XXVIII Congreso Interamericano de Ingeniera Sanitaria y Ambiental Cancn, Mxico, 27 al 31 de octubre, 2002

DEGRADACIN DE DIESEL MEXICANO POR BACTERIAS DE UN SUELO AGRCOLA Y OXIDACIN CON PERXIDO DE HIDRGENO
Santiago Alonso Cardona Gallo Instituto de Ingeniera. Coordinacin de Ingeniera Ambiental. Grupo: Saneamiento de suelos y acuferos. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Doctorado: Doctorado en Ingeniera Ambiental-UNAM. En proceso. Maestra: Maestra en Ingeniera Ambiental-UNAM. Se han desarrollado 25 proyectos de ingeniera ambiental desde 1994 a la fecha. Instituto de Ingeniera, Coordinacin de Ingeniera Ambiental, Grupo: Saneamiento de suelos y acuferos. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Apartado Postal 70-472, Mxico D.F. Tel. 56223335 ext, 04. Fax: 56162164. Email: sancardona@hotmail.com. RESUMEN Se determina la cintica de biotransformacin, oxidacin y adsorcin del diesel para su aplicacin en los proyectos de saneamiento de suelos y acuferos contaminados con diesel. Se presenta la metodologa y los resultados de la biodegradacin, oxidacin y la adsorcin del diesel contenido en agua sinttica as como la caracterizacin del suelo de agrcola seleccionado para el estudio. La degradacin se realiz utilizando los microrganismos nativos del suelo de agrcola seleccionado, al cual se le suministr nitrgeno como nutriente (abono agrcola al 46%) y sin l. El perxido de hidrgeno al 50% industrial se suministr como fuente de oxgeno. Para la etapa oxidativa se uso perxido de hidrgeno como agente oxidante del diesel. Por ltimo se presentan los anlisis de la volatilizacin del diesel. Con los resultados obtenidos se determinaron las ecuaciones cinticas de degradacin, oxidacin, adsorcin y se obtuvieron las constantes de velocidad. Se determina la velocidad de biotransformacin de 0.04204 d-1 para un intervalo de concentracin de 31,480 a 12,602 mg/L y un tiempo de vida media de 16.5 das. Se obtuvo una velocidad de oxidacin de 0.1128 d-1 y un tiempo de vida media de 6.14 das. Tambin se observ el aumento de la biomasa del suelo con cuenta en placa y los slidos suspendidos voltiles. El coeficiente de distribucin del diesel en el suelo es de 0.8 mL/g y la capacidad mxima de adsorcin del suelo, es Cs de 17.40 mg/g. No se apreci volatilizacin en las pruebas con diesel. Palabras Claves: Biodegradacin , diesel, perxido de hidrgeno, nutrientes, cinticas. INTRODUCCION La biodegradacin de hidrocarburos del petrleo (HP) por las poblaciones microbianas nativas representan uno de los principales mecanismos por el cual el petrleo y sus derivados puede disminuir su presencia en el ambiente, teniendo identificados los principales factores para el suelo: fisicoqumicos y biolgicos (pH, Humedad, nutrientes, tamao de la partcula y homogeneidad, conductividad hidrulica, densidades del suelo, color, textura, slidos suspendidos voltiles, capacidad de campo, contenido de materia orgnica y la densidad de microrganismos en el suelo, UFC/g). La contaminacin de acuferos con HP es un problema ambiental de grandes proporciones que ha permitido el desarrollo de diversas tecnologas (Hunkeler et al, 1998). El tratamiento in situ ha tenido una especial atencin debido a que permite una completa mineralizacin de los HP sin profundas excavaciones de la zona contaminada ni la aplicacin de sistemas de saneamientos costosos (Hunkeler et al, 1998). En acuferos contaminados con HP las poblaciones de microrganismos nativas que pueden mineralizar los HP son comnmente utilizadas (Atlas et al, 1972, Cassidy et al, 1997, Hunkeler et al, 1998, Jackson, 1994, Suthersan, 1997). En las zonas contaminadas la biorremediacin en el sitio usa esquemas de oxidantes externos, O2, H2O2 para estimular, incrementar y mejorar las tasa de degradacin (Fiorenza et al, 2000, Hunkeler et al, 1998, Pardieck et al,1992). Se ha propuesto la cintica de degradacin de primer orden para la biotransformacin del diesel en sistemas aerobios (Jackson, 1994, Suthersan, 1997). Se han reportado variados trabajos referentes a la biodegradacin del diesel bajo diferentes condiciones ambientales, concentracin, nutrientes, pH y densidad de microrganismos (Cassidy et al, 1997, Deyta, 1997, Hunkeler et al, 1998, Jackson, 1990, 1992y 1994, Marquez-Rocha et al, 2001, Jackson, 1990, 1992 y 1994, Suthersan, 1997, Yang et al,2000, Zegarra, 2000). Los reactores fuera del sitio permiten la verificacin de la mineralizacin de los HP. La oxidacin qumica in situ involucra la liberacin y distribucin de agentes oxidantes dentro de subsuperficie para transformar y en algunos casos lograr la mineralizacin de los contaminantes, reducir la masa, la movilidad y la toxicidad del contaminante. La ventaja 1

