significativa respecto a la inoculacin al suelo. Bhat et al. (1971) y Debinstein (1970), sealan el importante papel que desempea la filosfera en los ecosistemas agrcolas.

Cuadro 12. Efecto de las formas de aplicacin de A. chroococcum en los indicadores de calidad en los cultivos estudiados.
TOMATE Vit. C M.S. Contenido de nutrientes (%) SST (%) (%/100 g) (%) N P K 5.88 15.93 5.89 1.91 0.405 3.93 5.87 16.55 5.89 1.90 0.409 4.02 0.0527 ns 0.2764 ns 0.1362 ns 0.0540 ns 0.0020 ns 0.0592 ns PEPINO M.S. Contenido de nutrientes (%) (%) N P K 3.16 2.47 0.858 4.45 3.03 0.1001 NS M.S. (%) 2.46 0.789 4.56 0.0279 NS 0.0245 NS 0.0870 NS LECHUGA Contenido de nutrientes (%) N P K 39

Formas de aplicacin Foliar Suelo E.S. x Formas de aplicacin Foliar Suelo E.S. x Formas de aplicacin

Tesis de maestra Foliar Suelo E.S. x 3.38 a 2.94 b 0.0653 * 1.73 1.72 0.0373 ns 1.47 a 0.71 b 0.0251 * 6.06 5.98 0.1201 ns

Medias con letras distintas difieren significativamente entre si para p 0.05 segn la prueba de rango mltiple de Duncan.

El resultado final de los anlisis agroqumicos en el sustrato de los 3 cultivos estudiados se presenta en el cuadro 13. Los contenidos de P2O5, K2O y MO en los tratamientos inoculados en su mayora tuvieron diferencias significativas respecto al testigo sin inocular, se muestran los mayores valores en el tratamiento donde se aplic el producto a partir de la cepa nativa FS-2, la cual supera en la mayora de los casos a la cepa de referencia INIFAT-12. Las dems cepas evaluadas presentan un comportamiento irregular en los parmetros evaluados. En los anlisis finales del sustrato, cuando se culmino la ltima cosecha del cultivo de la lechuga, se observa una disminucin del contenido de P2O5, K2O y M.O., fenmeno caracterstico en estas instalaciones segn Carrin et al. (1997) y Prez et al. (1998), estos autores lo atribuyen al sistema de explotacin intensivo que se prctica en estas instalaciones, la solubilidad del potasio del estircol vacuno usado para prepara las mezclas iniciales, a las que se refieren Spiess y Besson (1992), las altas extracciones que de ese elemento realizan las hortalizas segn Guenkov (1983) e Hierres y Carballo (1988) y que para condiciones de organopnicos Prez et al. (1995) determinaron que son del orden de los 30g de K2 O m-2 (aproximadamente 300 kg ha-1). As como la elevada tasa de mineralizacin de la materia orgnica que afirma Ruz (1978) y Primavesi (1990).

Cuadro 13:Efecto de la aplicacin de las cepas en los anlisis agroqumicos finales del sustrato en los cultivos de tomate, pepino y lechuga. TOMATE
Tratamiento Plantas no inoculadas Cepa INIFAT- 12 Cepa FS- 2 P2O5 K2O (Mg 100 g-1) 11.93 c 2.73 e 15.25 b 5.86 b 18.67 a 6.65 a PH H2O 8.52 8.56 8.36 M .O (%) 12.0 d 18.75 b 21.62 a 40

Tesis de maestra Cepa PS- 2 Cepa PC-2 Cepa FR-1 Multicepa E.S. x 14.50 b 14.56 b 15.07 b 14.54 b 0.6078 * 4.75 c 3.58 d 3.31 de 3.15 de 0.2383 * 8.42 8.52 8.40 8.44 0.0585 ns 15.37 c 13.50 cd 13.12 cd 13.62 cd 0.7579 *

