Disciplina de Bioqumica Clnica

ENZIMOLOGIA CLNICA
Srgio Chibute

CONCEITO
Enzimologia

cincia das enzimas ao diagnstico e tratamento das doenas.

clnica a aplicao da

ENZIMAS

Enzimas so protenas com propriedades

catalticas devido a sua capacidade de activao especfica de seus substratos.

Enzimas e a Clnica Mdica

Alm do papel central das enzimas na bioqumica, a atividade das enzimas no sangue fornece informaes importantes para o diagnstico de doenas.
O perfil da atividade de enzimas no soro est relacionado processos patolgicos.

DOSEAMENTO DAS ENZIMAS

A actividade duma enzima pode ser avaliada por trs vias:

Consumo

do substrato. Formao do producto. Transformao duma coenzima.

Unidades de Actividade Enzimtica 1 IU = mol / min Katal = mol / seg

Factores que afectam as anlises enzimticas

Temperatura Tempo pH Hemlise Conservao (amostra e reagentes) Contaminao

Enzimas e a Clnica Mdica

As enzimas podem ser classificadas em dois grupos Plasma-especficas
secretadas activamente no plasma por certos rgos, tendo papel funcional no plasma

No-plasma especficas
produzidas pelas clulas durante o metabolismo celular normal. So enzimas intracelulares, sem funo fisiolgica no plasma.

Libertao de enzimas a partir de clulas normais e de clulas doentes ou expostas a um trauma

Enzimas no-plasma especficas

Atividade de enzimas intracelulares no plasma

Extravazamento por leso tecidual

Extravazamento por alterao de permeabilidade da membrana

Estado patolgico

A determinao das atividades de muitas enzimas no plasma utilizada para fins diagnsticos em vrias doenas. O grau de elevao da actividade enzimtica no plasma pode auxiliar na avaliao do prognstico do paciente.

Enzimas no-plasma especficas

Distribuio tecidual restrita a um ou a poucos tecidos

Distribuio tecidual ampla

Concentrao no plasma Diagnstico especfico Valor diagnstico limitado

Em termos de diagnstico deve-se considerar que: a proporo das enzimas varia de tecido para tecido tempo de aparecimento destas no plasma diferente

Mtodos de determinao de enzimas

Mtodos

directos S

Essencialmente imunolgicos e apropriados para isoenzimas. Determinam-se poro no activa.

Mtodos

indirectos(catalticos)

Avaliam a actividade.

Tipos de Mtodos catalticos

Baseiados em NAD(P)H, NAD(P)H.

pticos:

NAD(P)H

E E

NAD(P)

Podem

ser simples ou Faseados

Mtodos com duas etapas

A
Exemplo:

B
NAD+

C
NADH

Alanina

+ -Cetoglutarato
NADH ALT

Lactato
NAD

Piruvato + Glutamato

Tipos de Mtodos catalticos(2)

Colorimtricos:
com

dois pontos, determina-se a actividade no incio e fim da reaco. Cinticos, avalia-se ininteruptamente a actividade durante um certo intervalo de tempo.

Optimizao dos mtodos enzimticos.

Para melhores resultados devem-se observar as seguintes condies:

concentrao do substrato (10 x KM). temperatura ptima constante. pH constante. uso de activadores.

Enzimas de maior utilidade diagnstica

AST E ALT Significado clnico: hepatite viral 100 vezes v.r. valores mximos 7-12 dias Normaliza 3. a 5. Semana ALT>AST
1.

Outras enzimas importantes em diagnstico

Transaminases
TGO - Transaminase glutmico oxalactica TGP - Transaminase glutmico pirvica Presentes nas clulas do fgado, corao, msculo esqueltico, rim e pncreas.
DOENA HEPTICA

INFARTO AGUDO DO MIOCRDIO

TGO eleva-se aps 12 horas, atingindo seu pico aps 24-36 horas.

Valor informativo das transaminases

As duas transaminases(aminotransferases) tm localizao diferente. A ALT encontrase livre no citosol e a AST encontra-se na mitocndria e citosol em quantidades equivalentes. No plasma, AST / ALT < 1 AST / ALT = 1, sinal de alarme. ALT especfica do fgado.