competitiva del proceso radica en la rapidez de la reaccin con los compuestos lo cual facilita la remediacin, acelera la limpieza del sitio y puede remover compuestos remanentes. Se ha impulsado la aplicacin del perxido de hidrgeno cuya descomposicin de productos son agua, oxigeno y productos no txicos y la formacin de radicales de hidrxilo, el cual es el oxidante ms potente conocido. La cintica de transformacin se rige por la reaccin de primer orden (Crittenden, et al, 1999, Suthersan, 1997, Jenkins y Snoeyink, 1997, Siegrist, 2000). Para la adsorcin del diesel en suelo los datos han presentado un mejor ajuste con el modelo de Freundlich (Bedient et al, 1994, Iturbe y Silva, 1992). En este estudio, el objetivo fue obtener la evolucin de la mineralizacin de la mezcla de diesel en condiciones aerobias por medio de un suelo de agrcola con suministro de oxigeno (H2O2) con adicin de nitrgeno a escala de laboratorio por medio de reactores batch, la determinacin de la cintica y ecuacin de oxidacin del diesel por H2O2 y la determinacin de su capacidad mxima de adsorcin, as como el coeficiente de distribucin de diesel en el suelo agrcola utilizado. Se determinaron los modelos cinticos de degradacin biolgica de primer orden de acuerdo con la ecuacin de Michaelis-Menten (Cassidy et al, 1997, Jackson, 1990, 1992 y 1994, Mrquez-Rocha et al, 2001, Yang et al, 2000). Se propuso el uso del H2O2 por su fcil manejo, almacenamiento, econmico y por tener la capacidad de disolverse siete veces mas que el O2 en el agua (Pardieck et al, 1992). METODOLOGIA CARACTERIZACIN DEL SUELO El suelo seleccionado para el estudio corresponde a un suelo agrcola del Rancho San Francisco, ubicado en San Andrs Mixquic, Mxico, D.F., propiedad de la Facultad de Veterinaria de la UNAM. La caracterizacin del suelo permiti obtener las propiedades fsicas y qumicas para poder acoplarlas al diseo de la barrera reactiva permeable. Los anlisis del suelo se realizan de acuerdo con los procedimientos validados por la Soil Science Society of America, Inc. y American Society of Agronomy, Inc. de Estados Unidos de Norteamrica. Se determinaron: porcentaje de humedad, porcentaje de materia orgnica, pH, nitrgeno, fsforo, clasificacin del suelo, conductividad elctrica, slidos suspendidos voltiles, densidades, porosidad, textura, color, conductividad hidrulica, capacidad de campo y la densidad de biomasa (UFC/gr). CINTICAS DE BIODEGRADACIN Para estas pruebas se utiliz el suelo con aplicacin de nitrgeno como nutriente y sin l. El procedimiento consisti en agregar 20 gramos de suelo en un vial de 40 mL. Luego se aplic la concentracin de diesel para cada corrida. Se adicion nitrgeno de acuerdo con los requerimientos del suelo: 120 mg amonio (46% de nitrgeno) por 20 gramos de suelo. No se adicion fsforo por el alto contenido del nutriente en el suelo. La adicin del H2O2 se realiz paulatinamente durante ocho das hasta alcanzar 2.5 mL. Se compar con un suelo sin nutrientes con el mismo procedimiento anterior. Igual que el perxido de hidrgeno, el nitrgeno se aplic en bajas cantidades por pulsos durante ocho das hasta lograr lo requerido por los organismos para evitar la toxicidad y lograr la aclimatacin (Fiorenza, et al, 1997 y 2000, Mrqez-Rocha et al, 2001, Pardieck et al, 1992). Posteriormente se tomaron muestras durante diez das a partir de los ocho de aclimatacin. Los ensayos de las cinticas se realizaron en tres corridas con concentraciones diferentes y por duplicado. Las concentraciones aplicadas en el estudio se consideraron de las investigaciones realizadas, donde se recomienda para degradar diesel un valor menor de 40,000 mg/L aunque otros autores recomiendan menores a 100,000 mg/L (Zegarra, 2000). Los reactores utilizados fueron los recomendados para el anlisis en cromatografa de gases de material de vidrio oscuro con rosca de seguridad para evitar la volatilizacin. Finalmente se analiz el sobrenadante del vial en el cromatgrafo de gases con selector de masa 5890 serie II de marca Hewlett Packcard, con el mtodo de la EPA. El modelo del proceso biolgico se simul a partir de la reaccin enzimtica de Michaelis-Menten que determina una reaccin cintica de primer orden, dC/dt= -kC, considerando la concentracin de la enzima constante, C=C0-kt, donde C= concentracin de diesel a un tiempo t, C0 = Concentracin inicial de diesel, t= tiempo de residencia y k = constante cintica de biodegradacin. El diesel, el nitrgeno y el perxido de hidrgeno se suministraron de acuerdo con la relacin estequiomtrica de biodegradacin aerobia para hidrocarburos propuesta por McCarty (1988) y la ecuacin para diesel recomendada por Jackson (1990) C15H30, 4C15H30 + 45O2 + 9NH3 9C5H7O2N + 42H2O + 15CO2.