PEPINO
P2O5 K2O PH M .O Tratamiento -1 Mg 100 g H2O % c c Plantas no inoculadas 9.56 1.34 8.13 16.1 d Cepa INIFAT- 12 11.94 b 2.80 b 8.10 23.1 ab a a Cepa FS- 2 14.31 4.65 8.00 25.5 a Cepa PS- 2 10.94 bc 2.14 b 7.91 22.2 bc Cepa PC- 2 10.84 bc 2.06 b 8.02 20.5 bc b b Cepa FR- 1 11.19 2.35 8.12 19.6 c Multicepa 10.38 bc 2.22 b 8.00 19.5 c E.S. x 0.4926* 0.2313* 0.0537ns 0.9008* LECHUGA P2O5 K2O pH M .O Tratamiento -1 Mg 100 g H2O % Plantas no inoculadas 5.37 0.86 c 7.82 12.38 d Cepa INIFAT- 12 7.84 1.26 b 7.73 14.88 ab Cepa FS- 2 8.98 1.72 a 7.71 15.00 a Cepa PS- 2 7.88 1.13 bc 7.65 13.38 cd bc Cepa PC- 2 7.88 1.12 7.66 13.50 cd Cepa FR- 1 7.32 1.04 bc 7.61 13.75 bc bc Multicepa 7.05 0.99 7.74 13.75 bc E.S. x 0.3862 n s 0.1141 * 0.0850 n s 0.3851`* Medias con letras distintas difieren significativamente entre si para p 0.05 segn la prueba de rango mltiple de Duncan. Uno de los principales problemas que afectan la productividad de los sustratos en los organopnicos, segn Prez et al. (1995) y Carrin (1995), es el descenso brusco que se produce en el contenido de nutrientes, en especial del potasio, resultados que coinciden con los obtenidos en esta investigacin. Resulta de gran eficacia la utilizacin del inoculante a partir de la cepa nativa FS-2, ya que la misma ayuda de cierto modo a mantener los mayores contenidos de elementos minerales y materia orgnica en el sustrato, coincidiendo con lo reportado por Gandarilla et al. (1998) que lograron un aumento en los contenidos de K2O y materia orgnica en el sustrato con la aplicacin de 4,5 ml m-2 de Biostn. Es imprescindible aparte de los biofertilizantes la aplicacin de otras enmiendas orgnicas que mejoren y aporten al sustrato mayor cantidad de elementos minerales y orgnicos, que a travs de

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Tesis de maestra las inoculaciones de estos microorganismos se haran ms fcilmente asimilables por las plantas, como ha demostrado Prez (1999). Con relacin a los resultados obtenidos en el trabajo referente a la materia orgnica, que en su mayora se ve favorecida con la aplicacin del inoculante microbiano, puede parecer contradictorio como afirma Prez (1999), cuyos resultados coinciden con el presente trabajo, en el caso de estos inoculantes y sobre todo a lo que ha contenido de materia orgnica se refiere, pues como afirman Frobisher (1969), Barea et al. (1977) y Burges (1968), estas bacterias necesitan grandes cantidades de materia orgnica para cubrir su ciclo vital. No obstante, Jausen y Whitney (1996) consideran que la materia orgnica en el suelo es el resultado del balance entre las prdidas por descomposicin y las ganancias provenientes de los residuos y races del cultivo que permanecen despus de la cosecha por lo que pudiera inferirse que al haber un mayor desarrollo de los cultivos por la aplicacin del biopreparado, quede un mayor volumen de residuos de cosecha y de races que se incorporan al sustrato con las labores de preparacin, compensando as la mineralizacin que se produce, como afirma Gandarilla (1988). Como ha sugerido Calero, citado por Prez (1999), estudios realizados recientemente han demostrado que aunque la sobrevivencia de estas bacterias en el suelo es efmera , la accin que produce en su corto ciclo de vida deja una gran cantidad de exudados, azcares, vitaminas, aminocidos y otras sustancias en la rizosfera, as como las mismas clulas bacterianas, que constituyen una materia orgnica activa y pueden enriquecer el sustrato en ese componente. .En cuanto al pH, se observa que la aplicacin del inoculante no altero el mismo, se encuentran entre los rangos para el buen desarrollo del microorganismo en estudio, resultados que coinciden con los obtenidos por Siqueira y Franco (1988), quienes reportan que las bacterias de vida libre del gnero Azotobacter, son ms abundantes en suelos con pH neutro y alcalino.

