Estudio Fitoqumico y Farmacolgico de la actividad UNIVERSIDAD NACIONAL de MAYOR DE SAN MARCOS Hipoglicemiante la Pasuchaca

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FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

Estudio Fitoqumico y Farmacolgico de la actividad Hipoglicemiante de la Pasuchaca

Ctedra de Farmacologa II

2012
Campos Salazar, Brayan Cceres Azaa, Carlos Gamarra Domnguez, Eliane Prez Guerrero, Fiorella Sagua Ticona, Henry Yataco Lzaro, Marcela
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CTEDRA

DE

FARMACOLOGA

II

Estudio Fitoqumico y Farmacolgico de la actividad Hipoglicemiante de la Pasuchaca

INDICE
I. II. III. IV. V. RESUMEN/SUMMARY INTRODUCCIN OBJETIVO GENERAL OBJETIVOS ESPECIFICOS GENERALIDADES V.1. CLASIFICACIN BOTNICA V.2. PATOLOGA A TRATAR VI. PARTE EXPERIMENTAL VI.1. EQUIPOS Y MATERIALES VI.1.1.1. Material Biolgico. VI.1.1.2. Equipos de Laboratorio. VI.1.1.3. Material de Laboratorio. VI.1.1.4. Material Farmacolgico y Reactivos. Pg. Pg. Pg. Pg. Pg. Pg. Pg. Pg. Pg.

VI.2. METODOS Y TECNICAS PROCEDIMENTALES Pg. VI.2.1.1. Recoleccin y desecacin del material botnico. VI.2.1.2. Obtencin del extracto. VI.2.1.3. Preparacin de los animales. VI.2.1.4. Determinacin del efecto. VII. RESULTADOS VII.1. Ensayo de solubilidad VII.2. Anlisis Cualitativo Fitoqumico del extracto VII.3. Resultado de la determinacin del efecto Hipoglicemiante VIII. DISCUSIN IX. CONCLUSIONES X. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS XI. ANEXOS Pg. Pg. Pg. Pg. Pg.

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RESUMEN En el presente estudio prospectivo, transversal y experimental tiene como objetivo determinar la valoracin del efecto hipoglicemiante del extracto hidroalcohlico de Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca) en ratas normales y con hiperglucemia inducidas con glucosa 3g/Kg de peso corporal a partir de una solucin glucosada al 50%. Este proyecto fue llevado acabo en el departamento de Farmacologa II de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos entre los meses de octubre y diciembre del 2012, en donde fueron empleadas 20 ratas Albinas con un peso promedio de 223g y de 8-9 semanas de edad, provenientes del Bioterio de la Universidad Nacional Agraria la Molina; para el estudio experimental se lograron formar 4 grupos de 5 rata cada uno y en donde se evidenci una glicemia basal promedio de 85.7mg/dl, los tres grupos restantes fueron empleados para la comparacin del efecto hipoglicemiante de la Pasuchaca en concentraciones de 500mg/Kg, 250mg/Kg y 5mg/Kg Glibenclamida respectivamente, el cual fue administrado por va oral en una sola dosis a travs de una cnula intragstrica. Los niveles de glicemia fueron medidos posteriormente mediante un glucmetro AccuChek Active de laboratorios Roche a los 30, 60,120 y 180min luego de haber administrado la primera dosis.

Segn los resultados obtenidos se pudo evidenciar que la actividad hipoglicemiante para el extracto de Pasuchaca 250mg/Kg de peso es efectiva pero muy lenta en comparacin con la de 500mg/Kg y la Glibenclamida por lo que se recomienda valorar la actividad hipoglicemiante de esta planta a largo plazo y en un modelo de diabetes mellitus no insulino-dependiente. Palabras clave: hipoglicemiante, glicemia, cnula intragstrica, diabete mellitus.