PROCESO DE OXIDACIN Se determinaron las cinticas de oxidacin del diesel por medio del perxido de hidrgeno para obtener su velocidad de transformacin. La prueba de oxidacin se realiz por triplicado con una concentracin en cada vial de 40,000 mg/L diesel. Se agreg 25 mL de la solucin sinttica contaminada. Luego se aplicaron 6.104 mL de H2O2 de acuerdo con la ecuacin estequiomtrica propuesta por Jackson (1990), C15H18+45H2O2 60H2O+15CO2. Los viales se colocaron bajo agitacin por 48 horas a 50 revoluciones por minuto. Finalmente se analiz el diesel remanente en fase lquida. A partir de las 32 horas se tomaron muestras por duplicado hasta alcanzar la vida media del diesel. Para todos los anlisis se utiliz un cromatgrafo de gases con selector de masa 5890 serie II de marca Hewlett Packcard. PROCESO DE ADSORCIN Y DETERMINACIN DEL COEFICIENTE DE ADSORCIN DEL DIESEL Las pruebas de adsorcin se realizaron con la finalidad de conocer la cantidad de diesel que se adsorbe en el suelo y determinar el coeficiente de distribucin del diesel en el suelo. Para las pruebas se utilizaron viales de 40 mL. Se pesaron 20 gramos de suelo y se aplicaron a los viales por triplicado. A cada vial se le agreg 30 mL de pentano. Para el diesel se colocaron cinco concentraciones diferentes en los viales (40,000; 30,000; 20,000; 10;000 y 5,000 mg/L). Finalmente se pusieron los viales bajo agitacin horizontal durante 48 horas a 50 revoluciones por minuto. Se analiz el sobrenadante del vial en el cromatgrafo de gases con selector de masa 5890 serie II de marca Hewlett Packcard. Se plante la ecuacin y la grfica para determinar el coeficiente de distribucin del diesel, Kd (Bedient et al, 1994, Iturbe y Silva, 1992). Para calcular la concentracin del compuesto adsorbida en la masa de suelo Cs, se emple la siguiente ecuacin:

