UNIVERSIT MOHAMMED V AGDAL FACULT DES SCIENCES Rabat

N dordre : 2326

THSE DE DOCTORAT DETAT Prsente par Ouafae BRITEL Discipline : Chimie Spcialit : Chimie Physique MODELISATION ET OPTIMISATION PAR LA METHODOLOGIE DES PLANS DEXPERIENCES DE LA SYNTHESE : - DE LHYDROXYAPATITE PHOSPHOCALCIQUE - DU PHOSPHATE TRICALCIQUE APATITIQUE - DU PHOSPHATE DE CALCIUM APATITIQUE CARBONATE Soutenue le 17 Janvier 2007 Devant le jury Prsident :
A. ZRINEH : Professeur la Facult des Sciences de Rabat

Examinateurs :
H. CHAAIR K. DIGUA M. HAMAD A. NOUNAH M. OUAMMOU : Professeur la Facult des Sciences et Techniques de Mohammadia : Professeur la Facult des Sciences et Techniques de Mohammadia : Professeur la Facult des Sciences de Rabat : Professeur lEcole Suprieure de Technologie de Sal : Professeur la Facult des Sciences et Techniques de Mohammadia

H. OUDADESSE : Professeur la Facult des Sciences de Rennes B. SALLEK : Professeur la Facult des Sciences de Knitra

Invit :
M. FERHAT : Ancien Professeur lUniversit Mohammed V-Agdal

Facult des Sciences, 4 Avenue Ibn Battouta, B. P. 1014, RP, Rabat- Maroc Tel : 212 (0) 37 77 18 34/35/38. Fax : 212 (0) 37 77 42 61, http://www.fsr.ac.ma

Avant - Propos Ce travail a t ralis au Laboratoire de Chimie Physique Gnrale de la Facult des Sciences de Rabat sous la direction de Monsieur le Professeur M .HAMAD en collaboration avec Monsieur le Professeur H .CHAAIR. Que Monsieur le Professeur M. HAMAD de la Facult des Sciences de Rabat, trouve ici lexpression de ma profonde et sincre gratitude pour mavoir accueillie dans ce laboratoire, pour lintrt constant quil a manifest pour mes recherches et les conseils clairs quil ma prodigus pour le dveloppement de ce travail. Que Monsieur le Professeur H. CHAAIR de la Facult des Sciences et Techniques de Mohammedia croit ma reconnaissance pour mavoir guide avec patience dans mes recherches, pour le savoir quil ma transmis, pour son soutien permanent et aussi pour son amiti. Je suis sensible lhonneur que me fait Monsieur A. ZRINEH, Professeur la Facult des Sciences de Rabat, dassumer la fonction de Prsident du Jury dvaluation de cette thse. Je tiens remercier Monsieur M. FERHAT, Professeur lUniversit Mohammed VAgdal pour le grand honneur quil ma fait en acceptant dtre membre du Jury de cette thse. Je remercie vivement Monsieur A. NOUNAH, Professeur lEcole Suprieure de Technologie de Sal et Monsieur M. OUAMMOU,, Professeur la Facult des Sciences et Techniques de Mohammedia davoir accept dtre rapporteurs de ce travail ; je leur exprime toute ma reconnaissance. Mes vifs remerciements sadressent galement Monsieur K. DIGUA, Professeur la Facult des Sciences et Techniques de Mohammedia pour ses discussions fructueuses et sa disponibilit mon gard et Monsieur B. SALLEK, Professeur la Facult des Sciences de Knitra, pour son apport scientifique prcieux et davoir accept de participer au Jury de cette thse.

Monsieur H. OUDADESSE, Professeur la Facult des Sciences de Rennes a accept de faire partie du Jury de cette thse, je lui exprime toute ma gratitude. Enfin, je souhaite associer ces remerciements tous ceux qui ont contribu la ralisation de ce travail, en particulier tous les membres du laboratoire et tous les collgues de la Facult des Sciences et Techniques de Mohammedia.

SOMMAIRE

INTRODUCTION GENERALE.. 1 CHAPITRE I : GENERALITES SUR LES PHOSPHATES DE CALCIUM... 6 I. LES PHOSPHATES DE CALCIUM .. 7 II. LES PHOSPHATES DE CALCIUM APATITIQUES... 8 III. LES APATITES BIOLOGIQUES 8 III.1. Constitution du tissu osseux 8 III.1.a. Los naturel .. 9 III.1.b. La dent.. 10 III.1.c. Le remodelage osseux 11 III.2. Composition chimique et structure de la phase minrale du tissu osseux 13 IV. DIFFERENTES METHODES DE SYNTHESE DE PHOSPHATE APATITIQUE 15 IV.1. Ractions en phase aqueuse. 15 IV.2. Ractions en phase solide 16 IV.3. Ractions en sels fondus. 16 IV.4. Ractions sol - gel. 16 IV.5. Raction liquide / solide : la voie des ciments 17 V. STRUCTURE CRISTALLINE DES PHOSPHATES DE CALCIUM DE SYNTHESE A USAGE BIOLOGIQUE... 17 V.1. L hydroxyapatite. 17 V.1.a. Etude cristallographique 18 V.1.b. Substitution de Ca2+ V.1.c. Substitution de PO43-.... 20 20

V.1.d. Substitution de OH- .... 21

V.2. Le phosphate tricalcique 21 V.2.a. Etude cristallographique. 22 CHAPITRE II : ETUDE DE LA SYNTHESE DE LHYDROXYAPATITE STCHIOMETRIQUE PAR VOIE AQUEUSE 24 I. METHODE DE SYNTHESE PAR NEUTRALISATION... 26 I.1. Prsentation de la mthode de synthse par neutralisation de Ca(OH)2 par H3PO4 26 I.2. Etude des produits de synthse... 27 I.2.a. Etude par diffraction des rayons X. 27 I.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge. 31 I.2.c. Mesure de la surface spcifique 34 I.2.d. Conclusion 34 I.3. Prsentation de la mthode de synthse par neutralisation de CaCO3 par H3PO4 34 I.4. Etude des produits de synthse.. 35 I.4.a. Etude par diffraction des rayons X. 35

I.4.b. Etude par spectroscopie infrarouge. 38 I.4.c. Conclusion... 38 II. METHODE DE SYNTHESE PAR DOUBLE DECOMPOSITION.. 41 II.1. Prsentation de la mthode de synthse par double dcomposition partir de Ca(NO3)2 et (NH4)2HPO4. 41 II.2. Etude du produit de synthse. 41

II.2.a. Etude par diffraction des rayons X. 41 II.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge. 42 II.2.c. Conclusion... 42 II.3. Prsentation de la mthode de synthse par double dcomposition partir de CaCO3 et H3PO4... 43 II.4. Etude du produit de synthse. 44

II.4.a. Etude par diffraction des rayons X. 44 II.4.b. Etude par spectroscopie infrarouge. 46 II.4.c. Mesure de la surface spcifique.. 47 II.4.d. Microscopie lectronique balayage . 47 II.4.e.Conclusion 49 CHAPITRE III : ETUDE DE LA SYNTHESE DU PHOSPHATE TRICALCIQUE APATITIQUE PAR VOIE AQUEUSE . 50 I. METHODE DE SYNTHESE DU PHOSPHATE TRICALCIQUE A PARTIR DE Ca(NO3)2 ET (NH4)2HPO4... . 52 I.1. Prsentation de la mthode de synthse. 52 I.2. Etude du produit de synthse. 53 I.2.a. Etude par diffraction des rayons X . 53 I.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge.. 54 II. METHODE DE SYNTHESE DU PHOSPHATE TRICALCIQUE A PARTIR DE CaCO3 ET H3PO4..... 55 II.1. Prsentation de la mthode de synthse 55 II.2. Etude du produit de synthse 56 II.2.a. Etude par diffraction des rayons X 56

II.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge 58 II.2.c. Mesure de surface spcifique. 59 II.2.d. Microscopie lectronique balayage. 59 II.2.e. Conclusion.. 59 CHAPITRE IV : ETUDE DE LA SYNTHESE DUN PHOSPHATE DE CALCIUM APATITIQUE CARBONATE PAR VOIE HYDROTHERMALE. 61 I. CONDITIONS EXPERIMENTALES... 63 I.1. Description du dispositif exprimental 63 I.2. Protocole exprimental 64

II. ETUDE DE LINFLUENCE DES PARAMETRES DE SYNTHESE SUR LA STOECHIOMETRIE DU PHOSPHATE DE CALCIUM 65 II.1.Influence du rapport atomique (Ca/P) initial . 65 II.1.a. Etude par diffraction des rayons X. 66 II.1.b. Etude par spectroscopie infrarouge. 66 II.2.Influence du temps de sjour... 69 II.2.a. Etude par diffraction des rayons X. 69 II.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge. 69 II.3.Influence de la temprature de traitement .. 72 II.3.a. Etude par diffraction des rayons X. 72 II.3.b. Etude par spectroscopie infrarouge. 72 III. ETUDE PAR ANALYSE CHIMIQUE.. 75 IV. ETUDE PAR MICROSCOPIE ELECTRONIQUE A BALAYAGE. 75 V. CONCLUSION 77 CHAPITRE V : MODELISATION ET OPTIMISATION DE LA SYNTHESE DE LHYDROXYAPATITE 79 I. PRESENTATION DE LA METHODOLOGIE DE LETUDE 80 I.1. Choix des facteurs, centre dintrt, pas de variation et domaine exprimental. 80 I.1.a. Choix des facteurs. 80 I.1.b. Centre dintrt et pas de variation.. 81 I.1.c. Domaine exprimental. 81 I.2. Equation du modle 82 I.3. Construction de la matrice dexpriences .. 84 I.4. Construction de la matrice du modle. 86 II. RESULTATS EXPERIMENTAUX.... 86 III. MODELISATION DE LA REPONSE : RAPPORT MOLAIRE Ca/P DES PRODUITS LAVES.. 86

III.1. Signification et effets des diffrents facteurs... 86 III.2. Analyse de la variance.. 90 III.3. Equation du modle.. 91 III.4. Validit du modle... 91 IV. OPTIMISATION ... 93 IV.1.Analyse des courbes disorponse... 93 IV.2. Dtermination des conditions optimales.. 97 IV.3. Vrification exprimentale.. 98 CHAPITRE VI : MODELISATION ET OPTIMISATION DE LA SYNTHESE DU PHOSPHATE TRICALCIQUE APATITIQUE.. 100 I. PRESENTATION DE LA METHODOLOGIE DE LETUDE .. 101 II. RESULTATS EXPERIMENTAUX... 104 III. MODELISATION. 104 IV. OPTIMISATION... 109 IV.1. Analyse des courbes disorponses. 109 IV.2. Dtermination des conditions optimales. 115 IV.3.Vrification exprimentale... 116 CHAPITRE VII : MODELISATION ET OPTIMISATION DE LA SYNTHESE DUN PHOSPHATE DE CALCIUM APATITIQUE CARBONATE 118 I. PRESENTATION DE LA METHODOLOGIE DE LETUDE 119 I.1. Facteurs choisis et leur domaine exprimental. 119 I.2. Matrice dexpriences et quation du modle 120 II. RESULTATS EXPERIMENTAUX 123 III. MODELISATION. 124 IV. OPTIMISATION... 126 IV.1. Analyse des courbes disorponse... 126

IV.2. Dtermination des conditions optimales. 132 IV.3. Vrification exprimentale.. 136 CONCLUSION GENERALE 138 ANNEXE : METHODES DE CARACTERISATION ET DANALYSES... 142 BIBLIOGRAPHIE. 148

INTRODUCTION GENERALE

La mthode des plans d'expriences n'est pas une technique nouvelle. Elle date en fait du dbut du sicle avec les travaux de FISHER (1925). Les premiers utilisateurs de cette mthode furent des agronomes qui ont vite compris l'intrt des plans d'expriences et, notamment, la rduction du nombre d'essais lorsqu'on tudie de nombreux paramtres. En effet, les essais en agronomie sont trs consommateurs de paramtres, l'tude du rendement d'un bl ncessite la prise en compte du type de terrain, des diffrents traitements, de l'ensoleillement, etc De plus, dans ce type d'exprimentation, il faut attendre un an avant de connatre les rsultats. Il tait donc indispensable de rduire le nombre d'essais sans perdre en prcision et d'tre capable de planifier d'une faon formelle la campagne d'essais. Mais cette technique est reste relativement confidentielle et n'a pas russi pntrer de faon significative les industries occidentales avant les annes soixante dix. Une des raisons de ce manque d'intrt des industriels pour cette mthode tait probablement l'aspect trop thorique de l'approche propose. Il a fallu les travaux du Docteur TAGUCHI dans les annes soixante au Japon pour que les plans d'expriences pntrent nos usines. TAGUCHI, avec le pragmatisme qui caractrise les japonais, a su simplifier et clarifier l'utilisation des plans d'expriences. Son apport est considrable et la diffusion grande chelle de ses travaux aux Etats-Unis date de la fin des annes soixante dix. Aujourd'hui, les plans d'expriences reprsentent un outil indispensable tout industriel, du plus petit au plus grand, soucieux d'amliorer la qualit de ses produits. Depuis quelques annes, on sest aperu que la qualit dun produit (notion essentielle dans le monde de lindustrie) dpendait principalement de la conception de ce produit ou plus prcisment de la connaissance parfaite de cette conception, plutt que du produit fini luimme. En effet, connatre parfaitement llaboration dun produit permet de prvoir son volution au cours du temps en fonction des paramtres influents quils soient internes ou externes. Or, ces paramtres sont gnralement nombreux et difficilement modlisables par les mthodes classiques de la physique. Le concepteur a donc besoin dune mthode exprimentale , peu coteuse en expriences , qui lui permettra de mesurer et de connatre linfluence de tous les paramtres et den dduire les plus influents. Ainsi, le plan dexpriences reprsente loutil adquat qui permettra de rpondre lensemble de ces questions.

Dans le cas de la synthse du phosphate de calcium, ce phnomne dpend de plusieurs paramtres savoir : le pH, la temprature, la concentration des ractifs, le rapport molaire cation/anion, la dure de maturation, la vitesse dagitation, etc. En gnral, tout phnomne Y dpend de nombreux paramtres xi (x1, x2, x3, x4) appels facteurs. Afin de connatre linfluence du paramtre x1 sur Y, la logique veut que lon fixe tous les autres (x2, x3, x4) et que lon fasse varier seul x1. Il faudrait effectuer la mme opration pour x2, x3 et x4 pour voir leur influence sur le systme. Ainsi, si on dcide de prendre 3 points exprimentaux par variable tudie, il faudrait raliser 34= 81 expriences, ce qui est considrable. La question se poser est comment diminuer ce nombre dexpriences de manire intelligente afin dobserver les mmes effets. Il nest dj pas possible de faire moins de 2 points dtudes (valeurs minimale et maximale du paramtre) par variable et il semble difficile de rejeter linfluence de certaines variables au hasard (mthode des impasses), sans savoir si cela a de limportance. La solution ce problme est de faire varier lensemble des paramtres la fois. Cette solution apporte plusieurs avantages si elle est applique correctement selon les six tapes suivantes : Etape 1 : L'objectif et sa mesure : - quel est le problme ? - comment dfinir clairement l'objectif que l'on veut atteindre ? - par quelles mesures saurons-nous s'il est atteint ? Etape 2 : Slection des paramtres, modalits et interactions : - recherche des paramtres influents, - choix des modalits donner aux paramtres, - identification d'ventuelles interactions entre paramtres. Etape 3 : Construction du plan d'expriences : - choix dans un catalogue d'une table, - adaptation du plan au cas trait, - planification de l'tude, Etape 4 : Ralisation des essais : - ralisation de tous les essais prvus, - matriser la mesure.

Etape 5 : Modlisation: - degr de confiance accord aux rsultats, - paramtres et interactions significatifs, - tablissement du modle pour un seuil de signification. Etape 6 : Optimisation : - analyse graphique, - dtermination des conditions optimales. Nous nous proposons dans ce travail dappliquer cette mthodologie, en suivant les diffrentes tapes afin de modliser et doptimiser la synthse de lhydroxyapatite, du phosphate tricalcique apatitique et dun phosphate de calcium apatitique carbonat. Pour ce faire, cette tude sarticule autour de sept chapitres, prsents en deux parties : la premire traite de ltude de la synthse de chacun des produits prcits et la seconde concerne la modlisation et loptimisation des synthses correspondantes. PARTIE I CHAPITRE I : Gnralits sur les phosphates de calcium,

CHAPITRE II : Etude de la synthse de lhydroxyapatite par voie aqueuse, CHAPITRE III : Etude de la synthse du phosphate tricalcique par voie aqueuse, CHAPITRE IV : Etude de la synthse dun phosphate de calcium apatitique carbonat par voie hydrothermale.

PARTIE II CHAPITRE V : Modlisation et optimisation de la synthse de lhydroxyapatite, CHAPITRE VI : Modlisation et optimisation de la synthse du phosphate tricalcique, CHAPITRE VII : Modlisation et optimisation de la synthse dun phosphate de calcium apatitique carbonat.

PARTIE I

ETUDE DE LA SYNTHESE : - DE LHYDROXYAPATITE STOECHIOMETRIQUE - DU PHOSPHATE TRICALCIQUE APATITIQUE - DU PHOSPHATE DE CALCIUM APATITIQUE CARBONATE

CHAPITRE I

GENERALITES SUR LES PHOSPHATES DE CALCIUM

I. LES PHOSPHATES DE CALCIUM

Les phosphates de calcium constituent la phase minrale majeure des tissus durs des vertbrs. Ds 1926, De Jong
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, en utilisant la diffraction des rayons X, a montr lanalogie

du minral osseux avec les minraux de phosphate de calcium possdant une structure apatitique. Pendant plus de vingt ans, les phosphates de calcium de synthse, choisis parmi les biomatriaux existants, ont fait lobjet de plusieurs travaux fondamentaux qui ont dbouch sur des applications biologiques et cliniques
(2-6)

. Ils sont parmi les plus utiliss en chirurgie

osseuse ou dentaire lorsque des apports de matriaux de comblement sont ncessaires (8 -16). En effet, leurs compositions chimiques sont proches de celle du tissu dur des os et des dents, leurs proprits de biocompatibilit et de bioactivit les rendent utilisables comme substitut osseux permettant un comblement lors de dfaut et une libration de principe actif (17). Les proprits de dissolution de ces phosphates de calcium dpendent de leurs caractristiques physico - chimiques, en particulier le rapport molaire Ca/P (18), de la structure cristallographique et de la surface spcifique. Ainsi, en fonction du rapport molaire Ca/P, nous pouvons dfinir plusieurs familles dorthophosphate de calcium. Tableau I-1 : Diffrents phosphates de calcium (19). Symbole TTCP HAP - TCP OCP DCPD DCPA PPC MCPM PCP Nom Phosphate ttracalcique Hydroxyapatite Phosphate tricalcique anhydre Phosphate octocalcique Phosphate dicalcique dihydrat Phosphate dicalcique anhydre Pyrophosphate de calcium Phosphate monocalcique mono hydrat Phosphate monocalcique anhydre Formule Ca4(PO4)2O2 Ca10(PO4)6(OH)2 Ca3(PO4)2 Ca8H2(PO4)6,5H2O CaHPO4, 2H2O CaH (PO4) Ca2P2O7 Ca (H2PO4)2, H2O Ca (H2PO4)2 Ca/P 2,00 1,67 1,50 1,33 1,00 1,00 1,00 0,50 0,50

II. LES PHOSPHATES DE CALCIUM APATITIQUES

Parmi ces phosphates de calcium, les apatites constituent une famille de composs ioniques dcrite par la formule chimique Me10(XO4)6(Y)2 dans laquelle Me est un mtal bivalent (Ca2+, Sr2+, Ba2+, Pb2+ ...), XO4 un anion trivalent (PO43-, AsO43-, VO43- ...) et Y un anion monovalent (F-, Cl-, Br-, I-, OH- ...). Les apatites cristallisent gnralement dans le systme hexagonal cationiques (22-25). Ainsi, les cations bivalents (Me2+) peuvent tre remplacs par d'autres cations bivalents, mais galement par des cations monovalents (Na+, K+) ou trivalents (La3+, Eu3+, Ga3+ ...) (26-28). Les anions XO43- peuvent galement tre substitus par des anions bivalents (CO32-, SO42-, HPO42- ...) ou ttravalents (SiO44-) ( 24, 25, 29). Enfin, les groupements Y-, peuvent aussi tre substitus par des ions bivalents (CO32-, O2-, S2- ...) et / ou par des lacunes (29, 30). Les mcanismes de compensation de charges mis en jeu lorsque des ions de valences diffrentes coexistent sur un mme site, impliquent des modifications structurales et la cration de lacunes cationiques (sites Me) et / ou anioniques (sites Y). Aucune apatite possdant des lacunes sur les sites XO4 n'a cependant t observe.
(20-21)

. Une particularit de cette structure rside dans sa capacit former

des solutions solides et accepter un grand nombre de substituants anioniques et

III. LES APATITES BIOLOGIQUES III.1. Constitution du tissu osseux

Le tissu osseux naturel est assimilable un matriau composite constitu de fibres organiques (le collagne) inscrites dans une matrice minrale qui a t identifie comme tant un phosphate de calcium apatitique poly-substitu
(31)

. La rpartition massique des deux

phases dans le tissu est variable suivant la partie du corps considre et a ainsi amen distinguer deux types de tissus osseux : los et la dent. Une autre particularit des tissus osseux rside dans leur aptitude constamment voluer au cours de leur existence afin de sadapter le mieux possible aux contraintes auxquelles ils sont soumis (mcaniques ou autres). Ce phnomne, engendr par lactivit cellulaire, est appel remodelage osseux .

III.1.a. Los naturel

La composition massique moyenne de los naturel est la suivante : 60% de phase minrale, 15% de phase organique et 25% deau. La rsistance et la lgret de los sexpliquent par son architecture associant deux types de macrostructures osseuses.

Figure I-1 : Coupe longitudinale schmatique d'un os long (32). La rsistance aux contraintes mcaniques est assure par un os dense, appel os cortical, localis en surface du tissu (Figure I-1). Ses caractristiques mcaniques sont donnes au tableau I-2. Tableau I-2 : Proprits mcaniques de l'os cortical, de l'os trabculaire, de la dentine et de l'mail dentaire. Rsistance la rupture (MPa) Compression Os cortical Os trabculaire Dentine Email 167 9,1 1,3 297 382 4 Tension 122 Flexion 168 11 Rfrence (33) (34) (35) (36) Module d'lasticit (MPa) Compression 15450 84 14 17500 1500 81000 3000 Rfrence (37) (34) (35) (36)

Sa microstructure peut tre dcrite comme un empilement lamellaire compact d units de construction appeles ostons (Figure I-2).

