Qu es la transcripcin? La transcripcin es el proceso por el cual se sintetiza un ARN usando como molde al ADN.

Muchos tipos de ARN pueden ser sintetizados as por la enzima ARN polimerasa, el ARN ribosomal el de transferencia, los pequeos ARN nucleares o citoplasmticos y por supuesto los ARN mensajeros, que sern luego traducidos a una cadena polipeptdica. El proceso de la transcripcin de los mensajeros es diferente en procariotas y eucariotas. Esto es debido a las diferencias propias entre los genes de las bacterias y los de las celulas de animales superiores.

TRANSCRIPCIN DE ADN SINTESIS DE ARN

El flujo de la informacin gentica en las clulas normalmente es: ADN ARN Protena La sntesis de ARN usando un ADN patrn es llamada transcripcin, mientras que la sntesis de protena a partir de un ARN patrn es llamado traduccin. Clases de ARN. Existen tres clases de ARN: - ARN mensajero (mARN) - ARN de transferencia (tARN) - ARN ribosomal (rARN) En general, todos estos ARN son de hebra simple, pero el ARN de transferencia y ARN ribosomal contienen extensas regiones de doble hlice (la cadena de nucletidos se dobla formando una horquilla o loop). Los ARN ms pequeos son los tARNs, que contienen alrededor de 75 nucletidos, mientras que el ms grande esta entre los mARN, que pueden tener ms de 5.000 nucletidos. Enzima de la sntesis Todos los ARN celulares son sintetizados por la ARN polimerasa de acuerdo a las instrucciones dadas por un ADN-patrn (o molde), empleando ribonuclesido-5-trifosfatos como sustrato. La direccin de la sntesis de ARN es 53, similar a la sntesis de ADN.

La actividad de la ARN polimerasa es diferente a la actividad de la ADN polimerasa porque no necesita una secuencia partidora o primer y no posee una actividad nucleasa. Otra diferencia es que el ADN patrn es totalmente conservado despus de la sntesis de ARN. La secuencia de ADN transcrito por la ARN polimerasa en ARN es llamado UNIDAD DE TRANSCRIPCIN y el producto de la sntesis (ARN) es el TRANSCRIPTO PRIMARIO. Transcripcin en eucariotes La maquinaria transcripcional de eucariontes es lejos ms complejo que en procariontes. Una importante consideracin es que en eucariontes superiores solamente una pequea proporcin del genoma es expresada a ARN (cerca de 10% como mximo). Una considerable proporcin del genoma de eucariontes existe permanentemente como cromatina (ADN cromosomal) altamente condensada y es transcripcionalmente inerte. Adicionalmente, hay protenas accesorias especficas llamadas FACTORES DE TRANSCRIPCIN y son requeridos para una transcripcin eficiente de todos los genes de eucariontes. Diferente al factor bacterial sigma (), los factores de transcripcin no se unen a la polimerasa directamente. Ellos forman complejos con la cromatina (ADN cromosomal) antes del inicio de la transcripcin y acta como un regulador positivo de la transcripcin. Enzimas de la trancripcin en eucariontes. El ncleo de eucariontes contiene tres tipos de ARN polimerasas: - ARN polimerasa I (localizada en el nuclolo) transcribe los genes de ARN ribosomal. El transcrito primario producido corresponde a un pre-rARN que posteriormente sufre algunas modificaciones para transformarse en una rARN maduro. -ARN polimerasa II (se encuentra en el nucleoplasma) transcribe los genes que codifican para protena y el transcrito primario corresponde

a un ARN nuclear heterogneo (hnARN), que son los precursores del ARN mensajeros citoplasmtico. -ARN polimerasa III (nucleoplasmtica) transcribe el rARN 5S (ARN ribosomico) y los tARNs (ARN de transferencia). Regin promotora para la actividad de ARN polimerasa I Para el caso particular de la ARN polimerasa I que sintetiza el ARN ribosomal. En el gen (ADN) para el rARN presenta una regin promotora de 150 pares de bases, ubicada en la posicin -142 y +6. Sin embargo, existen copias imperfectas del largo total del promotor en posiciones -1200 y -2300 pares desde el sitio de inicio de la transcripcin y entre estas regiones hay mltiples copias de 60 81 pares de bases de la regin promotora . Las copias 60/81 estimulan la transcripcin del verdadero promotor y puede estar involucrado en la unin de un factor presente en cantidades limitadas. Las copias totales de los promotores pero imperfectos son capaces de iniciar la sntesis de ARN, pero este efecto termina antes de alcanzar la verdadera regin promotora.
Punto de inicio

repeticiones gen 28S rARN Promotor espaciador de 60/81 bp

Promotor del gen Gen 18S rARN

-4000

-2000

+1

Figura 8. Regin promotora del gen de rARN, con una regin promotora verdadera ( ) y con copias imperfectas de ella ( . ). Regin promotora para la ARN polimerasa II. Los genes transcritos por la polimarasa II producen los ARN mensajeros. Estos incluyen los genes que codifican a las protenas que son expresadas constitutivamente (que siempre son expresadas) en todos los tejidos y aquellos genes que solamente son expresados en un tejido particular de un organismo multicelular o que esta regulado por la presencia o ausencia de un sustrato particular, hormona o estmulo ambiental. Los promotores para la ARN polimerasa II estn localizados en el lado 5 del sitio de inicio de la transcripcin.

