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Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria DGSV-CNRF-ENECuSaV rea de Cuarentena y Saneamiento Octubre 2012
CONTENIDO
1. 2. 3. 4. 5.
Objetivo especfico Introduccin Definiciones especficas Resumen de procedimiento Procedimiento de cuarentena posentrada 5.1. Recepcin e inspeccin inicial 5.1.1 Recepcin 5.1.2 Inspeccin 5.2. Establecimiento del material in vitro o in vivo 5.3 Desarrollo del material 5.4. Cultivo o manejo del material 5.5 Minimizacin de riesgos 5.6 Diagnstico 5.6.1 Inspeccin de insectos y enfermedades 5.6.2 Pruebas de nemtodos 5.6.3 Pruebas de virus 5.6.4 Pruebas de bacterias
6. Referencias Anexos Anexo 1. Requisitos de las instalaciones para cuarentena Anexo 2. Pruebas de diagnstico Anexo 3. Lista de Plagas reguladas.
1. Objetivo especfico
Este documento describe el mtodo de cuarentena posentrada para la deteccin de viroides, virus, bacterias y fitoplasmas propagativo importado. (varetas y plantas enraizadas) de Olea en material
europea L.
2. Introduccin
Este procedimiento fitosanitario para la cuarentena posentrada de material propagativo de olivo debera ser implementado por la Estacin Nacional de Epidemiologa, para prevenir Cuarentena la entrada y y Saneamiento dispersin de Vegetal plagas (ENECuSaV)
cuarentenarias del olivo dentro del territorio nacional. La cantidad de plantas que ingresen a cuarentena posentrada debe ser determinada por la disponibilidad del personal, dimensiones de la infraestructura y apoyo tcnico para la deteccin y diagnstico de plagas y enfermedades. En principio, el material infectado no debe ser liberado de la
cuarentena. Sin embargo, las autoridades bajo medidas especiales pueden autorizar, dependiendo de la plaga y el propsito , la liberacin del material para su uso bajo confinamiento.
3. Definiciones especficas
Estacin cuarentenaria: instalacin fitosanitaria en donde se mantienen temporalmente los vegetales de importacin, sus productos o subproductos, y envases que impliquen un riesgo fitosanitario, para confirmacin de diagnstico y, en su caso, saneamiento, tratamiento profilctico, destruccin o retorno a su pas de origen. Lote: un nmero de unidades de un solo bien identificables por su homogeneidad de composicin, origen, etc, y forma parte de un embarque.
Material propagativo: Planta o parte de una planta que sirve para la reproduccin de la especie en forma asexual.
Plaga: forma de vida vegetal o animal o agente patognico, daino o
potencialmente daino a los vegetales. Plaga cuarentenaria: Plaga de importancia econmica potencial para un pas o rea, la cual no est presente, o que estndolo, no se encuentra ampliamente distribuida y est bajo control oficial. Suelo: Capa superficial de la tierra en la cual crecen y se desarrollan las plantas y dems partes vegetales propagativas, en la mayora de los casos se compone de roca desintegrada mezclada con material orgnico. Sustrato inerte: Material de origen orgnico o inorgnico, que fue sometido a un tratamiento cuarentenario, que sirve como soporte para plntulas, y se encuentra libre de plagas, ejemplo: vermiculita, agrolita, peat moss, tezontle, arena lavada, etc. Tratamiento : procedimiento de naturaleza qumica, fsica o de otra ndole para eliminar, remover o inducir esterilidad a las plagas que afectan a los vegetales. Vareta: Porcin de tallo (con o sin hojas) o de raz capaz de originar una nueva planta.
Recepcin e inspeccin del material. Establecimiento del material in vitro o in vivo. Desarrollo del material (o plantas derivadas de l) bajo
confinamiento.
iv.
v.
Cultivo del material usando procedimientos que minimicen el riesgo de infeccin cruzada, contaminacin o escape accidental de plagas.
vi.