SUMMARY In this prospective study, experimental cross and aims to determine the valuation of the hypoglycemic effect of hydroalcoholic extract of Geranium ruizii Hieron (Pasuchaca) in normal rats with induced hyperglycemia and body weight 3g/kg glucose from a glucose solution 50%. This project was carried out in the Department of Pharmacology II, Faculty of Pharmacy and Biochemistry, National University of San Marcos between October and December 2012, where they were used 20 albino rats with an average weight of 223g and 8-9 weeks of age, from the Vivarium of the Universidad Nacional Agraria La Molina, for the experimental study is able to form 4 groups of 5 rats each and where they showed an average basal glucose 85.7mg/dl, the three remaining groups were used for comparison of the hypoglycemic effect in concentrations Pasuchaca 500mg/kg, respectively 250mg/Kg and 5mg/Kg Glibenclamide, which was administered orally as a single dose via intragastric cannula. Glucose levels were subsequently measured using a glucometer Accu-Chek Active from Roche at 30, 60.120 and 180min after the first dose administered.

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According to the results it was evident that the hypoglycemic activity of the extract weight 250mg/Kg Pasuchaca is effective but very slow compared to that of glibenclamide 500mg/kg and so it is recommended to assess the hypoglycemic activity of this plant long term and in a model of diabetes mellitus non-insulin dependent.

Keywords: hypoglycemic, glucose, intragastric cannula, diabetes mellitus.

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INTRODUCCIN

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OBJETIVO GENERAL Determinar el efecto hipoglicemiante del extracto hidroalcohlico de Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca) al ser administrado por va oral en ratas hiperglucemicas inducidas con glucosa. OBJETIVOS ESPECIFICOS Determinar la diferencia significativa de los niveles de glicemia en ratas inducidas a diabetes tipo II con glucosa tras la administracin de dosis de 500 mg y 250mg por kg de peso del extracto hidroalcohlico Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca ) en tiempos especficos. Determinar la eficiencia y eficacia de el Geranium ruizii Hieron como hipoglicemiante oral frente a los frmacos de uso comn como la Glibenclamida en la terapia de la Diabetes tipo II. HIPOTESIS H1: Existe efecto hipoglicemiante del extracto hidroalcohlico de Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca) al ser administrado por va oral en ratas hiperglucemicas inducidas con glucosa. H0: No Existe efecto hipoglicemiante del extracto hidroalcohlico de Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca) al ser administrado por va oral en ratas hiperglucemicas inducidas con glucosa.

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I. GENERALIDADES I.1. CLASIFICACIN BOTNICA A. Nombre Cientfico La muestra vegetal (Planta con flores) ha sido estudiada y clasificada como Geranium ruzzi hieron. B. Clasificacin botnica Tiene la siguiente posicin taxonmica, segn es Sistema de Clasificacin de Cronquist(1988). DIVISIN: MAGNOLIOPHYTA CLASE: MAGNOLIOPSIDA SUB CLASE: ROSIIDAE ORDEN: GERANIALES FAMILIA: GERANIACEAE GNERO: Geranium ESPECIE: Geranium ruizzi Hieron C. Descripcin Planta, acaule, silvestre que crece en forma espontnea; de porte herbceo, con las hojas membranosas. Raz tpica o pivotante. Hojas basales pubescentes, sostenidas por pecolos de 21 mm de largo, alternas, palmatipartidas, con 7 lbulos, dentibuladas. Los lbulos ampliamente cuneado-abovados. Los 3 lbulos medios, tridentados, y los 4 lbulos laterales, bidentados, con estipulas pubescentes concrecentes, corolinas, de 13 mm de largo. Inflorescencia en umbela; pednculo floral de 10 mm de largo.

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Flor perantica, diclamdea, heteroclamdea, hermafrodita, actinomorfa. Presenta en su base 5 verticilos de brcteas corolinas. D. Origen y Habitad S Se encuentra en altitudes por encima de los 3,000 metros sobre el nivel del mar y se desarrolla sobre los lugares soleados. Su presencia se ha reportado en los departamentos de Cerros de Pasco (Yanahuanca, Palca, Tambo pampa, Oxapampa.) Ancash, Apurmac, La Libertad, Huancayo, Junin y Cajamarca, hacia la cordillera de los Andes, entre los 2,500 y 3,500 m.s.n.m. E. Partes usadas Toda la planta seca: raz, hojas y flores. F. Componentes activos Glucsidos cianogenticos, alcaloides, antraquinnicos, anticianicos, saponnicos, gomas, muclagos, taninos, saponinas, clorofila, grasas, esencias, ceras, resinas, flavonoides, carotenoides, azcares reductoras. G. Usos Principalmente es un hipoglucmico, antidiabtico, depurativo, astringente atonas, blenorragias, llagas, diarreas, faringitis., gripes, hemorragias hemoptisis, inflamaciones, menorragias, resfriados, ulceras bucales y de las mamas. Esta planta posee accin Hipoglicemiante, por lo que se recomienda su uso en casos de diabetes; si bien an no se ha podido determinar el mecanismo de accin de sus componentes pero se cree que aumenta la utilizacin perifrica de la glucosa o incrementa la captacin de la glucosa por el Farmacologa II Pgina 8