-80

-25

inicio

--CAAT----------GGGCCCGGG------GGGCCGGG---------TATA--------

Estas secuencias tienen la funcin de unir los factores de transcripcin especficos en vez de dirigir los puntos de contacto con la ARN polimerasa II, como ocurre en procariontes. Varios promotores que estn relativamente cercanos al punto de inicio de la transcripcin, son necesarios pero normalmente insuficientes para que se realice una eficiente expresin de los genes por la enzima ARN polimerasa II.

Adems existen otros tipos de secuencias en el ADN molde llamadas ENHANCER que no tienen actividad promotora por si mismas, pero que pueden estimular la transcripcin y pueden actuar sobre considerables distancias de varios kilobases del sitio de inicio de la transcripcin. Una caracterstica de los enhancer es que realizan su accin independiente de la orientacin que ellos tengan (Fig. 9)

-8,000

+1

Enhancer

Promotor Sitio de inicio

Figura 9. Esquema de la posicin del Enhancer con respecto al promotor. El transcrito primario de la ARN polimerasa II, son conocidas colectivamente como ARNs nucleares heterogneos. Ellas pueden llegar a ser grandes molculas (sobre 10 kilobases) debido que contiene an los intrones (secuencia que no son traducidas a protena) en la secuencia de ARN, pero ellas no estarn presente en el ARN maduro. SINTESIS DE ARN MENSAJEROS La sntesis de un mARN en eucariontes (ver fig. 10): - (1) Comienza la transcripcin de un ADN cuando una ARN polimerasa se encuentra a 20 o 30 nucletidos despus de la secuencia TATA. - (2) Cuando el transcrito ( ARN) ha alcanzado 30 nucletidos de largo, en su extremo 5 es colocado una guanosina unido a un grupo trifosfato que adems es metilado. - (3) La ARN polimerasa se nueve a lo largo del ADN transcribiendo tanto exones como intrones. Hasta que se transcribe la secuencia AAUAAA, despus de cerca de 20 nuclotidos de esta secuencia, el transcrito es cortado; la reaccin probablemente involucra una pequea ribonucleoprotena nuclear (snRNP) que contiene una molcula de ARN ( U1 ARN) rico en uracilo. - (4) Una enzima adiciona una secuencia de 150 a 200 adeninas en el extremo 3 de la hebra de ARN naciente. - (5) El transcrito es procesado y son cortados los intrones, probablemente con la ayuda de otras snRNPs; y nuevamente U1 ARN se une a una secuencia complementaria (que incluye GU) en

el comienzo del intron, tambin en este proceso participan otras 6 molculas de ARN (denominadas U2,U3,...U7) - (6) Los intrones son doblados y cortados - (7) Los exones son unidos para formar finalmente el ARN mensajero maduro

La mayora de los genes en eucariontes superiores son discontnuos. Las secuencias que se codificaran en estos genes (exones) son separadas por secuencias que no son traducidas (intrones), que son removidos en la conversin del transcripto primario a mARN maduro.

(1)
TAT A

ARN Polimerasa II

ADN

(2)
TATA

+CH3 G -P-P-P

Transcrito primario

Enzima

(3)

CH3

AAUA AA

G -P-PP

snRNP

U1 ARN Enzima Poli (A)

(4)

CH3

! G - P-P-P

AAUAAA

AAAA...

(5)
snRNP

U1 ARN CH3

! G - P-P-P

GU

GU
AAAA...

(6)

GU

CH3

! G - P-P-P
AAAA...

CH3

! G - P-P-P
AAAA...

Figura 10. Transcripcin de un mARN en Eucariontes (las explicaciones se encuentran en el texto).