Inspeccin y diagnstico de plagas con tcnicas especficas, en etapas de desarrollo ptimas para la deteccin, incluyendo aquellas para los patgenos con distribucin desuniforme o de baja concentracin.
vii.
Destruccin del material que result infectado, a menos que, el material infectado con virus se intente someter a la eliminacin de virus.
viii.
Liberacin del material que pas la pruebas de diagnstico, sealando las pruebas especficas realizadas .
5.1.1 Recepcin
El embarque completo y la documentacin son presentados por el interesado al personal oficial responsable de la recepcin del material. La documentacin debe ser cuidadosamente revisada para asegurarse que coincide con el embarque y para verificar que se ha cumplido con los requisitos previos establecidos por la Direccin General de Sanidad Vegetal. A su llegada a la ENECuSaV, el material es desempacado dentro de un rea designada para la cuarentena, donde se realizar la inspeccin. Todos los lotes del embarque son sujetos a la inspeccin de la siguiente manera.
5.1.2 Inspeccin
i. Todos los cultivos de tejidos son inspeccionados para la deteccin de sntomas de enfermedades o contaminacin por hongos y/o bacterias.
Cualquier cultivo infectado es enviado al laboratorio de la ENECuSaV o los laboratorios de diagnstico fitosanitario del
Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria (CNRF), para su identificacin. ii. Las plantas y varetas son inspeccionadas visualmente para la deteccin de insectos vivos, sntomas de enfermedades (particularmente agallas), y cualquier otra plaga concerniente a la cuarentena. Para el caso de las plantas se procede como sigue:
En caso de que se presentara sustrato es removido para permitir la examinacin de las races. Al menos el 10% del lote es examinado (con microscopio estereoscpico 40X con lmpara fluorescente) para la deteccin de insectos vivos, caros y huevecillos.
Las plagas, signos o sntomas encontrados sern colectados como muestras y enviados al laboratorio de la ENECuSaV o a los laboratorios de diagnstico fitosanitario del CNRF, para la identificacin respectiva.
Si son encontrados insectos vivos, caros u otros invertebrados, el embarque completo deber ser fumigado, destruido o regresado al pas de origen.
Si
no
son
encontrados
insectos
vivos,
caros
otros
invertebrados, todo el embarque deben ser tratado mediante inmersin por un minuto en una mezcla fresca de plaguicida preparada con Imidacloprid (Confidor) ms aceite agrcola. Despus remover las plantas de la inmersin y dejarlas se car a la intemperie. Las plantas no deben ser lavadas antes de la mezcla de inmersin.
Todos
los
residuos
material
no
deseado
deben
ser
Los lugares destinados al proceso de cuarentena debe n ser lavados y en su caso desinfestados antes del ingreso del nuevo material, adems de cumplir con los requisitos necesarios para el proceso de cuarentena (ver Anexo 1). Cuando se reciban cultivos de tejidos o varetas, la primera etapa del establecimiento comprender la adaptacin, que se desarrollar en un rea cerrada que asegure de una humedad que el relativa y se ha temperatura establecido adecuadas. Despus material
adecuadamente, debe ser trasladad o a los sitios de cuarentena normal para el comienzo del proceso de cuarentena posentrada. Todas las plantas o con ingresadas la deben ser cultivadas para en el rea a
cuarentena y no debe ser removidas de esa rea hasta concluir la cuarentena autorizacin respectiva someterlas tratamiento o eliminacin, tambin se debe evitar la presencia de otras plantas ajenas al proceso. En el rea de cuarentena normal el material se establecer de acuerdo a lo siguiente. i. Trasplantar cada unidad de material en un recipiente
previamente lavado con agua y jabn y desinfectado con hipoclorito al 2%. Utilizar sustrato inerte, libre de plagas. ii. Etiquetar cada unidad del material con una clave nica de identificacin que permita rastrear lo en cualquier etapa del proceso, anotar la fecha de ingreso a cuarentena. iii. Resguardar el material en el lugar de cuarentena previendo las condiciones adecuadas de desarrollo, enfatizando en la luminosidad, temperatura y la humedad. iv. Colocar las plantas en mesas elevadas para facilitar su manejo y prevenir la infeccin de fitopatgenos. Debe haber suficiente espacio entre las hileras para permitir la adecuada inspeccin de las plantas. v. Dar un riego pesado para favorecer el establecimiento de las plantas.
