Trocas de Energia e Matria

Compartimentalizao: estabelecimento de 2 regies no espao, separadas fisicamente por uma barreira, e funcionalmente pelo trnsito seletivo

Tempo

Evoluo

4.600.000.000 anos Terra 3.500.000.000 anos procariontes 2.000.000.000 anos eucariontes 700.000.000 anos multicelulares 70.000.000 anos mamferos 12.000 anos Homem 80 anos vida mdia 40 anos membranas 33 anos eletrodos celulares

eNOS

L-Arg

iNOS nNOS PKG

PKA
AMPc

NO GMPc GCs PDE1/3

GMPc

Carioteca

Biofsica das membranas biolgicas

EVOLUO DOS MODELOS DE MEMBRANA

1- GORTER & GRENDEL (1925) - bicamada lipdica

eritrcitos

2- DANIELLI & DAVSON (1935)

3- STEIN & DANIELLI (1956)

4- LUCY & GLAUERT (1964)

Micelas revestidas por protenas

5- BENSON (1966)
Matriz protica Disperso de lipdeos

6- LENARD & SINGER (1966)

Protenas fixadas

7- SINGER & NICOLSON (1972) - Mosaico Fluido

Membrana Plasmtica

ESTRUTURA DA MEMBRANA CELULAR

uma faixa muito fina de lipdeos e de protenas mantidas juntas principalmente por interaes no covalentes

COMPOSIO DAS MEMBRANAS

Componente lipdico (bicamada de
lipdeos) Fosfolipdeos Glicolipdeos esterides

Componente protico (protenas inseridas

na bicamada) Protenas Perifricas Protenas Integrais

Componente glicdico (carboidratos)

Poro de carboidratos dos glicolipdeos e glicoprotenas, constituindo o glicoclix

GLICOCLIX
As protenas de membrana esto geralmente associadas a carboidratos, que podem ser:
Glicoprotenas (cadeias de oligossacardeos s protenas) e a lipdeos Glicolipdeos (cadeias de oligossacardeos lipdios) Cadeias de polissacardeos de molculas de proteoglicanas.

GLICOCLIX
O glicoclix uma zona onde se encontra vrios desses carboidratos na superfcie da membrana.

COMPOSIO DAS MEMBRANAS

Fonte Mielina Eritrcito
Cloroplasto Mitocndria

Protena (%) 18 49
70 76

Lipdio (%) 79 43
30 24

Carboidrato (%) 3 8
0 0

Fosfolipdio

-Tipos de lipdios
1-Fosfolpdios Fosfatidilcolina Fosfatidilserina Fosfatidiletanolamina Fosfatidilinositol Esfingomielina 2- Glicolipdeos

3- Esterides Colesterol

FOSFOLIPDIOS
Possuem uma cabea polar e duas caudas de hidrocarboneto hidrofbicas (caracterstica que confere a dupla camada lipdica). As caudas so normalmente cidos graxos com diferenas no comprimento, o que influi na fluidez da membrana.

GLICOLIPDIOS
Auxiliam na proteo da membrana plasmtica em condies adversas, como pH baixo.

Acredita-se que essas molculas participem dos processos de reconhecimento celular, e alguns glicolipdeos propiciam pontos de entrada para algumas toxinas bacterianas.

COLESTEROL
Alteram as propriedades de permeabilidade das duplas camadas lipdicas. Ela torna a bicamada lipdica menos sujeita a deformaes, e assim, diminui a permeabilidade da membrana.

ASSIMETRIA DA BICAMADA LIPDICA

A BICAMADA LIPDICA UM FLUIDO BIDIMENSIONAL

Flip-flop Difuso lateral (D = 10-8 cm2/s) = 2 m1 seg Rotao Flexo

PROTENAS DE MEMBRANA

Unipasso

multipasso

Fig 10-13 Seis modos pelos quais as protenas da membrana associam-se com a bicamada lipdica . (1) nica -hlice- unipasso, (2) mltiplas -hlice-multipasso, (3) lipdeo covalentemente lidado protena, (4) ligado a um fosfatidilinositol, (5 e 6) ligao no-covalente com outras protenas.