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msculo e inhibe la gluconeognesis heptica aumentada en los diabticos o aumenta la recepcin de la insulina a sus receptores, considerando que la insulina no ejerce efecto para el transporte de la glucosa sobre ciertas clulas como las del epitelio tubular del rin, nos hace suponer que la Pasuchaca impide la reabsorcin de glucosa a travs del epitelio tubular, de ser as, se eliminaran mayores concentraciones de glucosa en la orina que las presentadas en las condiciones fisiolgicas de los diabticos. H. Uso tradicional Usos Diarreas crnicas: Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al da. Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al da. Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al da. Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al da Clera infantil: Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al da.

Inflamacin de la garganta: lceras bucales: Hemorragias: Clera infantil:

I. Preparacin y Dosis Para el tratamiento de la diabetes se realiza un cocimiento en el cual se debe hervir 3 tazas de agua, luego agregar 15 gramos de la planta (Pasuchaca), dejar reposar 5 minutos. Tomar una taza cada 4 horas

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J. Toxicidad Se han efectuado estudios de toxicidad aguda, administrando extracto acuoso por va oral mediante sonda metlica a ratones con ayuno de 14 horas; primero se busc por tanteo la dosis aproximada (20, 30 y 100 g/Kg. p.c.) que determina el efecto de un pequeo nmero de animales, luego se procedi a hacer un ensayo de animales (10 ratones por grupo) observndose la mortalidad en cada dosis empleada por un perodo de 7 das, sobre cuyos resultados se practicaron los clculos estadsticos a fin de determinar la DL50 exacta. La dosis de 20 g/Kg. p.c. administrada al primer grupo no produjo muertes, en el segundo con la dosis de 30 g/Kg. p.c. se produjo el 10% de muertes. El porcentaje de mortalidad aumenta con el incremento de la dosis de 50 g/kg p.c. La DL50 corresponde a 35 g/Kg. p.c. Despus de cada administracin de la droga y especialmente con las mayores dosis se observ primero la fase de excitacin con aumento de la frecuencia respiratoria, por aproximadamente 20 minutos, luego viene una fase de depresin disminuyendo la actividad espontnea y la reaccin de alarma, y aumento de la pasividad; posteriormente algunos experimentaron convulsiones seguidos de una muerte lenta. En la diseccin de los ratones se observ distensin intestinal.

K. Recomendaciones y Contraindicaciones No se recomienda consumir durante el tratamiento con alimentos azucarados ni bebidas alcohlicas. Tampoco se recomienda el uso en mujeres embarazadas, en periodos de lactancia y en nios menores de 3 aos. I.2. PATOLOGIA A TRATAR La Diabetes Mellitus es un grupo de enfermedades metablicas caracterizadas por hiperglicemia a consecuencia de defectos en la secrecin y/o en la accin de la insulina. La hiperglicemia crnica se asocia en el largo plazo dao, disfuncin e insuficiencia de diferentes rganos especialmente de los ojos, riones, nervios, corazn y vasos sanguneos. En 1997 la Asociacin Americana de Diabetes (ADA), propuso una clasificacin que est vigente en donde se incluyen 4 categoras de pacientes y un 5 grupo de individuos que tienen glicemias anormales con alto riesgo de desarrollar diabetes:

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Diabetes Mellitus tipo 1 Diabetes Mellitus tipo 2 Diabetes Gestacional Intolerancia a la glucosa y glicemia de ayunas alterada Otros tipos especficos de Diabetes

Diabetes Mellitus tipo 2:

Caracterizada por insulino-resistencia y deficiencia (no absoluta) de insulina. Es un grupo heterogneo de pacientes, la mayora obesos y/o con distribucin de grasa predominantemente abdominal, con fuerte predisposicin gentica no bien definida (multignica). Con niveles de insulina plasmtica normal o elevada, sin tendencia a la acidosis, responden a dieta e hipoglicemiantes orales, aunque muchos con el tiempo requieren de insulina para su control, pero ella no es indispensable para preservar la vida (insulino-requirentes).