Figure I-2 : Localisation des ostons dans l'os cortical.

L'oston est un canal neurovasculaire dont la paroi est forme de plusieurs couches concentriques de fibres de collagnes sur lesquelles se dveloppent les cristaux dapatites. Les diffrentes couches ont une paisseur comprise entre 3 et 7 m
(39)

. Los cortical reprsente

environ 80% de la masse osseuse chez ladulte, mais, de par sa structure dense et compacte, il nintervient que trs peu dans les changes mtaboliques. Cette deuxime fonction du tissu osseux est assure par los trabculaire (Figure I-1). Ce dernier occupe la part la plus volumineuse du tissu mais ne reprsente que 20% de sa masse. Sa structure macroporeuse tridimensionnelle offre une surface dchange mtabolique importante.

III.1.b. La dent
Les dents ont toutes une mme structure de base. Outre la pulpe dentaire qui est un tissu mou trs innerv et vascularis, la dent se compose de deux tissus osseux distincts : la dentine et lmail (Figure I-3).

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Figure I-3 : Coupe transversale schmatique d'une molaire. La dentine (ou ivoire) recouvre et protge la pulpe dentaire. Elle se compose en masse de 75% de phase minrale, de 20% de phase organique et de 5% deau. Cest le deuxime tissu le plus dur de lorganisme. Cest un tissu mcaniquement isotrope ; son module dlasticit est comparable celui de los cortical et sa rsistance en compression lgrement suprieure (Tableau I-2). Lmail dentaire recouvre la dentine au niveau de la couronne. Cest un tissu osseux quasiment minral. Il ne contient que 0,5% en masse de phase organique et 2% deau. Il est le tissu le plus dur de lorganisme avec un module dlasticit et une contrainte rupture suprieurs ceux de la dentine. La microstructure de lmail dentaire correspond lempilement compact de "colonnes" de 3 10 m de diamtre sur 50 150 m de hauteur constitues de cristallites lamellaires dapatites. Contrairement tous les autres tissus osseux, lmail ne contient pas de collagne et ne se rgnre pas une fois endommag.

III.1.c. Le remodelage osseux

Durant la vie, le tissu osseux subit un remodelage continu. La finalit de ce remodelage est, dune part, dassurer la rparation dinfimes dgts du squelette et, dautre

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part, de contrler le taux de calcium relargu dans lorganisme par change mtabolique. Le remodelage est d laction couple de deux cellules osseuses distinctes : les ostoclastes et les ostoblastes ; les premires rsorbent le tissu et les secondes le reforment. La figure I-4 prsente une suite chronologique de schmas retraant le principe daction des cellules mises en jeu lors de la rsorption et le remplacement dune unit de remodelage.

Figure I-4 : Principe d'action des cellules osseuses (39). Au repos , la surface de los est recouverte de cellules dites bordantes de forme allonges et trs fines (A) (Figure I-4). Au cours de la phase dactivation (B), des cellules mononucles, percent le lit de cellules bordantes et se groupent sur une surface minralise du tissu. La phase de rsorption (C) est caractrise par lexcavation dun petit volume de tissu osseux par les ostoclastes ns de la fusion des cellules mononucles. Les ostoclastes sont des cellules polynucles qui, en librant des protons, rsorbent le tissu minralis par dissolution. Aprs rsorption, des cellules mononucles prparent la surface de la lacune (D) larrive des ostoblastes (cellules mononucles denviron 30 m de diamtre). Ces dernires engendrent la formation d'un jeune tissu minralis (E). Le processus se poursuit alors jusqu ce que los jeune ait entirement combl la lacune (F).

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III.2. Composition chimique et structure de la phase minrale du tissu osseux

Le tableau I-3 prsente les compositions chimiques lmentaires des phases minrales correspondant aux trois tissus osseux prsents prcdemment. Tableau I-3 : Composition chimique (en pourcentages massiques) des phases minrales de l'mail, de la dentine et de l'os (19). Elment Ca P CO2 Na K Mg Sr Cl F Rapport molaire Ca/P Email 37,6 18,3 3,0 0,7 0,05 0,2 0,03 0,4 0,01 1,59 Dentine 40,3 18,6 4,8 0,1 0,07 1,1 0,04 0,27 0,07 1,67 Os 36,6 17,1 4,8 1,0 0,07 0,6 0,05 0,1 0,1 1,65

Les donnes prsentes dans le tableau I-3 montrent les nombreux minraux que contiennent les phases minrales des tissus osseux. Les quatre lments qui y sont prpondrants sont le calcium, le phosphore (PO43-, HPO42-), le carbone (CO32-) et l'oxygne (O2-, OH-, PO43-, HPO42-). Les teneurs en sodium, magnsium et chlore varient de manire importante suivant le tissu considr. Les autres lments, tels que le fluor, le strontium et le potassium, font office de traces.

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Legros, par des analyses structurales et chimiques de la phase minrale de l'os priostique animal (comparable l'os cortical) a pu dcrire ce dernier par le modle suivant (32, 40) :

Cette formule correspond celle dune apatite phosphocalcique poly-substitue dans laquelle le calcium sinscrit dans les sites Me de la structure. La non stchiomtrie, illustre par la prsence de lacunes (notes
x)

sur les sites Me et Y, est engendre par la poly

substitution des sites XO4 par des espces de valences diffrentes. En effet, ces sites sont occups plus de 70% (molaire) par des ions phosphate trivalents ; les 30% restant tant combls soit par des ions carbonate, soit par des ions hydrognophosphate, tous deux bivalents. Les sites Y sont galement principalement occups par deux ions de valences diffrentes : carbonate et hydroxyde. Cependant, comme le mettent en vidence les donnes prsentes ci-dessus (Tableau I-3), chaque tissu possde sa propre composition chimique et cette dernire peut voluer au sein d'un mme tissu. Il a galement t montr que les diffrentes teneurs ioniques au sein des tissus osseux voluent avec l'ge du sujet
(32)

. Ds lors, les htrognits

microstructurales et chimiques dont font preuve les phases minrales des tissus osseux rendent leur modlisation, et fortiori, leur synthse exacte utopique. Par ailleurs, les possibilits de reconstruction osseuse chez lhomme sont limites et les pertes de tissu, quelles soient involontaires ou consquence dune thrapie curatrice, soulvent le problme de leur comblement. La chirurgie orthopdique recoure alors la greffe osseuse. Toutefois, les difficults et les complications de prlvement lies aux greffes autologues dune part, et les risques potentiels de transmissions virales soulevs par les allogreffes et xnogreffes animales dautre part, ont amen envisager limplantation de substituts osseux synthtiques do la ncessit dutiliser les phosphates de calcium synthtiques.

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IV. DIFFERENTES METHODES DE SYNTHESE DE PHOSPHATE APATITIQUE

La reproductibilit, la biocompatibilit et labsence de toxicit constituent les principaux points du cahier des charges que doit remplir un substitut osseux de synthse. Plusieurs types de biomatriaux rpondent ces contraintes (polymres, mtaux, bioverres, cramiques...) et sont aujourdhui utiliss sous diffrentes formes en fonction de lapplication vise (granules, pices massives ou ciment pour le comblement osseux, dpts denses ou poreux pour le scellement de prothses...). Les phosphates de calcium suscitent un vif intrt en tant que substituts osseux grce une composition chimique voisine de celle de la phase inorganique du tissu calcifi. Ils forment une famille de composs chimiques de structures et de compositions variables. Ils peuvent apparatre sous diffrentes formes : hydrates, hydroxydes ou anhydres. Ils sont habituellement dcrits par leur rapport molaire Ca/P. Plusieurs grandes voies de synthse sont utilises pour la prparation des apatites : la prcipitation par voie aqueuse, la raction solide - solide (voie sche), la raction en sels fondus, le procd sol gel et la voie des ciments.

IV.1. Ractions en phase aqueuse

Les synthses en phase aqueuse se font selon deux procds diffrents : la mthode par double dcomposition et la mthode par neutralisation. Ces procds sont actuellement utiliss pour la production industrielle dapatite (41). La mthode par double dcomposition
(17, 42-46)

consiste ajouter de faon

contrle une solution du sel de cation Me dans une solution du sel de lanion XO4. Le prcipit est ensuite lav et sch. Cette technique permet galement dobtenir des apatites mixtes (contenant deux cations diffrents) avec une matrise du rapport Me1/Me2. Les cations sont introduits simultanment dans le racteur avec le rapport Me1/Me2 dsir, cela permet dviter une sgrgation lors de la prcipitation. Les principaux inconvnients de cette mthode viennent de sa mise en uvre qui ncessite beaucoup de matriel et de sa vitesse de synthse qui est plutt lente.

15

La mthode par neutralisation consiste neutraliser une solution de lait de

chaux en y ajoutant une solution dacide phosphorique. Cette raction permet dobtenir rapidement de grandes quantits dhydroxyapatite phosphocalcique avec peu de matriel (42, 47). Il est galement possible de synthtiser des fluorapatites.

IV.2. Ractions en phase solide

La synthse par raction solide - solide consiste chauffer un mlange ractionnel, constitu des divers sels des cations et des anions, dans un rapport Me/XO4 gal 1,67. Ce mlange doit tre parfaitement homogne pour permettre une raction totale. La synthse dune fluorapatite phosphocalcique peut tre effectue, par exemple, partir de phosphate tricalcique et de fluorure de calcium selon la raction suivante (48) : 3 Ca3(PO4)2 + CaF2 Cette raction s'effectue 900 C Ca10(PO4)6F2 pendant plusieurs heures.

Dans le cas dune raction solide/gaz, le gaz provient soit de la sublimation dun sel solide contenu dans le mlange ractionnel (la synthse peut alors seffectuer dans une enceinte ferme), soit par un apport extrieur sous forme dun balayage du gaz ractif par exemple.

IV.3. Ractions en sels fondus

Cette mthode permet de se rapprocher des conditions de synthse de certaines apatites naturelles. Des phosphates mtalliques structure apatitique ont ainsi t prpars. On a pu ainsi obtenir des cristaux qui sont le plus souvent mlangs lexcs de ractifs de dpart (49, 50).

IV.4. Ractions sol - gel

Le procd sol - gel est bas sur la polymrisation de prcurseurs organomtalliques de type alcoxydes M(OR)n. Aprs une hydrolyse contrle de cet alcoxyde en solution, la condensation des monomres conduit des ponts oxo puis un oxyde organique. La polymrisation progressive de ces prcurseurs forme des oligomres puis des polymres en augmentant ainsi la viscosit. Ces solutions polymriques conduisent des gels qui permettent une mise en forme aise des matriaux (films denses et transparents, poudres ultra - fines, cramiques, ...) avec de nombreuses applications technologiques (51-53).

16

IV.5. Raction liquide / solide : la voie des ciments

Les ciments phosphocalciques sont des ciments hydrauliques minraux qui font prise grce des ractions acido-basiques entre des phosphates de calcium caractre acide et des phosphates de calcium caractre basique pour donner une hydroxyapatite phosphocalcique en phase unique (54, 55) .

V. STRUCTURE CRISTALLINE DES PHOSPHATES DE CALCIUM DE SYNTHESE A USAGE BIOLOGIQUE V.1. Lhydroxyapatite
Les apatites phosphocalciques qui entrent dans la constitution des tissus calcifis peuvent tre dcrites partir de l'hydroxyapatite. L'hydroxyapatite stoechiomtrique a pour formule chimique : Ca10(PO4)6(OH)2 Elle cristallise dans le systme hexagonal selon le groupe d'espace P63/m (3). La dimension de la maille lmentaire de l'hydroxyapatite est : a = b = 9,432 c = 6,881 . La maille contient 10Ca2+, 6PO43- et 2OH-. Le rapport atomique Ca/P de l'hydroxyapatite phosphocalcique stchiomtrique est 1,67. Les dix Ca2+ sont dfinis par Ca (I) ou Ca (II) dpendant de leur environnement. Quatre ions calcium occupent la position de Ca (I) en deux couches situes aux niveaux 0 et 1/2 de la maille. Les six ions restants occupent la position de Ca (II) en deux couches : trois situs aux niveaux 1/4 et trois autres aux niveaux 3/4. Les six ions ttradriques PO43- se trouvent en deux couches o ils sont situs aux niveaux 1/4 et 3/4 de la maille. Les deux ions OH- se situent approximativement la mme hauteur que les plans contenant les atomes Ca (II) (1/4 et 3/4). Si nous considrons la structure paralllement l'axe c, les ions PO43- constituent des colonnes, lies les unes aux autres. En fait un atome de phosphore est li trois atomes d'oxygne d'une colonne et un
17

atome d'oxygne d'une colonne voisine. Les assemblages d'ions PO43- sont sous la forme de nid d'abeille qui constitue l'armature du rseau et fournit une grande stabilit la structure de l'apatite. Cet assemblage est parallle l'axe c et contient des tunnels ouverts.

V.1.a. Etude cristallographique

Le contenu de l'unit asymtrique, en tenant compte des multiplicits des diffrentes positions de Wyckoff occupes par les atomes, conduit un contenu de maille de dix cations calcium, six anions phosphores, deux cations hydrognes et vingt six anions oxygnes (oxydes). Ceci donne une stchiomtrie en accord avec la formulation Ca10(PO4)6(OH)2. Les anions phosphores occupent des sites de coordinence quatre, gnrs par l'arrangement de quatre anions oxygne premiers voisins (Figure I-5). La distance moyenne < dP-0> = 1,467 est infrieure la somme des rayons ioniques de ces deux lments RI (P-O) = 1,750 . Ceci est conforme aux distances attendues pour l'anion (PO4)3-.

Figure I-5 : Site ttradrique des anions phosphores (55). La maille lmentaire de l'hydroxyapatite est reprsente sur la figure I-6. La structure peut alors se dcrire comme un arrangement d'anions (PO4)3- stabilis par des cations Ca2+.

18

Figure I-6 : Maille lmentaire(55) de Ca10(PO4)6(OH)2. On remarquera la prsence des anions (OH-) localiss sur l'axe cristallographique c (Figure I-7).

Figure I-7 : Maille lmentaire(55) de Ca10(PO4)6(OH)2 projection sur le plan (010). Les tunnels jouent un rle trs important dans les proprits physico-chimiques des apatites. Du fait de l'existence des tunnels, les apatites peuvent se comporter soit comme des

19

changeurs d'ions, soit comme des composs dans lesquels diffrents ions peuvent se substituer. Ces substitutions induisent une lgre variation du diamtre moyen des tunnels et modifient ainsi les proprits des apatites. Les diffrentes apatites drivent de l'hydroxyapatite par la substitution totale ou partielle des cations et des anions par d'autres cations ou anions ou des lacunes. Toutefois, d'aprs la formule gnrale des apatites, les anions XO43- ne peuvent pas tre remplacs par des lacunes. Les diffrentes possibilits de substitutions sont rpertories ci-dessous : Tableau I-4 : Substitution possible dans la maille apatitique(55).

V.1.b. Substitution de Ca2+

Mg2+ et Na+ sont des ions trs abondants dans les tissus biologiques. L'incorporation de Mg2+ dans la structure apatitique est limite mais elle peut diminuer le paramtre a dans la maille ainsi que le taux de cristallinit. En raison des similitudes de taille atomique entre Ca2+ et Na+, l'incorporation de ce dernier ne change pas les paramtres cristallins. Par contre, la substitution par des carbonates diminue le paramtre a et augmente lgrement le paramtre c de l'apatite.

V.1.c. Substitution de PO43CO 32- conduit un minral dfini comme apatite de type B qui est la plus importante dans les apatites biologiques. Elle se produit lors de la prparation des apatites soit par prcipitation directe, soit par hydrolyse des autres phosphates de calcium en prsence de carbonate. Le taux d'incorporation de carbonate dpend directement de la prsence des autres cations. Par exemple, la prsence de Na+ augmente le taux de substitution, tandis que Sr2+ le

20

diminue. Cette substitution diminue la taille et la cristallinit du cristal et augmente donc sa solubilit.

V.1.d. Substitution de OHGnralement les anions qui se substituent aux ions OH- se disposent dans les tunnels de l'apatite. CO32- peut entrer dans les tunnels des apatites synthtiques prpares haute temprature (1000 C) ou dans certaines apatites biologiques. Il y a alors augmentation du paramtre a et diminution du paramtre c. La substitution des OH- par F- augmente la stabilit structurale et la cristallinit et diminue donc la solubilit des cristaux d'apatite. Elle peut galement diminuer le paramtre a sans changer le paramtre c. Lorsqu'un Cl- entre dans les tunnels, le paramtre a augmente et c diminue fortement.

V.2. Le phosphate tricalcique (TCP)

Le phosphate tricalcique (Ca3(PO4)2) est caractris par un rapport atomique Ca/P de 1,5 et existe sous quatre formes : la forme stable entre 1120 et 1470 C et mtastable temprature ambiante, la forme stable au-dessus de 1470 C, la forme stable en dessous de 1120 C, et la forme obtenue sous haute pression.

La forme ne peut pas tre directement synthtise par prcipitation en milieux aqueux. Elle est obtenue par chauffage de phosphate de calcium amorphe (ACP) entre 800 et 1000 C (56, 57). Le TCP cristallise
(58)

dans

le

systme

trigonal

(repre

hexagonal)

(groupe spatial R3c)

; a = b = 10,439 ; c = 37,375 .

21

La forme peut tre obtenue par dcomposition thermique de l'ACP une temprature suprieure 1200 C suivie d'une trempe. Il est galement possible de synthtiser du TCP par chauffage d'un mlange intime de solides comme CaHPO4 et CaCO3 1000 C pendant une heure. Celui-ci port au-dessus de 1200 C permet galement d'obtenir la forme . L' TCP cristallise dans le systme monoclinique

V.2.a. Etude cristallographique

Le contenu de l'unit asymtrique, en tenant compte des multiplicits des diffrentes positions de Wyckoff occupes par les atomes, conduit une stchiomtrie en accord avec la formulation Ca3(PO4)2. Les anions phosphores occupent des sites de coordinence quatre gnrs par l'arrangement de quatre anions oxygne premiers voisins. La distance moyenne < d P - 0> = 1,535 est conforme aux distances attendues pour l'anion (PO4)3-.

Figure I- 8 : Maille lmentaire (55)de Ca3(PO4)2.

22

Figure I- 9 : Maille lmentaire(55) de Ca3(PO4)2.

La prsence de TCP pur n'a pas t observe dans les tissus biologiques. Par contre, la structure du phosphate tricalcique est telle qu'il peut se produire des substitutions d'ions Ca2+ par d'autres ions bivalents tel que Mg2+ (59, 60). Ces substitutions stabilisent la structure cristalline du TCP et entranent une diminution des paramtres a et c de la maille lmentaire. La plupart des phosphates tricalciques rencontrs dans les milieux biologiques sont ceux substitus en magnsium, ils sont alors appels whitlockite (TCMP) et ont t observs dans de nombreuses calcifications pathologiques et dans les caries arrtes de la dentine.

23

CHAPITRE II

ETUDE DE LA SYNTHESE DE LHYDROXYAPATITE STCHIOMETRIQUE PAR VOIE AQUEUSE

Ce chapitre sera consacr la description dtaille de la synthse par voie aqueuse de lhydroxyapatite phosphocalcique partir du carbonate de calcium CaCO3 et lacide phosphorique H3PO4. C'est Patat en 1976
(61)

qui, en tudiant les architectures poreuses capables d'tre

colonises par le tissu osseux, dcouvrit les possibilits d'utilisation du corail naturel comme substitut de greffons osseux. Le corail est compos pour plus de 97 % de carbonate de calcium sous sa forme cristalline d'aragonite et d'une fraction rduite d'oligo-lments et d'acides amins. En collaboration avec Guillemin (62, 63), il effectua les premires tudes exprimentales sur ce biomatriau. Mais ces expriences, ont montr un certain rejet du corail par les patients ; ce matriau dorigine naturelle comporte des traces de vie, des protines, quil faut liminer, et une mauvaise purification peut entraner des ractions inflammatoires. Lquipe BIOMATERIAUX de lUniversit de Rennes 1, compose de physicochimistes et de biologistes a mis au point des matriaux synthtiques tel que le carbonate de calcium CaCO3 sous forme d'aragonite, pure ou dope
(64)

, comme remplacement du corail

naturel, pour des applications en chirurgie orthopdique ou maxillo-faciale. Lvaluation de la cytotoxicit de matriaux base daragonite synthtique CaCO3 pure ou dope au strontium na mis en vidence aucun potentiel cytotoxique pour ces matriaux (65). Cest pour ces proprits biologiques, sa disponibilit et son cot modr que nous avons utilis le carbonate de calcium CaCO3 commercial pour la synthse de lhydroxyapatite phosphocalcique stoechiomtrique de rapport molaire Ca/P = 1,67. Rappelons que plusieurs grandes voies de synthse sont utilises pour la prparation des apatites : la prcipitation en voie aqueuse, la raction solide - solide, la raction en sels fondus, le procd sol gel et la voie des ciments.(voir chapitre I) Les synthses en phase aqueuse se font selon deux procds diffrents : la mthode par neutralisation et la mthode par double dcomposition. Ces procds sont actuellement utiliss pour la production industrielle dapatite (41). La premire dite de neutralisation, consiste neutraliser une solution de lait de chaux en y ajoutant une solution dacide phosphorique.

25

La seconde dite de double dcomposition consiste ajouter de faon contrle une solution du sel de cation Me dans une solution du sel de lanion XO4.

I. METHODE DE SYNTHESE PAR NEUTRALISATION

Cette mthode de synthse a t mise en uvre par Wallayes
(48)

et amliore par

Trombe (42). Rcemment dautres auteurs sintressent ce type de raction partir de lacide phosphorique et lhydroxyde de calcium (47,66). En effet, Ca(OH)2 prsente des caractristiques convenables pour la mise au point dune telle synthse en particulier pour sa basicit. Son attaque par lacide conduit la libration des ions OH- en solution induisant ainsi la basicit ncessaire au milieu ractionnel.