Cs =

(C o C w )
W

V , donde Cs = concentracin de diesel adsorbido por el suelo (mg/g), Co = concentracin inicial de

diesel (mg/L), Cw = concentracin de equilibrio (mg/L), V= volumen de la solucin (L) y W= masa del suelo (g). El coeficiente de distribucin Kd se obtuvo de acuerdo con el modelo de adsorcin de Kd, Cs = Kd Cw, donde Kd corresponde a la pendiente de la recta de regresin obtenida al grficar los valores de Cw, en la abscisa y Cs en la ordenada (Bedient et al,1994, Iturbe y Silva, 1992). El coeficiente de distribucin expresa la relacin de equilibrio entre la fase slida y la fase lquida, presentando unidades de volumen de solucin/masa de la fase slida, mL/g. VOLATILIZACIN DEL DIESEL Se llev a cabo el ensayo de volatilizacin de diesel durante ocho das por duplicado (Mrquez-Rocha et al, 2001). Se aplic a cada vial una concentracin aproximada de 57,800 mg/L de diesel y luego se agit a 50 rpm. Finalmente se analiz en el cromatgrafo de gases la concentracin no volatilizada. RESULTADOS Y DISCUSION BIODEGRADACIN Primera corrida : Es esta etapa se aplic una corrida con nutrientes (nitrgeno) y H2O2 como fuente de oxigeno al suelo y otra sin nutrientes. Con nutrientes y H2O2:
B io d e g r a d a c i n d e l d ie s e l
1 .2 1 0 .8 0 .6 0 .4 0 .2 0 0 4 8 T ie m p o 1 2 ( d a s ) 1 6 2 0 y = - 0 .0 4 4 4 x + 1 .0 7 7 R 2 = 0 .7 1 7 2

FIGURA 1: Cintica de biodegradacin de diesel.

Sin nutrientes: Suelo+H2O2

Biodegradacin del diesel sin nutrientes

1.5 1 0.5 0 0 5 10 Tiempo (das) 15

y = -0.0356x + 1.1556 R = 0.6057

2

C/Co

20

FIGURA 2: Cintica biodegradacin de diesel. Segunda corrida: Es esta etapa se aplic una corrida con una concentracin de diesel mayor a la anterior para determinar la velocidad de degradacin. Se estimul el metabolismo microbiano con nitrgeno y H2O2 como fuente de oxgeno. Con nutrientes y H2O2:
biodegradacinl diese nutrientesl

1.2 1.1 1 C/Co 0.9 0.8 0.7 0.6 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 Tiempo (das) y = -0.0115x + 1.0234 R = 0.8457
2

FIGURA 3: Cintica de biodegradacin diesel. Sin nutrientes

Biodegradacin del diesel sin nutrientes

1.5 C/Co 1 0.5 0 0 3 6 9 12 Tiempo (das)

y = -0.0352x + 0.9355 R = 0.9003

2

15

18

21

FIGURA 4: Cintica de biodegradacin diesel. Tercera corrida: Es esta etapa se aplic una corrida con nutrientes (nitrgeno) y H2O2 como fuente de oxigeno al suelo y otra con perxido de hidrgeno sin nutrientes. Con nutrientes y H2O2:
Biodegradacin del diesel nutrientes

1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 2 4 6 8 10 12 14

y = -0.04204x + 1.07278 R = 0.80588

2

C/Co

16

18

20

Tiempo (das)

FIGURA 5: Cintica de biodegradacin de diesel.

Sin nutrientes: Suelo+H2O2

Biodegradacin del diesel sin nutrientes 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 2 4 6 8 10 Tiempo (das) 12 14 y = -0.0329x + 0.9348 R = 0.9389
2

C/Co

16

18

20

FIGURA 6: Cintica de biodegradacin de diesel. TABLA 1: Resumen de la velocidad y tiempo de vida media para la biodegradacin K C0 inicial C final Porcentaje t1/2 Corrida (d-1) (d) (mg/L) (mg/L) degradado Con nutrientes 1 0.0444 15.61 28,411.70 5,494.89 80.66 2 0.0115 19.47 39,742.40 33,954.13 18.93 3 0.0420 16.50 31,480.65 12,602.19 59.97 Sin nutrientes 1 0.0356 19.49 22,165.60 8,228.91 62.18 2 0.0352 19.69 15,481.66 4,953.84 63.97 3 0.0329 21.06 31,480.65 11,474.27 63.55