El material debe ser conservado con buena sanidad y libre de malezas, plagas y enfermedades endmicas a fin de no afectar verificacin de las plagas cuarentenarias. La propagacin del material propagativo no se permitir mientras est en cuarentena. 5.3. Desarrollo del material
El material procedente de viveros podr conservarse por un periodo mnimo de 12 meses en cuarentena posentrada, ste tiempo es un indicativo mnimo del periodo de cuarentena ya que puede extenderse si el material se desarrolla lentamente, las plagas son detectadas o si los tratamientos o los diagnsticos as lo requieren. Las plantas se desarrollaran bajo condiciones de invernadero , en un ambiente con las condiciones climticas ptimas, con temperaturas diurnas de 25 hasta 32C y temperaturas mnimas nocturnas de 10 C. Las plantas bajo cuarentena no deben ser restringidas de nutrientes, temperatura, humedad y luz. El ambiente deber permitir cualquier expresin de sntomas asociados a posibles enfermedades presentes en el material. Cuando las plantas estn siendo analizadas para una enfermedad, debern ser mantenidas en condiciones apropiadas de temperatura para la enfermedad en cuestin. 5.4. Cultivo o manejo del material
Las plantas deben cultivarse previendo un buen estado nutricion al, que les permita crecer de forma libre para la adecuada expresin de cualquier sntoma de enfermedad, sin estrs por falta de nutrientes o de agua. Todas las plantas as como las varetas enraizadas deben ser tratadas con un nematicida, despus de dos semanas de la plantacin. Este tratamiento no se aplicar a - o varetas sin enraizar. Se aplicarn fertilizantes de liberacin lenta y una mezcla de
micronutrientes para mantener las plantas en buenas condiciones de desarrollo. Alternativamente, se podr utilizar como un riego diario una solucin de fertirrigacin ligera que contenga macro y micro elementos . Los fungicidas podrn ser usados con la autorizacin respectiva, excepto las aspersiones a base de cobre.
Los bactericidas no pueden ser usados porque pueden inhibir el desarrollo de sntomas de Pseudomonas savastanoi pv. s avastanoi o nudo del olivo. La poda se realizar cuando no exista la posibilidad de que enmascare los sntomas de enfermedades. Las herramientas de corte (tijeras y navajas) se desinfectarn usando una solucin de hipoclorito de sodio o amonio cuaternario entre cada plata, alternando cortes y enjuagues. Todo el material de residuo (es decir las ramas podadas) debe ser recogido y depositado para su eliminacin mediante un mtodo adecuado. 5.5. Minimizacin de riesgos Los procedimientos estrictos de confinamiento deben aplicarse dentro de la cuarentena, ya que si existe alguna unidad del material infectada, existe el riesgo de una infeccin cruzada al material no infectado y podra escaparse a la deteccin. El cultivo del material propagativo se realizar mediante procedimientos que minimicen el riesgo de infeccin cruzada, contaminacin o escape accidental de plagas. Las actividades bsicas de prevencin de infeccin cruzada,
Establecer una zona de amortiguamiento, mediante exclusa (antesala fitosanitaria equipada) a la entrada del invernadero, o mediante arcos de desinfeccin en los compartimentos en los que las plantas se cultiven.
El acceso debe estar restringido a las pers onas directamente involucradas en el cultivo y diagnstico.
Realizar inspecciones peridicas de las plantas y las trampas pegajosas para prevenir la presencia y manejo de los vectores potenciales.
Utilizar pantallas de plstico u otro material para evitar el posible contacto y transmisin mecnica entre cada lnea.
Utilizar
guantes
nuevos
desechables
instrumentos
desinfestados durante la manipulacin de las plantas por cada unidad o lote definido.