ENZIMAS DE MAIOR UTILIDADE DIAGNSTICA

COLESTASE EXTRA-HEPTICA
CIRROSE : 4 a 5 vezes o VR. AST>ALT CARCINOMA HEPTICO 5 a 10 vezes AST>ALT Delirium tremens (aps ingesto de alcool, drogas opiceos, salicilatos ou ampicilina) Infarto do miocrdio AST & ALT -normal

Enzimas de maior utilidade diagnstica

ENZIMA: CREATINA QUINASE CK Doenas do msculo esqueltico

Distrofia muscular progressiva
Doenas musculares neurognicas

Doenas do corao

Infarto miocrdio Outras doenas cardacas Doenas do Sistema nervoso central

Enzimas de maior utilidade diagnstica Gama glutamil transferase

Obstruo biliar intra ou ps heptica; hepatite infecciosa;

AMILASE

pancreatite aguda; derrame pleural; papeira; peritonite;

Outras enzimas importantes em diagnstico

Fosfatases
Fosfatase Alcalina
Presente em muitos tecidos, principalmente no fgado e nos ossos. O aumento fisiolgico
observado na GRAVIDEZ e na INFNCIA.

DISTRBIOS SSEOS DOENA HEPTICA OBSTRUTIVA

Outras enzimas importantes em diagnstico

Transferases
GAMA GLUTAMIL TRANSPEPTIDASE Presente no fgado.

INDICADOR DE DOENA HEPTICA ALCOOLISMO

Outras enzimas importantes em diagnstico

Amilase
Produzida pelo pncreas e pelas glndulas salivares.

PANCREATITE

Cintica de liberao de enzimas cardacas no soro aps um IAM

CPK creatina quinase LDH Lactato desidrogenase HBDH - -hidroxibutrico desidrogenase

Diagnstico Especfico Isoenzimas ou isozimas

Enzimas intracelulares que catalisam a mesma reaco em diferentes tipos celulares.
Enzimas formadas por vrias cadeias polipeptdicas (subunidades) permitindo diferentes associaes. Protenas geneticamente diferentes

Propriedades diferentes: KM imunolgicas

Aplicao na clnica mdica

Isoenzimas
Lactato desidrogenase - LDH
NAD+ NADH

Lactato
Tetrmero: subunidades M e H Composio MMMM M4 Tipo LDH5

Piruvato
5 isoenzimas

Localizao Fgado e Msculo Esqueltico

MMMH MMHH MHHH HHHH

M3H M2H2 MH3 H4

LDH4 LDH3 LDH2 LDH1

Fgado e Msculo Esqueltico Crebro e Rim Miocrdio e Hemceas Miocrdio e Hemceas

Padro normal e alterado das isoenzimas LDH no soro humano

Isoenzimas LDH do soro humano foram separadas em acetato de celulose, em pH 8,6 e coradas para enzima. A: paciente com infarto do miocrdio B: paciente normal C: paciente com doena heptica

Isoenzimas
Creatina quinase
ATP ADP

Creatina Dmero: subunidades B e M Composio BB MB MM Tipo CK1/CPK1 CK2/CPK2 CK3/CPK3

Fosfocreatina 3 isoenzimas Localizao Crebro Corao Msculo esqueltico

Aparecimento de CPK2 no sangue

infarto do miocrdio

DISTRIBUIO DAS ENZIMAS DE IMPORTNCIA DIAGNSTICA

ENZIMA FONTES PRINCIPAIS PRINCIPAIS APLICAES CLNICAS Doena heptica parenquimatosa Doenas musculares

ALT ALDOLASE

Fgado, msculo esqueltico, corao Msculo esqultico, corao

AMILASE
Fosfatase cida AST

Glndulas salivares, pncreas, ovrios

Prstata, hemcias Fgado, msculo esqueltico, corao, rim, hemcias Fgado

Doenas pancreticas
Carcinoma da prstata Infarto do miocrdio, doena heptica parenquimatosa, doena muscular Envenenamento por inseticida organofosforado, doenas hepticas parenquimatosa Infarto do miocrdio, doenas musculares Doenas sseas, doenas hepatobiliares Infarto do miocrdio, hemlise, doenas hepticas parenquimatosa

Colinesterase

Creatino quinase Fosfatase alcalina LDH

Msculo esqueltico, crebro, corao, msculo liso Fgado, osso, mucosa intestinal, placenta, rim Corao,fgado,msculo esqueltico, hemcias, plaquetas, linfonodos

Enzimas adicionais de utilidade clnica

Colinesterase

Envenenamento por inseticidas

fosfatase
Antgeno

cida

cncer da prstata

especfico da Prstata

Cncer da prstata