Para las tres concentraciones diferentes, aplicadas para estudiar la biodegradacin del diesel en presencia de nutrientes, se observ que a una concentracin ms alta el tiempo de vida media, t1/2, se amplia ms para lograr la biodegradacin y la velocidad disminuye en una tercera parte, lo que muestra la influencia en gran medida de la concentracin en la transformacin del diesel y es consecuente con lo reportado en otros estudios (Mrquez-Rocha et al, 2001, Yang, et al, 2000). Las constantes de velocidad determinadas con nutrientes (0.04d-1) se relacionan con los valores propuestos por otros investigadores para la biodegradacin del diesel (Jackson, 1994). Sin nutrientes se observ una condicin similar, presentando las velocidades y t1/2 similares. Los dos mtodos con nutrientes y sin ellos presentan una diferencia menor para bajas concentraciones pero a mayores concentraciones se muestra una diferencia ms acentuada, lo cual ratifica la necesidad del suministro de nutrientes esenciales para lograr una adecuada biodegradacin (McCarty, 1988). En el sistema de biodegradacin se muestra que los porcentajes del contaminante removido son menores con el aumento de la concentracin. En la tercera corrida la diferencia entre el porcentaje degradado para las muestras con nutrientes y sin ellos es muy baja pero con una marcada diferencia en la constante de velocidad, lo que demuestra que la biotransformacin aerobia es un mecanismo adecuado para remover el diesel (Fiorenza et al, 2000, McCarty, 1988, Yang et al, 2000). La relacin C:N.P suministrada a partir de la ecuacin propuesta por McCarty (1988) y la frmula qumica para el diesel de Jackson (1990) presentaron consistencia con los relaciones reportadas en la literatura para C:N:P de 100:15:1 respectivamente (Burke et al, 2000, Cassidy et al, 1997, Jackson, 1992). La adicin del H2O2 como fuente de O2 tuvo un comportamiento adecuado como aceptor de electrones ya que los datos obtenidos reportan la biodegradacin del diesel, lo cual es consistente con los procesos propuestos como fuentes alternas y econmicas de suministro de oxigeno (Fiorenza et al, 2000, Freijer, 1996, pardieck et al, 1992). La biodegradacin se constat adicionalmente con los ensayos de slidos suspendidos voltiles (SSV) y la cuenta total en placa de organismos hetertrofos, como unidades formadoras de colonias por gramo de suelo (UFC/g) para observar el crecimiento de los microrganismos presente en el suelo de cultivo. Los SSV aumentaron de 2.66% en el suelo original hasta 15.50% al final del ensayo, este crecimiento de los SSV se ha reportado en otros estudios (Deyta, 1999). Las UFC/g presentaron tambin un aumento de forma similar a lo reportado en otros trabajos desde 6.4x105 UFC/g en el suelo original hasta 8x107 y 3.2x108 de UFC/g en el suelo despus del ensayo de biodegradacin (Mrquez-Rocha et al, 2001).

OXIDACIN
Cintica de oxidacin del diesel
0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 10 20 30 40 50 60 Tiempo (hr) 70 80 90

ln(C/Co)

y = 0.0047x + 0.1063 R = 0.8374

2

100

110

120

FIGURA 7: Oxidacin del diesel por H2O2 El proceso de oxidacin present una alta velocidad de transformacin del diesel, en aproximadamente 6.14 das redujo a la mitad la concentracin inicial de 44,682.65 mg/L bajo condiciones ambientales de la ciudad de Mxico (18-19oC), sin catalizadores y a un pH entre 6.5-7.5. la velocidad obtenida fue de 0.1128 d-1. los resultados obtenidos son consecuentes con otros estudios realizados (Fiorenza et al, 1997, Mrquez-Rocha et al, 2001, Pardieck et al, 1992, Domenico y Schwartz, 1990 ). Comparando los tiempos de vidas medias del proceso biolgico y de oxidacin se puede observar que ste ltimo sistema mostr una mejor remocin del contaminante, aunque la biodegradacin inici con una menor concentracin (39,742.40 mg/L). ADSORCIN TABLA 2.: Resultados de adsorcin en suelo Co (mg/L) 5,753.50 10,124.00 19,330.46 30,664.74 36,548.48 Cw eq. (mg/L) Sobrenadante 4,551.94 7,734.10 13,764.97 20,111.37 24,948.02 Cs (mg/g) adsorbidad Suelo 1.802 3.585 8.348 15.830 17.401 V (L) Volumen W (g) masa de suelo C (mg/L) terica 5,000 10,000 20,000 30,000 40,000 Kd (mL/g)

