ASSEPSIA: LIMPEZA, DESCONTAMINAO E ESTERILIZAO A assepsia um conjunto de prticas essenciais na atividade laboratorial e que vai desde a limpeza prvia

a do ambiente e instrumentos at a desinfeco e esterilizao. O ato de desinfetar ou esterilizar implica em eliminar os agentes da contaminao somente a contaminao biolgica que biolgica. No entanto, em pesquisa no

interfere nos resultados, necessrio garantir entre diferentes etapas de trabalho a remoo de resduos slidos ou lquidos do ambiente ou dos instrumentos de trabalho.

Limpeza de vidraria A vidraria deve sempre ser lavada imediatamente aps o uso. Quando no possvel uma lavagem completa, coloque-a de molho em gua. Certos equipamentos como as pipetas, podem apresentar superfcies internas de difcil acesso. A lavagem da vidraria pode ser feita em gua corrente utilizando-se uma gaze ou escova. Ao lavar o recipiente pode-se usar sabo, detergente ou p de limpeza (com ou sem abrasivo). Detergentes neutros e gua quente so recomendados. Deve-se ter muito cuidado para no arranhar as superfcies, pois vidros riscados so mais propensos a quebrar durante o uso. A melhor maneira de remover gorduras, leos e ceras ferver a vidraria com uma soluo fraca de carbonato de sdio. Acetona ou outros solventes para gordura podem ser utilizados. Para a remoo de resduos mais resistentes podem ser utilizados "banhos" em solues de limpeza (cidos e outros). To importante quanto a aplicao das tcnicas j citadas o enxge da vidraria. A remoo de todo e qualquer resduo de sabo, detergente e outros materiais de limpeza essencial antes da utilizao da vidraria. Por exemplo, leves traos de detergente podero interferir com reaes sorolgicas e de cultura. O enxge deve ser feito com gua corrente. Para que tubos de ensaio, frascos graduados e similares sejam enxaguados, deve-se utilizar gua corrente por fora e por dentro, durante um determinado perodo de tempo. Para enxaguar pipetas e buretas use uma mangueira de borracha para levar gua da torneira at o interior das peas, e deixe correr. No processo de enxge muito comum a utilizao da gua destilada, que tem alta capacidade de dissoluo de sais.

Quando o uso da vidraria constante o material pode ser autoclavado ou

esterilizado em grandes estufas a vapor ou equipamentos similares.

Limpeza de materiais do laboratrio A limpeza remove todo tipo de lixo, a matria orgnica e resduos dos materiais de laboratrio e inclui escovar, aspirar, limpar a seco, lavar ou esfregar com gua contendo sabo ou detergente. Detritos, poeira, lixo em geral, sedimentos (terra, areia) e matria orgnica podem servir de proteo a microrganismos e interferir com a ao de produtos de descontaminao. Para se conseguir uma desinfeco ou esterilizao correta essencial proceder a uma limpeza prvia. Muitos produtos germicidas s so ativos em materiais previamente limpos.

Descontaminao A descontaminao o processo de remoo ou eliminao de microrganismos. O mesmo termo tambm qumicos perigosos e utilizado para remoo ou neutralizao de produtos materiais radiativos. As exigncias da descontaminao

dependem do tipo de experincia e da natureza do agente manipulado, assim como o tempo de aplicao e o tipo de desinfetante especfico a cada material. So vrios os termos que designam diferentes tipos de descontaminantes, entre eles esto: Antimicrobiano Agente que mata microrganismos ou impede o seu

desenvolvimento e multiplicao; Anti-sptico microrganismos superfcies do corpo; Biocida Termo geral para qualquer agente que mata organismos; Desinfetantes Substncia qumica ou mistura de substncias qumicas utilizadas para matar microrganismos, mas no necessariamente esporos. Desinfetantes so normalmente aplicados em superfcies ou objetos inanimados. Esporocida Substncia qumica ou mistura de substncias qumicas Substncia que inibe o crescimento e desenvolvimento de

sem necessariamente os matar. So normalmente aplicados sobre

utilizadas para matar microrganismos e esporos. Germicida qumico Substncia qumica ou mistura de substncias qumicas utilizadas para matar microrganismos. Muitos germicidas podem ser nocivos para os seres humanos ou para o meio ambiente. Devem ser escolhidos, armazenados,