Tratamiento Farmacolgico

Fig 20 : Tratamiento farmacolgico en la Diabetes Mellitus tipo II

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Tratamiento No Farmacolgico El tratamiento de la diabetes mellitus se basa en tres pilares: dieta, ejercicio fsico y medicacin. Tiene como objetivo mantener los niveles de glucosa en sangre dentro de la normalidad para minimizar el riesgo de complicaciones asociadas a la enfermedad. En muchos pacientes con diabetes tipo II no sera necesaria la medicacin si se controlase el exceso de peso y se llevase a cabo un programa de ejercicio fsico regularmente. Sin embargo, es necesaria con frecuencia una terapia sustitutiva con insulina o la toma de frmacos hipoglicemiante por va oral. Hoy en da el descubriendo de de los efectos hipoglicemiante en nuevas especies botnicas nos permite el uso y consumo de ciertas plantas como complemento homeoptico, una de ellas es la Pasuchaca La Pasuchaca es una planta silvestre que contiene, segn los homepatas, sustancias como taninos, saponas, clorofila, grasas, esencias, resinas, carotenoides y azcares reductores, que ayudan en tratamientos de ciertos tipos de diabetes y que se administra en especial a personas para complementar los tratamientos con insulina. II. PARTE EXPERIMENTAL El presente trabajo se realiz en el laboratorio de la Ctedra de Farmacologa de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. El mtodo utilizado para la investigacin fue inductivo deductivo; con un tipo de investigacin experimental a ciego simple y con un diseo experimental, longitudinal, prospectivo. En el proceso de trabajo se indujo a las ratas a Hiperglucemia con una dosis elevada de glucosa a partir de una solucin glucosada al 50%, posteriormente se administr el extracto de Pasuchaca con el objetivo de observar el efecto Hipoglicemiante del extracto en estudio. 1.1. EQUIPOS Y MATERIALES 1.1.1. Material Biolgico Se eligieron como animales de experimentacin 20 ratas albinas, provenientes del Bioterio de la Universidad Nacional Agraria la Molina las cuales estuvieron bajo condiciones de humedad, luz y temperatura controladas (humedad 60 + 10%, temperatura 23 + 1C y periodos de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad).Fig 1 y 2 Se formaron 4 grupos de 5 ratas cada uno a los cuales se le indujo Hiperglucemia (Diabetes tipo II) mediante la administracin de Glucosa va oral 3g/Kg de peso corporal a partir de una solucin glucosada al 50%; al mismo tiempo a las dems ratas se le administr la dosis del Farmacologa II Pgina 12

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extracto correspondiente va oral mediante cnulas intragstricas y fueron tomadas muestras adicionales a los 30, 60,120 y 180 minutos de administrado los tratamientos. Doce horas antes del experimento los animales fueron privados de alimentos y se les permiti libre acceso al agua. Se tom las primeras muestras de sangre y se determinaron los niveles de glicemia (normo glicemia de 70-100mg/dL)

Fig 1 y 2: Ratas albinas provenientes del Bioterio de la Universidad Nacional Agraria la Molina. Condiciones de humedad, luz y temperatura controladas (humedad 60 + 10%, temperatura 23 + 1C y periodos de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad).

1.1.2. Equipos de Laboratorio A. Glucmetro Para determinar los niveles de glucosa en sangre de ratas se us un kit comercial, el glucmetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche. Fig.3 El medidor de la glucosa en sangre est concebido y aprobado para analizar muestras de sangre capilar Fig.4 entera fresca (p.ej., sangre extrada de la yema de los dedos o de sitios alternativos como en las colas de ratas) fuera del cuerpo (uso como diagnstico in vitro); la muestra de sangre se obtuvo luego de hacer una pequea incisin en el pice de la cola hasta obtener una gota homognea y aplicar directamente sobre la tira reactiva del glucmetro.

