I Introduccin:

establece los criterios de higiene del proceso de produccin en los mataderos basndose en el recuento de microorganismos aerobios mesfilos (RA) y de enterobacterias (RE) de muestras tomadas mediante el mtodo destructivo. Adems indica que los explotadores de los mataderos podrn usar otros procedimientos de toma de muestras si pueden demostrar que proporcionan al menos garantas equivalentes. El anlisis de los
alimento y piensos para determinar la existencia, tipo y nmero de microorganismos es bsico para la microbiologa de alimentos. Sin embargo ninguno de los mtodos utilizados habitualmente permite determinar el nmero exacto de microorganismos que existe en un determinado alimento.

II OBJETIVO Evaluar la eficacia del mtodo del hisopado en la recuperacin de microorganismos aerobios mesfilos y enterobacterias de la superficie de Canals de placa petri III MARCOTEORICO Se compararon dos metodologas de cuantificacin de esfilosaerobiostotales: el mtodo estndar propuesto por la Food and Drug Administration (FDA) y el mtodo de recuento en placas Petrifilm.Fueron estudiadas 25 muestras de drogas vegetales en envases individuales. Se encontraron diferencias ignificativas con un p< 0,001 entre el mtodo estndar y el mtodo de placas Petrifilm para el recuento de mesfilos aerobios, con un 95% de probabilidad. El anlisis de regresin del log10 de la media geomtrica del recuento deesfilos aerobios totales versus el log10 del recuento por placas Petrifilm, para recuentos entre 104 y 106 ,indica una correlacin de 0,964 entre ambos mtodos. Las placas Petrifilm podran considerarse como mtodo alternativo para el recuento de mesfilos aerobios totales en los controles microbiolgicos en los procesos de industrializacin de las drogas vegetales para
3.1Recuento de aerobios mesfilos En este grupo se incluyen todas las bacterias, mohos y levaduras capaces de desarrollarse a 30 C en las condiciones establecidas. En este recuento se estima la microflora total sin especificar tipos de microorganismos. Refleja la calidad sanitaria de un alimento, las condiciones de manipulacin, las condiciones higinicas de la materia prima. Un recuento bajo de aerobios mesfilos no implica o no asegura la ausencia de patgenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa presencia de flora patgena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por fermentacin, no son recomendables recuentos elevados. Un recuento elevado puede significar: 1 - Excesiva contaminacin de la materia prima 2 - Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin 3 - La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son mesfilos 4 - La inmediata alteracin del producto El recuento de mesfilos nos indica las condiciones de salubridad de

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3.2 Captacin y envo de la muestra
La captacin de las muestras no es una actividad incluida en la competencia del laboratorio acreditado para este anlisis. Para este tipo de anlisis no se utilizarn contramuestras. La toma y envo de muestras deben ser realizada por el Mdico Veterinario Oficial del SAG (MVO), el cual debe adjuntar las muestras a un Protocolo Oficial SAG, en cuyo documento debe sealar al menos la identificacin de cada una de ellas, el tipo de muestras, la fecha y la hora de la recoleccin de stas. Lo anterior debe realizarse de acuerdo a lo definido en el Manual de Procedimientos para Muestreo Microbiolgico Oficial en Carnes faenadas en Mataderos de Exportacin. SAG, ltima versin vigente.

3.3 Recepcin y manejo de la muestra

La recepcin y manejo de las muestras en el laboratorio debe realizarse de acuerdo a lo sealado en el Manual de Procedimientos para Muestreo Microbiolgico Oficial en Carnes faenadas en 1 2 3 4 5 6 7 Temperatura de recepcin (rango aceptado: 4 8 C). Tiempo entre la toma de muestras y la recepcin, ya que DEBEN SER PROCESADAS DENTRO DE LAS 24 HORAS DESDE LA TOMA DE LAS MUESTRAS. Integridad de las muestras. Cantidad suficiente de muestras para el anlisis. Identificacin adecuada. Contenedor con sello SAG intacto. Protocolo fuera del contenedor y con los datos requeridos de acuerdo al Manual anteriormente mencionado.

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3.4 Metodologa
Caractersticas del procedimiento de ensayo

Las placas Petrifilm para el Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos estn diseadas para determinar las poblaciones totales de bacterias aerobias. Se basa en el crecimiento de colonias de la flora aerobia mesfila que lleva la muestra. El diseo de esta placa presenta una pelcula con nutrientes y agentes gelificantes soluble en agua y un indicador rojo de Te

3.4 Preparacin de la muestra 1 Piel cuello de ave

2 - Aspticamente pesar a lo menos (manteniendo relacin 1:10 con el diluyente) 10 0.1 g de muestra representativa dentro de una bolsa estril Stomacher.