Registrar cronolgicamente las actividades de manejo, de modo, se comprobar fcilmente la infeccin cruzada si el material infectado se detecta ms tarde.
Esterilizar material, instrumentos y medio de cultivo en autoclave o utilizando un esterilizador de vidrio taln entre las unidades de cada lnea (la esterilizacin puede complementarse usando metanol / etanol no siempre puede ser eficaz, por una unidad de material).
Los procedimientos de minimizacin de riesgos son particularmente importantes para la cuarentena in vivo , donde el material vegetal no puede haber recibido las pruebas de diagnostico antes de ser plantadas en el invernadero y el material es liberado desde el invernadero al final del procedimiento de cuarentena. 5.6 Diagnstico En funcin del nivel de riesgo de las plagas asociadas al material propagativo, los administradores debern realizar los arreglos necesarios para suministrar los servicios de diagnstico para todas las categoras de las plagas. Cualquier planta que se muera mientras est en proceso de cuarentena ser retenida para la inspeccin y anlisis. Cuando sea aplicable las macetas con las plantas muertas sern retenidas para la inspeccin y anlisis, despus todas las plantas muertas, el suelo y las macetas debern ser esterilizadas. Los siguientes procedimientos deben usarse para la inspeccin de plagas:
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Todos los rboles deben ser inspeccionados visualmente por personal fitosanitario familiarizado con sntomas o signos de plagas y enfermedades de cuarentena.
El material establecido en invernadero deber inspeccionarse en intervalos quincenales, durante un ao. La inspeccin final se realizar quince das antes de la liberacin del material.
El material que exhiba sntomas de la enfermedad debe ser analizado por fitopatlogos autorizados por el C.N.R.F. y los resultados de todos los anlisis deben mantenerse archivados para ser usado en el momento que se requiera.
Las plantas de olivo infectadas con virus son g eneralmente asintomticas, con la excepcin del Olive Latent 1 Virus, que causa una ligera fasciacin y bifurcacin de las hojas . del cultivar Paesana. El Strawberry Latent Ringspot Virus est asociado con deformaciones de hojas (acortamiento, epinastia y arrocetamiento) de frutas y hueso del cultivar Ascolana.
La mayora de los sntomas comunes de la enfermedad Nudo del Olivo ( Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi ) son agallas o nudos en hojas, ramas, troncos y races. Inicialmente las agallas son verdes y tienen una superficie lisa, pero despus se vuelven oscuras y rugosas. La bacteria est presente en las agallas y bajo condiciones de humedad se puede presentar exudado bacteriano.
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En el caso de que un virus cuarentenario sea detectado en alguna unidad del material, ninguna de las planta s del mismo lote podr ser liberada hasta realizar un anlisis minucioso de todo el lote.
6.
Referencias
Gundersen, D.E., Lee, I.M. 1996. Ultrasensitive detection of phytoplasmas by nested-PCR assays using two universal primer pairs. Phytopathologia
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Todas las plantas se cultivan en medios esterilizados o inertes . Todas las plantas se cultivan en bancos elevados y ser de fcil acceso para su inspeccin por el operador.
Trampas
amarillas
pegajosas
para
insectos
debidamente
instaladas en cada casa cuarentena en un porcentaje mnimo de uno por cada 15 metros cuadrados de superficie plantada y cambiarse en cada sito despus de la inspeccin por el operario. Durante el perodo de cuarentena la instalacin se utilizar nicamente para los fines registrados. La instalacin de cuarentena debe tener un a leyenda claramente visible.
El responsable de la cuarentena deber proveer evidencia de que todas los anlisis para las plagas cuarentenarias pueden ser conducidos con los requerimientos necesarios
Las pruebas deben llevarse a cabo, en nombre del responsable de la estacin de cuarentena.
El responsable de la instalacin de cuarentena debe reportar, el nmero y variedad de plantas bajo cuarentena, su estado actual (por ejemplo: bajo tratamiento, en espera de diagnstico , etc). El informe tambin deber detallar las plantas que se le ha dado el visto bueno de bioseguridad, destruidas, transferidas o retiradas de la instalacin.