GU

(7)

GU

GU

ARN Polimerasa III Los genes transcritos por la ARN polimerasa III ( rARN 5S, tARN y varios ARNs nucleares y citoplasmticos pequeos) usualmente contiene menos de 300 nuclotidos. Genes de rARN 5S no contienen intrones mientras que muchos genes de tARN poseen pequeos intrones. Regin Promotora para la accin ARN polimerasa III. El control de transcripcin mejor estudiada es del gen rARN 5S, que inesperadamente tiene una secuencia promotora dentro de su secuencia transcrita. Se ha determinado que la regin interna promotora esta entre las posiciones + 50 y + 84, que mostr ser esencial para la transcripcin de los genes rARN 5S (fig. 11). En la regulacin de las sntesis de rARN 5S existen factores llamados : TFIIIA, TFIIIC, que son requeridos para una transcripcin eficiente. Gen 5S rARN
Regin Promotora

5'

3'

5S rARN

-80

-40

+40

+80

+100

Figura 11. Localizacin de la regin promotora del gen 5S rARN de X. laevis. Modificaciones Post Transcripcionales Muchos ARNs son modificados qumicamente (Ej. metilados) y escindidos o cortados despus de la transcripcin. Los mARNs son modificados por acoplamiento de una larga cadena de poli-A a su extremo 3. Los rARNs se generan a partir de una larga cadena precursora que finalmente es escindida para rendir los ARNs maduros. ENCONTR LA INFORMACIN DE ARRIBA EN UNA PGINA Y REALMENTE NO ENTEND MUCHO.

Transcripcin (sntesis de ARN)

El proceso de sntesis de ARN o TRANSCRIPCIN, consiste en hacer una copia complementaria de un trozo de ADN. El ARN se diferencia estructuralmente del ADN en el azcar, que es la ribosa y en una base, el uracilo, que reemplaza a la timina. Adems el ARN es una cadena sencilla.

En una primera etapa, una enzima, la ARNpolimerasa se asocia a una regin del ADN,denominada promotor, la enzima pasa de una configuracin cerrada a abierta, y desenrolla una vuelta de hlice, permitiendo la polimerizacin del ARN a partir de una de las hebras de ADN que se utiliza como patrn.

La ARN-polimerasa, se desplaza por la hebra patrn, insertando nucletidos de ARN, siguiendo la complementariedad de bases, as p.e. Secuencia de ADN: 3'... TACGCT...5' Secuencia de ARNm: 5'...AUGCGA...3'

Cuando se ha copiado toda la hebra, al final del proceso, la cadena de ARN queda libre y el ADN se cierra de nuevo, por apareamiento de sus cadenas complementarias. De esta forma, las instrucciones genticas copiadas o transcritas al ARN estn listas para salir al citoplasma.

El ADN, por tanto, es la "copia maestra" de la informacin gentica, que permanece en "reserva" dentro del ncleo. El ARN, en cambio, es la "copia de trabajo" de la informacin gentica. Este ARN que lleva las instrucciones para la sntesis de protenas se denomina ARN mensajero. MS ENTENDIBLE..
Transcripcin en eucariotas En el caso de las eucariotas, el proceso se realiza en el ncleo, y es similar al de las procariotas, pero de mayor complejidad. Diferentes ARNp transcriben distintos

tipos de genes. La ARNpII transcribe los pre-ARNm, mientras que la ARNpI y ARNpIII transcriben los ARN-ribosomales y ARNt, respectivamente. Los ARNs transcritos son modificados posteriormente. El pre-ARNm,por ejemplo, sufre un proceso de maduracin que tras cortes y empalmes sucesivos elimina ciertos segmentos del ADN llamados los intrones para producir el ARNm final. Durante este proceso de maduracin se puede dar lugar a diferentes molculas de ARN, en funcin de diversos reguladores. As pues, un mismo gen o secuencia de ADN, puede dar lugar a diferentes molculas de ARNm y por tanto, producir diferentes protenas. Otro factor de regulacin propio de las clulas eucariotas son los conocidos potenciadores (en ingls: "enhancers"), que incrementan mucho (100 veces) la actividad de transcripcin de un gen, y no depende de la ubicacin de stos en el gen, ni la direccin de la lectura. Etapas de la transcripcin Clsicamente se divide el proceso de la transcripcin en 3 etapas principales (iniciacin, elongacin y terminacin), pero realmente se pueden diferenciar 5 etapas : Preiniciacin Al contrario de la replicacin de ADN, durante el inicio de la transcripcin no se requiere la presencia de un cebador para sintetizar la nueva cadena, de ARN en este caso. Antes del inicio de la transcripcin se necesita toda una serie de factores de transcripcin que ejercen los factores de iniciacin. Estos se unen a secuencias especficas de ADN para reconocer el sitio donde la transcripcin ha de comenzar y se sintetice el ARN cebador. Esta secuencia de ADN en la que se ensamblan los complejos de transcripcin se llama promotor. Los promotores se localizan en los extremos 5'-terminales de los genes, antes del comienzo del gen, y a ellos se unen los factores de transcripcin mediante fuerzas de Van der Waals y enlaces de hidrgeno. Los promotores tienen secuencias reguladoras definidas, muy conservadas en cada especie, donde las ms conocidas son la caja TATA (situada sobre la regin -10), con la secuencia consenso TATA(A/T)A(A/T); y la caja TTGACA (situada en el punto -35). La formacin del complejo de transcripcin se realiza sobre el promotor TATA, all se forma el ncleo del complejo de iniciacin. Sobre la caja TATA se fija una protena de unin (TBP) junto con el factor de transcripcin TFII D (TF proviene del ingls: transcription factor). Despus, a ellos se unen otros factores de transcripcin especficos: TFII B se une a TBP, TFII A (opcional), que estabiliza el complejo TFII B-TBP; luego se une el complejo TFII F y ARN polimerasa, y al final TFII E y TFII H. Todo ello forma un complejo que se llama complejo de preiniciacin cerrado o PIC. Cuando la estructura se abre por mediacin del factor