Unipasso

Multipasso

Perifrica Unipasso -hlice

Multipasso -hlices

Multipasso -pregueada

FLUIDEZ DA MEMBRANA
A membrana plasmtica no uma estrutura esttica, Os lipdios movem-se proporcionando uma fluidez membrana.

FLUIDEZ DA MEMBRANA
A membrana plasmtica no uma estrutura esttica, Os lipdios movem-se proporcionando uma fluidez membrana.

FLUIDEZ DA MEMBRANA
Os lipdios podem:
girar em torno de seu prprio eixo, podem difundir-se lateralmente na monocamada, migrar de uma monocamada para outra (flip-flop) - raramente, e realizar movimentos de flexo por causa das cadeias e hidrocarbonetos

FLUIDEZ DA MEMBRANA
Depende tambm da temperatura e da quantidade de colesterol, pois quanto maior a temperatura e maior quantidade de colesterol menos fluida ser a membrana.

PROTENAS DA MEMBRANA
Desempenham a maioria das funes especficas das membranas. So elas que conferem as propriedades funcionais caractersticas de cada tipo de membrana.

PROTENAS DA MEMBRANA
Protenas transmembrana: atravessam a bicamada lipdica e so anfipticas. Elas podem atravessar a membrana uma nica vez (protena transmembrana de passagem nica) ou ento atravessando vrias vezes a membrana (protena transmembrana multipassagem). Podem ter a funo de transportar ons, funcionar como receptores ou como enzimas.

PROTENAS TRANSMEMBRANAS

PROTENAS DAS MEMBRANAS

Protenas perifricas: se prende a superfcie interna e externa da membrana plasmtica atravs de vrios mecanismos.

Bicamada lipdica

Protena integral multipasso

Membrana Plasmtica
delimitao do volume celular antigenicidade (induz uma resposta imune) reconhecimento, adeso e topo inibio serve como ponto de fixao para enzimas e estruturas de sustentao trocas entre a clula e o meio (permeabilidade seletiva)

manuteno de um potencial eltrico atravs da membrana

Organelas Membranosas
As Mitocndrias A Carioteca O Sistema de Endomembranas
Retculo Endoplasmtico Complexo de Golgi Lisossomos, Peroxissomos e Endossomos

Membranas Biolgicas
estrutura da Membrana Plasmtica a similar para todas as organelas membranosas. estrutura traz implicaes para as funes desta organela, nfase para os transportes atravs da membrana.

Carioteca

Funes das Protenas na Membrana

determina quais substncias iro entrar ou sair das clulas, e em quais quantidade e velocidades isso vai acontecer.

transportadores de ons

Transporte transmembrana
Transporte transmembrana

Transporte passivo Difuso simples Difuso facilitada

Transporte ativo

Mediado por canal

Mediado por carreador

Transporte passivo transporte de soluto do meio de

maior concentrao para o de menor concentrao sem gasto de ATP
Difuso simples

Difuso

DIFUSO FACILITADA

Trocador Na+/Ca++

Bomba de Ca++ do retculo sarcoplasmtico

10 -hlices

Sarcoplasmic/Endoplasmic Reticulum Calcium ATPase

TRANSPORTE ATIVO Bomba de Na+/K+

2 subunidades ( e ) (112.000 daltons) 10 -hlices ( 35.000 daltons) 147.000 daltons 1 -hlice - glicoprotena 11 -hlices

Transporte transmembrana
Transporte transmembrana

Transporte passivo Difuso simples Difuso facilitada

Transporte ativo

Mediado por canal

Mediado por carreador

Porqu as clulas precisam ter canais?

Natureza da membrana

Espessura:6 8 nm

Porqu as clulas precisam ter canais?