I.1. Prsentation de la mthode de synthse par neutralisation de Ca(OH)2 par H3PO4

Cette mthode de synthse de lhydroxyapatite consiste neutraliser rapidement, en prsence de quelques gouttes de phenolphtaleine servant dindicateur de fin de raction une solution aqueuse de calcium par une solution aqueuse de phosphate. La solution aqueuse de calcium (0,1 M) est prpare partir de carbonate de calcium calcin au moufle 900 C et mis en suspension rapidement dans leau distille. La solution aqueuse de phosphate (0,06 M) est prpare par dilution de lacide phosphorique concentr dans de leau distille. La raction mise en jeu est la suivante :

10 Ca(OH)2

+ 6 H3PO4

Ca10(PO4)6(OH)2 + 18 H2O

La suspension ainsi obtenue est maintenue sous agitation puis porte la temprature dtude dsire. La neutralisation est acheve lorsque la coloration rose de lindicateur color reste stable pendant une demi-heure.

26

Cette synthse a t ralise deux tempratures diffrentes : la temprature ambiante (exprience A) et la temprature dbullition de la suspension (exprience B). Le prcipit obtenu est alors spar de la solution par filtration, lav leau chaude puis une partie est sche 80 C pendant une nuit, lautre partie est calcine 900 C pendant deux heures. La caractrisation par diffraction des rayons X, spectroscopie dabsorption infrarouge, analyse chimique et la mesure des surfaces spcifiques a t ralise sur les chantillons lavs, schs 80 C et galement sur les chantillons lavs, calcins 900 C.

I.2. Etude des produits de synthse I.2.a. Etude par diffraction des rayons X
Le diagramme des rayons X du produit prcipit la temprature ambiante et sch 80 C (A1) prsente des raies larges et diffuses correspondant une hydroxyapatite mal cristallise. Dautre part, le diagramme des rayons X du mme produit aprs calcination lair pendant deux heures (A2) montre des raies fines correspondantes deux phases que nous avons identifies lhydroxyapatite et au phosphate tricalcique (Figure II-1). Ltude par diffraction des rayons X (Figure II-2) du produit synthtis la temprature dbullition puis sch 80 C (B1) montre sur le diagramme la prsence de raies larges caractristiques de la structure apatitique. Par ailleurs, ltude par diffraction des rayons X du mme produit mais calcin 900 C lair pendant deux heures (B2) indique la prsence dune phase unique identifie lhydroxyapatite. En effet, les distances interrticulaires releves sur le diagramme sont comparables celles indiques dans le tableau II-1. Les valeurs des paramtres cristallographiques a et c calcules sont identiques celles donnes par la littrature.

a = 9,421

c = 6,880

La calcination de cet chantillon nindique la prsence daucune phase supplmentaire celle de lhydroxyapatite, telle que le phosphate tricalcique ou la chaux. Le test la phnolphtalene ralis immdiatement aprs calcination, ne montre aucune coloration ce qui justifie labsence de chaux.

27

A1

* * A2 *

+
25

+
30

+
35

+
40

+
45

+
50

+
55

+
60

Figure II-1 : Diagrammes de diffraction des rayons X. A1 : produit prcipit la temprature ambiante et sch 80 C A2 : produit prcipit la temprature ambiante, sch 80 C et calcin 900 C lair pendant deux heures

* : prsence de la phase de TCP

28

B1

B2

+
25

+
30

+
35

+
40

+
45

+
50

+
55

+
60

Figure II-2 : Diagrammes de diffraction des rayons X. B1 : produit prcipit la temprature dbullition et sch 80 C B2 : produit prcipit la temprature dbullition, sch 80 C et calcin 900 C lair pendant deux heures

29

Tableau II-1: Distances interreticulaires et intensits des raies de diffraction de lhydroxyapatite phosphocalcique (67). d () 8,168 5,263 4,716 4,084 3,890 3,512 3,440 3,171 3,087 2,817 2,779 2,723 2,631 2,532 2,298 2,265 2,231 2,152 2,063 1,945 1,892 1,873 1,841 1,808 1,782 1,756 1,720 1,645 1,611 I/I0 26 7 4 6 10 3 42 9 14 100 43 55 24 4 5 20 2 5 4 24 12 4 26 15 10 11 12 5 3 hkl 100 101 110 200 111 201 002 102 210 211 112 300 202 301 212 130 221 131 113 222 132 230 213 321 410 402 004 322 313 d () 1,543 1,532 1,506 1,502 1,475 1,467 1,454 1,451 1,434 1,429 1,407 1,349 1,311 1,315 1,308 1,285 1,280 1,257 1,251 1,245 1,237 1,235 1,222 1,158 1,148 1,146 1,114 1,109 1,105 I/I0 3 3 3 4 6 2 6 7 6 4 2 2 3 2 2 3 3 4 2 2 5 4 4 3 2 2 3 2 4 hkl 240 331 241 124 502 510 304 323 511 332 413 512 431 404 520 521 243 215 342 610 144 513 252 433 244 006 116 235 352

30

I.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge

Le spectre dabsorption du compos (A1) montre la prsence de toutes les bandes principales dune apatite faiblement hydroxyle, accompagnes de bandes trangres telles que celles vers 875 cm-1 associs aux ions hydrognophosphate (HPO42-). La bande large situe entre 1450 et 1500 cm-1de faible intensit est attribue aux ions carbonate adsorbs la surface (Figure II-3). Par ailleurs, la calcination lair 900 C pendant deux heures de ce mme chantillon (A2) rvle quil contient une quantit significative du phosphate tricalcique . Dautre part, le spectre associ au produit (B1) prpar la temprature dbullition lav et sch 80 C montre uniquement la prsence de toutes les bandes caractristiques dune hydroxyapatite phosphocalcique (Figure II-4). Le spectre du mme compos calcin lair pendant deux heures 900 C (B2) ne dcle aucune bande supplmentaire celles caractristiques dune hydroxyapatite phosphocalcique pure dont les positions et les attributions des diffrentes bandes sont regroupes dans le tableau II-2. Tableau II-2 : Position, intensit et attribution des bandes dabsorption infrarouge de lhydroxyapatite phosphocalcique. Position des bandes (cm-1) 474 571 - 601 630 962 1046 1087 1630 3560 3000 3400 F : bande de forte intensit, m : bande de moyenne intensit, Intensits des Attributions bandes f PO43- (2 : dformation symtrique) F ep m F f ep m PO43- (4 : dformation antisymtrique) OH- (L : bande de libration) PO43- (1 : longation symtrique) PO43- (3 : longation antisymtrique) H2O (dformation des molcules deau lies par des ponts H) OH- (s : longation symtrique) H2O (longation symtrique des molcules deau lies par des ponts H) f : bande de faible intensit, ep : paulement.

31

A1

A2

cm-1

+
4000

+
3500

+
3000

+
2500

+
2000

+
1500

+
1000

+
500

Figure II-3 : Spectres dabsorption infrarouge. A1 : produit prcipit la temprature ambiante et sch 80 C A2 : produit prcipit la temprature ambiante, sch 80 C et calcin 900 C lair pendant deux heures

32

B1

B2

cm-1

+
4000

+
3500

+
3000

+
2500

+
2000

+
1500

+
1000

+
500

Figure II-4 : Spectres dabsorption infrarouge. B1 : produit prcipit la temprature dbullition et sch 80 C B2 : produit prcipit la temprature dbullition, sch 80 C et calcin 900 C lair pendant deux heures.

33

I.2.c. Mesure de la surface spcifique

Lactivit catalytique des chantillons A1 et B1 a t mesure laide de la mthode B.E.T. sur uniquement les produits lavs et schs 80 C pendant une nuit.

S(A1) = 151,95 m2 g-1 S(B1) = 77,53 m2 g-1

Lanalyse de ces rsultats montre que les apatites obtenues ont des surfaces spcifiques leves.

I.2.d. Conclusion
Nous avons prpar par cette mthode une hydroxyapatite phosphocalcique stchiomtrique et stable 900 C. Gnralement ce type de prparation conduit une hydroxyapatite mlange de la chaux. En effet, la prparation de lhydroxyapatite stchiomtrique ncessite un contrle rigoureux des conditions exprimentales, exemple le pH, la temprature et les quantits de ractifs de base (dfaut ou excs en ractif existant dans le milieu). Llimination de la chaux peut tre faite par la calcination des produits 1000 C suivie dun lavage avec de leau chaude. Cette opration (calcination lavage) doit tre rpte plusieurs fois afin dliminer totalement la chaux.

I.3. Prsentation de la mthode de synthse par neutralisation de CaCO3 par H3PO4

Dans cette partie, nous adoptons, pour prparer une hydroxyapatite, la mthode de neutralisation en utilisant comme ractif le carbonate de calcium et lacide phosphorique. Cette mthode est similaire celle dcrite dans la partie prcdente, la seule diffrence que dans ce cas la neutralisation est ralise entre une solution aqueuse (0,1M) de carbonate de calcium CaCO3 sch 100 C pendant une nuit et une solution aqueuse (0,06 M) dacide phosphorique H3PO4.

34

Une fois laddition termine, la suspension est maintenue la temprature dtude dsire. La fin de la raction est marque par une coloration rose stable pendant une demiheure de la phnolphtalne. Nous avons ralis deux synthses de produits, lune temprature ambiante (C) et lautre la temprature dbullition de la solution (D). Les solides forms, ont t filtrs, lavs leau chaude, schs 80 C puis une partie est calcine 900 C pendant deux heures. La caractrisation par diffraction des rayons X et par spectroscopie infrarouge a t ralise sur les quatre chantillons.

I.4. Etude des produits de synthse I.4.a. Etude par diffraction des rayons X
Le diagramme de diffraction des rayons X du produit prcipit la temprature ambiante et sch 80 C pendant une nuit (C1) prsente des raies larges et diffuses correspondant celles dune structure apatitique et des raies fines qui sont identifies au carbonate de calcium CaCO3 (calcite) (Figure II-5). La calcination de ce mme produit 900 C lair pendant deux heures (C2) conduit galement la formation de deux phases qui sont dans ce cas lhydroxyapatite et de la chaux CaO. Le diagramme de diffraction des rayons X du produit prcipit la temprature dbullition et sch 80 C pendant une nuit (D1) prsente des raies mieux dfinies que dans le cas du produit (C1). On note galement la formation de deux phases qui ont t identifies lhydroxyapatite et la calcite CaCO3 (Figure II-6). La calcination de ce produit 900 C lair pendant deux heures (D2) rvle la prsence de deux phases qui sont lhydroxyapatite bien cristallis et de la chaux sous forme de CaO.

35

C1
O

C2

+
25

+
30

+
35

+
40

+
45

+
50

+
55

+
60 2

Figure II-5 : Diagrammes de diffraction des rayons X. C1 : produit prcipit la temprature ambiante et sch 80 C C2 : produit prcipit la temprature ambiante, sch 80 C et calcin 900 C lair pendant deux heures

* : prsence de CaCO3
O : prsence de CaO

36

D1

D2

+
25

+
30

+
35

+
40

+
45

+
50

+
55

+
60

Figure II-6 : Diagrammes de diffraction des rayons X. D1 : produit prcipit la temprature dbullition et sch 80 C D2 : produit prcipit la temprature dbullition, sch 80 C et calcin 900 C lair pendant deux heures

* : prsence de CaCO3
O : prsence de CaO

37

I.4.b. Etude par spectroscopie infrarouge

Ltude par spectroscopie infrarouge des solides lavs et schs 80 C (C1, D1) pendant une nuit et les solides lavs et schs puis calcins 900 C lair pendant deux heures (C2, D2) confirme ltude par diffraction des rayons X ralise sur ces mmes produits (Figure II-7, Figure II- 8). En effet, on note sur les spectres correspondants aux produits C1, D1 les bandes caractristiques des ions CO32- dans la calcite et des bandes caractristiques des ions PO43et HPO42-. Dans le cas de la caractrisation des produits (C2, D2) , les spectres dabsorption infrarouge montrent la prsence de toutes les bandes dabsorption correspondantes lhydroxyapatite et une phase supplmentaire dont la bande dabsorption est situe 3642 cm-1 attribue aux ions hydroxyles de la chaux.

I.4.c. Conclusion
La neutralisation de CaCO3 par H3PO4 aux deux tempratures dtudes savoir la temprature ambiante et lbullition conduit la formation dun mlange de lhydroxyapatite mal cristallise et la calcite CaCO3. La calcination de ces produits conduit galement la formation de deux phases qui ont t identifies dans ce cas celle de lhydroxyapatite bien cristallise et de la chaux.

38

C1

C2

cm-1

+
4000

+
3500

+
3000

+
2500

+
2000

+
1500

+
1000

+
500

Figure II-7 : Spectres dabsorption infrarouge. C1 : produit prcipit la temprature ambiante et sch 80 C C2 : produit prcipit la temprature ambiante, sch 80 C et calcin 900 C lair pendant deux heures

39

D1

D2

cm-1

+
4000

+
3500

+
3000

+
2500

+
2000

+
1500

+
1000

+
500

Figure II-8 : Spectres dabsorption infrarouge. D1 : produit prcipit la temprature dbullition et sch 80 C D2 : produit prcipit la temprature dbullition, sch 80 C et calcin

I.4. c. Conclusion pendant deux heures 900 C lair

40

II. METHODE DE SYNTHESE PAR DOUBLE DECOMPOSITION II.1. Prsentation de la mthode de synthse par double

dcomposition partir de Ca(NO3)2 et (NH4)2HPO4

Cette mthode de synthse permet de prparer lhydroxyapatite stoechiomtrique en effectuant une prcipitation lente en milieu basique, entre une solution de nitrate de calcium et une solution dhydrognophosphate dammonium. La composition des solutions est choisie partir des coefficients stoechiomtriques correspondant lquilibre de lquation de la raction : (rapport atomique Ca/P = 10/6). 10Ca(NO3)2 + 6(NH4)2HPO4 + 8NH4OH Ca10(PO4)6(OH)2+20NH4NO3 + 6H2O

solution A : 26,4 g de diammonium hydrogno-phosphate (NH4)2HPO4 dissout dans 130 ml deau dsionise dcarbonate (1,5 M). solution B : 78,7 g de nitrate de calcium Ca(NO3)2, 4H2O dissout dans 300 ml deau dsionise (1 M)

La solution A du phosphate additionne 150 ml dammoniaque est verse au moyen dune pompe pristaltique dans la solution B de nitrate de calcium porte lbullition et agite avec une vitesse constante de 400 tr/min. La prsence dammoniaque en excs est ncessaire pour avoir un milieu basique proche de 9. Une fois laddition termine, la prparation est maintenue lbullition et sous agitation environ une heure. Le prcipit est ensuite filtr chaud sur bchner, lav avec une solution dun litre deau dsionise contenant 100 ml dammoniaque, sch 80 C pendant une nuit puis calcin 900 C lair pendant deux heures.

II.2. Etude du produit de synthse II.2.a. Etude par diffraction des rayons X
Ltude du diagramme de diffraction des rayons X du produit prpar (Figure II-9) montre la prsence de toutes les raies de diffraction de la phase apatitique bien cristallise. En effet, les distances interreticulaires et les intensits des raies de diffraction observes sont

41

identiques aux valeurs des donnes cristallographiques de lhydroxyapatite phosphocalcique (fiche A.S.T.M.) regroupes dans le tableau II-1.

Figure II-9 : Diagramme de diffraction des rayons X du produit prpar.

II.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge

Les positions et les intensits des bandes dabsorption releves du spectre dabsorption infrarouge du phosphate de calcium que nous avons prpar correspondent celles qui sont rapportes par diffrents auteurs pour lhydroxyapatite que nous avons regroupes dans le tableau II-2. En effet, on retrouve sur le spectre donn par la figure II-10, les bandes propres lion OH- situes 3560 cm-1 et 633 cm-1 et les bandes attribuables aux groupements PO43situes 1090-1047 cm-1, 962 cm-1 ,602 cm-1 et 572 cm-1.

II.2.c. Conclusion
La mthode de double dcomposition permet de prparer lhydroxyapatite phosphocalcique pure et stoechiomtrique. Afin dobtenir un meilleur tat de cristallisation, il est ncessaire de soumettre lapatite une calcination lair 900 C pendant deux heures. Ce produit est donc prpar pour tre utilis comme produit de rfrence.

42

Figure II-10 : Spectre dabsorption infrarouge du produit prpar.

II.3.

Prsentation

de

la

mthode

de

synthse

par

double

dcomposition partir de CaCO3 et H3PO4

Afin de valoriser les produits locaux, tels que le carbonate de calcium (calcite) qui possde des proprits biologiques dans le domaine des biomatriaux et lacide phosphorique (H3PO4) qui est le driv de la premire ressource naturelle de Maroc (les phosphates), nous avons opt pour leur utilisation comme ractifs pour la prparation de lhydroxyapatite et du phosphate tricalcique apatitique. Dans ce cas, la synthse se fait en deux tapes : La premire consiste la prparation de deux solutions (A et B) qui seront utilises comme des ractifs. la solution A de phosphate est obtenue par la dilution de 13,7 ml dacide ortho phosphorique pur de densit d = 1,68 et de pourcentage p = 85 % dans 130 ml deau distille et dcarbonate.

43

La solution B de calcium est obtenue partir de lattaque de 33,33g de carbonate de calcium CaCO3 poudre par 46,16 ml dacide nitrique HNO3 pur de densit d = 1,4 et de pourcentage p = 65% selon la raction suivante :

CaCO3 +

(2HNO3)aq

( Ca(NO3)2)aq

CO2

H2O

Aprs agitation et refroidissement , la solution est complte avec 330 ml deau distille et dcarbonate. La seconde tape consiste placer la solution de calcium dans un racteur de 2 litres (Figure II-11). Elle est porte bullition et ajuste pH 7 avec de lammoniaque. A laide dune pompe pristaltique la solution de phosphate ajuste pH 10 est verse goutte goutte sur la solution de calcium pendant une heure et demie. La raction mise en vidence est la suivante :
10 Ca(NO3)2aq + 6 (NH4)2HPO4aq + 8 NH4OH Ca10(PO4)6(OH)2 + 20 NH4NO3 + 6H2O

Le milieu ractionnel est maintenu pH constant une valeur de 8 par lajout dammoniaque au moyen dune pompe doseuse commande par un pH-stat reli une lectrode combine de mesure du pH, plonge dans le milieu ractionnel et pralablement talonne la temprature de la synthse.

II.4. Etude du produit de synthse II.4.a. Etude par diffraction des rayons X
Le diagramme de diffraction des rayons X du produit lav et calcin 900 C (Figure II-12), rvle la prsence de toutes les raies de diffraction caractristiques dune phase apatitique bien cristallise. On note galement labsence de raies trangres telles que celles de la chaux ou du phosphate tricalcique . Ceci confirme que lapatite prcipite lave est une hydroxyapatite stoechiomtrique. Lanalyse des rsultats ports dans le tableau II-3 montre que les paramtres cristallographiques de lapatite calcine, sont identiques ceux dune hydroxyapatite stoechiomtrique.

44

M
Solution de phosphate

R pH
Solution de calcium

NH4OH

Filtrat

R : racteur, M : mlangeur, P : pompe, pH : rgulateur de pH, F : systme de filtration, Se : dessiccateur, Br : broyeur.

Se

Br HAP

Figure II-11 : Procd de synthse de lhydroxyapatite.

45

Figure II-12 : Diagramme de diffraction des rayons X du produit prcipit et calcin lair pendant deux heures 900 C.

Tableau II-3 : Paramtres cristallographiques de lapatite obtenue lave et calcine 900 C. Apatites HAP prsent travail HAP Nadir (29) HAP Trombe (42) a () 9,422 9,421 9,421 b () 6,881 6,883 6,882

II.4.b. Etude par spectroscopie infrarouge

Le spectre dabsorption infrarouge du produit lav et calcin (Figure II-13) est identique celui dune hydroxyapatite stchiomtrique. La finesse des bandes atteste lexcellent tat de cristallisation du solide.

46

Quant au produit non lav et sch 80 C, il contient en plus de la phase apatitique des bandes caractristiques des ions ammoniums, des ions nitrates et des ions HPO42- qui disparaissent par lavage.

Figure II-13 : Spectre dabsorption infrarouge du produit prcipit et calcin lair pendant deux heures 900 C.

II.4.c. Mesure de la surface spcifique

La surface spcifique ralise sur des poudres rend compte en particulier de ltat de cristallinit de lchantillon tudi. En effet, plus la surface est faible plus ltat de cristallinit est important. La surface spcifique du solide calcin est de 16,2 0,4 m2 g-1, valeur nettement infrieure celle des apatites prpares selon la mthode dArends et al (44), qui est de lordre de 37 m2 g-1.

II.4.d. Microscopie lectronique balayage

Lexamen par microscopie lectronique balayage du prcipit obtenu montre qu faible grossissement (x 1900), il est constitu de sphrodes homognes en tailles et de diamtre voisin de 40 m (Figure II-14). A plus fort agrandissement (x 6500), ces sphrodes se rvlent tre de formation dendritique constitue dun agglomrat daiguilles orientes vers le centre du grain (Figure II-14).

47

Figure II-14 : Micrographies MEB du produit prcipit et calcin lair pendant deux heures 900 C.

48

II.4.e.Conclusion
Nous avons pu montrer par cette tude, quil est difficile dobtenir une hydroxyapatite phosphocalcique pure et stoechiomtrique par la neutralisation du carbonate de calcium en suspension par lacide phosphorique. En revanche, par lattaque du carbonate de calcium par lacide nitrique, le calcium se trouve sous forme ionique Ca2+ en solution et rentre en raction avec les ions phosphate PO43pour former en milieu ammoniacal une hydroxyapatite phosphocalcique pure et stoechiomtrique (68). Les conditions optimales qui permettent de prparer une hydroxyapatite

stoechiomtrique sont dtermines lors de ltude de loptimisation de la synthse de ce produit dans le chapitre V.

