FOLLETO PARA COMPLEMENTAR EL APRENDIZAJE DE BIOQUIMICA I AREA:CIENCIASDELASALUD ASIGNATURA:laboratoriodeBioqumicaI.MED195. GuaParacomplementarla10ma.PrcticadeLab.BioqumicaI Dr.DanielE.RodrguezC,M.A.(Farmacutico).. PRACTICANo.10:RECONOCIMIENTOYDIFERENCIACINDEESTEROIDES. I. Objetivos:reconocerydiferenciarlosesteroidescolesterolyergosterol.

Esteroides Los esteroides se encuentran asociados a las grasas. Poseen la estructurara del ciclopentanoperhidrofunantreno.Elcolesteroleselesteroidedeorigenanimalmasconocidoyuno de los mas estudiados,sunombreprocededelgriego(chole, quequieredecirbilis,porser el componentemsabundantedelosclculosbiliares).Estpresentenormalmenteenlostejidos.Por ejemplosecalculaqueenunhombrede80kilos,hayunos240gramosdecolesterol.Alosmdicos porlogenerallesgustaverelcolesteroltotalmenora200mg/dL,conunLDL(colesterolmalo) inferiora130,ellmiteelevadodelnivelcasiptimo,yelHDL(colesterolalto)superiora40. Lasplantascontienenunavariedaddeesteroles. El ergosterol es un esteroide de origen vegetal. Difiere del colesterol por tener en su estructuradosdobleligadurasadicionales,unaentreC7C8 enelanilloB,ylaotraenlacadena lateralentreC22C23.

El ergosterol tambin se diferencia del colesterol por llevar un grupo metilo extra en posicin2,4.Estasustanciaesconsideradacomounaprovitamina,yaqueporirradiacinconluz ultravioletaadquierepropiedadesantiraquticas,comoconsecuenciadelaaperturadelanilloB. Otrosesteroidesdegranimportanciabioqumicasonlashormonassexuales,hormonasde lacortezasuprarrenal,vitaminaD,glucsidoscardiacosylos cidosbiliares.(Asbun,1972,p. 168) Losesteroidessepuedenanalizarpormediosfotomtricos,estoesdemaneracuantitativa, para esto se lleva a cabo una reaccin qumica que desarrolle color. Estas reacciones no son especficas,lasdantodoslosesteroidesquellevenunoomasdoblesenlacesenelanilloAoB,los

compuestossaturadosnodesarrollancolor.

Reaccionesdelosesteroides:
REACCIONDELIEBERMANBUCHARD:enestareaccinsetrataunamuestradeesteroideen cloroformoconanhdridoacticoycidosulfrico,sedesarrollauncolorpurpuraquepasaaazul verdosoyseestabilizaenverde. REACCION DE SALKOWSKI: cuando se trata la muestra de solucin clorofrmica de un esteroide,sedesarrollauncolorrojopurpura REACCIONDEROSENHEIM:seutilizaparadiferenciaral ergosteroldelcolesterol,slolos compuestosquedanlareaccinpositivasonaquellosquetienendosdoblesenlacesconjugados.El ergosterol,porejemplo,poseedosdoblesenlacesconjugadosenelanilloB. Estareaccinconsisteentratarlamuestradesolucinclorofrmicadeunesteroideconuna solucindecidotricloroactico,eldesarrollodeuncolorrojoquecambiaaazulplidoindicauna reaccinpositiva.

Reactivos
Solucin de colesterol 0.003 M: se pesan 0.116 g de colesterol y se disuelven en cloroformo ,cantidadsuficienteparacompletar100mL. Solucindeergosterol0.003M:sedisuelven0.119gdeergosterol(recientementerecristalizadode etanol)encloroformo,secompletaelvolumena100mL. Anhdridoactico,calidadreactivo. H2SO4 concentrado,calidadreactivo. cidotricloroactico. ExperimentoI:Tcnica:Setomandostubosdeensayobienlimpiosysecos.Aunosele agrega2miLdeSolucindecolesterol0.003Myalotro2miLdeSolucindeergosterol0.003 M. Se le agrega acada tubo6miL decloroformo ,y10gotas deAnhdrido actico ,calidad reactivo.Semezclabienyseadiciona2gotasdecidosulfrico.Sedejareposarenlaobscuridad

durante una hora .Seguidamente transcurrido ese tiempo, se mide la densidad ptica en el espectrofotmetro.Empezandoen380m,luego400m,luegoen20m,hastallegara680m. Seusacloroformocomoblanco.Cadavezquecambialalongituddeondasellevalaescalaa100% Tconelblanco.Seanotanlosvaloresobtenidosysetrazaunacurvadeabsorcinparacadaunode loscompuestos,indicandoladensidad pticasobreelejedelasordenadasylalongituddeonda ensobre el eje delasabscisas.Seobservaraqueelcolesterolyelergosteroltienencurvasde absorcinsimilares. ExperimentoII REACCIONDEROSENHEIM:Tcnica:Setomandostubosdeensayobienlimpiosy secos.Aunoseleagrega2miLdeSolucindecolesterol0.003Myalotro2miLdeSolucinde ergosterol0.003M.Seleagregaacadatubo2miLdesolucindecidotricloroactico,6miLde cloroformoysemezclanbien.Despusde30minutossemideladensidadpticadecadaunadelas solucionesEmpezandoen380m,setomanlecturassucesivasincrementandolalongituddeonda en20muhastallegaralos680m,seusacloroformocomoblanco,cadavezquesecambiala longituddeondasellevalaescalaa100%Tconelblanco.

Conlosdatosobtenidosseconstruyeunacurvadeabsorcinparaelcolesterolyotraparael ergosterol,anotandoladensidadpticasobreelejedelasordenadasylalongituddeondasobreel ejedelasabscisas.Elcolesterolaldarunareaccinnegativacarecerdedecurvadeabsorcinen lafrecuenciasealada,entantoqueelergosterolpresentaraunamarcadacurvadeabsorcin.

ExperimentoIII: Obtencindelcolesteroldeclculosbiliares.(sepuedenobtenerstosenunhospital,hablar conlasestudiantesdeenfermera). Enunmatrazerlenmeyerde100miLsecolocan4gdeclculosbiliarespulverizadosyse revuelvencon40miLdeacetona,mientrassecalientalasuspensinenbaoodeMara,hasta disolucindelcolesterol.Lasolucinsefiltraencaliente,enunembudopreviamentecalentado.Si elfiltradoestamuyoscuro,seledecoloracon0.1gdecarbnactivado(norita,sepuedeconseguir enellaboratoriodetecnologafarmacutica),sevuelveacalentaryfiltrarencaliente,utilizando doshojasdepapelfiltro.Alfiltradoseleaaden20miLdemetanol,sevuelveacalentarhasta ebullicinyselevaaadiendoaguahastaturbidez,secalientahastadisolucinysedejaenfriar. Loscristalesserecogenporsuccin,sesecanysepesan.elfiltradosedestilaalamitadde volumenysedejaenfriarrecogindoseunasegundacosecha.

HacerlapruebadeLIEBERMANBUCHARDparaesteroidesinsaturados.

Mezclar5gotasdecloroformocon4gotasdeanhdridoacticoy1gotadecidosulfrico. Tomarconuncapilar,unpocodeestamezclayjuntarlacon12mgdecolesterol,observarlos cambiosdecoloren5minutos. Observary apuntar__________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________.

BIBLIOGRAFIA.

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