GENETICA MOLECULAR DE LA INFECCION DE LAS LEGUMINOSAS POR RHIZOBIUM 1.- Introduccin.

El proceso de simbiosis entre los rizobios (bacterias de los gneros Rhizobium, Bradyrhizobium y Azorhizobium) y las plantas con la que se asocian especficamente est controlado genticamente. La capacidad de establecer simbiosis fijadoras de nitrgeno se limita a las leguminosas (familia Leguminisae) y al gnero Parasponia de la familia de las Ulmaceae infectada por el gnero Bradyrhizobium. Existe otra bacteria capaz de formar ndulos fijadores de nitrgeno (Frankia, del grupo de los actinomicetos) en simbiosis con ciertos rboles. La simbiosis entre los rizobios y las leguminosas no es debida a una especializacin de un nicho ecolgico particular puesto que la distribucin de las leguminosas es muy amplia, sino que se trata de una relacin debida a caractersticas genticas particulares de las leguminosas que no se presentan en otros grupos de plantas y que durante la evolucin no han aparecido ms de una vez. Los tres gneros de rizobios se han clasificado durante mucho tiempo junto con las bacterias del gnero Agrobacterium en la familia Rhizobiaceae. Sin embargo, por anlisis molecular se ha comprobado que el grupo no es homogneo: (1) la distancia entre Rhizobium y Bradyrhizobium es grande y, (2), existen bacterias muy relacionadas filogenticamente (alta homologa de ADN o de ARN ribosomal) que no son caapaces de establecersimbiosis ni de fijar nitrgeno. Por otra parte, la denominacin de las especies del grupo se ha realizado considerando la planta con la que formaba simbiosis; sin embargo, se ha visto que el espectro de especies vegetales con el que un rizobio puede establecer simbiosis vara mucho dependiendo del rizobio de que se trate y que cambios simples en ciertos genes involucrados en la interaccin entre el rizobio y la planta pueden tener efectos drsticos en el perfil del espectro de interaccin: la especificidd de la simbiosis es mucho ms compleja de lo que se haba pensado.

2.- Infeccin de la raz por los rizobios. La infeccin consta de dos etapas: (1) la preinfeccin o atraccin quimiotctica de la bacteria por la planta seguida de la induccin de cambios estructurales en los pelos radiculares. La atraccin quimiotctica se debe a que la planta exuda compuestos tales como amoinocidos y cidos dicarboxlicos que actuan como atrayentes nutritivos; tambin liberan compuestos de tipo flavonoide que no son nutritivos. La quimiotaxis por s no es necesaria para la infeccin, slo es necesaria para que las bacterias entren en contacto con la planta. La bacteria entra en contacto con los pelos radiculares jvenes de la planta (se suelen infectar los que aparecen justo encima del meristemo apical; los pelos maduros raramente son infectados): en primer lugar se establece una unin muy dbil entre la bacteria y el pelo radicular y, posteriormente, se agregan otras muchas bacterias al sitio de unin y sta se hace mucho ms fuerte. Cuando la bacteria se aproxima o entra en contacto con la raiz que va a infectar, secreta un compuesto lipopolisacardico denominado factor NOD que induce una serie de deformaciones en los pelos radiculares que permitirn el progreso de la segunda etapa. (2) La infeccin: la bacteria entra en el pelo y forma canales, recubiertos por nuevo material de pared celular, que van ramificndose. Estos canales de infeccin van entrando en la raiz al mismo tiempo que las clulas corticales de la raiz comienzan a dividirse para formar el primordio de ndulo. El canal de infeccin se dirige entonces hacia este primordio de ndulo en formacin, los rizobios en ellos se dividen varias veces y se transforman en bacteroides que quedan rodeados por una membrana bacteriana denominada peribacteroidal. En los cacahuetes (Arachis hypogaea9 no se induce formacin de ndulos a travs de los pelos radiculares sino que los rizobios pueden infectar races laterales jvenes a travs de heridas que producen en ellas. En Mimosa la entrada de los rizobios se produce directamente a travs de la epidermis. Por consiguiente, Existen diferentes mecanismos de entrada de los rizobios en las plantas. La ruta de entrada es especfica de cada planta puesto que una bacteria determinada puede utilizar rutas de entrada distintas en diferentes plantas.