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Tesis de maestra El efecto de la aplicacin del inoculante sobre la altura en los cultivos del tomate y la lechuga se presenta en la figura 1. Se observa en ambos casos que en los tratamientos inoculados hubo diferencias significativas respecto al testigo sin inocular. En el tomate se aprecia una clara superioridad de la cepa nativa FS-2 con respecto a la cepa de referencia INIFAT-12 y a las dems cepas nativas. En la lechuga no se observan diferencias significativas entre las cepas nativas FS-2, PS y PC respecto al testigo de referencia. En las formas de inoculacin suelo y foliar no hubo efecto en este parmetro en los cultivos evaluados. Tomate
200 150 cm 100 50 0 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 d b a c c c c c ab

Lechuga
a ab ab 30 b b cm 20 10 0

Tratamientos Figura 1. Efecto de la aplicacin de distintas cepas de A. chroococcum sobre la altura del tomate y la lechuga

La influencia de la inoculacin de las diferentes cepas de A. chroococcum sobre el rendimiento en los cultivos evaluados se muestra en la figura 2. En los cultivos del tomate y la lechuga se observa que con la aplicacin foliar de las cepas en estudio hubo un incremento en los rendimientos con diferencias significativas respecto al tratamiento donde no se aplic el inoculante, de forma similar este comportamiento se observ cuando se realiz la aplicacin al suelo en el caso del tomate, no ocurriendo as en la lechuga que no existen diferencias significativas cuando se aplica al suelo la cepa FR1 y de ambas formas la Multicepa, con rrelacin al testigo sin inocular, al parecer estas cepas encontraron en la zona rizosfrica algn efecto antagnico de otros microorganismos

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Tesis de maestra presentes en el suelo, acumulacin de sustancias bacteriostticas o falta de sustratos utilizables por las bacterias, lo que dio lugar a la poca eficacia de las mismas, aspecto estudiado por Rovira (1965). Con la inoculacin de la cepa nativa FS2 en ambos cultivos tanto en aplicaciones al suelo como foliar se lograron los mayores rendimientos respecto al resto de los tratamientos. Es interesante sealar que la aplicacin foliar de esta cepa nativa provoc un aumento significativo del rendimiento con respecto a la aplicacin en el suelo; si la comparamos con la cepa de referencia nacional ( INIFAT-12) el incremento en el cultivo del tomate fue de 70 % y un 30 % en la lechuga . En el caso del pepino no hubo diferencias en cuanto a las formas de aplicacin suelo y foliar, se muestra un aumento en los rendimientos en las variantes inoculadas con diferencias significativas al tratamiento sin inocular, se destaca la cepa nativa FS2 con un incremento del 69 % en comparacin con la cepa INIFAT 12. Este aumento del rendimiento en los cultivos en las variantes inoculadas con la cepa nativa FS-2, al parecer es debido fundamentalmente a que la misma tiene mayor capacidad de sintetizar sustancias biolgicamente activas, las cuales proporcionan un mayor estimulo en el desarrollo vegetal y el incremento del rendimiento, aspecto que se ha demostrado por Raznitzina (1938), Vancura (1961), Barea y Brown (1974), Gonzlez et al (1986), Martnez y Dibut (1998) , entre otros. Elmerich (1992), reporta que estas sustancias no slo incrementan el desarrollo de las plantas, sino que asegura el establecimiento competitivo de una especie de bacteria particular en la rizosfera, logrndose aumentos en los rendimientos. El efecto beneficioso del Azotobacter sobre el rendimiento de los cultivos haba sido encontrada con anterioridad por Dibut et al. (1992), Gonzlez et al. (1992), Martnez y Dibut (1996), Alarcn et al. (1998), Alarcn y Rodrguez (1998) y Ravelo et al. (1998), cuando aplicaron el inoculante en hortalizas tales como tomate, lechuga y otras. De igual modo, en organopnicos Heredia et al. (1998) encuentra efectos beneficiosos e incrementos del rendimiento al aplicar el Azotobacter conjuntamente con otros biofertilizantes y