49

CHAPITRE III

ETUDE DE LA SYNTHESE DU PHOSPHATE TRICALCIQUE APATITIQUE PAR VOIE AQUEUSE

Les caractristiques physicochimiques des phosphates de calcium sont responsables de leur bio activit. L'hydroxyapatite est chimiquement le phosphate de calcium qui se rapproche le plus de la phase cristalline de l'os. Nanmoins, en raison de son rapport molaire Ca/P de 1,67, lapatite est trs peu soluble dans les milieux biologiques et de ce fait son taux de dgradation est trs bas in vivo
(69-71)

. En revanche, le TCP au rapport Ca/P de 1,5 est

beaucoup plus soluble et sa dgradation est plus importante. Le TCP est gnralement employ lors de la ralisation de cramiques qui constituent lheure actuelle un substitut osseux de choix (72). Ces cramiques sont bioactifs et permettent des interactions entre les cellules du milieu et les liquides biologiques gage d'une intgration de qualit. De mme leur biocompatibilit est bien connue. Ils ne donnent lieu aucune raction immunologique ou toxique pour les tissus ni aucune raction corps tranger. Ils ne sont nanmoins pas osto inducteurs car il n'y a pas de vritable formation osseuse lorsqu'ils sont implants dans un site non osseux musculaire en particulier o ils sont alors le sige d'une simple encapsulation. En revanche, ils sont ostoconducteurs c'est--dire qu'ils induisent une ostorgnration leur contact aussi bien la priphrie qu' l'intrieur du biomatriau au sein des macropores de faon centrifuge. Le TCP est un phosphate tricalcique anhydre. Il est obtenu par calcination 900 C du phosphate tricalcique apatitique ou du phosphate tricalcique amorphe sont prpars par diffrentes voies : - En milieu aqueux, par hydrolyse de la brushite (DCPD) dcomposition (48, 57), - En milieu hydroalcoolique par double dcomposition (75), - Par voie sol-gel (76). Dans ce chapitre, nous nous sommes proposs de prparer galement le phosphate tricalcique apatitique partir de ractifs disponibles cot modr tel que le carbonate de calcium CaCO3 comme source de calcium et lacide phosphorique H3PO4 comme source de phosphate en utilisant la mthode tablie par J.C.HEUGHEBAERT.
(74) (56, 73)

. Ces derniers

ou par double

51

I. METHODE DE SYNTHESE DU PHOSPHATE TRICALCIQUE A PARTIR DE Ca(NO3)2 ET (NH4)2HPO4 I.1. Prsentation de la mthode de synthse
Le phosphate tricalcique apatitique a t labor par prcipitation par double dcomposition rapide partir dune solution A de nitrate de calcium et une solution B ammoniacale des ions orthophosphates .Signalons que le rapport Ca/P en solution est fix dans ce cas 1,5. solution A : 46,73 g de nitrate de calcium Ca(NO3)2, 4H2O sont dissout dans 550 ml deau distille dcarbonate (0,36 M) additionne de 40 ml dammoniaque pur (d = 0,92). - solution B : 25,74 g de diammonium dihydrognophosphate (NH4)2HPO4 sont dissout dans 1300 ml deau distille et dcarbonate (0,15 M). A cette solution sont ajouts 40 ml dammoniaque pur (d = 0,92). La prcipitation seffectue la temprature de 37 0,1 C en versant rapidement, tout en agitant, la solution A dans un racteur de deux litres contenant la solution B. Le prcipit est spar des eaux mres par filtration sur buchner, lav plusieurs fois avec de leau distille additionne dammoniaque. Il est ensuite sch 80 C pendant une nuit. Le produit non sch, obtenu dans ces conditions est amorphe et peut tre dcrit par la formule suivante :

Ca9 (PO4)6 ; nH2O.

Cest une phase de transition lors de prcipitation dapatites dficientes. Le phosphate tricalcique amorphe se caractrise par diffraction des rayons X par un large halo correspondant un produit amorphe. Le phosphate tricalcique apatitique est la forme cristallise basse temprature de phosphate tricalcique amorphe. Il prsente une formule chimique diffrente puisque lors de la cristallisation, il se produit simultanment lhydrolyse

52

interne dun groupement PO43formule suivante :

(73)

. Il se forme alors un compos de structure apatitique de

Ca9 (HPO4) (PO4)5(OH) I.2. Etude du produit de synthse

Le produit prcipit selon cette mthode, aprs une heure de maturation est caractris par diffraction des rayons X et spectroscopie dabsorption infrarouge.

I.2.a. Etude par diffraction des rayons X

Le diagramme de diffraction des rayons X (Figure III-1) du solide prcipit aprs une heure dagitation, lav et sch 80 C, montre la formation dun produit de structure apatitique. En effet, on relve la prsence des raies principales de cette phase telle que la raie 002 211 112 300 202 que nous avons pu indexer partir de la fiche ASTM de lhydroxyapatite reprsente par le tableau II-1 (chapitre II). On remarque galement que lapatite ainsi prpare est mal cristallise. 211 112 002 300

202

+
25

+
30

+
35

Figure III-1 : Diagramme de diffraction des rayons X du phosphate tricalcique apatitique.

53

I.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge

Les positions et les intensits des bandes dabsorption releves partir du spectre dabsorption infrarouge (Figure III-2) du solide prcipit aprs une heure, lav et sch 80 C sont regroupes dans le tableau III-1 ci dessous.

+
4000

+
3500

+
3000

+
2500

+
2000

+
1500

+
1000 cm-1

+
500

Figure III-2 : Spectre dabsorption infrarouge du phosphate tricalcique apatitique.

On note daprs ce tableau la prsence de toutes les bandes dabsorption de lhydroxyapatite phosphocalcique, par contre, on observe une diminution de lintensit de quelques bandes telle que celle relative aux ions OH- situes vers 3560 et 630 cm-1 et lapparition de bandes dabsorption situes 1180 1200 et 875 cm-1 attribus aux ions HPO42-.

54

Tableau III-1 : Positions, intensits et attributions des bandes dabsorption infrarouge du phosphate tricalcique apatitique (57). Position des bandes (cm-1) Intensits des bandes f ep F ep F m F ep f m ep Attribution PO43- (2 : dformation symtrique) HPO42- (dformation HO-PO3 ) PO43- (4 : dformation antisymtrique) OH- (L : bande de libration) HPO42- (longation P-OH) PO43- (1 : longation symtrique) PO43- (3 : longation antisymtrique) HPO42- (dformation dans le plan des groupements OH-) H2O (dformation des molcules deau lies par des ponts H) H2O (longation symtrique des molcules deau lies par des ponts H) OH- (s : longation symtrique)

474 530 571 - 601 630 875 962 1046 1087 1180 1200 1630 3000 3400 3560

II. METHODE DE SYNTHESE DU PHOSPHATE TRICALCIQUE A PARTIR DE CaCO3 ET H3PO4 II.1. Prsentation de la mthode de synthse
Notre mthode de synthse du phosphate tricalcique apatitique dcoule directement de celle dcrite par HEUGHEBEART que nous avons prsente dans le paragraphe prcdant. Elle consiste, dune part, prparer la solution A de calcium et la solution B de phosphate qui seront utilises ensuite comme ractifs de synthse.

55

la solution A est prpare partir de lattaque de 66 g de carbonate de calcium CaCO3 par 91,4 ml dacide nitrique HNO3 (d = 1,4 et p = 65%) selon la raction suivante : CaCO3 + 2 HNO3 Ca (NO3)2 +H2O + CO2

Aprs dissolution totale du solide et refroidissement de la solution, on la complte 550 ml avec de leau distille et dcarbonate ensuite on ajoute 40 ml dammoniaque pur (d = 0,92). la solution B est obtenue par neutralisation de 30 ml dacide ortho phosphorique H3PO4 (d = 1,68 et p = 85%) par lammoniaque pur (d = 0,92) selon la raction suivante : H3PO4+2 NH4OH (NH4)2HPO4+ 2 H2O

Aprs refroidissement de la solution, on la complte 1300 ml avec de leau distille et dcarbonate. Dautre part, on procde la prcipitation du solide en introduisant rapidement la solution B dans un racteur de capacit 2 litres contenant dj la solution A la temprature de 60 C. Le pH du milieu ractionnel est maintenu constant une valeur de 7, par lajout dammoniaque pur (d = 0,92) au moyen dune pompe doseuse commande par un pH-stat reli une lectrode de mesure du pH. Aprs 4 heures dagitation la temprature de synthse, le produit form est filtr sur Buchner , lav, sch 80 C et calcin 900 C lair pendant une heure.

II.2. Etude du produit de synthse II.2.a. Etude par diffraction des rayons X
Le diagramme de diffraction des rayons X du produit prcipit, lav et sch 80 C pendant une nuit (A1), nous confirme lidentit dune phase de structure apatitique mal cristallise (Figure III-3).

56

Aprs calcination 900 C pendant une heure du produit lav et sch 80 C (A2), ltude par diffraction des rayons X (Figure III-3) montre le changement de structure. En effet, le phosphate tricalcique apatitique se transforme cette temprature en ortho phosphate tricalcique anhydre de formule :

Ca9 (PO4)6

A2

A1

Figure III-3 : Diagrammes de diffraction des rayons X. A1 : solide lav et sch 80 C pendant une nuit A2 : solide lav, sch 80 C et calcin 900 C pendant une heure

57

II.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge

Le spectre dabsorption infrarouge du prcipit lav et sch 80 C pendant une nuit (A1) rvle les mmes positions, intensits et attributions des diffrentes bandes que celles regroupes dans le tableau III-1. En effet, on observe, en plus des bandes relatives aux ions PO43- , les bandes des ions HPO42- 875 cm-1 et de faibles bandes des ions OH- 3560 cm-1 et 630 cm-1 (Figure III-4). Sur le spectre dabsorption infrarouge du prcipit lav et sch 80 C puis calcin 900 c pendant une heure (A2), on vrifie labsence de bandes caractristiques du pyrophosphate P2O72- dans le domaine 1200 1100 cm-1 ni les bandes relatives aux ions OHde lhydroxyapatite qui apparaissent aux environs de 3560 cm-1 et 630 cm-1 (Figure III-4). A2

A1

cm-1 +
4000

+
2500

+
2000

+
1500

+
1000

+
500

3500 3000

Figure III-4 : Spectres dabsorption infrarouge. A1 : solide lav et sch 80 C pendant une nuit A2 : solide lav, sch 80 C et calcin 900 C pendant une heure

58

II.2.c. Mesure de surface spcifique

La mesure de la surface spcifique a t effectue sur le prcipit lav et sch 80 C pendant une nuit. Le phosphate tricalcique apatitique prpar dans ces conditions exprimentales a une surface spcifique de lordre de 62 m2/g qui est suprieure celle de lhydroxyapatite.

II.2.d. Microscopie lectronique balayage

Les photos prises par microscopie lectronique balayage du produit prcipit lav et sch 80 C pendant une nuit deux grossissements diffrents (x 5000) et (x 10 000) sont reportes sur la figure III-5.

II.2.e. Conclusion
La mthode que nous avons prsente, en changeant les ractifs, en augmentant la temprature et le temps de maturation au cours de la raction nous a conduit lobtention dun phosphate tricalcique apatitique pur de rapport molaire Ca/P =1,5. Cette mthode parait intressante compare celle de HEUGHEBEART qui posa plusieurs difficults quant la reproductibilit de cette synthse pour prparer un phosphate tricalcique apatitique de rapport molaire Ca/p gale 1,5
(77)

. Il a t montr, dans la plupart des cas, quaprs calcination

900 C du produit prpar par cette mthode, la prsence de trace du pyrophosphate de calcium. Cette difficult est lie au manque de matrise des paramtres exprimentaux au cours de la synthse. La dtermination des conditions optimales de la synthse de ce phosphate fera lobjet du chapitre VI.

59

Figure II-5 : Micrographies en microscopie lectronique balayage du produit prcipit et sch 80 C pendant une nuit. x 5 000 x 10 000

60

CHAPITRE IV
ETUDE DE LA SYNTHESE DUN PHOSPHATE DE CALCIUM APATITIQUE CARBONATE PAR VOIE HYDROTHERMALE

La synthse industrielle de phosphate de calcium apatitique se fait gnralement par voie humide selon la mthode de double dcomposition prsente auparavant, qui permet de prparer des quantits suffisantes de ces produits. Cependant, le procd hydrothermal est le plus utilis aprs cette mthode de double dcomposition (78). Ce traitement hydrothermal consiste dans la plupart des cas traiter sous vapeur deau dans une enceinte ferme un mlange de ractifs selon le rapport molaire Ca/P dsir, une temprature comprise entre 100 C et 500 C et sous une pression de vapeur deau de 0,5 17 MPa (79,80). Ce traitement seffectue de deux mthodes diffrentes : * Dans la premire, le mlange des ractifs est totalement immerg dans le milieu aqueux de faon ce quil soit en contact avec leau ltat liquide. Ce premier procd conduit la prparation dapatite par un traitement hydrothermal, dans un autoclave, temprature comprise entre 160 C et 200 C dun mlange en solution de CaCO3 et de CaHPO4, 2H2O en milieu aqueux basique (pH = 10) (81-83) . * Dans la seconde mthode, le mlange des ractifs est dispos au dessus du milieu liquide de sorte quil ne soit en contact quavec la vapeur deau produite sous leffet de la temprature. Ce second procd de synthse a t utilis pour la prparation dhydroxyapatite partir dalgue marine caractrise par son taux lev de carbonate de calcium CaCO3 voisin de 80% en prsence dhydrognophosphate dammonium (NH4)2HPO4 (84). Toutefois, les caractristiques physico-chimiques des phosphates de calcium dpendent de leur rapport molaire Ca/P qui est son tour directement li aux conditions opratoires choisies au cours de la synthse. Ce chapitre sera consacr ltude dune nouvelle mthode de synthse par voie hydrothermale de phosphate de calcium apatitique dficient en ions calcium. Par consquent, nous allons dans cette tude suivre le comportement, sous atmosphre humide et des tempratures infrieures 100 C, de plusieurs mlanges de poudre dun sel de calcium et dun sel de phosphate, homogniss par broyage manuel afin dvaluer linfluence de certains paramtres de synthse sur le produit final tels que :

62

Le rapport atomique Ca/P initial du mlange, le temps de sjour du mlange, la temprature du traitement du mlange.

I. CONDITIONS EXPERIMENTALES
Cette synthse consiste prparer un phosphate de calcium de structure apatitique dficiente en ion calcium, partir dun mlange de sel de calcium : CaCO3 et de sel de phosphate : (NH4)2HPO4, que lon soumet de la vapeur deau pour une dure et une temprature bien dtermines. Nous dcrirons dans cette partie le dispositif exprimental utilis pour le traitement sous atmosphre humide des chantillons, ainsi que le protocole exprimental suivi afin dobtenir un phosphate de calcium apatitique dficient.

I.1. Description du dispositif exprimental

Ce dispositif se compose (Figure IV-1) : Dun racteur sous forme dune enceinte cylindrique en inox, de diamtre gal 20 cm et de hauteur gale 13 cm possdant un couvercle qui facilite lintroduction des mlanges de poudre pralablement prpars et la quantit deau ncessaire la raction qui est de lordre de 750 ml . Dune grille mtallique de mme diamtre que le racteur, fixe mi-hauteur de lenceinte afin dviter tout contact de leau liquide avec le mlange de poudre. Les orifices de la grille permettent le passage de la vapeur deau de la partie infrieure la grille vers la partie suprieure o sont placs les constituants traiter. Une tuve thermostate la temprature de traitement, dans laquelle le racteur est plac pour la dure dtude dsire.

63

Racteur

tuve Echantillon

Eau

Figure IV-1 : Schma du dispositif exprimental.

I.2. Protocole exprimental

Le procd de synthse du phosphate de calcium apatitique sous atmosphre humide comprend les tapes suivantes :
-

La prparation des mlanges de poudre de rapport atomique (Ca/P)initial bien dtermin partir du carbonate de calcium et de lhydrognophosphate dammonium.

Lhomognisation par broyage au mortier dagate des diffrents constituants pess avec prcision.

Ltalement de la poudre ainsi obtenue, en couche mince sur un verre de montre de diamtre 8 cm.

Lemplacement de lchantillon prpar dans ces conditions, dans un racteur contenant de leau (Figure IV-1) pendant des dures allant de quelques heures quelques jours.

Le retrait du solide du racteur, puis le schage pendant 1 heure la temprature de ltude afin darrter la raction entre les ractifs.

64

Le lavage du produit sur verre fritt deux fois leau distille et trois fois avec une solution deau-thanol (50/50 en volume), puis le schage de lchantillon ltuve pendant 4 heures la temprature de ltude.

La caractrisation de lchantillon par diffraction des rayons X, spectroscopie dabsorption IR.

II. ETUDE DE LINFLUENCE DES PARAMETRES DE SYNTHESE SUR LA STOECHIOMETRIE DU PHOSPHATE DE CALCIUM II.1.Influence du rapport atomique (Ca/P) initial
En gnral, les phosphates de calcium possdent des proprits physico-chimiques selon leur rapport atomique Ca/P, do la ncessit de bien matriser la stoechiomtrie du compos final lors de la synthse. Pour cela, nous nous sommes intresss au comportement des mlanges initiaux sous atmosphre humide afin de mettre en vidence linfluence des paramtres de synthse sur la composition chimique, et donc sur le rapport atomique (Ca/P) des poudres synthtises. Dans cette tude, nous nous sommes intresss une srie de trois mlanges de carbonate de calcium CaCO3 et dhydrognophosphate dammonium (NH4)2HPO4 selon un rapport atomique Ca/P gal 1,5 ; 1,6 et 1,67. Les masses de CaCO3 et celles de (NH4)2HPO4 correspondant aux trois mlanges sont reportes dans le tableau IV-1. Ces mlanges homogniss par broyage, ont t placs en atmosphre humide 80 C. Tableau IV-1 : masses de CaCO3 et de (NH4)2HPO4 correspondant aux trois mlanges. Masse de CaCO3 (en g) 1,667 1,667 1,667 Masse de (NH4)2HPO4 (en g) 1,4676 1,3759 1,3118

Ca/P

initial

1,50 1,60 1,67

65

Aprs un temps de sjour du racteur dans ltuve fix 24 heures, les chantillons ont t retirs de lenceinte, schs la temprature dtude pendant une heure, puis lavs sur verre fritt deux fois leau distille et trois fois avec une solution deau thanol (50/50 en volume) et schs ltuve pendant 4 heures. Les chantillons traits dans ces conditions, ont t tudis par spectroscopie dabsorption infrarouge et diffraction des rayons X.

II.1.a. Etude par diffraction des rayons X

Les diagrammes de diffraction des rayons X, des chantillons prpars partir de mlanges de diffrents rapports Ca/P, puis traits dans les conditions dcrites prcdemment sont reports sur la figure IV-2. Lanalyse de ces diagrammes montre que les produits obtenus aprs raction ont tous une structure apatitique isomorphe lhydroxyapatite. Cependant, ltat de cristallisation du solide final est diffrent dun cas lautre. On obtient un meilleur tat de cristallisation pour le produit synthtis partir dun mlange de rapport Ca/P initial gal 1,60. Lorsque le rapport Ca/P du mlange initial est gal 1,5 ou 1,6, le produit final est une hydroxyapatite pure et aucune phase trangre na t dcele. Par contre, le traitement dun mlange de rapport Ca/P initial gal 1,67 conduit la formation dun mlange dhydroxyapatite et de carbonate de calcium.

II.1.b. Etude par spectroscopie infrarouge

Les spectres dabsorption infrarouge des chantillons correspondant aux diffrents rapports atomiques Ca/P du mlange initial reports sur la figure IV-3 rvlent dans les trois cas, la prsence de la bande 875 cm-1 caractristique des groupements HPO42- dans une apatite dficiente en ion calcium. Lintensit de cette bande augmente lorsque le rapport Ca/P du mlange initial augmente. Paralllement, on observe une augmentation de lintensit de la bande situe entre 1400 cm-1 et 1350 cm-1 caractristique des ions CO32- dans le mme sens que la variation du rapport atomique Ca/P du mlange initial.

66

Ca/P = 1,67

Ca/P = 1,60

Ca/P = 1,50

Figure IV-2 : Diagrammes de diffraction des rayons X des chantillons prpars partir de mlanges de diffrents rapports Ca/P.
67

Ca/P = 1,67

Ca/P = 1,60

Ca/P = 1,50

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

cm-1

Figure IV-3 : Spectres dabsorption infrarouge des chantillons prpars partir de mlanges de diffrents rapports Ca/P.

68

Lensemble de ces observations montre que les phosphates de calcium synthtiss dans ces conditions sloignent de la stchiomtrie quand on augmente le rapport Ca/P des mlanges initiaux.

II.2.Influence du temps de sjour

Pour tudier linfluence du temps de sjour sur le produit final , nous avons choisi de placer 80 C sous atmosphre humide un mlange de rapport initial Ca/P de 1,6 pendant des temps de sjours fixs 24 h ; 48h et 72h. Aprs un temps de sjour fix au pralable, les chantillons ont t retirs de lenceinte, schs la temprature dtude pendant une heure, puis lavs et remis de nouveau ltuve durant 4 heures. Les trois chantillons traits dans ces conditions ont t caractriss par spectroscopie dabsorption infrarouge et diffraction des rayons X.

II.2.a. Etude par diffraction des rayons X

Les diagrammes de diffraction des rayons X des chantillons rcuprs aprs un temps de sjour de 24h ; 48h et 72h sont reprsents sur la figure IV-4. On remarque quune phase apatitique pure sest forme ds 24 h et que son tat de cristallisation samliore lorsque la dure de traitement augmente.

II.2.b. Etude par spectroscopie infrarouge

La figure IV-5 reprsente les spectres dabsorption infrarouge des trois chantillons de rapport Ca/P initial gal 1,6 traits 80 C sous atmosphre humide pendant des dures de 24h, 48h et 72h. On remarque sur cette figure une lgre diminution des bandes relatives aux ions CO32- accompagne dune augmentation de lintensit des deux bandes relatives aux OHqui sont situes 3650 cm-1 et 630 cm-1.

69

72h

48h

24h

Figure IV-4 : Diagrammes de diffraction des rayons X des chantillons prpars diffrentes dures de traitement.

70

72h

48h

24h

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

cm-1

Figure IV-5 : Spectres dabsorption infrarouge des chantillons prpars diffrentes dures de traitement.
71

II.3.Influence de la temprature de traitement

Pour tudier linfluence de la temprature de traitement sur un mlange de poudre initial, nous avons suivi le comportement dun mlange de poudre de rapport Ca/P initial gal 1,60. Cet chantillon a t plac sous atmosphre humide pendant un temps de sjour de 24h des tempratures de traitement correspondant 40 C, 60 C et 80 C. Aprs traitement, le solide obtenu est retir de lenceinte, sch la temprature dtude pendant une heure, puis lav et remis ltuve durant 4 heures. Ces chantillons ainsi traits ont t caractriss par spectroscopie dabsorption infrarouge et par diffraction des rayons X.

II.3.a. Etude par diffraction des rayons X

Les rsultats de ltude par diffraction des rayons X (Figure IV-6) des chantillons obtenus par traitement sous atmosphre humide dun mlange de poudre de rapport Ca/P initial gal 1,60 pendant 24h des tempratures de 40 C, 60 C et 80 C montrent que la phase apatitique apparat ds 40 C et quaucune phase trangre lhydroxyapatite na t identifie. Cependant, on a observ sur ces diagrammes, que les raies de diffraction ont une meilleure rsolution lorsque la temprature de traitement augmente. Ceci confirme que la temprature de traitement favorise le rapprochement la stoechiomtrie.