3.- Genes de la nodulacin La planta husped tiene la informacin gentica para la infeccin simbitica y para la nodulacin. El papel de la bacteria es slo el de disparar el proceso. Los elementos genticos bacterianos cuyos productos intervienen en la infeccin simbitica pueden estar colocados en megaplsmidos (como en el gnero Rhizobium) o ser de localizacin genmica (como en los gneros Bradyrhizobium y Azorhizobium). Los plsmidos que contienen la informacin para la asociacin se llaman plsmidos pSym y en ellos se encuentran los genes responsables de la nodulacin (genes nod) y los de la fijacin de nitrgeno (genes nif y fix). Se pueden dintinguir cinco grupos de genes involucrados en la fijacin del nitrgeno a nivel de la bacteria: (1) Genes nod comunes: (nodABC) son genes imprescindibles para la modulacin, estn conservados en todos los rizobios y pueden intercambiarse entre especies y gneros. Su ausencia impide el proceso de infeccin. (2) Genes nod especficos (nodFE, nodH, nodPQ) no necesariamente presentes en todos los rizobios. Son los responsables de la especificidad de husped: mutaciones en ellos alteran o amplan el rango de husped puesto que hay genes nod especficos que amplan el rango de especificidad y otros que lo reducen impidiendo que un rizobio determinado infecte una planta dada. (3) Genes responsables de la snteses del exopolisacrido (exo), del lipopolisacrido (lps), de glucanos y de polisacridos capsulares (antgenos K). Los productos de estos genes son importantes para formar los canales de infeccin. (4) Genes que permiten una ocupacin ms eficiente del mdulo. (5) Genes que permiten la infeccin de un tipo determinado de genotipo de la planta.

4.- Regulacin de la expresin de los genes de la modulacin. La expresin de los genes bacterianos que intervienen en el establecimiento de la simbiosis se proproduce como consecuencia de que la planta libera al medio favonoides (Flavonas e Isoflavonas) que en la bacteria interaccionan con la protena Nod D. Nod D es un factor de transcripcin presente en todas las especies de rizobios. Es un factor de transcripcin que regula operones inducibles y estimula la transcipcin de nodABC (genes nod comunes) y de otros genes nod esenciales. La protena Nod D reconoce la caja Nod presente en los genes de tipo nod. El factor Nod D responde a la unin de flavonoides o de betanas a uno de los extrmos de su cadena peptdica, el extremo ms variable. Se trata de una protena de membrana que recibe la seal del flavonoide a travs de la capa lipdica. Para que se produzca la infeccin la proptena Nod D tiene que ser activada y para esto tiene que interaccionar con el flavonoide especfico. Por esto, los factores Nod D son determinantes de la especificidad de husped. Se han encontrado mutaciones puntuales en Nod D que amplan el rango de infeccin a especies no leguminosas. La protena Nod D puede regular la expresin de otros genes nod en funcin del nitrgeno combinado presente. De esta forma se puede conseguir un control fino de la expresin de la batera de genes de fijacin de nitrgeno. Los genes nod inducibles dejan de expresarse cuando el rizobio es liberado en el ndulo y se transforma en bacteroide. Esto se produce porque la protena Nod D deja de interaccionar con la caja nod.

5.- El factor NOD

Una de las funciones de los genes nodABC es formar el factor NOD, tetrapentasacrido modificado que libera la bacteria como respuesta en la presencia de flavonoides. Los factores NOD funcionan de una forma similar a como lo hacen las hormonas vegetales de las que son anlogos estructurales. La composicin de las cadenas laterales de los factores NOD es especfica de cada tipo de rizobio. Los genes nodEF, nodM y nodPQ modifican el factor NOD hacindolo especfico. No se sabe donde acta el factor NOD en la planta; pero la presencia de los factores NOD es imprescindible para que tengan lugar los cambios de la planta durante la fase tempranas de la infeccin, aunque su sola presencia no es suficiente para que se produzcan todos los efectos de la induccin del ndulo. En la rizosfera pueden existir quitinasas y otras enzimas capaces de degradar selectivamente factores NOD determinados. De esta forma se logra tambin una especificidad de infeccin. En algunos casos se ha demostrado la induccin de la produccin de modulinas (productos gnicos de las plantas responsables de la formacin de los ndulos) por el factor Nod. En otros se ha visto que algunas nodulinas se expresan como consecuencia de la inhibicin del transporte hormonal en la planta, por esto se ha supuesto que el factor Nod puede interferir este transporte dando lugar a desequilibrios hormonales.

Otras Referencias: 1.- Host-Controlled Restriction of Nodulation by Bradyrhyzobium japonicum Strains in Serogroup 10 (AEM 61: 23782383)