manipulados, utilizados e eliminados com cuidado; Exemplo de germicida qumico vulgarmente utilizado: lcool O etanol (lcool etlico) e o 2-propanol (lcool isoproplico) tm propriedades desinfetantes similares. So ativos contra bactrias vegetativas, fungos e vrus lipdicos, mas no contra esporos. Para a maior eficcia devem ser utilizados em concentraes prximas de 70% em gua. Uma vantagem importante das solues aquosas de alcois no deixar resduos nos objetos tratados. Os alcois so volteis e inflamveis e no devem ser utilizados perto de chamas. As solues de trabalho devem ser armazenadas em recipientes apropriados para evitar a evaporao dos alcois.

Desinfeco e esterilizao pelo calor O calor o agente fsico mais vulgarmente utilizado para a

descontaminao de agentes patognicos. O calor seco totalmente no corrosivo e pode ser utilizado para tratar muitos objetos de laboratrio que suportem temperaturas de 160 C ou superiores durante 24 horas. O calor mido muito eficaz quando utilizado em alta presso, como no autoclave. A esterilizao por vapor saturado sob presso (autoclave) o meio mais eficaz e seguro de esterilizar materiais de laboratrio. A fervura no mata necessariamente todos os microrganismos, mas pode ser utilizada como tratamento prtico para desinfeco quando outros mtodos no forem aplicveis ou no estiverem disponveis. A incinerao til para eliminar carcaas de animais assim como outros resduos de laboratrio, com ou sem descontaminao prvia. Uma incinerao correta exige meios eficientes de controle da temperatura e uma cmara de combusto secundria. Muitos incineradores so inadequados para tratar materiais infecciosos ou substncias sintticas, como os plsticos. A destruio de tais materiais pode no ser completa e o efluente que sai da chamin pode poluir a atmosfera com microrganismos ou produtos txicos. Existe atualmente uma certa inquietude sobre os possveis efeitos negativos para o meio ambiente dos incineradores existentes ou em estudo, prosseguindo assim os esforos para produzir incineradores mais seguros e mais eficientes em relao energia.

Oxidao e esterilizao por ultravioleta

A luz ultravioleta (u.v.) constituda pelas ondas luminosas de menor comprimento e de alta energia. Como j sabemos esse tipo de radiao luminosa que pode gerar os maiores danos nos organismos e hoje temos uma grande preocupao ambiental, visto que a radiao u.v. tem aumentado em nosso planeta. Esse aumento est diretamente ligado ao buraco na camada de oznio. Bom, deixando as preocupaes ecolgicas de lado, quando estamos falando de esterilizao a luz ultravioleta um poderoso instrumento de laboratrio. Com a fabricao de lmpadas especiais e os devidos cuidados, podemos criar diferentes efeitos com a luz u.v. A oxidao por luz ultravioleta resulta da absoro da luz a 185 nm, produzindo radicais de hidroxil, que por sua vez oxidam materiais orgnicos ionizveis. Deve ser usada por recirculao da gua sob o foco da luz ultravioleta. Este processo isolado no garante a remoo das substncias orgnicas da gua. A esterilizao por ultravioleta realizada por absoro da luz de 254 nm que destri o DNA e RNA dos microorganismos, causando a morte de sua clula. A eficincia de ambos os processos depende da quantidade de luz que penetra na gua e tambm do tempo de exposio. A radiao ultravioleta tem baixssima penetrao nos meios aquosos. Desta forma, estruturas especiais devem ser utilizadas, quando o objetivo esterilizar grandes quantidades de gua.

Limpeza pessoal Nem mesmo o uso de luvas apropriadas elimina a necessidade do pessoal de laboratrio lavar as mos regularmente e corretamente. As mos devem ser lavadas antes e depois de trabalhar com a maioria dos materiais, em especial aqueles que apresentem riscos biolgicos. Para lavar bem as mos e obter descontaminao, bastam gua e sabo. Mas em situaes de risco maior recomenda-se a utilizao de sabes germicidas. Torneiras acionadas por sensores de movimento, pelo p ou cotovelo so ideais, pois evitam recontaminao. Para a descontaminao de mos pouco sujas em situaes onde a lavagem destas inconveniente ou impossvel, recomenda-se esfregar as mos com produtos base de lcool.