El responsable de la cuarentena deber establecer y mantener procedimientos e instrucciones que consideren los siguientes aspectos. Responsabilidades de todas las personas involucradas en el procedo de cuarentena incluidas las de este, por ejemplo en
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la conservacin de cuarentena, obtencin de muestras, diagnstico, eliminacin, etc. Sistema de control documental. Inspeccin y diagnstico. Acciones correctivas. Manejo, almacenamiento, empaque y liberacin . Revisiones o auditoras internas. Entrenamiento o capacitacin del personal. Auditoras internas.
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Cherry leaf roll virus Olive latent 1 virus Olive latent 2 virus Olive latent ringspot virus Olive leaf yellowing-associated virus Olive vein yellow virus Strawberry latent ringspot virus
[strains not in New Zealand] Phytoplasmas
benthamiana (Nb). Al menos dos plantas de cada especie indicadora deben ser utilizadas en las pruebas de
inoculacin mecnica. 4. Las plantas indicadoras debe ser cultivadas bajo las temperaturas adecuadas y deben estar sombreada por 24 horas antes de la inoculacin. Mantener especies indicadoras post-inoculadas bajo condiciones de invernadero apropiadas durante al menos 4 semanas. Inspeccionar las plantas indicadoras inoculadas al menos dos veces por semana para los sntomas de la infeccin por virus. 5. Ensayo por inmunoabsorcin ligada a enzimas (ELISA); Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). 6. Las pruebas deben llevarse a cabo en plantas de olivo mientras estn en crecimiento activo. Para los bioensayos y ELISA, se tomarn muestras de al menos dos posiciones de las plantas incluyendo una hoja joven totalmente expandida en la parte superior de la planta y una hoja mayor de una posicin media del tallo. 7. PCR y ELISA deben validarse utilizando controles positivos / material de referencia antes de su uso en pruebas de cuarentena. 10. Inspeccionar las plantas de Olea busca de signos de plagas y enfermedades, por lo menos un vez por semana durante los perodos de crecimiento activo y una vez quincenalmente durante la latencia. 8. Se aceptarn mtodos de pruebas aprobados internacionalmente.
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monachus,
Cacoecimorpha
pronubana,
Hylesinus
oleiperda,
Phloeotribus scarabaeoides, Prays oleae, Cycloconium oleaginum, Eutetranychus orientalis, P. syringae pv garae, Heterodera carotae, Paratrichodorus porosus, Xiphinema index , Strawberry latent ringspot
virus, Arabis mosaic nepovirus, Olive latent virus 1, Olive latent virus 2, Olive latent ringspot nepovirus. Plagas de importancia cuarentenaria para Mxico asociadas a estaquillas de olivo.
Nombre cientfico INSECTOS Nombre comn Dao
Apate monachus
(Fabricius)
Taladrador del cafeto Piral de los claveles Barrenillo negro del olivo Mayate de la corteza Polilla del olivo Acaro rojo oriental
Ramas Hojas, yemas Tronco y ramas Tronco y ramas Hojas, flores y frutos Hojas
Cacoecimorpha pronubana Hylesinus oleiperda F. Phloeotribus scarabaeoides (Bern) Prays oleae (Bern)
ACAROS
Eutetranychus orientalis
(Klein) BACTERIAS
P. savastanoi pv savastanoi
NEMATODOS Heterodera carotae
Tallo
Xiphinema
diversicaudatum y X. index
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Nombre comn Mosaicos, moteados y anillos clorticos, algunas veces necrosis Fasiaciones en el cv. Paesana atenuadas y
Xiphinema X. index y X.
diversicaudatum, bakeri
Inoculacin mecnica
bifurcacin apical de brotes y hojas Olive latent virus 2 Olive latent ringspot nepovirus Asntomatico Asntomatico Inoculacin mecnica Inoculacin injerto mecnica y por
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