Objetivos Manejar con mayor seguridad un espectrofotmetro.

o. Determinar la concentracin de sustancias orgnicas en muestras problema por medio de una curva de Calibracin. Aplicar la ley Lamber - Beer Obtener el espectrograma de cada uno de los estndares leda su absorbancia realizar una curva de calibracin. Analizar muestras de cafena, obtenida su absorbancia, determinar su concentracin con la ayuda de la curva de calibracin.

Consideraciones tericas Todo compuesto orgnico puede absorber radiacin electromagntica porque todos contienen electrones de valencia que pueden ser excitados a niveles de energa ms altos. El anlisis cuantitativo est basado en la Ley de Lambert Beer que establece que la cantidad de luz absorbida por la muestra, aumenta a medida que se incrementa la cantidad de dicha muestra o conforme es mayor el camino ptico de la radiacin a travs de la misma. Se debe de tener en cuenta que dicha ley cuenta con algunas limitaciones una de ella es el que esta debe trabajarse a concentraciones muy bajas, ya que a partir de o.1 ya no es ledo el espectrograma, adems que debe ser constante la absorbancia ya que si no tendremos errores en la lectura tambin se ocurrir esto, cuando trabajemos con una especie absorbante que participe en el equilibrio. Asimismo estos espectros existe un numero relativamente escaso de mximos y minimos esto es por

los factores que afectan los corrimientos de la longitud de onda los cual es debido por el disolvente, sera por una mal seleccin de l, incluso por su polaridad esto llega a deslocalizar o localizar a los electrones, nombrados como efecto bato crmico e hipsocrmico respectivamente, igualmente es por la intensidad de la brillantez y el potencial de hidrogeno, por ltimo los cambios mximos de absorbancia que son causadas por las concentraciones y el ancho de la celda, sus efectos son los llamados hipercrmico e hipocrmico que presenta una ancho de banda fuera de lo normal y un espectro sin vrtice respectivamente. Despus de establecer las condiciones del anlisis, es necesario preparar una curva de calibracin a partir de estndares de concentracin conocida. Estos estndares deben de estar dentro del rango lineal. Esta grafica de absorbancia contra concentracin debe ser una recta que pasa por el origen.

Clculos y resultados Construir curva de calibracin para la cafena. (Grafica 1) Calcular la concentracin (p.p.m.) de cafena en las muestras problemas, a partir de la curva de calibracin. Muestra COCA COLA MONSTER Concentracin (ppm) 5-20 5-20

Calcular el coeficiente de absorcin a partir de los datos de las soluciones estndar.

Datos: Muestra 1 2 3 4 Concentracin (ppm) 5 10 15 20 Absorbancia (nm) 0,273 0,487 0,741 0,983 Ancho de la celda (cm) 1 1 1 1

Aplicando la ley de lamber beer

A = abc
Despejando el coeficiente de absorcin.

-Para las soluciones estndar.

a1 = 0.273/(1).(5) = 0,0546 litros g cm-1 a2 = 0.550/(1).(10) = 0,0487 litros g cm-1 a3 = 0.800/(1).(15) = 0.0494 litros g cm-1 a4 = 1.050/(1).(20) = 0.04915 litros g cm-1 aprom= 0.05046 litros g cm-1 _Para las muestras aSPRIT = 0.152/(1).(3.9) = 0.039 litros g cm-1 aFANTA = 0.254/(1).(5.1) = 0.050 litros g cm-1 aCOCA = 0.654/(1).(12.8) = 0.051 litros g cm-1 aPEPSI = 0.900/(1)(17.0) = 0.053 litros g cm-1

Calcular la concentracin de la muestra problema a partir de la absortividad Muestra SPRITE FANTA COCA-COLA PEPSI KICK Concentracin (ppm) 3.9 5.1 12.8 17.0

Concentracin de la muestra del sprite de 600ml Volumen de muestra 0.5 ml aforado a 100ml C = A/ab C= 3.9/0.053.1 = 73.585 g Concentracin de la muestra de la fanta de 600ml C= 5.1/O.O53.1 = 96.226 g Concentracin de la muestra de la coca de 450ml C= 12.8/0.053.1 = 241.509 g Concentracin de la muestra de la Pepsi de 600ml C= 17.0/0.053.1 = 320.755 g Determinacin de la concentracin real de la muestra problema.