0.030

20

0.800

La adsorcin del diesel se represent adecuadamente por la ecuacin de Freundlich con un comportamiento lineal de acuerdo con lo reportado en la literatura para los compuestos orgnicos (Bedient et al, 1994, Iturbe y Silva, 1992). La capacidad mxima de adsorcin (Cs) obtenida del suelo agrcola fue de 17.40 mg/g para una concentracin de 36,548 mg/L, el Kd de 0.8 mL/g y un coeficiente de distribucin de carbono orgnico (Koc), Koc =Kd/foc= 0.8/0.01404 = 56.98 mL/g. Donde foc es la fraccin de carbono orgnico.

VOLATILIZACIN TABLA 3: Anlisis de la volatilizacin del diesel Tiempo Concentracin Concentracin Porcentaje de (das) (mg/L) promedio (mg/L) Volatilizacin 0 57,729.05 56,445.00 0.0000 0 55,161.01 2 57,457.64 56,315.71 0.2300 2 55,173.78 4 57,260.35 57,157.90 0.0000 4 57,055.45 6 58,083.22 56,743.52 0.0000 6 55,403.81 8 56,298.64 55,423.16 0.0000 8 54,547.68

La volatilizacin del diesel en los ensayos realizados fue de cero, lo cual es similar a lo reportado en otros estudios por Mrquez-Rocha et al (2001) que fue menor a 5% de la concentracin inicial. Los resultados de la volatilizacin del diesel como lo muestra la tabla 3 presentaron una baja prdida de ste, lo que hace concluir que el hidrocarburo no se volatiliza dentro de los reactores batch y se transforma por biodegradacin, oxidacin o adsorcin en el suelo. CONCLUSIONES Se muestra la influencia en gran medida de la concentracin en la transformacin del diesel, lo cual hace menor o mayor la tasa de degradacin. En el sistema de biodegradacin se muestra que los porcentajes del contaminante removido son menores con el aumento de la concentracin. Se observaron velocidades de biotransformacin similares a las suministradas a la literatura. Los SSV y las UFC/g presentaron el crecimiento de la biomasa, siendo stas unas herramientas adecuadas para observar el cambio en los organismos encargados de la biodegradacin. El H2O2 tuvo un comportamiento adecuado como fuente de O2 en el proceso aerobio de transformacin del diesel, lo cual es consecuente con los datos de los SSV y las UFC/g. Los dos mtodos con nutrientes y sin ellos presentan una diferencia menor para bajas concentraciones, debido a la alta presencia del fsforo, pero a mayores concentraciones se muestra una diferencia ms acentuada. El proceso de oxidacin present una alta velocidad de transformacin del diesel, en aproximadamente 6 das redujo a la mitad la concentracin inicial de 44,682.65 mg/L bajo condiciones ambientales de la ciudad de Mxico (18-19oC), sin catalizadores y a un pH entre 6.5-7.5. Comparando los tiempos de vidas medias del proceso biolgico y de oxidacin se puede observar que ste ltimo sistema mostr una mejor remocin del contaminante, aunque la biodegradacin inici con una menor concentracin (39,742.40 mg/L). Las cinticas de biodegradacin y oxidacin se representaron adecuadamente por la ecuacin de grado uno. El suelo utilizado present una adecuada capacidad de adsorcin y se represent apropiadamente por el modelo de Freundlich. Los reactores fuera del sitio permitieron observar la evolucin de la mineralizacin del diesel. La volatilizacin del diesel no se present y la adsorcin del suelo mostraron que el diesel remanente se biodegrado u oxido hasta el periodo del estudio, lo cual est en relacin con la biotransformacin y la oxidacin presentada en otras investigaciones. BIBLIOGRAFIA
Atlas, R. et al (1972) Degradation and mineralization of petroleum in sea water: Limitation by nitrogen and phosphorous. Biotechnology and Bioengineering.Vol.XIV, 309-318. Bedient, P. B., Rifai, H .S. and Newell, C. J. (1994) Ground Water Contamination. Transporte and remediation. Prenteci Hall, Inc. New Jersey, USA. Burke, Gwendolyn et al. (2000) Bioremediation. Cap 37. Handbook of environmental management and technology. Second edition. John Wiley & Sons, Inc. Publication. New York. Pg597-614. Cassidy, D. P. et al (1997) Bological Treatment of soil contaminated with diesel fuel using periodically operated slurry and solid phase reactors. Water Science Technology, Vol. 35, No. 1, pp. 185-192.