II.3.b. Etude par spectroscopie infrarouge

Les spectres dabsorption infrarouge des chantillons soumis sous vapeur deau pendant 24h des tempratures de 40 C, 60 C et 80 C puis lavs et schs la temprature de ltude sont regroups dans la figure IV-7. Ltude de ces spectres montre que ds 40 C on note la prsence des bandes caractristiques des ions PO43- dans une structure apatitique, ainsi que la prsence de la bande situe 870 cm-1 correspondante aux ions HPO42- dans une apatite non stchiomtrique. On remarque que lintensit de cette dernire bande diminue lorsque la temprature de traitement augmente.

72

80C

60C

40C

Figure IV-6 : Diagrammes de diffraction des rayons X des chantillons prpars diffrentes tempratures de traitement.

73

80C

60C

40C

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

cm-1

Figure IV-7 : Spectres dabsorption infrarouge des chantillons prpars diffrentes tempratures de traitement.

74

On note aussi une bande situe 1400 cm-1 attribue aux ions carbonates CO32- dont lintensit diminue lorsque la temprature de traitement augmente de 40 C 80 C. Paralllement ces observations, on remarque que lintensit des bandes relatives aux ions OH- situes 3560 cm-1 et 630 cm-1 augmentent lorsque la temprature de traitement augmente de 40 C 80 C.

III. ETUDE PAR ANALYSE CHIMIQUE

Afin de dterminer la composition chimique du produit de synthse, les teneurs en ions phosphate, calcium et carbonate ont t dtermines sur un produit de rapport molaire initial Ca/P gal 1,60 trait pendant 24 h 80 C sous vapeur deau. Les rsultats du dosage sont reports dans le tableau IV-2. Ils nous permettent de calculer le rapport molaire Ca/P et le rapport molaire Ca/(P+CO3) de lapatite obtenue.

Tableau IV-2 : Composition de lchantillon rcupr aprs traitement. Ca2+ (en mmole) 8,50 PO43- Total (en mmole) 5,37 HPO42(en mmole) 0,38 CO32(en mmole) 0,086 Ca/P 1,58 Ca/(P+CO3) 1,56

Le produit prpar est une apatite phosphocalcique dficiente carbonate de type B, dont la formule chimique est la suivante :

Ca9,34(PO4 )5,48(HPO4)0,42(CO3)0,09 (OH)1,22 IV. ETUDE PAR MICROSCOPIE ELECTRONIQUE A BALAYAGE

Le produit obtenu partir du traitement dun mlange de ractifs de rapport molaire Ca/P = 1,60 pendant 24 h 80 C sous vapeur deau, dont la formule chimique est donne ci-dessus a t caractris par microscopie lectronique balayage (figure IV-8). Ce produit prsente une morphologie poreuse qui peut lui donner des proprits biologiques intressantes lors de sa mise en contact avec un milieu cellulaire (98).

75

Figure IV-8 : Micrographies en microscopie lectronique balayage du produit obtenu. x 5 000 x 15 000

76

V. CONCLUSION
La mthode de synthse par voie hydrothermale que nous avons prsente au cours de ce chapitre, nous a conduit la prparation dun phosphate de calcium carbonat mal cristallis, de structure apatitique. Sa formule chimique dduite partir de lanalyse chimique montre que le produit que nous avons labor est similaire la partie minrale de los
(9)

Cependant la composition chimique de cette apatite est influence par plusieurs paramtres de synthse : le rapport atomique Ca/P initial du mlange, le temps de sjour du mlange dans ltuve et la temprature de traitement du mlange. Linfluence de ces facteurs sera tudie dans le chapitre VII qui est consacr la modlisation et loptimisation de cette synthse.

77

PARTIE II

MODELISATION ET OPTIMISATION DE LA SYNTHESE DES PHOSPHATES DE CALCIUM

CHAPITRE V
MODELISATION ET OPTIMISATION DE LA SYNTHESE DE LHYDROXYAPATITE

Lobjectif de cette tude est de dterminer les conditions optimales de synthse de lhydroxyapatite stchiomtrique pure par la mise au point dune stratgie mthodologique utilisant la technique des plans dexpriences. Ainsi on peut tablir un modle mathmatique afin de reprsenter au mieux la synthse modle descriptif de lexpliquer modle explicatif et de prvoir la rponse en un point o aucune exprience na t faite modle prvisionnel .

I. PRESENTATION DE LA METHODOLOGIE DE LETUDE I.1. Choix des facteurs, centre dintrt, pas de variation et domaine exprimental I.1.a. Choix des facteurs
Des travaux antcdents sur la synthse de phosphate de calcium en gnral
(86)

et les

connaissances dj acquises sur la mthode de synthse de lhydroxyapatite par double dcomposition en particulier nous ont conduits choisir 4 facteurs savoir le pH du milieu aqueux, le rapport Ca/P des ractifs, la concentration en ions actif [Ca2+] et la dure de la raction. Ces facteurs sont ceux qui ont priori une influence directe sur la composition du solide final cest dire sur le rapport molaire Ca/P du solide. Ces paramtres sont regroups dans le tableau V-1. Tableau V-1 : Facteurs influenant la synthse par double dcomposition de lhydroxyapatite. PARAMETRES pH du milieu aqueux Rapport molaire Ca/P des ractifs Concentration en calcium ractif Dure de la raction NOTATION pH (Ca/P)r [Ca2+] D UNITE mol/l h

80

I.1.b. Centre dintrt et pas de variation

Les variables naturelles et codes du centre dintrt ainsi que leurs pas de variation sont rassembls dans le tableauV-2. Tableau V-2 : Centre dintrt et pas de variation des facteurs influenant la synthse. CENTRE DINTERET FACTEURS pH (Ca/P)r [Ca2+] D Variables codes Xi 0 0 0 0 Variables naturelles xi 8,00 1,667 1,5 3 PAS xi 0,5 0,03 0,5 0,5

La temprature est maintenue constante au cours de cette tude la temprature dbullition de la suspension et lagitation est fixe 400 tours par minute.

I.1.c. Domaine exprimental

Le domaine exprimental choisi pour modliser la synthse de lhydroxyapatite par double dcomposition et tudier linfluence de ces quatre facteurs ainsi que celle de leur interaction sur le rapport molaire Ca/P du solide final est donn dans le tableau V-3. Les valeurs des variables codes et naturelles, qui permettent de dfinir lensemble du domaine exprimental sont rassembles dans le mme tableau. Tableau V-3 : Domaine exprimental. Niveaux Variables codes X1, X2, X3, X4 x1 = pH Variables naturelles xi x2 = (Ca/P)r x3 = [Ca2+] : mol/l x4 = D : h -2 7,00 1,607 0,5 2,0 -1 7,50 1,637 1,0 2,5 0 8,00 1,667 1,5 3,0 1 8,50 1,697 2,0 3,5 2 9,0 1,727 2,5 4,0

81

avec Xi : variable code. Xi : (xi xi)/xi Avec xi : valeur relle, xi : valeur de la ime variable relle au centre dintrt, xi : pas de la variation de la variable relle.

I.2. Equation du modle

Pour une tude doptimisation de synthse approfondie, on ne peut se contenter dun modle polynomial de degr 1 et donc de plans factoriels complets 2k ou factoriels fractionnaires 2k-p. Il est ncessaire dutiliser un modle polynomial de degr au moins 2. Parmi les plans permettant lutilisation dun modle polynomial du degr 2, nous avons choisi un plan composite centr qui permet des qualits optimales quant la prvision de la rponse calcule en tous points du domaine (86,87). Le polynme tester pour cette tude devient :

= 0 +

jX j j= 1 b

jj' X jX j' j = 1 j ' = 1 j ' jb

jjX 2 j j= 1 b

Ce modle comprend 15 termes : Avec : : fonction de rponse, o : terme constant du modle, j : coefficients du modle de la variable Xj, jj : coefficients du modle de la variable carre Xj2, jj : coefficients du modle dinteraction entre Xj et Xj. Terme constant Termes linaires Termes carrs = 1 = 4 = 4

Termes rectangles = 6

82

La ralisation de n expriences en diffrents points du domaine exprimental permet dtablir un systme de n quations linaires par rapport aux 15 inconnues que constituent les coefficients de lquation du modle. Ce systme dquations peut scrire sous forme :

yi = i + i,
et sous la forme matricielle

i = erreur exprimentale

y = X +
O : y X : est la matrice colonne de n rsultats exprimentaux, : est la matrice (n, 15) du modle, gnre partir de la matrice dexpriences, : est la matrice colonne des 15 coefficients du modle, : est la matrice colonne des n erreurs exprimentales.

La mthode des moindres carrs permet de rsoudre un tel systme de n quations indpendantes, linaires par rapport aux coefficients. Les estimations des moindres carrs des coefficients seront calcules par la relation :

b = = (XX)-1Xy
avec : X : matrice colonne des estimateurs bi, : matrice (19, n) transpose de la matrice du modle,

(XX)-1 : matrice inverse de la matrice (XX).

La qualit des estimateurs bi des coefficients i du modle dpend du choix de la matrice dexpriences raliser.

83

I.3. Construction de la matrice dexpriences

Afin dobtenir une bonne qualit descriptive du modle et de permettre une prvision fiable dans lensemble du domaine exprimental considr, pour un nombre raisonnable de manipulations, nous avons choisi de raliser une matrice dexpriences construite de la faon suivante : si on considre que toutes les variables sont orthogonales par construction du plan dexpriences, la ralisation du plan composite centr ncessite un nombre dessais gal : n = 2k + 2.k + N0 soit avec k = 4 : n = 24 + 2.4 + N0 = 16 + 8 + N0

Les 24 = 16 premiers essais nots (NF) constituent un plan complet 24 qui reprsente le plan de base du plan composite centr auquel on ajoute des points axiaux une distance du centre du domaine (point toile) dtermine par la rsolution de lquation suivante (88, 89) :

= NF1/4 ce qui donne : =2 Pour = 2 (afin dobtenir lorthogonalit des 4 variables de base) le nombre dessais au centre N0 = 7. Le tableau V-4 rassemble lensemble de 16 + 8 + 7 = 31 essais, dfinissant la matrice dexpriences pour les diffrents facteurs envisags. La ime ligne de cette matrice dfinit les conditions exprimentales de la ime exprience.

84

Tableau V-4 : Matrice dexpriences du plan composite centr. ordre adopt 30 22 21 26 01 05 29 04 27 25 20 13 10 08 18 23 24 31 12 03 06 28 15 19 07 11 16 17 09 14 02 Ordre logique 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 X1 + + + + + + + + -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 pH x1 7,50 8,50 7,50 8,50 7,50 8,50 7,50 8,50 7,50 8,50 7,50 8,50 7,50 8,50 7,50 8,50 7,00 9,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 8,00 X2 + + + + + + + + 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Ca/P x2 1,637 1,637 1,697 1,697 1,637 1,637 1,697 1,697 1,637 1,637 1,697 1,697 1,637 1,637 1,697 1,697 1,667 1,667 1,607 1,727 1,667 1,667 1,667 1,667 1,667 1,667 1,667 1,667 1,667 1,667 1,667 X3 + + + + + + + + 0 0 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 [Ca2+] x3 1,0 1,0 1,0 1,0 2,0 2,0 2,0 2,0 1,0 1,0 1,0 1,0 2,0 2,0 2,0 2,0 1,5 1,5 1,5 1,5 0,5 2,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 X4 + + + + + + + + 0 0 0 0 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 D x4 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 2,0 4,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0

85

I.4. Construction de la matrice du modle

La matrice du modle est obtenue de la manire suivante : on ajoute la matrice dexpriences une colonne de +1 dune part et lensemble des combinaisons possibles des lments pris deux deux de chaque colonne (interactions doubles) ainsi que les termes carrs XiX i (1 i 4) dautre part. La matrice du modle ainsi construite est donne dans le tableau V-5.

II. RESULTATS EXPERIMENTAUX

Lensemble des conditions opratoires, effectues au hasard, et les rsultats analytiques des rapports molaires Ca/P des produits lavs correspondants, sont regroups dans le tableau V-6. Le principe de lexploitation des rsultats repose sur lanalyse de la variance de la rgression, le calcul des estimations des coefficients du modle, leur signification par rapport lerreur exprimentale et le calcul des rsidus. Tous les calculs statistiques sont effectus laide du logiciel JMP (90).

III. MODELISATION DE LA REPONSE : RAPPORT MOLAIRE Ca/P DES PRODUITS LAVES III.1. Signification et effets des diffrents facteurs
Rappelons quun facteur est significatif 5 % lorsque sa valeur de Snedecor estime exprimentalement (Fexp) est suprieure ou gale la valeur de Snedecor critique (Fc) un niveau de confiance gale 95%. Le facteur de Snedecor exprimental est obtenu en divisant le carr moyen (CMu) par la variance de lerreur exprimentale (sr2) :

Fexp = CMu/sr2
Lestimation du carr moyen individuel (CMu) est obtenue en divisant la somme des carrs de chaque coefficient (SSu) par son degr de libert (u =1).

CMu = SSu /u

86

87

Tableau V-6 : Conditions opratoires et rsultats exprimentaux. Ordre logique 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Valeurs des variables codes X2 X3 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 0 0 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 rsultats (Ca/P)l 1,643 1,710 1,662 1,695 1,600 1,710 1,620 1,624 1,656 1,700 1,670 1,706 1,652 1,795 1,610 1,701 1,630 1,731 1,699 1,662 1,689 1,672 1,660 1,701 1,684 1,685 1,680 1,684 1,685 1,680 1,680

X1 -1 1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

X4 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 0 0 0 0 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0

88

Lestimation de la somme des carrs des coefficients (SSu) est obtenue en multipliant le carr du coefficient (bu) par la somme des carrs des valeurs de Xu

SSu = bu2 Xiu 2

Lestimation de la variance de lerreur exprimentale (sr2) est obtenue en divisant la somme des carres ei2 du rsidu par le nombre du degr de libert (nombre de degr de libert = nombre dexpriences nombre de coefficients de modles) :

sr2 = 0,00388630 /16 = 2,43 10-4

Le signe du paramtre donne le sens de variation de la rponse. En effet, lorsquun facteur passe du niveau (-1) au niveau (+1) on dit que son effet est positif quand son signe est positif et on dit que son effet est ngatif quand son signe est ngatif.

Le tableau IV-7 rassemble les diffrents facteurs et leurs significations. On remarque que : pour un seuil de signification de 0,1 %, cest dire pour un niveau de confiance de 99,9 %, les deux facteurs : le pH et la dure D ont un effet positif sur la valeur de la rponse rapport Ca/P du produit final lav, pour un seuil de signification de 1 %, cest dire pour un niveau de confiance de 99 %, le facteur (Ca/P)r , linteraction pH - (Ca/P)r et linteraction (Ca/P)r - [Ca2+] ont toutes les trois un effet ngatif tandis que linteraction [Ca2+] - D a un effet positif sur la valeur de la rponse qui est le rapport Ca/P du produit final lav, pour un seuil de signification de 5 %, cest dire pour un niveau de confiance de 95 %, le facteur [Ca2+] a effet ngatif sur la valeur de la rponse alors que linteraction pH - [Ca2+] a un effet positif sur la valeur de la rponse qui est le rapport Ca/P du produit final lav.

89

Tableau V-7 : Estimation des coefficients du modle associ au rapport molaire Ca/P et dtermination de leur signification par rapport la dispersion exprimentale. Coefficient (bu) 1,6825714 Degr de libert (u) Somme des carrs (SCbu) Valeur de Fexp Signification -

b0

b1 b2 b3 b4

0,0304167 -0,0105000 -0,0068330 0,0128333

1 1 1 1

0,02220417 0,00264600 0,00112067 0,00395267

91,4152 10,8937 04,6138 16,2732

*** ** * ***

b12 b13 b14 b23 b24 b34

-0,0125000 0,0105000 0,0062500 -0,0141250 -0,0033750 0,0113750

1 1 1 1 1 1

0,00250000 0,00176400 0,00062500 0,00319225 0,00018225 0,00207025

10,2926 07,2624 02,5731 13,1426 00,7503 08,5233

** * NS ** NS **

b11 b22 b33 b44

-0,0019140 -0,0019140 -0,0019140 -0,0019140

1 1 1 1

0,00010472 0,00010472 0,00010472 0,00010472

00,4312 00,4312 00,4312 00,4312

NS NS NS NS

*** : significatif 0,1 % (F0.001(1,16) = 16,12) ** : significatif 1 % (F0.01(1,16) = 8,53) * : significatif 5 % (F0.05(1,16) = 4,49) NS : non significatif Avec F (1, 2) est la fonction de Snedecor 1 et 2 degrs de libert pour une probabilit de .

III.2. Analyse de la variance

Lanalyse de la variance nous permet de voir si les variables retenues pour la modlisation ont, dans leur ensemble, un effet significatif sur la rponse. Les rsultats de lanalyse de la variance sont regroups dans le tableau V-8. Pour la signification globale, la valeur de F(1,2) exprimentale donne dans le tableau V-8 (Fexp(14,16) = 11,932) est

90

suprieure celle thorique (F0.01(14,16) = 5,41). La rgression est donc significative un niveau de confiance denviron 99 %. Tableau V-8 : Analyse de la variance de rgression pour la rponse Ca/P du produit lav. Source de variation REGRESSION RESIDU TOTAL Avec : Fexp *** : facteur de snedecor exprimental : significatif un niveau de 0.1% (F0.001(14,16) = 5.41) (86) Somme des carrs 0,04057480 0,00388630 0,04446110 Degrs de libert 14 16 30 Carr moyen 0,002898 0,000243 Fexp 11,9320 Signification *** -

III.3. Equation du modle

Lquation du modle concernant le rapport molaire Ca/P du solide lav scrit, en tenant compte du seuil de signification de 5%.

(Ca/P)103 = 1683 + 30 X1 10,5 X2 6,8 X3 + 12,8 X4 12,5 X1X2+ 10,5 X1X3 14,1 X2X3 + 11,4 X3X4

III.4. Validit du modle

La validation du modle consiste sassurer que les rponses calcules pour les points exprimentaux sont peu prs les mmes que les rponses mesures. Le tableau V-9 rassemble les rsultats exprimentaux et les rsultats calculs laide du logiciel J.M.P (90). Si on tient compte de lerreur exprimentale de lanalyse chimique qui est de lordre de 0,5% la comparaison entre ces deux rsultats montre quon a une trs bonne estimation du modle. Il peut donc tre adapt pour linterprtation des essais et ltablissement des graphiques.

91

Tableau V-9 : Comparaison entre les rsultats exprimentaux et les valeurs calcules partir du modle. N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 (Ca/P)exp 1,643 1,710 1,662 1,695 1,600 1,710 1,620 1,624 1,656 1,700 1,670 1,706 1,652 1,795 1,610 1,701 1,630 1,731 1,699 1,662 1,689 1,672 1,660 1,701 1,684 1,685 1,680 1,684 1,685 1,680 1,680 (Ca/P)cal 1,647 1,699 1,686 1,688 1,617 1,712 1,600 1,644 1,644 1,721 1,669 1,697 1,660 1,779 1,629 1,698 1,614 1,735 1,695 1,653 1,688 1,661 1,649 1,700 1,682 1,682 1,682 1,682 1,682 1,682 1,682 Diffrence -0,004 0,010 -0,024 0,007 -0,017 -0,002 0,020 -0,020 0,012 -0,021 0,001 0,009 -0,008 0,016 -0,019 0,003 0,016 -0,004 0,004 0,009 0,001 0,011 0,011 0,001 0,002 0,003 -0,002 0,002 0,003 -0,002 -0,002

92

IV. OPTIMISATION
Le but de cette optimisation est de rpondre un objectif bien prcis qui est dans notre cas : la synthse dune hydroxyapatite pure et stoechiomtrique de rapport Ca/P gal 1,67 partir du carbonate de calcium et lacide phosphorique. Elle consiste donc trouver lensemble des valeurs des variables opratoires (facteurs) qui entrane la rponse souhaite, en nous basant sur des contraintes conomiques. Aprs analyse du systme et modlisation de la rponse en fonction des diffrents facteurs, loptimum peut tre localis par la mthode du trac des courbes isorponse.

IV.1.Analyse des courbes disorponse

En mettant les valeurs prdites par le modle sous forme de courbes disorponse, nous pouvons analyser leffet de facteur sur notre rponse. Les courbes disorponse du rapport molaire Ca/P du solide lav en fonction du pH et de la concentration en calcium sont reprsentes sur la figure V-1. Elles confirment ce que nous avons dj constat prcdemment dans le tableau V-7, soit un effet positif du pH sur la rponse qui se traduit dune manire gnrale par une augmentation du rapport molaire Ca/P du solide lav lorsquon augmente le pH du milieu concentration en calcium des ractifs constante. Nous pouvons galement remarquer que cette variation est nettement plus prononce concentration en ion calcium [Ca2+] leve qu concentration en ion calcium [Ca2+] faible. Donc, laugmentation de ce facteur a tendance renforcer leffet positif du pH ce qui peut tre d daprs le tableau V-7 leffet de linteraction pH - [Ca2+] ayant un signe positif. Daprs les courbes (1a, 1c, 1d) de la figure V-1, nous notons un redressement des courbes disorponse dans le domaine exprimental, lorsque le facteur dure D augmente de 2 heures 30 minutes (X4 = -1) ; 3 heures 30 minutes (X4 = 1), rapport molaire Ca/P des ractifs gal 1,667 (X2 = 0). Ce redressement explique le fait que laccroissement de la dure de raction a tendance minimiser leffet de la concentration en ion calcium [Ca2+] sur la rponse. En effet, si nous nous reportons au tableau V-7 , nous notons que le coefficient du facteur concentration en ion calcium [Ca2+] est de signe ngatif par contre le coefficient du facteur D et celui de linteraction [Ca2+] D sont de signe positif.
93

Ca/P = 1,667 2,5 2,0

D = 3,5 h

1a
2,5 2,0

Ca/P = 1,697

D=3h

1b

[Ca2+]

[Ca2+]

1,5 1,0 0,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 pH Ca/P = 1,667 2,5 2,0

1,5 1,0 0,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 pH

D = 3,5 h

1c

[Ca2+]

1,5 1,0 0,5 7,0 7,5 8,0 pH 8,5 9,0

Ca/P = 1,667 2,5 2,0

D = 2,5 h

1d
2,5 2,0

Ca/P = 1,637

D = 3,5 h

1e

[Ca2+]

1,5 1,0 0,5 7,0 7,5 8,0 pH 8,5 9,0

[Ca2+]

1,5 1,0 0,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 pH

Figure V-1 : Courbes disorponse du rapport molaire Ca/P du solide lav en fonction du pH et de la concentration en ion calcium des ractifs en mol.l-1.