3 - Agregar 90 ml de Diluyente Butterfields Tamponado. Esta dilucin es denominada 10 -1. No usar tampones que contengan citrato, bisulfito o tiosulfato con las placas Petrifilm, ya que pueden inhibir el crecimiento. 4 - Homogenizar la muestra en equipo Stomacher por 1 minuto a velocidad media. 5 - Luego depositar 1 ml de esta dilucin de acuerdo a lo descrito en punto 5.3.3. 6 - La siembra en duplicado queda a criterio del laboratorio, para lo cual se debe repetir el procedimiento antes descrito. 7 - A partir de la dilucin anterior tomar 1 ml y depositarlo en un tubo que contenga 9 ml de Diluyente Butterfields Tamponado. Esta dilucin es denominada 10 -2. Con estas 2 diluciones se contina en el punto 5.3.3. 8 - En caso de ser necesario, el laboratorio puede realizar ms diluciones sucesivas con el objeto de obtener placas con recuentos contables.

3.5Protocolo de trabajo

1 - Rotular las placas Petrifilm con la identificacin de las muestras y la dilucin correspondiente. 2 - Colocar la placa Petrifilm Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos en una superficie plana. 3 - Levantar el film superior e inocular 1 ml de la dilucin decimal apropiada en el centro del film inferior. 4 - Bajar cuidadosamente el film superior encima de la muestra, evitando la formacin de burbujas de aire. 5 - Colocar el aplicador con la cara lisa hacia arriba en el centro de la placa. 6 - Presionar ligeramente el centro del aplicador para distribuir la muestra uniformemente. Distribuir el inculo por toda el rea de crecimiento del Petrifilm antes de que se forme el gel. No deslizar el aplicador por el film. 7 - Sacar el aplicador y esperar al menos un minuto para permitir que solidifique el gel. 8 - Por cada dilucin existente siembre en una o dos placas. 9 - Incubar las placas en posicin horizontal, cara arriba, en pilas de hasta 20 placas. La incubadora debe estar humidificada 10 - Incubar las placas Petrifilm Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos por 48 3 hrs a 35C 1C. 2 3.6Clculo e informe de los recuentos en placa

1 - Seleccionar las placas que presenten un rango de conteo entre 30 300 colonias. 2 - Altas concentraciones de colonias en las placas ocasionar que toda el rea de crecimiento se vuelva roja o rosada. Ocasionalmente, en placas demasiado cargadas, el centro de la placa puede carecer de colonias visibles, pero pueden apreciarse muchas colonias pequeas en los bordes. Cuando esto ocurre, diluir ms la muestra para obtener un

3.7. Anlisis Recuento de Microorganismos Aerobios Mtodos Recuento en placa, siembra en

Mesfilos (RAM) en alimentos

profundidad. Para anlisis de productos congelados, refrigerados, precocidos, o preparados. Bacteriological Analytical Manual Online. Enero 2001 Recuento de S. aureus en alimentos Recuento en placa siembra en superficie. Bacteriological Analytical Manual Online. Enero 2001 NMP Staphylococcus aureus en alimentos NMP. Bacteriological Analytical. Manual Online. Enero 2001 Recuento de mohos y levaduras en Recuento en placa, siembra en alimentos profundidadICMSFMicroorganismos de los alimentos. Tcnicas de anlisis microbiolgico Vol I- 2 Ed Deteccin de Nucleasa termoestable en Tatini-Cords-Gramoli. Screening for alimentos Staphylococcal Enterotoxins in Foods. Food Technology April 1976, Lachica -Hoeprich Metachromatic agar diffusion microslide technique for detecting staphylococcal nuclease in foods. Appl. Microb. 168-169, Jan 1972 Recuento de Microorganismos Aerobios Recuento en placa, siembra en Mesfilos (RAM) en agua profundidad.Standard Methods for Examination of Water and Wastewater 19th Ed 1995 Recuento de S. aureus en agua Recuento en placa siembra en superficie. Bacteriological Analytical Manual Online. Enero 2001 Recuento de mohos y levaduras en agua Recuento en placa, siembra en profundidadICMSFMicroorganismos de los alimentos. Tcnicas de anlisis microbiolgico Vol I- 2 Ed. Deteccin de toxina de S. aureus en cepas Tcnica Aglutinacin Reversa Pasiva en aisladas de alimentos Ltex (R P L A) Igarashi H. and Sugiyama J. 1987. Reversed passive latex aglutination test for the rapid and simple detection of bacterial toxins. Culture Oxoid. vol 8 N 1 Recuento de microorganismos Hetertrofos Recuento en placa, siembra en en placa profundidadStandard Methods for Examination of Water and Wastewater 19th Ed 1995