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Tesis de maestra Prez (1999) logran incrementos del rendimiento en secuencias de cultivos en organopnicos de la provincia de Camagey, empleando el Biostin junto a otros biofertilizantes y abonos orgnicos.

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Tesis de maestra

E.S. int. = 0.081

Rend (kg/m 2)

4
foliar suelo

a b

E.S. cepa = 0.087

4
b cd a

E.S. int. = 0.117

foliar suelo
Rend. (kg/m2)

3 e
2 1 0 1 2 3 4
Cepa
gh

Rend. (kg/m2)

5 4 3 2 1 0

ff 1

ee 7

1 0

4 5 Cepa

h h

1
Efecto de diferentes cepas de A. chroococcum sobre el rendimiento del tomate

7 C epa

TOMATE

Efectode diferentes cepas deA. C hroococumsobre el rendimiento del PEPINO pepino

Efecto de diferentes cepas de A chroococcum sobre el . rendimiento de la lechuga

LECHUGA

Figura 2. Influencia de la inoculacin de diferentes cepas de A. chroococcum sobre el rendimiento del tomate, pepino y lechuga

c cd e cd cd e ef de ef fg gh fg h

cc

ab dd ee ee

cd

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Tesis de maestra La valoracin econmica realizada (cuadro 14) muestra los beneficios de la aplicacin del Azotobacter. Se observa que los rendimientos donde se aplic el inoculante microbiano a partir de la cepa nativa FS-2 fueron superiores a los obtenidos en los testigos absoluto y de referencia, con un incremento del 53 % con respecto a la cepa de produccin nacional, lo que corrobora su eficacia. Se logr una ganancia de $ 29.56 m2 ao -1 por concepto de su utilizacin, superior a lo que se obtuvo con la cepa INIFAT12 que solo asciende a $14,67 m-2 ao.

Cuadro 14. Valoracin econmica de tres cosechas en organopnico con la aplicacin del inoculante microbiano.
Tratamiento Testigo absoluto Testigo de referencia Cepa FS- 2 Rendimiento (kg/ m2 ) 6.00 12.68 19.45 Valor de producc. ( $/ m2 ) 13.20 27.89 42.79 Costo de la aplicacin ($/ m2 ) 0.0025 0.0025 Diferencias ($/ m2 ) 14.67 29.56 Ganancia ($/ m2 ) 13.20 27.87 42.76

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Conclusiones
Las cuatro cepas nativas de Azotobacter chroococcum superan en la mayora de los parmetros estudiados al testigo sin inocular. La aplicacin de la cepa nativa FS-2, tanto en suelo como foliar, fue la que mejor resultado brind en los cultivos evaluados y super a la cepa INIFAT-12, recomendada nacionalmente. Con la aplicacin del inoculante microbiano y sobre todo con la cepa nativa FS-2 se logra atenuar las afectaciones que se producen en el sustrato, fundamentalmente en la sucesin de los dos primeros cultivos. Se obtiene una ganancia de $ 29.56 por concepto de la aplicacin del inoculante producido a partir de la cepa nativa FS-2, con un incremento del 53 % respecto a la cepa de referencia INIFAT-12.

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Recomendaciones
Emplear el inoculante microbiano a partir de la cepa nativa FS-2 en condiciones de organopnico para lograr la sostenibilidad de los rendimientos. Probar la eficiencia de la cepa FS-2 en otros suelos y cultivos. Ampliar los estudios de la cepa FS-2 con la finalidad de poder conocer las sustancias biolgicamente activas que ella es capaz de sintetizar as como su accin nitrofijadora.