94

Dautre part, sur les courbes (1b, 1c, 1e) de la mme figure, nous observons un affaissement des courbes quand le rapport Ca/P de ractifs croit de 1,637 (X2 = - 1) 1,697 (X4 = 1) dure de raction D gale 3 heures (X4 = 0). Donc laugmentation de ce facteur a tendance favoriser leffet de la concentration en ion calcium [Ca2+] sur la rponse puisque nous notons sur le tableau V-7 que les coefficients des facteurs Ca/P et [Ca2+] ainsi que linteraction Ca/P - [Ca2+] sont de mme signe ngatif. Afin datteindre notre objectif, cest dire la prparation dune hydroxyapatite pure et stoechiomtrique de rapport molaire Ca/P = 1,67, nous constatons que le domaine de pH commun aux diffrentes conditions exprimentales regroupes dans la figureV-1, conduisant ce produit est limit entre 7,75 (X1 = - 0,5) et 8 (X1 = 0). Ce rsultat, nous amne orienter ltude des courbes disorponse et celle de leffet des facteurs sur la rponse, dans ce domaine exprimental de pH. Dans ce domaine de pH, les courbes 1b, 1c et 1e de la figure V-1 montrent quune augmentation de la concentration en ion calcium [Ca2+] pH constant conduit une diminution de la rponse. Cependant, en respectant toujours notre objectif, lanalyse des courbes regroupes dans la figure V-1 nous conduit limiter le domaine exprimental concernant le facteur concentration en ion calcium [Ca2+] des valeurs comprises entre 1,25 mol/l (X3 = - 0,5) et 1,5 mol/l (X3 = 0). Pour dterminer le domaine des valeurs des deux autres facteurs qui sont le rapport molaire Ca/P des ractifs et la dure de la raction permettant de synthtiser une hydroxyapatite de rapport molaire Ca/P = 1,67, nous allons analyser les courbes disorponse dans un domaine de pH et de concentration en ion calcium [Ca2+] incluant le domaine limite que nous avons dtermin prcdemment. Ainsi, nous avons pu reprsenter dans la figureV-2 les courbes disorponse du rapport molaire Ca/P du produit synthtis en fonction du rapport molaire Ca/P des ractifs et la dure dans un domaine de pH gal [7,5 ; 8] (X1 = - 1 ; X1 = 0) et celui de la concentration en ion calcium [Ca2+] gale [ 1,25 mol/l ; 1,5 mol/l ] (X3 = - 1 ; X3 = 0). Lanalyse des courbes (2 a, 2 b, 2 c) de la figureV-2 montre un changement de lallure de ces courbes disorponse qui se transforment de branches hyperboliques en ellipses caractrisant un optimum, quand le pH dcrot concentration en ion calcium [Ca2+] gale 1,25 mol/l (X3 = 0) et quand la concentration en ion calcium [Ca2+] dcrot pH gal 8 (X1 = 0).
95

pH = 8,0 [Ca2+] = 1,5 mol l-1 4,0 3,5 D 3,0 2,5 2,0

2a

1,617 1,637 1,667 1,697 1,717 Ca/P pH = 7,5 [Ca2+] = 1,5 mol l-1 4,0 3,5 D 3,0 2,5 2,0 1,617 1,637 1,667 1,697 1,717 Ca/P pH = 8,0 [Ca2+] = 1,0 mol l-1 4,0 3,5 D 3,0 2,5 2,0

2b

2c

1,617 1,637 1,667 1,697 1,717 Ca/P

Figure V-2 : Courbes disorponse du rapport molaire Ca/P du solide lav et sch en fonction du rapport molaire Ca/P des ractifs et de la dure de la raction en heures.

96

Cependant, ces optimums ne correspondent pas un rapport Ca/P = 1,67, alors nous avons choisi une valeur du pH et de la concentration en ion calcium [Ca2+] intermdiaire entre - 1 et 0 qui est gale - 0,5. La courbe disorponse du rapport molaire Ca/P du produit dans ces conditions de pH et de concentration en ion calcium [Ca2+] est illustre dans la figure V-3.

IV.2. Dtermination des conditions optimales

Nous constatons daprs cette figure, que si le rapport molaire Ca/P des ractifs et la dure de la raction augmentent simultanment ou bien quand la dure de la raction augmente et le rapport molaire Ca/P des ractifs reste inchang ou inversement, le rapport molaire Ca/P du prcipit augmente jusqu la valeur thorique de lhydroxyapatite stoechiomtrique gale 1,67 et reste inchang. Lanalyse de cette courbe, nous montre que pour une valeur de X1 gale - 0,5 (pH = 7,75) et une valeur de X3 gale - 0,5 ([Ca2+] = 1,25 mol l-1), il existe plusieurs valeurs du rapport molaire Ca/P des ractifs et de la dure de raction qui conduisent un solide de rapport molaire Ca/P gal 1,67. Nous allons donc choisir des conditions qui nous paraissent les plus pratiques lobtention de ce produit, savoir : X2 = 0 quivaut un rapport molaire des ractifs gal 1,667 X4 = - 0,5 quivaut une dure de raction gale 2 heures 45 minutes Ainsi, ltude de lquation du modle mathmatique montre que si on choisit les conditions de prparation suivantes telles que: le pH est gal 7,75 (X1 = - 0,5), le rapport Ca/P initial est gal 1,667 (X2 = 0), la concentration en calcium actif [Ca2+] est gale 1,25 mol l-1 (X3= - 0,5), et pour une dure de raction de 2 heures 45 minutes (X4 = - 0,5),

alors le rapport molaire du solide form est gal 1,667. Cette valeur correspond au rapport molaire Ca/P de lhydroxyapatite phosphocalcique pure et stoechiomtrique.

97

pH = 7,75

[Ca2+] = 1,25 mol l-1

4,0

3,5

3,0

2,5

2,0

1,617

1,637

1,667

1,697

1,717

Ca/P

Figure V-3: Courbes disorponse du rapport molaire Ca/P du solide lav et sch en fonction du rapport molaire Ca/P des ractifs et de la dure de la raction.

IV.3. Vrification exprimentale

La vrification exprimentale en ce point a t ralise et le produit obtenu, lav et calcin 900 C lair pendant une heure a t analys par diffraction des rayons X et spectroscopie dabsorption infrarouge. Lanalyse du diagramme de diffraction des rayons X et du spectre dabsorption infrarouge montre que le produit synthtis est une hydroxyapatite pure et stoechiomtrique de rapport Ca/P gal 1,67 et aucune phase trangre na t dcele.

98

+ 10

+ 15

+ 20

+ 25

+ 30

+ 35

+ 40

+ 45

Figure V-4: Diagramme de diffraction des rayons X et spectre dabsorption infrarouge du solide lav et calcin 900 C lair, obtenu dans les conditions optimales.

99

CHAPITRE VI

MODELISATION ET OPTIMISATION DE LA SYNTHESE DU PHOSPHATE TRICALCIQUE APATITIQUE

Le phosphate tricalcique apatitique est tout phosphate de rapport atomique Ca /P gal 1,5 et dont la formule est (57,73, 91) :

Ca9(HPO4)(PO4)5(OH)
Le phosphate tricalcique apatitique, comme lhydroxyapatite, est utilis dans des applications biologiques. Ses proprits de biocompatibilit, de rhabilit et de biodgradabilit (en raison de sa solubilit) sont connues. La calcination de ce produit 900 C conduit lorthophosphate tricalcique anhydre (Ca3(PO4)2) . De nombreuses mthodes de prparation du phosphate tricalcique sont dcrites dans la littrature (48, 57, 74, 75, 76). Nous nous proposons dans ce chapitre de modliser et doptimiser la synthse par double dcomposition du phosphate tricalcique partir du carbonate de calcium et lacide phosphorique, en nous basant sur lanalyse statistique.

I. PRESENTATION DE LA METHODOLOGIE DE LETUDE

Pour modliser et optimiser la synthse du phosphate tricalcique apatitique, nous suivrons la mme dmarche que dans le cas de la synthse de lhydroxyapatite afin dtablir un modle mathmatique reliant la rponse rapport molaire Ca/P du solide lav et les facteurs influenant la prcipitation savoir : le pH, la concentration en ion calcium des ractifs, la temprature et la dure de la raction, en tenant compte de leurs interactions par la construction dun plan composite centr. Cette matrice prsente de nombreux avantages, particulirement une forte rsolution et un nombre minimum dessais
(92)

. Pour

quatre

facteurs, la ralisation dun plan factoriel complet 5 niveaux ncessite 54 = 625 expriences, tandis que le plan composite centr ne ncessite que 31 expriences (93). En effet, la ralisation de ce dernier dpend du nombre de variables explicatives tudier. Le tableau VI-1 rassemble les 31 essais qui constituent un plan composite centr.

101

Tableau VI-1: Matrice dexpriences du plan composite centr.

ordre adopt Ordre logique X1 pH x1 X2 [Ca2+] x2 X3 T x3 X4 D x4

30 22 21 26 01 05 29 04 27 25 20 13 10 08 18 23 24 31 12 03 06 28 15 19 07 11 16 17 09 14 02

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31

+ + + + + + + + -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

5,5 6,5 5,5 6,5 5,5 6,5 5,5 6,5 5,5 6,5 5,5 6,5 5,5 6,5 5,5 6,5 5,0 7,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0

+ + + + + + + + 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

1,0 1,0 1,4 1,4 1,0 1,0 1,4 1,4 1,0 1,0 1,4 1,4 1,0 1,0 1,4 1,4 1,2 1,2 0,8 1,6 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2

+ + + + + + + + 0 0 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0

55 55 55 55 65 65 65 65 55 55 55 55 65 65 65 65 60 60 60 60 50 65 60 60 60 60 60 60 60 60 60

+ + + + + + + + 0 0 0 0 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0

3 3 3 3 3 3 3 3 5 5 5 5 5 5 5 5 4 4 4 4 4 4 2 6 4 4 4 4 4 4 4

102

Les 16 premiers essais du tableau VI-1 constituent un plan complet 24qui reprsente le plan de base du plan composite centr. A ce plan on ajoute 7 essais au centre et 8 essais complmentaires sur chaque axe des facteurs situs une distance du centre du domaine (points en toile) dtermine par la rsolution de lquation = NF1/4 ce qui donne : =2 Les valeurs codes Xj= 1 sont obtenues partir des valeurs relles xj par lquation suivante : Xj = (xj- xj)/xj Avec xj : valeur de la ime variable relle, xj : valeur de la ime variable relle au centre dintrt, xj: pas de la variation de la variable relle. Les valeurs des variables relles xj et des variables Xj codes dfinissant le domaine exprimental sont regroupes dans le tableau VI-2. Tableau VI-2 : Domaine exprimental. Niveaux Variables codes X1, X2, X3, X4 x1= pH Variables naturelles xi x2 = [Ca ]: mol/l x3= T : C x4 = D : h
2+ (88)

-2 5,0 0,8 50 2

-1 5,5 1.0 55 3

0 6,0 1,2 60 4

1 6,5 1,4 65 5

2 7,0 1,6 70 6

Avec : X1 = (x1 6,0)/0,5 ; X2 = (x2 1,2)/0,2 ; X3 = (x3 60)/5 et X4 = (x4 4)/1

Au cours de cette tude, le rapport molaire Ca/P des ractifs est maintenu constant une valeur de 1,5 et la vitesse dagitation est fixe 400 tours par minute.

103

Lquation du modle thorique scrit donc :

= 0 +

jX j j= 1 b

jj' X jX j' j = 1 j ' = 1 j ' jb

jjX 2 j j= 1 b U

Ce modle comprend 15 termes : terme constant termes linaires termes carrs =1 =4 =4

termes rectangles = 6

La mthode des moindres carrs modle :

Yu
n

(86)

permet de dterminer les coefficients bu de ce

bu =

o
2 iu

Yu =

X
i =1

iu

yi

X
i =1

Xiu et yi sont les valeurs de Xu et y pour la ime exprience. Yu est nomm contrast (88).

II. RESULTATS EXPERIMENTAUX

Lensemble des essais effectus au hasard et les rsultats analytiques (dosage chimique) des rapports molaires Ca/P des produits lavs et schs sont donns dans le tableau VI-3.

III. MODELISATION
Les 15 termes du modle qui ont t calculs par la mthode des moindres carrs ainsi que leur signification sont regroups dans le tableau VI-4.

104

Tableau VI-3 : Conditions opratoires et rsultats exprimentaux. Ordre logique 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 X1 -1 1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Valeurs des variables codes X2 X3 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 0 0 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 X4 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 0 0 0 0 0 0 -2 +2 0 0 0 0 0 0 0 Rsultats (Ca/P)l 1,450 1,466 1,460 1,512 1,460 1,486 1,445 1,510 1,430 1,467 1,440 1,500 1,470 1,530 1,449 1,539 1,450 1,547 1,464 1,490 1,464 1,490 1,440 1,454 1,487 1,489 1,486 1,490 1,487 1,488 1,487

105

Tableau VI-4 : Estimation des coefficients du modle associ au rapport molaire Ca/P et dtermination de leur signification par rapport la dispersion exprimentale. Coefficient (bu) 1,4877143 Degrs de libert (u) Somme des carrs (SCbu) Valeur de Fexp Signification -

b0

b1 b2 b3 b4

0,0250000 0,0061667 0,0099167 0,0026667

1 1 1 1

0,01500000 0,00091267 0,00236017 0,00017067

1822,62 110,8963 286,7791 20,7374

**** **** **** ***

b12 b13 b14 b23 b24 b34

0,0080000 0,0047500 0,0055000 -0,0063750 -0,0021250 0,0086250

1 1 1 1 1 1

0,00102400 0,00036100 0,00048400 0,00065025 -0,002125 0,00119025

124,4242 43,8644 58,8099 79,0106 0,000717 144,6249

**** *** *** *** NS ****

b11 b22 b33 b44

0,0026339 -0,0027410 -0,0013660 -0,0102410

1 1 1 1

0,00019839 0,00021485 0,00005336 0,00299911

24,1054 26,1064 6,4842 364,4157

*** *** NS ****

**** : trs significatif *** : significatif 0,1% (F0.001(1,16) = 16,12) NS : non significatif Avec F (1, 2) est la fonction de Snedecor 1 et 2 degrs de libert pour une probabilit de .

106

En tenant compte de tous les termes, lquation du modle scrit sous la forme suivante :

(Ca/P)103 = 1488 + 25 X1 + 6 X2 + 10 X3 + 3 X4 + 8 X1X2 + 5 X1X3 + 6 X1X4 6 X2X3 2 X2X4 + 9 X3X4 + 3 X12 3 X22 1 X32 10 X42

A partir de cette quation, il est possible de calculer les valeurs estimes ( y i ) et les rsidus correspondant : ei = yi - y i . Ces rsultats sont rassembls dans le tableau VI-5. La
comparaison de ces valeurs montre quon a une bonne estimation du modle. Rappelons que la signification des coefficients est estime par comparaison de la valeur de Snedecor exprimentale (Fexp) la valeur de Snedecor critique (86) (F0.001(1,16) = 16,12) 1 = 1 et 2 = 16 degrs de libert, pour une probabilit de 99,9 %. Il apparat que pour un seuil de signification de 0,1 %, cest dire pour un niveau de confiance de 99,9 %, tous les facteurs et leurs interactions sont significatifs sur la rponse lexception de linteraction [Ca2+] - D et de linteraction T - T. En tenant compte du seuil de signification de 0,1 %, lquation du modle concernant le rapport molaire Ca/P du solide lav et sch scrit donc
(94)

(Ca/P)103 = 1488 + 25 X1 + 6 X2 + 10 X3 + 3 X4 + 8 X1X2 + 5 X1X3 + 6 X1X4 6 X2X3 + 9 X3X4 + 3 X12 3 X22 10 X42

(Ca/P est multipli par 103 par commodit)

107

Tableau VI-5 : Comparaison entre les rsultats exprimentaux et les valeurs calcules partir du modle. N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 (Ca/P)exp 1,450 1,466 1,460 1,512 1,460 1,486 1,445 1,510 1,430 1,467 1,440 1,500 1,470 1,530 1,449 1,539 1,450 1,547 1,464 1,490 1,464 1,490 1,440 1,454 1,487 1,489 1,486 1,490 1,487 1,488 1,487 (Ca/P)cal 1,451 1,464 1,464 1,509 1,456 1,489 1,444 1,509 1,432 1,467 1,437 1,504 1,472 1,527 1,452 1,538 1,448 1,548 1,464 1,489 1,462 1,502 1,441 1,452 1,488 1,488 1,488 1,488 1,488 1,488 1,488 Diffrence -0,001 0,002 -0,004 0,003 0,004 -0,003 0,001 0,001 -0,002 0,000 0,003 -0,004 -0,002 0,003 -0,003 0,001 0,002 -0,001 0,000 0,001 0,002 -0,001 -0,001 0,002 -0,001 0,001 -0,002 0,002 -0,001 0,000 -0,001

108

Tableau VI-6 : Analyse de la variance de rgression pour le modle associ au rapport molaire Ca/P du produit lav. Source de variation REGRESSION RESIDU TOTAL Avec : Fexp : facteur de snedecor exprimental S *** : test de signification : Trs significatif un niveau de 0.1% (F0.001(14,16) = 5,41) (86) Fexp >> F0.001 Somme des carrs 0,02574942 0,00013168 0,02588110 Degrs de libert 14 16 30 Carr moyen 0,001839 0,000008 Fexp 223,4829 S *** -

IV. OPTIMISATION
Par une approche similaire celle que nous avons effectue pour loptimisation de la synthse de lhydroxyapatite, nous allons tenter de dterminer les conditions exprimentales optimales dlaboration dun phosphate tricalcique apatitique de rapport molaire Ca/P gal 1,5 et pouvant faire lobjet dun usage biologique.

IV.1. Analyse des courbes disorponses

La reprsentation graphique du modle prtabli, dans lespace des variables permet dobtenir des courbes isorponses. Ces dernires nous permettent la visualisation de la rponse en fonction des diffrents paramtres de synthse. Leur analyse met en vidence linfluence des facteurs sur la rponse et permet aussi de dterminer une rgion optimale o le rapport molaire Ca/P du produit prpar est gal 1,5. La figure VI-1 regroupe les courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et de la concentration en ion calcium [Ca2+], des valeurs de temprature T et de dure de raction D fixes. Nous pouvons voir sur les courbes de cette figure, dans le domaine exprimental, un effet positif du pH sur la rponse. Au fur et mesure que nous augmentons le pH du milieu ractionnel, le rapport molaire Ca/P du solide lav et sch 80 C augmente. En effet, nous
109

remarquons, daprs le tableau VI-7, que le coefficient du facteur pH ainsi que les coefficients de toutes les interactions faisant intervenir le facteur pH (pH [Ca2+], pH T, pH D et pH pH) sont de signe positif. De plus, cette augmentation de la rponse en fonction du pH est plus importante des concentrations en ion calcium [Ca2+] leves et se traduit par un resserrement des courbes disorponses dans ce domaine. Donc laugmentation de la concentration en ion calcium [Ca2+] renforce leffet positif du pH. En analysant ces courbes disorponses, nous remarquons que la formation dun solide de rapport molaire Ca/P gal 1,5 ne peut se faire que dans un domaine de pH bien dtermin et qui dpend de la valeur des autres facteurs. En effet, par exemple, pour des valeurs de concentration en ion calcium [Ca2+] suprieures 1,2 mol.l-1 (X2 > 0), le domaine exprimental de pH se limite entre les valeurs [6,0 6,5] (X1 = 0 X1 = 1). Pour mettre en vidence linfluence des autres facteurs sur le rapport molaire Ca/P du solide, nous avons reprsent sur la figure VI-2 les courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et de la temprature T des valeurs de concentration en ion calcium [Ca2+] et de dure de raction D fixes. Dans le domaine de pH choisi, nous remarquons sur la courbe 2b, un effet positif de la temprature T sur la rponse qui se traduit par une augmentation du rapport molaire Ca/P du produit prpar lorsque la temprature de raction T augmente pH constant. Cet effet positif de la temprature T sur la rponse est influenc par leffet dautres facteurs comme la concentration en ion calcium [Ca2+] et la dure de la raction D : - Lorsque la concentration en ion calcium [Ca2+] croit dure de raction D constante (courbes 2b et 2a), nous notons un redressement des courbes disorponses qui deviennent parallles laxe des tempratures. Donc, laccroissement de la concentration en ion calcium [Ca2+] inhibe leffet positif de la temprature T sur la rponse.

110

T = 65 C D = 4 h 1,6 1,4 [Ca2+] 1,2 1,0 0,8

1a
1,6 1,4 [Ca2+] 1,2 1,0 0,8

T = 60 C D = 5 h

1d

5,0

5,5

6,0 pH

6,5

7,0

5,0

5,5

6,0 pH

6,5

7,0

T = 60 C D = 4 h 1,6 1,4 [Ca2+] 1,2 1,0 0,8

1b

5,0

5,5

6,0 pH

6,5

7,0

T = 55 C D = 4 h 1,6 1,4 [Ca2+] 1,2 1,0 0,8

1c
1,6 1,4 [Ca2+] 1,2 1,0 0,8

T = 60 C D = 3 h

1e

5,0

5,5

6,0 pH

6,5

7,0

5,0

5,5

6,0 pH

6,5

7,0

Figure VI-1 : Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide lav et sch en fonction du pH et de la concentration en calcium [Ca2+] en mol.l-1.