Natureza da membrana Fsico-qumica dos ons em soluo
Hidratao: os ons so hidroflicos

Mobilidade dos ons em soluo Raio X Mobilidade: Na e K

Menor raio carga mais localizada maior campo eltrico

Canais Inicos
Propriedades
Conduzem ons

Selecionam ons
Abrem e fecham em resposta a

sinais

eltricos,

mecnicos

ou

qumicos especficos

Canais Inicos
Velocidade de conduo

100 milhes (108/seg/canal) = I

Causa alteraes rpidas do potencial de membrana (Vm) sinalizao

Canais Inicos
Velocidade do fluxo inico X Concentrao
Dependncia

Saturao

CANAIS INICOS X SELETIVIDADE

Bertil Hille ampliou a teoria do poro Dimetro do poro - estreitamento Tamanho do on Canais inicos so seletivos Carga do canal Filtro - peneira Carga do on Canal de Na+: Perde maior parte da gua

CANAIS INICOS X SELETIVIDADE

Dimetro do poro suficiente// gde

No perde totalmente camada de hidratao

As guas em torno do ons so continuamente substitudas (106/s). O on troca facilmente sua interao com gua pela interao com um grupo qumico similar no filtro de seletividade do canal.

100ns para a travessia

CANAIS INICOS X SELETIVIDADE

Se deve interaes qumicas especficas e peneira molecular resultante do dimetro do poro

Regulao

Canal de Na+ dependente de acetilcolina

Regulao

Canais no modulados: Abertos ou Fechados durante o repouso

 Todos os canais tm um estado fechado e um aberto, e alguns tm tambm um estado inativo (Na e Ca), no qual o poro, mesmo aberto, encontra-se ocludo por uma regio prpria do canal. A transio entre as formas fechada e aberta alostericamente regulada por voltagem movimento de gating - por regulao de uma molcula ou por modificao covalente.

ESTADO CONFORMACIONAL

Tempo

Evoluo

4.600.000.000 anos Terra 3.500.000.000 anos procariontes 2.000.000.000 anos eucariontes 700.000.000 anos multicelulares 70.000.000 anos mamferos 12.000 anos Homem 80 anos vida mdia 40 anos membranas 33 anos eletrodos celulares

Canais inicos

Tempo

Evoluo

4.600.000.000 anos Terra 3.500.000.000 anos procariontes 2.000.000.000 anos eucariontes 700.000.000 anos multicelulares 70.000.000 anos mamferos 12.000 anos Homem 80 anos vida mdia 40 anos membranas 33 anos eletrodos celulares

Canais inicos

canais para o potssio

so os mais simples e os mais antigos

evolutivamente, surgiram, entre os procariontes, h mais de 2,4 bilhes de anos atrs.

Diversidade

Filtro de seletividade

Sensor de voltagem

Poro

Subunidade

Figura 4: Esquema geral de duas subunidades principais de um canal para o potssio dependente de voltagem. Neste esto mostrados a regio que constitui o filtro de seletividade, o poro e o sensor de voltagem (segmento S4) Adaptado de Koch et al., 1987.

Canais para Potssio

3 diferentes tipos de canais: 1) K1 (inward rectifier channel) Repouso corrente de sada de K+ atravs desses canais Fase 0 condutncia diminui (contribuir para o plat) 2) Kto (transiente outward channel) Fase 0 abre-se rapidamente mas logo se inativa

3) K (delayed rectifier channel) Progressivo aumento da condutncia (Fase 2) Canal Ks (insensvel ao sotalol), Kr (sensvel ao sotalol) e Kur.

Canais para o potssio dependentes de voltagem

Contribuem para manter o volume celular, o potencial de membrana, a excitabilidade neural, a secreo de neurotransmissores, de hormnios e sais. Em neurnios, sua diversidade influencia a forma e a frequncia de disparo dos potenciais de ao. Em clulas no-excitveis (linfcitos e clulas da glia) a atividade parece estar relacionada com um estgio funcional especfico no desenvolvimento celular.