C real absorcin = C leda de la curva * (V aforo (ml)/ V de muestra (ml) ) C real absorcin del Sprit = 3.9 * (10 / 0.5) = 78.00 En 0.5ml en los 600ml = 9.36 x 104

C real absorcin de la fanta = 5.1 * (10 / 0.5) = 102.00 En 0.5ml en los 600ml = 1.22 x 105

C real absorcin de la coca = 12.8 * (10 / 0.5) = 256.00 En 0.5ml en los 600ml = 3.07 x 105

C real absorcin de la pepsi = 17.0 * (10 / 0.5) = 340.00 En 0.5ml en los 600ml = 4.08 x 105

Comparacin de los resultados de las concentraciones Muestra sprit fanta coca pepsi C calculo (g) 78.00 102.00 256.00 340.00 C grafica(g) 73.585 96.226 241.509 320.755

Observaciones y conclusiones A travs de la absorcin de la radiacin ultravioleta es posible determinar un anlisis cuantitativo, se observ que los estndares preparados para la determinacin de la cafena iba creciendo a medida que estas aumentaban su concentracin con ayuda de los datos obtenidos de su absorbancia se pudo emplear un curva de calibracin para determinar la concentraciones de nuestras muestras y compararlas con ayuda de la absortividad y con la real. Se concluye que una bebida de sabor cola tiene ms contenido de cafena que uno de sabor. La ley lamber beer se cumplio, teniendo en cuenta sus limitaciones. Siendo una opcin para anlisis cuantitativos; teniendo resultados como la absorbancia fue constante las concentraciones ledas fueron debajo de 0.1 Las concentraciones obtenidas usando la curva de calibracin con respecto a la del clculo no tienen mucha variacin y el existe es debido por la exactitud leda en la curva de calibracin.

Cuestionario 1. Explique la Ley de Lambert-Beer Esta ley expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica y concentracin de un cromforo en solucin A=EbC LA absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su concentracin, tambin depende de la distancia que recorre la luz por la solucin y por ltimo de pende de E, una constante de proporcionalidad especfica por cada cromforo. 2. Diga cuales son las principales limitaciones de esta ley Si no se trabaja en bajas concentraciones, pierde su linealidad. Ancho de banda espectral Cambios de sensibilidad en el detector Fluctuaciones de la potencia del sistema de radiacin Desviaciones qumicas debido al equilibrio qumico Molar A=EbC El coeficiente de absorcin molar es una propiedad intensiva que no depende de la concentracin de la sustancia y representa la absorcin de la luz por parte de un mol de soluto para una longitud de onda dada. 4. Explique en que consiste el mtodo de cuantificacin por Curva de Calibracin Se hace una grfica con los estndares de concentracin conocida. Una vez hecha la grfica, obtenemos la absorbancia de la muestra problema y con la grfica del estndar, en el punto de interseccin con la recta se conoce la concentracin de la muestra problema. 5. Qu otro mtodo de cuantificacin existe y en que casos puede ser utilizado? Mtodo de un solo estndar o del factor. Se utiliza en soluciones puras de concentracin conocida como estndar; y se evalan aquellos en la que se tiene una idea de la concentracin a conocer.

3. En la ecuacin de Lambert-Beer. Explique que es el coeficiente de Absorcin

6. Defina los siguientes trminos a)Absorbancia Es la cantidad de radiacin electromagntica que absorbe el analto. b)Transmitancia Es la cantidad de radiacin electromagntica que logra atravesar la muestra en el ancho de la celda y no es absorbida por la materia 7. Cules son los factores que influyen en los mximos de la absorbancia? La concentracin Longitud de paso ptico (ancho de celda) La probabilidad de transicin electrnica PH Temperatura Tipo de solvente

8. Mencione los factores que influyen en los corrimientos de la longitud de onda

9. Qu caractersticas deben tener los disolventes empleados en la tcnica UVVisible? Disolver la muestra Deben ser transparentes en la regin de estudio No absorbe REM No debe reaccionar con la muestra Polaridad del solvente Transicin electrnica