111

[Ca2+] = 1,4 mol l-1 D = 4 h 70 65 T 60 55 50 5,0 5,5 6,0 pH 6,5 7,0

2a
70 65 T 60 55 50

[Ca2+] = 1,2 mol l-1 D = 5 h

2c

5,0

5,5

6,0 pH

6,5

7,0

[Ca2+] = 1,2 mol l-1 D = 4 h 70 65 T 60 55 50 5,0 5,5 6,0 pH 6,5 7,0

2b

[Ca2+] = 1,2 mol l-1 D = 3 h 70 65 T 60 55 50 5,0 5,5 6,0 pH 6,5

2d

7,0

Figure VI-2 : Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide lav et sch en fonction du pH et de la temprature de raction T en C.
112

- Dun autre cot, si nous augmentons la dure de la raction D concentration en ion calcium [Ca2+] fixe (courbes 2d, 2b et 2c), nous relevons un phnomne inverse qui sillustre par laffaissement des courbes disorponses, c'est--dire que laugmentation du facteur dure de raction D favorise leffet positif de la temprature T. Daprs la courbe 2d de la figure VI-2, nous relevons galement quil est dconseill de travailler dans des conditions telles que la dure de raction D soit faible et gale 3 heures (X4 = -1). En effet, on trouve que dans le domaine de pH que nous avons dtermin, il est impossible dobtenir un produit de rapport molaire Ca/P gal 1,5 si on fixe la concentration en ion calcium [Ca2+] = 1,2 mol l-1 (X2 = 0), et la dure de raction D = 3 heures (X4 = -1). Afin de complter cette tude, il est ncessaire danalyser dautres courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction dautres facteurs. Nous avons donc choisi de construire des courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction de la concentration en ion calcium [Ca2+] et de la dure de raction D des valeurs de pH prdfinis et de temprature T constantes que nous avons regroupes dans la figure VI-3. Il apparat nettement sur les courbes disorponses des six conditions exprimentales de la figure VI-3, lexistence dune rgion optimale qui correspond une rponse gale 1,49 ; 1,51 ou 1,53. Cette rgion optimale sagrandit et se dplace vers la gauche quand la temprature T augmente de 60 C (X3 = 0) 65 C (X3 = 1) des valeurs de pH constantes et respectivement gales 6 (X1 = 0) ; 6,25 (X1 = 0,5) ou 6,5 (X1 = 1). Cependant, dans cet intervalle de pH et de temprature T, seul le pH a une influence sur la valeur de la rponse correspondant la zone optimale. En effet, lorsque la temprature augmente de 60 C (X3 = 0) 65 C (X3 = 1) pH gal respectivement 6 (X1 = 0) ; 6,25 (X1 = 0,5) et 6,5 (X1 = 1) la valeur de la rponse de cette zone optimale reste inchange. Par contre, si le pH croit de 6 (X1 = 0) 6,5 (X1 = 1) des temprature constantes gales 60 C (X3 = 0) ou 65 C (X3 = 1) cette valeur croit de 1,49 1,53. Or ces optimums ne sont pas en accord avec notre objectif. Par consquent, les conditions exprimentales de pH et de temprature T donnes par les figures 3a, 3b, 3c, 3d, 3e et 3f sont carter puisque la valeur du rapport molaire Ca/P correspondant loptimum est gale 1,49 ; 1,51 ou 1,53 diffrente de 1,50 qui est la valeur recherche.

113

pH = 6,0 T = 60 C 6 5 D 4 3 2

3a
6 5 D 4 3 2

pH = 6,0 T = 65 C

3b

1,2 1,4 [Ca2+] pH = 6,25 T = 60 C 6 5 D 4 3 2

0,8

1,0

1,6

3c
6 5 D 4 3 2

1,2 1,4 [Ca2+] pH = 6,25 T = 65 C

0,8

1,0

1,6

3d

0,8

1,0

1,2 1,4 [Ca2+]

1,6

0,8

1,0

1,2 1,4 [Ca2+]

1,6

pH = 6,5 T = 60 C 6 5 D 4 3 2

3e
6 5 D 4 3 2

pH = 6,5 T = 65 C

3a

0,8

1,0

1,2 1,4 [Ca2+]

1,6

0,8

1,0

1,2 1,4 [Ca2+]

1,6

Figure VI-3 : Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P en fonction de la concentration en calcium [Ca2+] mol.l-1 et de la dure de raction D en heures.

114

Dautre part, compte tenu des rsultats prcdents (figure VI-2 et tableau VI-5) qui montrent leffet positif de la temprature sur la rponse, en largissant le domaine dtude, la temprature devrait avoir un effet positif sur la rponse correspondant loptimum. Si nous construisons les courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide prpar en fixant dune part le pH la valeur de 6 (X1 = 0) et dautre part la temprature une valeur suprieure 65 C (X3 = 1), par exemple 67,5 C (X3 = 1,5) nous aurons certainement un optimum qui sera en accord avec notre objectif.

IV.2. Dtermination des conditions optimales

Pour confirmer notre hypothse, nous avons reprsent sur la figure VI-4 les courbes disorponses dans les conditions de pH et de temprature T fixs prcdemment. Effectivement, nous obtenons un optimum pour un rapport molaire de rapport Ca/P gal 1,5. Nous observons, que lorsque la dure de raction D augmente concentration en ion calcium [Ca2+] constante ou quand la concentration en ion calcium [Ca2+] croit simultanment avec la dure de raction D, le rapport molaire Ca/P du produit form croit jusqu' une valeur de 1,5 puis reste presque inchang.

pH = 6,0 T = 67,5 C

6 5 4 3 2

0,8

1,0

1,2 1,4 [Ca2+]

1,6

Figure VI-4 : Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide lav et sch en fonction de la concentration en ion calcium [Ca2+] mol.l-1 et de la dure de raction D en heures.
115

Pour une valeur de pH gale 6 (X1 = 0) et de temprature gale 67,5 C (X3 = 1,5), il existe plusieurs valeurs de concentration en ion calcium [Ca2+] et de dure de raction D qui permettent lobtention dun solide de rapport Ca/P gal 1,5. Par ailleurs, ltude de lquation du modle mathmatique montre que si : X1 = 0, X2 = 0, X3 = 1,5 et X4 = 0, le rapport molaire Ca/P du prcipit est alors gal 1,504. Cette valeur correspond au rapport molaire Ca/P du phosphate tricalcique apatitique. En conclusion de cette tude, on montre que pour prparer un produit pur en quantit suffisante pendant des dures minimales, nous avons choisi les conditions exprimentales suivantes : le pH est gal 6 (X1 = 0), la concentration totale en calcium actif [Ca2+] est gale 1,2 mol l-1 (X2 = 0), la temprature de la raction T gale 67,5 C (X3 = 1,5), et pour une dure de raction de 4 heures (X4 = 0).

IV.3.Vrification exprimentale
Afin de vrifier ce rsultat, nous avons ralis lexprience dans les conditions cites ci-dessus. Le solide obtenu lav et sch 80C est ensuite calcin 900 C puis caractris par diffraction des rayons X dont le diagramme est donn dans la figure VI-5 et spectroscopie infrarouge dont le spectre est donn dans la figure VI-6. Aucune phase trangre au phosphate tricalcique na t dcele par ces deux techniques. Labsence de lhydroxyapatite et du pyrophosphate de calcium confirme que le produit calcin est le phosphate tricalcique de rapport molaire Ca/P = 1,5 et par consquent le produit prcipit et sch 80 C est de formule (57) :

Ca9

(HPO4)(PO4)5OH

116

Figure VI-5 : Diagramme de diffraction des rayons X du solide lav et calcin 900 C lair, obtenu dans les conditions optimales.

Figure VI-6 : Spectre dabsorption infrarouge du solide lav et calcin 900 C lair, obtenu dans les conditions optimales.

117

CHAPITRE VII
MODELISATION ET OPTIMISATION DE LA SYNTHESE DUN PHOSPHATE DE CALCIUM CARBONATE

Les substituts osseux synthtiques utiliss actuellement en orthopdie sont gnralement des cramiques composes de phosphates de calcium telles que lhydroxyapatite et le phosphate tricalcique (95). Ces dernires annes, la recherche de composs de substitution los humain, offrant une alternative la greffe osseuse sest oriente vers ltude de la prparation de compos biphas diffrentes compositions en hydroxyapatite et phosphate tricalcique pouvant tre partiellement rsorbables in vivo (96,97) . Ltude in vitro de la culture cellulaire sur une srie de produits biphass de composition 70 % dhydroxyapatite et 30 % de phosphate tricalcique conduisant un rapport molaire Ca/P = 1,61, na montr aucune cytotoxicit de ces composs. La croissance cellulaire sest droule sur chaque chantillon et pour chaque type cellulaire de manire exponentielle (98). En nous basant sur ces donnes scientifiques, nous nous proposons dans ce chapitre, de modliser et doptimiser la synthse de phosphate de calcium apatitique carbonat afin de dterminer les conditions optimales dobtention dun phosphate de calcium de rapport Ca/P = 1,61. Cette tude a t mene par une approche similaire celle que nous avons effectue pour la modlisation et loptimisation de la synthse de lhydroxyapatite et le phosphate tricalcique apatitique par voie aqueuse.

I. PRESENTATION DE LA METHODOLOGIE DE LETUDE I.1. Facteurs choisis et leur domaine exprimental

Daprs des tudes pralables ralises dans le chapitre IV, nous avons plusieurs facteurs susceptibles dinfluencer sur la composition du solide final. Le domaine exprimental choisi pour tudier linfluence de ces cinq facteurs savoir : le pH du milieu aqueux, le rapport molaire Ca/P des ractifs, la masse en carbonate de calcium, la temprature lintrieur de ltuve et la dure de la raction D, sur le produit de la synthse est donn dans le tableau VII-1.

119

Tableau VII-1 : Domaine exprimental. Niveaux Variables codes X1,X2,X3,X4,X5 x1= pH Variables naturelles xi x2 = (Ca/P)r x3 = mCa : g x4 = D : h x5 = T : C -1,3408 6,33 1,506 0,610 -1 6,50 1,530 0,666 20 60 0 7,00 1,600 0,833 1 7,50 1,670 1,000 48 90 1,3408 7,67 1,694 1,056 -

X1= (x1 7,0)/0,5 ; X2 = (x2 1,6)/0,07 ; X3 = (x3 0,833)/0,5 ; X4 = (x4 34)/14 ; X5 = (x5 75)/15

I.2. Matrice dexpriences et quation du modle

Afin dobtenir une bonne qualit descriptive du modle et de permettre une prvision fiable dans lensemble du domaine exprimental considr, pour un nombre raisonnable de manipulations, nous avons choisi de raliser une matrice dexpriences construite de la faon suivante : Pour les trois variables trois niveaux, la solution est donc le plan composite centr dont le nombre dessais, pour P variables avec une exprience au centre est : 2P + 2P + 1 = N (quation 1). Soit N = 15 pour P = 3, le nombre impair ne permet aucun contraste quilibr entre les deux niveaux des autres variables X4 et X5. Lastuce est dajouter un essai au centre qui ne perturbe rien soit N = 16 qui est une puissance de 2. Malheureusement, ce nombre est infrieur au nombre de coefficients du modle qui sont au nombre de 19. Pour complter ce plan, il suffit de doubler le nombre dessais, soit 32 expriences. Mais, on peut diminuer ce nombre dessais : en effet, le terme 2P de lquation 1 devient un plan 24 o sintroduit naturellement X4 ou X5 en dfinissant la dernire variable par lintermdiaire des quatre premires : X5 = X1X2X3X4 ou X4 = X1X2X3X5. Ces 4 interactions sont toutes concomitantes des interactions triples que lon nglige. Les 16 premiers essais sont donc ceux du plan factoriel fractionnaire 25-1.

120

Quant aux 8 essais de la partie du plan toile du plan composite centr correspond aux points axiaux + nombre dexpriences au centre soit (2 x 3) + 2 = 8 des 3 premires variables, il est facile dy ajouter les contrastes ordinaires du plan 22 complet, rpt deux fois de manire obtenir lorthogonalit cherche. Il est donc inutile de rpter cette partie toile. Le tableau VII-2 rassemble lensemble de 16 + 8 = 24 essais, dfinissant la matrice dexpriences pour les facteurs pH, (Ca/P)r, mCa, D et T. La ime ligne de cette matrice dfinit les conditions exprimentales de la ime exprience. Le calcul de la distance des points axiaux est dtermin par la rsolution de lquation bicarre ordinaire : 16 ((16 + 22)2/24) = 0 soit

= 1,3408
Les 24 valeurs de Xi2 prsentent une somme diffrente de zro et une valeur moyenne de 19,59/24 = 0,816 ; par consquent les variables Xi2 sont remplaces par des variables centres Ui2 = Xi2 0,816. Lquation du modle thorique scrit donc :

= 0 +

jX j j= 1 b

jj' X jX j' jb j= 1 j' = 1 j '

jjU 2 j j= 1 b X

Ce modle comporte 19 termes : Terme constant Termes linaires Termes carrs Termes rectangles = 1, = 5, = 3, = 10.

121

Tableau VII-2 : Matrice dexpriences du plan composite centr. Ordre Ordre X1 + + + + + + + + pH x1 6,50 6,50 6,50 6,50 6,50 6,50 6,50 6,50 7,50 7,50 7,50 7,50 7,50 7,50 7,50 7,50 X2 + + + + + + + + 0 0 Ca/P x2 1,530 1,530 1,530 1,530 1,670 1,670 1,670 1,670 1,530 1,530 1,530 1,530 1,670 1,670 1,670 1,670 1,600 1,600 X3 + + + + + + + + 0 0 0 0 mCa x3 0,666 0,666 1,000 1,000 0,666 0,666 1,000 1,000 0,666 0,666 1,000 1,000 0,666 0,666 1,000 1,000 0,833 0,833 0,833 0,833 X4 + + + + + + + + + + + + Du x4 20 48 20 48 20 48 20 48 20 48 20 48 20 48 20 48 20 20 20 20 48 48 48 48 X5 + + + + + + + + + + + + T x5 90 60 60 90 60 90 90 60 60 90 90 60 90 60 60 90 60 60 90 90 60 60 90 90

adopt logique 5 1 6 11 23 15 20 18 2 7 14 22 9 8 12 13 24 21 16 4 17 3 19 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

-1,3408 6,33 +1,3408 767 0 0 0 0 0 0

7,00 -1,3408 1,506 7,00 +1,3408 1,694 7,00 7,00 7,00 7,00 0 0 0 0 1,600 1,600 1,600 1,600

-1.3408 0,610 +1.3408 1,056 0 0 0,833 0,833

122

II. RESULTATS EXPERIMENTAUX

Par analyse chimique des produits de synthse obtenus dans les diffrentes conditions exprimentales, nous avons dtermin les rapports molaires Ca/P correspondants que nous avons rassembls dans le tableau VII-3. Tableau VII-3 : Conditions opratoires et rsultats exprimentaux. Ordre logique 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 X1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 -1,3408 +1,3408 0 0 0 0 0 0 Valeurs des variables codes X2 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 0 0 -1,3408 +1,3408 0 0 0 0 X3 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 0 0 0 0 -1,3408 +1,3408 0 0 X4 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 +1 -1 -1 -1 -1 +1 +1 +1 +1 X5 +1 -1 -1 +1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 -1 +1 -1 -1 +1 -1 -1 +1 +1 -1 -1 +1 +1 rsultats (Ca/P)l 1,626 1,563 1,612 1,658 1,661 1,636 1,586 1,739 1,595 1,607 1,616 1,615 1,622 1,664 1,659 1,615 1,636 1,634 1,591 1,617 1,570 1,620 1,561 1,569

123

III. MODELISATION
Lanalyse statistique de ces rsultats, effectue au moyen du logiciel JMP, est reprsente dans les tableaux VII-4 et VII-5. Le tableau VII-4 montre que les variables retenues pour la modlisation de la rponse Ca/P ont dans leur ensemble un effet significatif un niveau de confiance de 99 % (Fexp(18,5) = 5.7810) est suprieure celle thorique (F0.01(18,5) = 4.59 ).

TableauVII-4 : Analyse de la variance de rgression pour la rponse Ca/P du produit lav. Source de variation REGRESSION RESIDU TOTAL Avec : Fexp : facteur de snedecor exprimental *** : significatif 99 % (F0.01(18,5) = 4,59) (86) Somme des carrs 0,0345874 0,00166193 0,03624933 Degrs de libert 18 5 23 Carr moyen 0,001922 0,000332 5,7810 0,0307 *** Fexp Signification

Le tableau VII-5 regroupe les coefficients du modle de la rponse Ca/P ainsi que leurs significations. Nous constatons que : pour un seuil de signification de 1 %, cest dire pour un niveau de confiance de 99 %, le rapport Ca/P du mlange initial a un effet positif alors que linteraction rapport Ca/P du mlange initial - temprature a un effet ngatif sur la valeur de la rponse rapport Ca/P du produit final lav, pour un seuil de signification de 5 %, cest dire pour un niveau de confiance de 95 %, les interactions pH - pH et (Ca/P) - (Ca/P) ont toutes les deux un effet positif sur la valeur de la rponse qui est le rapport Ca/P du produit final lav, pour un seuil de signification de 10 %, cest dire pour un niveau de confiance de 90 %, la dure a un effet ngatif sur la valeur de la rponse tandis que linteraction

124

masse en carbonate de calcium - dure a un effet positif sur la valeur de la rponse qui est le rapport Ca/P du produit final lav. Tableau VII-5: Estimation des coefficients et leurs significations. Coefficient (bu) b0 1.5721 Degrs de libert (u) Somme des carrs (SCbu) Valeur de Fexp Signification -

b1 b2 b3 b4 b5

-0,005751 0,002133 0,006418 0,006614 -0,009760

1 1 1 1 1

0,00061125 0,00841534 0,00076124 0,00077008 0,00167665

1,8390 25,3180 2,2902 2,3168 5,0443

NS *** NS NS *

b12 b13 b14 b15 b23 b24 b25 b34 b35 b45

-0,00225 -0,00575 -0,006124 1110

-7

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

0,00008100 0,00052900 0,00069306 0,00000000 0,00055225 0,00046866 0,00808088 0,00195796 0,00130960 0,00000032

0,2437 1,5915 2,0851 0 1,6615 1,41 24,3117 5,8906 3,9400 0,001

NS NS NS NS NS NS *** * * NS

-0,005875 0,0050358 -0,020911 0,010293 -0,008418 -0,000135

b11 b22 b33 *** ** * NS

0,03149627 0,0249627 0,0017391

1 1 1

0,00470340 0,00295400 0,00001434

14,1504 8,8873 0,031

** ** NS

: significatif 1 % (F0.01(1,5) = 16,26) : significatif 5 % (F0.05(1,5) = 6,61) : significatif 10 % (F0.10(1,5) = 4,06) : non significatif

Avec F ( 1, 2) est la fonction de Snedecor 1 et 2 degrs de libert pour une probabilit de .

125

Donc pour un seuil de signification de 10 % lquation du modle associe la rponse Ca/P scrit :

(Ca/P)103 = 1572 + 21 X2 - 10 X5 - 21 X2X5 + 10 X3X4 8 X3X5 + 31 X12 + 25 X22

La comparaison des rsultats exprimentaux et des rsultats calculs laide du logiciel J.M.P. (tableau VII-6) montre quon a une bonne estimation du modle.

IV. OPTIMISATION
Rappelons que le but de cette optimisation est de dterminer les conditions optimales de la synthse dun phosphate de calcium apatitique carbonat de rapport Ca/P = 1,61 qui pourrait tre utilis comme biomatriau synthtique de substitution osseuse.

IV.1. Analyse des courbes disorponse

La reprsentation gomtrique de la rponse dans lespace des variables, nous permet de tracer les courbes disorponse du rapport molaire Ca/P du solide en fonction de diffrents facteurs. Ainsi, nous pouvons dune part visualiser et analyser leffet des facteurs les plus signifiants sur la rponse et dautre part rechercher les conditions les plus favorables lobtention dun phosphate de calcium apatitique carbonat de rapport Ca/P = 1,61. La figure VII-1 regroupe trois courbes disorponse du rapport molaire Ca/P du solide (1a, 1b et 1c) en fonction du rapport molaire Ca/P des ractifs et respectivement la masse en carbonate de calcium mCa, la dure de raction D et la temprature de traitement T. Lorsque nous augmentons le rapport molaire Ca/P des ractifs en gardant la masse en carbonate de calcium m fixe (1a) ou la dure de raction D fixe (1b) ou la temprature de

126

Tableau VII-6 : Comparaison entre les valeurs calcules partir du modle et les rsultats exprimentaux pour la rponse rapport molaire Ca/P du solide lav et sch. N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 (Ca/P)exp 1,626 1,563 1,612 1,658 1,661 1,636 1,586 1,739 1,595 1,607 1,616 1,615 1,622 1,664 1,659 1,615 1,636 1,634 1,591 1,617 1,570 1,620 1,561 1,569 (Ca/P)cal 1,616 1,572 1,609 1,651 1,668 1,638 1,598 1,733 1,594 1,603 1,609 1,615 1,631 1,665 1,661 1,615 1,631 1,632 1,606 1,594 1,558 1,625 1,568 1,568 difference 0,010 -0,009 0,003 0,007 -0,007 -0,002 -0,002 -0,041 -0,001 0,004 0,005 0,000 -0,009 -0,001 -0,002 0,000 0,005 0,002 -0,096 0,023 0,012 -0,005 0,007 -0,001

127

pH = 7,0 D = 34 h T = 75 C 0,666

1a

mCa

0,833

1,000 1,530 1,600 Ca/P 1,670

pH = 7,0 mCa = 0,833g T = 75 C 48

1b

34

20 1,530 1,600 Ca/P 1,670

pH = 7,0 mCa = 0,833g D = 34h 90

1c

75

60

1,530

1,600 Ca/P

1,670

Figure VII-1 : Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du rapport molaire Ca/P des ractifs et respectivement de la masse mCa en g, de la dure de raction D en heures et de la temprature de traitement T en C.
128

traitement T fixe (1c), il apparat sur ces trois courbes disorponses, malgr leur allure diffrente, trois domaines de variation de la rponse. Un premier domaine o nous notons une lgre diminution de la rponse, un deuxime domaine o la rponse reste pratiquement constante puis un troisime domaine o la rponse croit. Cette mme observation est valable dans le cas de lanalyse des courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide (2a, 2b et 2c) en fonction du pH et respectivement de la masse en carbonate de calcium mCa, de la dure de raction D et de la temprature de traitement T, qui sont donnes par la figure VII-2. Nous notons sur ces trois courbes (2a, 2b et 2c) que le rapport molaire Ca/P du solide diminue puis reste sensiblement constant et enfin augmente, lorsque le pH augmente en maintenant soit la masse en carbonate de calcium m fixe ou la dure de raction D fixe ou la temprature de traitement T fixe. Si on se restreint uniquement lanalyse de ces six courbes, il savre que celles-ci sont insuffisantes pour dterminer les conditions optimales dobtention du produit dsir. La construction et lanalyse dautres surfaces disorponses deviennent donc indispensables pour complter cette tude qui consiste valuer linfluence de la masse en carbonate de calcium m, de la dure de la raction D et de la temprature de traitement T sur la rponse et dterminer les valeurs de ces facteurs qui conduisent la prparation du phosphate de calcium de rapport molaire Ca/P = 1,61. La figure VII-3 regroupe trois courbes disorponses (3a, 3b et 3c) du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et du rapport molaire Ca/P des ractifs des valeurs de dure de raction D gale 34 h (X4 = 0) et de temprature de traitement T gale 75 C (X4 = 0) en faisant varier la valeur de la masse en carbonate de calcium m de 0,666 g (X3 = -1) 1,000 g (X3 = 1). Nous observons nettement sur cette figure lexistence dune rgion optimale o le rapport molaire Ca/P du solide reste constant quand le pH varie rapport molaire Ca/P des ractifs fixe ou quand le rapport molaire Ca/P des ractifs varie pH fixe ou encore quand ces deux facteurs varient simultanment. Au fur et mesure que nous augmentons la masse du carbonate de calcium m de 0,666 g (X3 = -1) 1,000 g (X3 = 1) le rapport molaire Ca/P du solide correspondant la zone optimale augmente lgrement mais natteint pas la valeur recherche qui est de 1,61.