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64

Tesis de maestra

5
Rend. (kg/m2)

Rend (kg/m2)

4 3 2 1 0 1 2 f e cc

a b

E.S. int. = 0.081

4
foliar suelo

a b e

E.S. cepa = 0.087

Rend. (kg/m2)

3 2 1 0 1 2 3 4 5 6 7 C epa cd c d d

3 2 1 0 1
h h

dd

e e e e ee

4 5 Cepa

Efecto de diferentes cepas de A chroococcum . TOMATE ate sobre el rendim iento del tom

E fecto dediferentes cepas deA. C roococu sobreel ren ien del h m PEPINO dim to pepin o

Efecto de difere

Figura 2. Influencia de la inoculacin de diferentes cepas de A. chroo rendimiento del tomate, pepino y lechuga
CUADRO 11: EFECTO DE LA APLICACION DE LAS CEPAS EN LOS ANLISIS AGROQUMICOS FINALES DEL SUSTRATO EN LOS CULTIVOS DE TOMATE, PEPINO Y LECHUGA.
Trata miento Plantas no inocula Cepa INIFAT12 Cepa FS2 Cepa PS Cepa PC Cepa FR

TOMATE Mg/100 g H2O P2O5 K2O pH

11.93 c 15.25 b 18.67 a 14.50 b 14.56 b 15.07 b 2.73 e 5.86 b 6.65 a 4.75 c 3.58 d 3.31 de 8.52 8.56 8.36 8.42 8.52 8.40 8.44

% M.O.
12.0 d 18.75 b 21.62 a 15.37 c

PEPINO Mg/100 g H2O P2O5 K2O pH

9.56 c 11.94 b 14.31 a 1.34 c 2.80 b 4.65 a 8.13 8.10 8.00 7.91 8.02 8.12 8.00

% M.O.
16.1 d 23.1 ab 25.5 a 22.2 bc 20.5 bc 19.6 c 19.5 c

LECHUGA Mg/100 g H2O P2O5 K2O pH

5.37 7.84 8.98 7.88 7.88 7.32 7.05 0.86 c 1.26 b 1.72 a 1.13 bc 1.12 bc 1.04 bc 0.99 bc 7.82 7.73 7.71 7.65 7.66 7.61 7.74

% M.O.
12.38 d 14.88 ab 15.00 a 13.38 cd 13.50 cd 13.75 bc 13.75 bc

10.94bc 2.14 b

13.50cd 10.84bc 2.06 b 13.12cd 11.19 b 2.35 b

Multicepa 14.54 b 3.15 de

13.62cd 10.38bc 2.22 b 0.4926* 0.231 *

E.S. x

0.608 *

0.238 *

0.058ns 0.758 *

0.054ns 0.901 *

0.386n s 0.114 *

0.085n s 0.3851`*

Medias con letras distintas difieren significativamente entre si para p 0.05 segn la prueba de rango mltiple de Duncan. 2.2.1. Azospirillium.