IVMATERIALES Y MTODOS a. MATERIALES Mechero de bunsen. Asa de vidrio esterilizado Horno estufa Contador de colonias Muestra problema Nctar Agua peptonada Agar nutritivo

Materiales de Vidrio: Tubo de ensayo3 unidades. Placas petri 3 unidades Pipeta 2 unidades.

b. MTODOS 1. El recuento estndar en placas. Se utiliza para determinar el nmero de grmenes por gramo o mililitro del alimento en estudio, partiendo de la serie de diluciones decimales, mediante el empleo de tcnicas en placas de agar. 2. procedimiento o De la muestra problema tomar 1 ml. o 1 gr. y depositarlo en un tubo o o
o o o o o que contiene 9 ml. de diluyente, agitar, se obtiene la dilucin 10 -1 (1/10). La diluciones se preparan de la forma siguiente: de la solucin 10 -1 tomamos un ml. y la colocamos en un tubo que contiene 9 ml. de diluyente, mezclar bien y se obtiene la dilucin 10-2 (1/100). Repetimos el mismo procedimiento par obtener la dilucin 10 -3 (1/1000). De cada dilucin tomar 1 ml. y drenarlo en cada placa petri estril y vaca, previamente rotulada, por duplicado (sembrar por incorporacin). Agregar agra licuado y T de 44 45C a las cajas petri (15 ml.). Mezclar por rotacin dejar solidificar y agregar una capa de agar y dejar solidificar. Una vez solidificado el agar invertir las placas e incubar a 27C por 48 horas. Luego de la incubacin efectuar el conteo d las colonotas en la placa petri, utilizando una cuenta colonias o un microscopio simple.

V RESULTADO Los microorganismos aerobios se detectaron en todas las canales por ambos mtodos y las enterobacterias en el 77,5% y 72,5% de las canales muestreadas por escisin e hisopado respectivamente. Los RA y RE (Log ufc/cm2) hallados a partir de muestras obtenidas por escisin (4,29 y 2,01 respectivamente) fueron significativamente (p<0.001) ms elevados a los valores obtenidos por hisopado (2,95 y 0,78). El valor medio de la relacin entre el RA de escisin y RA de hisopado de cada canal fue 53,09; por tanto el hisopado solo recuper, por trmino medio, el 1,88% de VI DISCUCIONES
3 Algunos organismos pueden licuar el gel, pudindose producir una difusin que oculte la presencia de otras colonias. Si la licuacin del gel interfiere con el recuento, debe realizarse un recuento estimado contando las reas no afectadas.

4 - Tras la incubacin, las placas pueden conservarse, para recuentos posteriores, en congelacin a temperaturas bajo o igual a los 15 C por un mximo de una semana, para efectuar el conteo. Esto es slo para casos de emergencia, no se debe establecer como procedimiento rutinario. 5 - En el caso de valores obtenidos sobre o bajo el rango deben ser informados como Recuento Estimado en Placa (RESP). 6 - En caso de recuentos nformar como Muy Numeroso Para Contar (MNPC). 7 VII COCLUCIONES

En canales de nectar, el mtodo del hisopado recupera muy pocos microorganismos (1,88%) y las enterobacterias se detectan en el 77,5% (escisin) y 2,5% (hisopado) de las canaleteen el nctar no hubo muchos microorganismos en el analisis de recuento de microorganismo
8 VIII BIBLIOGRAFIA http://www.analizacalidad.com/arm2004-4.pdf

http://www.ugr.es/~ars/abstract/41-383-00.htm http://aym.juntaex.es/NR/rdonlyres/F5A7E80C-8F6C-49DB-A4A0161A867CDC1B/0/SolicitudAnalisisMuestrasMicrobiologicas.pdf http://farmacia.ugr.es/ars/pdf/205.pdf