de transcripcin TFII H, da comienzo la iniciacin y al complejo abierto (por su accin helicasa dependiente de ATP). Iniciacin Primero, una Helicasa separa las hebras de ADN en estas denominadas cajas TATA, ya que entre adenina y timina se establecen dos enlaces de hidrgeno, mientras que entre citosina y guanina se forman tres. Posteriormente se unen los factores y las proteinas de transcripcin (TBP, TF2D, TF2B) permitiendo, de esta manera, el acceso de la ARN polimerasa al molde de ADN de cadena simple, siendo esta la ultima en posicionarse. Aunque la bsqueda del promotor por la ARN polimerasa es muy rpida, la formacin de la burbuja de transcripcin o apertura del ADN y la sntesis del cebador es muy lenta. La burbuja de transcripcin es una apertura de ADN desnaturalizado de 18 pares de bases, donde empieza a sintetizarse el ARN cebador a partir del nucletido nmero 10 del ADN molde de la burbuja de transcripcin. La burbuja de transcripcin se llama complejo abierto. La ARN polimerasa es una enzima formada por 5 subunidades: 2 subunidades , 1 subunidad , 1 subunidad ' y 1 subunidad que tiene como funcin la unin de ribonucletidos trifosfato. Cuando se forma el complejo abierto, la ARN polimerasa comienza a unir ribonucletidos mediante enlaces fosfodister, y una vez que se forma el primer enlace fosfodister, acaba la etapa de iniciacin.y comienza asi la siguiente etapa. Disgregacin del promotor Una vez sintetizado el primer enlace fosfodister, se debe deshacer el complejo del promotor para que quede limpio para volver a funcionar de nuevo. Durante esta fase hay una tendencia a desprenderse el transcrito inicial de ARN y producir transcritos truncados, dando lugar a una iniciacin abortada, comn tanto en procariontes como eucariontes. Una vez que la cadena transcrita alcanza una longitud de unos 23 nucletidos, el complejo ya no se desliza y da lugar a la siguiente fase, la elongacin. La disgregacin del promotor coincide con una fosforilacin de la serina 5 del dominio carboxilo terminal de la ARN polimerasa, que es fosforilado por el TFII H (que es una protena quinasadependiente de ATP) Elongacin La ARN polimerasa cataliza la elongacin de cadena del ARN. Una cadena de ARN se une por apareamiento de bases a la cadena de ADN, y para que se formen correctamente los enlaces de hidrgeno que determina el siguiente nucletido del molde de ADN, el centro activo de la ARN polimerasa reconoce a los ribonucletidos trifosfato entrantes. Cuando el nucletido entrante forma los enlaces de hidrgeno idneos, entonces la ARN polimerasa cataliza la formacin

del enlace fosfodister que corresponde. A esto se le llama elongacin, la segunda etapa de la transcripcin del ARN. Terminacin Al finalizar la sntesis de ARNm, esta molcula ya se ha separado completamente del ADN (que recupera su forma original) y tambin de la ARN polimerasa, terminando la transcripcin. La terminacin es otra etapa distinta de la transcripcin, porque justo cuando el complejo de transcripcin se ha ensamblado activamente debe desensamblarse una vez que la elongacin se ha completado. La terminacin est sealizada por la informacin contenida en sitios de la secuencia del ADN que se est transcribiendo, por lo que la ARN polimerasa se detiene al transcribir algunas secuencias especiales del ADN. Estas secuencias son ricas en guanina y citosina, situadas en el extremo de los genes, seguidas de secuencias ricas en timina, formando secuenciaspalindrmicas, que cuando se transcriben el ARN recin sintetizado adopta una estructura en horquilla que desestabiliza el complejo ARN-ADN, obligando a separarse de la ARN polimerasa, renaturalizndose la burbuja de transcripcin. Algunas secuencias de ADN carecen de la secuencia de terminacin, sino que poseen otra secuencia a la que se unen una serie de protenas reguladoras especficas de la terminacin de la transcripcin como rho.