Fig. 3: Glucmetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche. Farmacologa II Pgina 13

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Toma de muestra

Fig. 4 Toma de muestra B. Molino de cuchillas El empleo de e este equipo tiene como objetivo disminuir el tamao de las partculas de la droga vegetal y adecuarlas a la etapa siguiente de extraccin. A menor tamao de partcula mayor superficie de contacto, en este caso especfico tambin cabe mencionar que mientras las partculas de la droga vegetal se Fig. 5 : Molino de cuchillas malla N20 encuentren parcialmente destruidas facilitar la disolucin de los constituyentes celulares

en el medio de extraccin. Los molinos de cuchilla poseen en la cmara de molienda, laminas afiladas rotativas y fijas. El nmero de malla acoplado en el molino fue igual a 20 (Fig. 5) lo cual nos brind un polvo moderadamente grueso.

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C. Balanza analtica Fig. 6: Balanza analtica I nstrumento de medida ms usados en laboratorio y de la cual dependen bsicamente todos los resultados analticos. Las balanzas analticas (Fig. 6) ofrecen valores de precisin de lectura de 0,1 g a 0,1 mg, estn bastante desarrolladas de manera que no es necesaria la utilizacin de cuartos especiales para la medida del peso. An as, el simple empleo de circuitos electrnicos no elimina las interacciones del sistema con el ambiente. De estos, los efectos fsicos son los ms importantes porque no pueden ser suprimidos. D. Balanza para roedores Balanza con contenedor para animales (Fig.7), es una balanza electrnica que opera de acuerdo al principio de compensacin de fuerza electromagntica, aplicable a desplazamiento o torques donde se combina la exactitud de los componentes mecnicos con los sistemas automticos de lectura.

Fig. 7: Balanza electrnica para roedores con contenedor.

E.

Cocinilla elctrica de laboratorio

Instrumento de laboratorio que consiste en un alambre de alta resistencia enrollado varias veces alrededor de una placa rectangular de hierro. El alambre, que al conducir la electricidad adquiere un brillo blanco anaranjado, esta situado en el Farmacologa II Fig. 8: Cocinilla elctrica Pgina 15

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centro de una pantalla parablica que concentra y difunde el calor en un haz. (Fig. 8)

1.1.3. Material de Laboratorio Durante todo el estudio se emplearon los siguientes materiales: Material de Vidrio Frascos grandes de vidrio oscuro con tapa Frascos pequeos de vidrio oscuro con tapa Pipeta Embudo de vidrio Beaker Placa Petri Material de Plstico Colador de plstico Lavatorio de plstico Jeringas Pizeta Otros materiales Papel craft Papel filtro Cuchillo Tijera Pinza Cnula intragstricas Jaula para ratones Volumen 2L 40 ml 5ml , 10 ml 200 ml Volumen 2ml 250ml Cantidad 2 3 2 1 2 4 Cantidad 1 2 2 1 4 2 1 2 1 1 2

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1.1.4. Material Farmacolgico y Reactivos

Material Farmacolgico Extracto de tallo seco de Pasuchaca Reactivos Alcohol 70% Reactivo de Molish Reactivo de Fehling Reactivo de Benedict Reactivo de Brow Reactivo de Tollens Reactivo de Dragendorff Reactivo de Meyer

Cantidad 2Kg 2L V gotas V gotas V gotas V gotas V gotas V gotas V gotas

1.2. MTODOS Y TECNICAS PROCEDIMENTALES

1.2.1. Recoleccin y desecacin del material botnico. El material botnico fue recolectado en la provincia de Carabaya, departamento de Puno (mayor a 3,500 msnm). Se recolect aproximadamente 3 kilos de la planta. Se realiz el Sistema de Clasificacin de Cronquist (1988) para la muestra vegetal (planta con flores). La clasificacin taxonmica es la siguiente:

DIVISIN: MAGNOLIOPHYTA CLASE: MAGNOLIOPSIDA SUB CLASE: ROSIIDAE ORDEN: GERANIALES FAMILIA: GERANIACEAE GNERO: Geranium ESPECIE: Geranium ruizzi Hieron

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Nombre vulgar: Determinado por:

Pasuchaca. Blgo. Severo Balden.