 Os canais inicos para o potssio abertos impulsionam o potencial de membrana da clula na direo do potencial de equilbrio do K+. Eles ajudam a restaurar o estado de repouso aps a despolarizao, promovendo a hiperpolarizao das membranas no estgio seguinte ao disparo do potencial de ao.

As funes de estabilizao e restaurao do potencial de membrana so feitas por um repertrio extenso de canais para o potssio que diferem em cintica, sensibilidade voltagem e modulao pelo on clcio e por vrios mensageiros intracelulares, tais como o ATP.

Canais para Sdio

Evoluram a partir dos canais para K, via canais para Ca, nos primeiros metazorios, h aproximadamente 800 milhes de anos atrs. Responde a fase 0 dos potenciais de ao bloqueado pela TTX ou lidocana A acidose diminui a condutncia desses canais

Canais para clcio

Descobertos 50 distinguidos pelo potencial de ativao Corrente dependente da voltagem
Imax= Classificao: HVA e LVA

Canais para Ca2+

Canais para Clcio ativados por voltagem

Subunidade formadora do poro (1) Subunidade auxiliares ( 2, d, , g, )

CLCIO

segundo mensageiro
[Ca]i = 100nM repouso [Ca]e = 1 a 2mM pequeno influxo sensibilidade

IMPORTNCIA

CANAIS DE CLCIO:

CONTRAO SECREO NEUROTRANSMISSO EXPRESSO GNICA CASCATA DE FOSFORILAO DE PROTENAS

Canais para clcio tem 2 papis principais: Eletrognico Regulatrio

Mltiplos tipos de canais para Ca

sensveis dihidropiridinas 1963 investigao eletrofisiolgica

CLASSIFICAO
N neurnio P Purkinje R resistente a tox L large condutance T tiny condutance

CANAIS DE CLCIO DEPENDENTES DE VOLTAGEM Ertel, 2000 Birnbaumer,1994 nome

L

classe S C D F A B E G

L
HVA N P/Q R

Ca v 1.1 Ca v 1.2 Ca v 1.3 Ca v 1.4 Ca v 2.1 Ca v 2.2 Ca v 2.3 Ca v 3.1 Ca v 3.2 Ca v 3.3

N
P/Q R

LVA

H I

20

40

60

80

100

Porcentagem de similaridade por aminocidos

Canais para Clcio

Responde a fase de plat Canais identificados:

Canal tipo L (large condutance) condutncia de 25pS ativado em voltagens prximas a 0 mV pode ser bloqueado pelas diidropiridinas (nifedipina, nitrendipina) verapamil, D600 e cdmio HVA (High Voltage) ativados em potenciais mais positivos
2 Canal tipo T (tiny condutance) condutncia de 8pS pouco sensvel ao verapamil e ao D600 pode ser bloqueado pelo Ni++ e tetrametrim LVA (Low Voltage) ativados em potenciais menos positivos

3- Canais do tipo N, P, Q e R condutncia de 13pS HVA (High Voltage) ativados em potenciais mais positivos

February 1, 2001 THE AMERICAN JOURNAL OF MEDICINE Volume 110

1: 190-250kDa 4 unidades homlogas Domnios

S4 - Arg e Lys
alas P filtro seletivo (4 resduos de glutamato)

1
I II
S4
+ + I II III IV V + + VI + + I II III IV V + + P VI

Ca2+ Ba2+ e Sr2+ Domnio I inativao do canal

ala P

III

IV

NH2

d
+ + + + I II III IV V + + + VI + + I II III IV V + + VI

COOH 533 COOH

NH2

PKC

P 27/31

COOH P 478/479

NH2

PKG
PKA

P 1928

PKA

Permeabilidade
Ca2+ Ba2+ e Sr2+

inativao do canal K

Bloqueadores:
La3+ > Co2+ >Mn2+ > Ni2+ > Mg2+

F
I

Ion Channels David J. Aidley and Peter R. Stanfield (MODIFICADO)