129

Ca/P = 1,600 D = 34h T = 75 C 0,666

2a

mCa

0,833

1,000

6,5

7,0 pH

7,5

Ca/P = 1,600 mCa = 0,833g T = 75 C

2b

48

34

20

6,5

7,0 pH

7,5

Ca/P = 1,600 mCa = 0,833 g D = 34h 90

2c

75

60

6,5

7,0 pH

7,5

Figure VII-2 : Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et respectivement de la masse m en g, de la dure de raction D en heures et de la temprature de traitement T en C.

130

mCa = 0,666g D = 34h T = 75 C 1,67

3a

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

mCa = 0,833g D = 34h T = 75 C 1,67

3b

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

mCa = 1,000g D = 34h T = 75 C 1,67

3a

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

Figure VII-3 : Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et du rapport molaire Ca/P des ractifs dure de raction D fixe et

temprature de traitement T fixe en variant la masse en carbonate de calcium m.

131

En vue de prparer un phosphate de calcium de rapport molaire Ca/P = 1,61, nous avons donc dcid de fixer la valeur de la masse en carbonate de calcium 1,000 g (X3 = 1) permettant ainsi la prparation dune quantit suffisante de ce produit et de faire varier les autres facteurs savoir la dure de raction D et la temprature de traitement T. La figure VII-4 regroupe trois courbes disorponses (4a, 4b et 4c) du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et du rapport molaire Ca/P des ractifs la valeur de masse en carbonate de calcium m = 1,000g (X3 = 1) et la valeur de temprature de traitement T = 75 C (X5 = 0) et des valeurs de dure de raction D respectivement gale 20 h (X4 = -1) ; 34 h (X4 = 0) et 48 h (X4 = 1). Nous pouvons constater sur cette figure leffet positif de la dure de raction D sur la rponse qui se traduit par une augmentation de la valeur du rapport molaire Ca/P du solide correspondant la rgion optimale de 1,57 1,60 quand la dure de raction croit de 20 h (X4 = -1) 48 h (X4 = 1). Il est donc conseill de travailler dans des conditions telles que la dure de raction soit gale 48 h (X4 = 1). Afin dvaluer linfluence de la temprature de traitement T sur la rponse, nous avons construit trois courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et du rapport molaire Ca/P des ractifs tout en fixant la valeur de la masse en carbonate de calcium m 1,000 g (X3 = 1) et la valeur de la dure de raction D 48 h (X4 = 1) et en variant la temprature de traitement T de 60 C (X5 = -1) 90 C (X4= 1). Les trois courbes respectives (5a, 5b et 5c) sont regroupes dans la figure VII-5. Il apparat sur cette figure que la temprature a un effet ngatif sur la rponse, puisque le rapport molaire Ca/P du solide correspondant la rgion optimale diminue de 1,60 1,58 quand la temprature de traitement augmente de 60 C (X5 = -1) 90 C (X4= 1). Par consquent, il faut viter de travailler dans les conditions o la temprature est leve. Pour des raisons purement conomiques, nous avons choisi pour la synthse du phosphate de calcium dsir des tempratures de traitement les moins leves comme par exemple 60 C.

IV.2. Dtermination des conditions optimales

Cependant, nous navons pas encore atteint notre objectif. En effet, si nous nous plaons dans les conditions que nous avons choisies c'est--dire la masse en carbonate de calcium m = 1,000 g (X3 = 1), la dure de raction D = 48 h (X4 = 1) et temprature de traitement T = 60 C (X5 = -1) la courbe disorponses (5a) montre que le rapport molaire

132

mCa = 1,000g D = 20h T = 75 C 1,67

4a

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

mCa = 1,000g D = 34h T = 75 C 1,67

4b

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

mCa = 1,000g D = 48h T = 75 C 1,67

4c

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

Figure VII-4 : Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et du rapport molaire Ca/P des ractifs masse en carbonate de calcium m fixe et temprature de traitement T fixe en variant la dure de raction D.

133

mCa = 1,000g D = 48h T = 60 C 1,67

5a

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

mCa = 1,000g D = 48h T = 75 C 1,67

5b

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

mCa = 1,000g D = 48h T = 90 C 1,67

5c

Ca/P

1,60

1,53 6,5 7,0 pH 7,5

Figure VII-5: Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et du rapport molaire Ca/P des ractifs masse en carbonate de calcium m fixe et dure de raction D fixe en variant la temprature de traitement T.

134

Ca/P du solide correspondant la zone optimale est de 1,60 diffrent de celui recherch qui est de 1,61. Il est donc ncessaire de faire varier les facteurs qui ont un effet positif sur la rponse de faon augmenter la valeur du rapport Ca/P du solide correspondant la zone optimale. Daprs le tableau VII-5, nous relevons que la masse du carbonate de calcium m et la dure de raction D ont tous les deux un effet positif sur la rponse. Donc nous avons pens augmenter lgrement la masse mCa .La courbe disorponses du rapport molaire Ca/P du solide obtenu est donne par la figure VII-6.

mCa = 1,033g D = 48h T = 60 C

5b

1,67

Ca/P

1,60

1,53

6,5

7,0 pH

7,5

Figure VII-6: Courbes disorponses du rapport molaire Ca/P du solide en fonction du pH et du rapport molaire Ca/P des ractifs. Lanalyse de cette courbe nous montre que pour une valeur de X3 gale 1,2 (mCa = 1,033 g), une valeur de X4 gale 1 (D = 48 h) et une valeur de X5 gale -1 (T = 60 C), il existe plusieurs valeurs du pH et du rapport molaire Ca/P des ractifs qui conduisent un solide de rapport molaire Ca/P gale 1,61. Nous allons donc choisir des conditions qui nous paraissent les plus favorables lobtention de ce produit qui sont :

135

X1 = 0,5 quivaut un pH gal 7,25 X2 = -0,5 quivaut un rapport molaire Ca/P des ractifs gal 1,565

En conclusion de cette analyse, on en dduit quun phosphate de calcium apatitique de rapport Ca/P gal 1.61peut tre prpar dans les conditions suivantes : le pH est gal 7,25 (X1 = 0,5), le rapport Ca/P initial est gal 1,565 (X2 = - 0,5), la masse en calcium mCa est gale 1,033g (X3= 1,2), la dure de raction est de 48 heures (X4 = 1), et une temprature de traitement gale 60 C (X5 = -1).

IV.3. Vrification exprimentale

Lexprience en ce point a t ralis et le produit obtenu, lav et sch e a t analys par diffraction des rayons X et spectroscopie dabsorption infrarouge. Ltude du diagramme de diffraction des rayons X (figure VII-7) et du spectre dabsorption infrarouge (figure VII-8) du produit synthtis dans les conditions optimales montre la formation dun phosphate de calcium carbonat mal cristallis et de structure apatitique. Aucune phase trangre lapatite na t dtecte par ces deux techniques. Par analyse chimique, les teneurs des diffrents constituants de ce phosphate ont t dtermins afin de calculer le rapport molaire Ca/P du solide prpar et dtablir la formule chimique correspondante que lon peut reprsenter sous la forme suivante :

Ca9,49(PO4 )5,49(HPO4)0,38(CO3)0,13 (OH)1,49

136

+
25

+
30

+
35

+
40

+
45

Figure VII-7 : Diagramme de diffraction des rayons X du produit prpar dans les conditions optimales.

+
4000

+
3500

+
3000

+
2500

+
2000

+
1500

+
1000

+
500 cm-1

Figure VII-8 : Spectre dabsorption infrarouge du produit prpar dans les conditions optimales.
137

CONCLUSION GENERALE

Compte tenu des proprits biologiques du carbonate de calcium et sa disponibilit en bonne quantit au Maroc, nous avons utilis le carbonate de calcium sous forme de calcite comme prcurseur de calcium. Dautre part, comme prcurseur de phosphate, nous avons choisi lacide phosphorique qui est un driv de la premire richesse marocaine : le
(68)

phosphate naturel. Ainsi, dans la premire partie de ce travail, nous avons montr quil est possible de prparer une hydroxyapatite phosphocalcique stoechiomtrique et un phosphate tricalcique apatitique (87) par une mthode qui dcoule directement de la mthode de double dcomposition, dcrite dans la littrature, qui consiste prcipiter le phosphate de calcium dsir, partir dun sel de calcium et dun sel de phosphate, en milieu ammoniacal. Nous nous sommes galement intresss la synthse dun phosphate de calcium carbonat de structure apatitique par voie hydrothermale partir du carbonate de calcium et de lhydrognophosphate dammonium. Cette mthode est la plus utilise dans lindustrie de fabrication des biomatriaux, aprs la mthode de double dcomposition. La caractrisation par diffraction des rayons X et spectroscopie infrarouge des produits prpars dans diffrentes conditions de synthse a montr que le rapport atomique Ca/P initial du mlange, le temps de sjour du mlange et la temprature de traitement du mlange ont une influence sur leur stoechiomtrie et par consquent sur leur composition chimique. Dautre part, dans la deuxime partie de ce travail et dans le but de dterminer les conditions optimales de synthse de ces phosphates, nous avons t amens raliser une recherche exprimentale planifie. Ainsi, un plan composite centr a t dfini, dans lequel on a tenu compte de linfluence des facteurs importants tels que :

dans le cas de lhydroxyapatite : le pH du milieu aqueux (X1), le rapport molaire Ca/P des ractifs (X2), la concentration en calcium ractif (X3) et la dure de la raction (X4),

dans le cas du phosphate tricalcique : le pH du milieu aqueux (X1), la concentration en calcium ractif (X2), la temprature (X3) et la dure de la raction (X4), dans le cas du phosphate carbonat apatitique : le pH du milieu aqueux (X1), le rapport molaire Ca/P des ractifs (X2), la masse en carbonate de calcium (X3), la dure de la raction (X4) et la temprature(X5). Les facteurs influents tant choisis, nous avons pu reprsenter par une quation

polynomiale du second degr les variations de la rponse Y (rapport molaire Ca/P du solide

139

prpar) en fonction de ces facteurs. Les coefficients ont t dtermins grce aux essais raliss, par un calcul de rgression multilinaire utilisant le critre des moindres carrs. Le modle empirique retenu est :

dans le cas de la prparation de lhydroxyapatite

(Ca/P)103 = 1683 + 30 X1 10,5 X2 6,8 X3 + 12,8 X4 12,5 X1X2+ 10,5 X1X3 14,1 X2X3 + 11,4 X3X4

dans le cas de la prparation du phosphate tricalcique

(Ca/P)103 = 1488 + 25 X1 + 6 X2 + 10 X3 + 3 X4 + 8 X1X2 + 5 X1X3 + 6 X1X4 6 X2X3 + 9 X3X4 + 3 X12 3 X22 10 X42

dans le cas de la prparation du phosphate de calcium carbonat apatitique

(Ca/P)103 = 1572 + 21X2 - 10 X5 - 21 X2X5 + 10 X3X4 8 X3X5 + 31X12 + 25X22

Ltude des courbes disorponses qui sont la reprsentation graphique de la rponse Y(rapport molaire Ca/P) dans lespace des variables, nous a permis de dterminer des conditions optimales de synthse de chacun des phosphates tudis et qui sont :

dans le cas de la prparation de lhydroxyapatite - pH = 7, - Ca/P initial = 1,667, - [Ca2+] = 1,25 mol l-1, - D = 2 heures 45 minutes.

140

dans le cas de la prparation du phosphate tricalcique - pH = 6, - [Ca2+] = 1,2 mol l-1, - T = 67,5 C, - D = 4 heures. dans le cas de la prparation du phosphate de calcium carbonat apatitique - pH = 7,25, - Ca/P initial = 1,565, - mCa = 1,033g, - D = 48 heures, - T = 60 C. Par ce travail, nous avons contribu la prparation de phosphates de calcium par

diffrentes mthodes de synthse. La continuit de ce travail consiste valuer les proprits biologiques de ces produits, dans une premire tape in vitro et dans une seconde tape in vivo. Ces exprimentations seront effectues par la mise en contact de ces produits avec des liquides physiologiques sans prsence cellulaire, puis dans un milieu cellulaire.

141

ANNEXE
METHODE DE CARACTERISATION ET DANALYSES

I. DIFFRACTION DES RAYONS X SUR POUDRES (99)

Le principe repose sur l'interaction entre un faisceau de rayons X de longueur d'onde donne et les atomes ou groupe d'atomes qui se rptent de manire priodique dans les trois dimensions de l'espace du rseau cristallin observ. Les rayons X de longueur d'onde peuvent se rflchir sur les plans rticulaires dtermins par la loi de Bragg suivant un angle : 2d sin = n avec : d : distance inter-rticulaire, n : ordre de diffraction. Grce cette technique nous obtenons diffrentes informations : Identification et puret des diffrentes poudres, Connaissance des structures cristallines corrobores par les banques de donnes (JCPDS) ; chaque spectre prsente une empreinte unique.

Mthode :
Cette analyse a t faite systmatiquement pour toutes les poudres synthtises. Les poudres ont t sches puis broyes dans un mortier, ensuite tamises afin de n'obtenir que des petites particules et viter ainsi l'orientation prfrentielle des cristaux. Les diffrents diagrammes ont t effectus sur un diffractomtre SEIFERT XRD 3000 P dans les conditions suivantes : 30 kV de tension, intensit 25 mA, suivant un angle : 25 < 2 < 50 . Les donnes radiocristallographiques sont collectes avec une radiation monochromatique K de cuivre ou cobalt. Aprs traitement nous avons obtenu un spectre qui a t trait par le logiciel Easy Plot.

II. SPECTROSCOPIE INFRAROUGE (100,101)

Les liaisons interatomiques sont, l'tat fondamental, au niveau d'nergie vibrationnelle

0. Irradies dans les domaines infrarouge (4000 cm-1 400 cm-1) et / ou proche infrarouge
143

(400 cm-1 10 cm-1), les liaisons sont susceptibles de changer de mode normal vibratoire, c'est dire, d'atteindre un niveau d'nergie vibrationnelle suprieur 1, 2, 3... Les diffrents modes vibratoires normaux se traduisent physiquement par une longation, une flexion ou une vibration de la molcule (ou groupement atomique) par rsonance. Les niveaux d'nergie vibrationnelle sont fixs par les forces interatomiques, la masse des atomes lis et les contraintes imposes par les atomes voisins. Ainsi, l'nergie (ou la frquence) mise ou absorbe par une molcule lorsqu'elle change de mode normal vibratoire est caractristique de sa nature chimique et de sa position au sein du rseau. La spectromtrie infrarouge consiste irradier l'chantillon dans le domaine 4000 400 cm-1 et dtecter les frquences absorbes par ce dernier. Seuls les modes normaux vibratoires induisant un dplacement du barycentre des charges du groupement atomique sont actifs en spectromtrie infrarouge. A l'occasion de l'tude des phosphates de calcium, la spectroscopie infrarouge donne certaines informations : - Identit du compos tudi par comparaison aux diffrentes banques de donnes, - Prsence de groupements fonctionnels HPO42-, CO32-, PO43-, OH- (102, 103), - Environnement des groupements fonctionnels, Type et le taux de substitution et les effets sur les vibrations des groupements

fonctionnels.

Mthode :
Nous avons pass l'infrarouge les poudres synthtises pour dceler d'ventuels rsidus. 3 mg de poudre sont broyes avec 300 mg de bromure de potassium (KBr), puis comprimes 10 tonnes pendant 20 s pour obtenir une pastille trs fine. Cette pastille est analyse l'aide d'un spectromtre infrarouge Perkin-Elmer 1600 FTIR. La rfrence tant une pastille de KBr (300 mg). Pour chacun des chantillons le signal est effectu sur une gamme spectrale s'tendant de 400 4000 cm-1.

144

III. MICROSCOPIE ELECTRONIQUE A BALAYAGE (104)

La microscopie lectronique balayage permet l'tude de la surface d'un chantillon massif. Lorsqu'un chantillon est bombard par des lectrons primaires de faible nergie, la pntration de ces derniers est peu importante et est limite un petit volume. Dans ce volume, les lectrons subissent des pertes nergtiques et provoquent l'excitation d'autres lectrons, ceux-ci de faible nergie sont appels lectrons secondaires. Ces lectrons permettent l'observation de la surface, laquelle donne l'impression d'une vue en trois dimensions. Lorsque l'nergie des lectrons primaires est grande, d'autres lectrons peuvent tre arrachs au matriau. Ce sont des lectrons rtrodiffuss qui possdent une grande nergie (50 kev), cette mthode donne une information sur la densit de l'chantillon. Plus les lments tudis sont lourds, plus la quantit des lectrons renvoys est importante. A l'cran, ce phnomne se traduit par une intensit de lumire plus importante dans les zones les plus denses, c'est dire o les lments sont les plus lourds. Cette densit est proportionnelle une coloration entre niveaux de gris. Le microscope lectronique balayage utilis est un Quanta 200 coupl avec un ordinateur permettant la prise d'image. L'mission d'lectrons se fait grce un filament de tungstne.

IV.

ANALYSE CHIMIQUE IV.1. Dosage du calcium

Le dosage du calcium est ralis par complexomtrie avec lacide thylne diamine

ttraactique (EDTA) en prsence dammoniaque

(105, 106)

. Lexcs dEDTA est ensuite dos

par une solution titre de chlorure de zinc. Lindicateur de virage est le noir riochrome. Lerreur sur la teneur en calcium est de lordre de 0,5%.

IV.2. Dosage du phosphore

Dans les solides tudis, le phosphore peut se prsenter sous forme de groupements orthophosphorique PO43- ou hydrognophosphoriquesHPO42-. Les ions PO43- se dose en gnral par colorimtrie
(107)

. Le principe de cette mthode

consiste mesurer, en milieu acide, la densit optique (absorbance) de la coloration jauntre du complexe phosphovanadomolybdique (VO3[P(Mo3O10)4]) = 460nm. Le ractif
145

colorimtrique est prpar en mlangeant une solution de molybdate dammonium (80 g.l-1) et une solution de monvanadate dammonium (4 g.l-1) dans la proportion 50/50 en volume. Les ions HPO42- se condensent haute temprature pour donner des ions P2O74suivant la raction : 2 HPO42Une tude
(108)

P2O74- + H2O

conduite sur lOCPa et le PTCa a montr que le taux maximal de

condensation est atteint ds 20 mn de chauffage 600 C (Fig.1). Cette dure et cette temprature ont t adoptes pour la dtermination de la teneur en ions HPO42-.

Figure 1 : Variation du taux de phosphore sous forme dions pyrophosphate en fonction de la temprature de calcination

Aprs calcination des chantillons synthtiss 600 C pendant 20 mn, les ions P2O74ne ragissent pas avec le ractif colorimtrique, il est ncessaire dhydrolyser pralablement les liaisons P-O-P (108) . Cette hydrolyse seffectue 100 C en milieu acide. Les ions PO43- sont doss donc avant et aprs hydrolyse suivant la mthode dcrite prcdemment.

146

o Pt : nombre total datomes de phosphore obtenu par dosage aprs hydrolyse. Ph : nombre datomes de phosphore sous forme dions HPO42- obtenu par la diffrence entre les nombres datomes de phosphore dtermins avant et aprs hydrolyse. Les absorbances des diffrentes solutions ont t mesures, dans des cuves en quartz, laide dun spectrophotomtre UV-visible double faisceau. La prcision du dosage du phosphore a t dtermine avec une erreur relative de 0,5 %.

IV.3. Dosage des ions carbonates

Ce dosage consiste dterminer la quantit de gaz libre par attaque acide des chantillons selon le schma ractionnel : CO32+ H3O+ CO2 + H2O

Lattaque par lacide perchlorique de 25 mg dchantillon produit un dgagement de gaz carbonique. Cette quantit est mesure par volumtrie laide dun montage qui comprend une enceinte ractionnelle dont la partie infrieure contient le produit et la partie latrale sous forme dun bec coud contient lacide perchlorique. Ce racteur est reli un tube calibr rempli de mercure destin mesurer le volume dgag. Lincertitude relative sur la teneur en oxygne est de lordre de 2 %.

147

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ANNEE : 2007 DOCTORAT DETAT

NUMERO DORDRE : 2326

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------Titre de la thse : Modlisation et optimisation par la mthodologie des plans dexpriences de la synthse : De lhydroxyapatite phosphocalcique Du phosphate tricalcique apatitique Du phosphate de calcium apatitique carbonat -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------

NOM PRENOM : BRITEL OUAFAE SPECIALITE : Chimie Physique RESUME : (150 MOTS)

Afin de valoriser des produits locaux tels que le carbonate de calcium et lacide phosphorique, nous avons utilis ces produits comme ractifs de synthse de phosphates de calcium employs comme biomatriaux. Dans la premire partie de ce mmoire, nous avons mis au point une nouvelle mthode de synthse de trois phosphates de calcium : une hydroxyapatite phosphocalcique stchiomtrique et un phosphate tricalcique apatitique par la mthode de double dcomposition dune part, et un phosphate de calcium apatitique carbonat par voie hydrothermale dautre part. Ces produits ont t caractriss par diffrentes techniques telles que la diffraction des rayons X, la spectroscopie infrarouge, la microscopie lectronique balayage et lanalyse chimique. La deuxime partie a t consacre la modlisation de la synthse de ces phosphates et la dtermination des conditions optimales qui conduisent aux produits souhaits. Cette tude a t mene en appliquant la mthodologie des plans dexpriences. Ainsi, nous avons pu tablir, dans chacun des cas, un modle mathmatique qui dcrit la variation du rapport molaire Ca/P du produit en fonction des diffrents facteurs influenant la synthse. Lanalyse des courbes disorponses nous a permis de rpondre aux objectifs fixs pour la synthse de chacun de ces phosphates.

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------Mots-cls : plans dexpriences, synthse, phosphates de calcium, carbonate de calcium. ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------