Crittenden, J. C. et al (1999) A kinetic model for H2O2/UV process in a completely mixed batch reactor. Water Research, Vol. 33, No. 10, pp. 2315-2328. Deyta Teco, A. L. (1999) Caracterizacin de dos suelos contaminados con gasolina y evaluacin de su potencial degradadora de hidrocarburos monoaromticos. Tesis de Maestra en Biotecnologa. Facultad de Qumica, Colegio de Ciencias y Humanidades de la UNAM. Mxico, D. F. Domenico, Patrick A. and Schwartz, Franklin W. (1990) Physical and chemical hydrogeology. John Wiley & Sons. New York. USA. Fiorenza, S. et al (1997) Microbial adaptation to hydrogen peroxide and biodegradation of aromatic hydrocarbons. J. of Industrial Microbiology & Biotechnology. 18: 140-151. Fiorenza, Stephanie et al (2000) Sequenced reactive barriers for groundwater remediation. Lewis Publishers, CRC Press LLC. Boca Raton , Florida. Freeze, J. A and cherry, R. A. (1979) Groundwater. Prentice Hall, Inc-. New Jersey, USA. Freijer, J. I. (1996) Mineralization of hydrocarbons in soils under decreasing oxygen availability. Environmental Quality. 25: 296-304. Hunkeler, D. et al (1998) Petroleum hydrocarbon mineralization in anaerobic laboratory aquifer columns. J. Of Contaminant Hydrology. 32: 41-61. Iturbe A. R. Y Silva M. A. E. (1992) Agua subterrnea y contaminacin. Series del Instituto de Ingeniera, No. 539. UNAM. Jackson, J. D. (1990) Bioremediation of diesel contaminated soils. Proceesing of 3th annual Symposium of the Hydrology Society. Casa Grande, Arizona. Pgs. 309-316. September 20-21. Jackson, J. D. (1992) In-situ bioremedition of diesel contaminated soils. Proceesing of 5th annual Symposium of the Hydrology Society. Casa Grande, Arizona. Jackson, J. D. et al (1994) Using microbial kinetics in the bioremediation of contaminated soils. Remediation of hazardous waste contaminated soils. Edited by: Donald L. Wise and Bebra J. Trantolo. Marcel Dekker, Inc. New York. Pp. 681-989. Jenkins, D. y Snoeyink, V. L. (1997) Qumica del Agua. Limusa-Noriega Editores. Ciudada de Mxico. Mrquez-Rocha, F. J. et al (2001) Biodegradation of diesel oil in soil by a microbial consortium. Water, Air and soil Pollution, 128: 313-320. McCarty, Perry L. (1988) Bioengineering issues related to in situ remediation of contaminated soils and groundwater. In Environmental Biotechnology, Reducing risks from environmental chemicals trough biotechnology. Edited by Gilbert S. Omenn. Plenum Press. New York. 1988. Pardieck, D. L., et al. (1992) hydrogen peroxide use to increase oxidant capacity for in situ bioremediation of contaminated soils and aquifers: A review. J. of Contaminat Hydrology, 9, 221-242. Siegrist, Robert L. (2000) In situ chemical oxidation. Technology features & applications. Advances in innovation ground water remediation technologies. GWRTAC and EPA-TIO. June 6. Boston. Suthersan, Suthan S. (1997) Remediation Engineering. CRC Lewis Publisher. Boca Raton, Florida. USA. Yang, L.et al (2000) Biodegradation of dispersed diesel fuel under high salinity conditions. Water Research, Vol. 34, No. 13, pp. 3303-3314. Zegarra Martnez, H. G. (2000) Optimizacin de la biodegradacin de diesel industrial en un suelo contaminado mediante la metodologa de superficie de respuesta. Tesis de Maestra Ingeniera Ambiental. Divisin de Estudios de Posgrado de la Facultad de Ingeniera de la UNAM. 146 pginas. Mxico, D.F.