65

Tesis de maestra Las bacterias del gnero Azospirillium fueron descritas por Beijerink en 1925 con el nombre de Spirillium lipoferum y cayeron en el olvido hasta que fueron redescubiertas por Dobereinier y Day en 1976. Desde un punto de vista evolucionista, se ha sugerido que estas bacterias son organismos intermedios entre los fijadores libres y los simbiticos; la localizacin de los puntos de fijacin de nitrgeno dentro de las clulas de las plantas hospedantes ha apoyado esta hiptesis, porque no se admite hoy que la fijacin simbitica tenga que estar confinada dentro de estructuras visibles como los ndulos cuando existe la posibilidad de otras formas de asociacin, tales como el establecimiento dentro del tejido cortical de las races (Krieg y Tarrand, 1978). Se han realizado numerosos estudios para conocer la distribucin del Azospirillium y los resultados se resumen en el siguiente cuadro: Distribucin geogrfica de Azospirillium en races y suelos colectados en varias regiones del mundo (Sarro da Silva y Dobereinier, 1977). Races de pastos Suelos No. muestras % positivas No. muestras % positivas Europa 48 8 EEUU 62 11 6 17 Africa 58 45 79 58 Colombia 54 43 Brasil Tropical 926 61 192 Brasil Subtropical 226 22 Puede verse que los mayores beneficios de la aplicacin de estas bacterias al suelo son Origen de las muestras logrados en el trpico. Los resultados positivos en Israel en aplicaciones de campos de trigo han conducido a establecer el uso de esta bacteria en aquel pas como una prctica agronmica (Okon et al., 1988), aunque an debe verificarse ms profundamente el xito de las aplicaciones. Un problema importante en el trigo lo constituye la escasa colonizacin interna de las races por las bacterias, como lo demuestra el reporte de New et al., (1991), quienes encontraron 10000 veces menos bacterias en el interior de las races (endorhizosfera), en comparacin con el interior, la causa de que los resultados positivos son

66

Tesis de maestra inconsistentes se atribuye a que no se conoce cul es el nmero necesario de bacterias ni las cantidades de sustratos carbonados que deben existir para que se logre un aporte significativamente adecuado a las necesidades de nitrgeno de las plantas de trigo (Kennedy y Tcham, 1992). Se ha demostrado que existe una gran variabilidad genotpica entre cultivares de trigo, maz y otros cereales en cuanto a lograr una eficiente fijacin de nitrgeno en asociacin con Azospirillum (Jagnow, 1990) tambin se ha reportado la presencia de quimiotaxismo, lo que es causa de que plantar c4 como maz se asocie principalmente con A. lipoferum, mientras que las plantas c3 se asocien con A. brasilensis (Dobereiner, 1983). Estos datos deben ser manejados cuidadosamente por los investigadores y fabricantes de inoculantes para seleccionar las cepas adecuadas con el fin de inocular diferentes especies y variedades de gramneas. En Cuba se han realizado diversos estudios con esta bacteria, fundamentalmente en los cultivos de caa de azcar, arroz y pastos, encontrando en los mismos respuesta positiva (Velazco et al., 1992; Hernndez et al., 1992 y Reboredo et al., 1992).

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resultados de estas pruebas y las mimas se comportan de igual forma que la cepa de produccin nacional INIFAT-12, reportada por Dibut et al (1989).

CUADRO 11.-EFECTO DE LAS FORMAS DE INOCULACIN DE LAS CEPAS EN LOS ANLISIS AGROQUMICOS FINALES DEL SUSTRATO EN LOS CULTIVOS DE TOMATE, PEPINO Y LECHUGA.
FORMA DE INOCULACIN TOMATE P2O5 K2O Mg/100 g

pH
H2O

Foliar Suelo E.S. x

FORMA DE INOCULACIN

14.38 b 15.47 a 0.2823 *

P2O5

4.19 4.39 0.1816 ns

8.50 a 8.43 b 0.0237 * pH

H2O

M.O. % 15.10 15.75 0.3438 ns M.O. % 21.40 20.50 0.3117 ns

PEPINO K2O Mg/100 g

Foliar Suelo E.S. x

FORMA DE INOCULACIN

11.51 11.11 0.2753 ns

P2O5

2.52 2.49 0.1323 ns

8.15 a 7.93 b 0.0243 * pH

M.O. H2O % Foliar 7.20 b 6.06 7.56 b 13.14 b Suelo 7.72 a 5.98 7.85 a 14.46 a E.S. x 0.1156 * 0.3177 ns 0.0520 * 0.3838 * Medias con letras distintas difieren significativamente entre si para p 0.05 segn la prueba de rango mltiple de Duncan.

LECHUGA K2O Mg/100 g

70