CHROMATOGRAPHIE

Die Chromatographie ist ein analytisches Trennverfahren. Dabei wird die unterschiedliche Verteilung eines Stoffes zwischen einer ruhenden (stationren) Phase und einer sich bewegenden (mobilen) Phase ausgentzt. Die beiden Phasen drfen nicht miteinander mischbar sein. Die Ursprnge der modernen chromatographischen Verfahren liegen etwa 150 Jahre zurck. Das Phnomen der chromatographischen Trennung wurde erstmals 1834 von dem deutschen Wissenschaftler Runge beschrieben. Als Begrnder der eigentlichen Chromatographie (griech. chroma = Farbe) gilt der Russe Tswett, der im Jahre 1906 als Erster die Begriffe Chromatogramm und chromatographische Analyse bei der Beschreibung eines Verfahrens zur Trennung der Blattfarbstoffe einfhrte. E. Stahl (19241986) hat der DC als analytischen Methode dann zum Durchbruch verholfen . Ist die stationre Phase in Form eines dnnen Films auf einem Trger fixiert, spricht man von Dnnschichtchromatographie. Liegt sie hingegen in gepackter Form in einer Sule vor, wird sie als Sulenchromatographie bezeichnet. Die mobile Phase kann flssig (Flssigkeitschromatographie), aber auch gasfrmig (Gaschromatographie) sein.

DNNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE

Wie bereits erwhnt, befindet sich die stationre Phase auf einem Trger. Diese Platte kann aus Glas, Kunststoff- oder Aluminiumfolie sein. Die am hufigsten verwendeten, stationren Phasen sind Kieselgel, Zellulose, Polyamid und Aluminiumoxid.

Die Platten sind meist 10 bis 20cm lang, ihre Breite richtet sich nach der Anzahl der Proben und Standards. Falls kein geeignetes Laufmittel bekannt ist, mssen auf kleinen Platten einige Vorversuche gemacht werden. Zustzlich wird die Trennung der Probe bei Verwendung verschiedener Lsungsmittel getestet. Hat man so ein geeignetes Laufmittel ( = mobile Phase) gefunden, wird die Platte zur Analyse vorbereitet. ACHTUNG: DC-Platte seitlich anfassen, damit keine Fingerabdrcke auf der stationren Phase entstehen !!!! Zuerst wird etwa einen Zentimeter vom unteren Rand der Platte ein feiner Strich mit einem Bleistift ( kein Kugelschreiber) gezogen. Nun werden mit jeweils neuen Kapillaren das Prparat (feste Substanzen z.B. in Diethylether oder Dichlormethan zu lsen!) und - in je einem Zentimeter Abstand Vergleichssubstanz und Ausgangsverbindungen so aufgetragen , dass mglichst kleine Flecken entstehen. DC 1/3

Vor dem Auftragens wird in der Chromatographiekammer bereits das Laufmittel etwa 5mm hoch eingefllt und die Kammer verschlossen. Das dient dazu, die Atmosphre in der Kammer mit dem Dampf des Laufmittels bzw. Laufmittelgemisches zu sttigen. Anschlieend wird die Platte in die Kammer gestellt.

Das Laufmittel wird nun von den Kapillarkrften in die Hhe gesaugt. Erreicht das Laufmittel (LM) die Probe oder einen der Standards, so werden deren Komponenten aufgenommen. Das LM bewegt sich natrlich weiter fort und die gelsten Stoffe wandern mit. Allerdings treten die Teilchen der Komponenten immer wieder mit der stationren Phase in Wechselwirkung. Diese Bindungen erfolgen, weil als stationre Phase meist ein relativ polarer Stoff genommen wird. Ein polarer Stoff bildet, obwohl er nach auen hin elektrisch neutral ist, relativ starke Ladungen im Molekl. Polare Stoffe sind etwa Zellulose, Aluminiumoxid oder Kieselgel .Sie knnen als stationre Phasen z.B. Alkohole oder organische Suren, die Bestandteil der Probe sein knnen, binden. Unpolare Verbindungen sind zum Beispiel Alkane, die bei polaren, stationren Phasen als LM eingesetzt werden. Je nachdem wie stark polar die Komponenten einer aufzutrennenden Substanz sind, binden sie sich strker oder schwcher an die stationre Phase. Relativ unpolare Substanzen gehen also relativ selten Bindungen mit der stationren Phase ein und werden auch schnell wieder von dort durch das LM abgelst. Solche Verbindungen wandern also fast mit der Geschwindigkeit des LM. Umgekehrt verhalten sich stark polare Stoffe. Sie gehen sehr oft starke Bindungen ein und werden auch nur uerst langsam wieder abgelst. Sie haben daher nur eine kleine Wandergeschwindigkeit. Erreicht die LM-Front den oberen Rand der Platte (1cm Abstand sollte bleiben) wird die Platte aus der Kammer genommen. Nun wird mglichst schnell die Front angezeichnet und die Platte getrocknet, .z.B. durch warme Luft. Zur unspezifischen Sichtbarmachung wird hufig UV-Licht eingesetzt, da viele Substanzen dieses absorbieren. Enthlt die stationre Phase einen Fluoreszenz-Indikator ( z.B.Kieselgel 60 F254 ), erscheinen diese Substanzen als dunkle Flecken. Ein spezifischer Nachweis ist durch DC 2/3

postchromatographische Reaktion mglich, wobei die notwendigen Reagenzien entweder aufgesprht od. im Tauchverfahren aufgebracht werden, z.B. Ninhydrin zum Nachweis von Aminosuren.

Sichtbarmachen im Iod-Trog : Iod mit Kieselgel verreiben, in Chromatographietrog fllen, DC-Platte nach dem Trocknen hineinstellen. Fr Verbindungen mit Doppelbindungen.

RF-WERTE:
Eine erste Auswertung wird rein optisch durchgefhrt, also etwa nach Farbintensitt der Flecken und der ermittelten Laufstrecke. Dann wird die Entfernung zwischen Laufmittelfront und Startlinie sowie die Wanderungsstrecken jedes einzelnen Flecks gemessen. Daraus wird wie folgt der RFWert berechnet. Bleibt die Verbindung am Start, ist der RF-Wert = 0 , luft die Substanz mit der Laufmittelfront mit, ist der RF-Wert = 1.

Substanz 1: Rf = 0

Substanz 3: Rf = 1

Die RF-Werte von Prparat- und Vergleichsflecken werden verglichen. RF-Werte sind abhngig von der Art des Stoffes, zudem gibt es aber weitere Faktoren, die sie beeinflussen. Dazu zhlen die Art der stationren und mobilen Phasen, aber auch die Gre der einzelnen Teilchen, die Dicke der stationren Phase, Alter der Platten und weitere Gren.

DC 3/3