En nuestro proyecto se trabaj con los tallos de Pasuchaca. Estos fueron sometidos a los proceso de lavado, seleccin, desinfectado, secado, trozado, molienda, extracto. Fig. 9

Lavado

Seleccin

Desinfectado

Trozado
Molienda

Secado

Extracto

Fig. 9: Diagrama de flujo I para la obtencin de extracto seco de tallos de Pasuchaca.

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1.2.2. Obtencin del extracto A fin de determinar la presencia de los principales grupos de compuestos qumicos presentes, tanto libres como en la forma de glucsidos se procedi a preparar un extracto hidroalcohlico para la obtencin de los elementos activos de los tallos de Pasuchaca; se sabe que los extractos hidroalcohlico son preparados con alcohol y agua y tienen la ventaja que el alcohol puede disolver muchas sustancias activas de las plantas medicinales, y por ser voltil, la evaporacin es mucho ms rpida, por lo que no se requiere tenerlo demasiado tiempo al calor para su concentracin. Se pesaron 106.2 g de polvo de tallo de Pasuchaca medianamente grueso obtenido por molienda y se dej macerar por 11 das en 600ml del solvente hidroalcohlico (proporcin 3:1 agua-alcohol); pasado los 11 das el extracto fue filtrado. El volumen de filtrado obtenido se distribuy en 4 placas petri y se llev a la estufa por 2 da para volatilizar el solvente, por ultimo se procedi al raspado obteniendo una cantidad de extracto seco de tallo de Pasuchaca igual a19g el cual fue incorporado en un recipiente mbar previamente rotulado. Fig. 10

Se pesaron 106.2 g de polvo de tallo de Pasuchaca. Macerar por 11 das en 600ml del solvente hidroalcohlico (proporcin 3:1 agua-alcohol).

Filtrado.

El filtrado se distribuy en 4 placas petri y se llev a la estufa por 2 da para volatilizar el solvente.

Raspado

Obteniendo del extracto seco de tallo de Pasuchaca igual a19g.

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Fig. 10: Diagrama de flujo II para la obtencin de extracto seco de tallos de Pasuchaca.

1.2.3. Preparacin de los animales Se emplearon como animales de experimentacin 20 ratas albinas con un peso promedio de 223g y de 8-9 semanas de edad, provenientes del Bioterio de la Universidad Nacional Agraria la Molina las cuales estuvieron bajo condiciones adecuadas y buenas prcticas de laboratorio. Se formaron 4 grupos de 5 ratas cada uno (2machos y 3 hembras) a los cuales se le indujo Hiperglucemia (Diabetes tipo II) mediante la administracin de Glucosa va oral 3g/Kg de peso corporal a partir de una solucin glucosada al 50% Fig. 11. Doce horas antes del experimento los animales fueron privados de alimentos y se les permiti libre acceso al agua. Se tom las primeras muestras de sangre y se determinaron los niveles de glicemia (normo glicemia de 70-100mg/dL)

Grupo A B C D

Dosis Glucosa Glucosa + Pasuchaca 500mg/Kg Glucosa + Pasuchaca 250mg/Kg Glucosa + Glibenclamida 5mg/Kg

N de ratas 5 ratas 5 ratas 5 ratas 5 ratas

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Fig. 11: Clculo de glucosa

Glucosa 3g glucosa 1Kg peso X1 glucosa 200g X1 = 0.6g Glucosada al 50% 50g 100mL 0.6g X2 X2= 1.2ml Peso en ratas Para una rata de 200g

1.2ml

PESO DE CADA RATA

X3

1.2.4. Determinacin del efecto Hipoglicemiante Para determinar el efecto Hipoglusemiantes de la Pasuchaca se administr al Grupo A, B, C y D glucosa 3g/Kg, al Grupo B al mismo tiempo se le administr 500mg/Kg de peso del extracto de Pasuchaca, al Grupo C 250mg/Kg de peso del extracto de Pasuchaca y al Grupo D 5mg/Kg de peso de Glibenclamida correspondientemente va oral mediante cnulas intragstricas y fueron tomadas muestras adicionales a los 30, 60,120 y 180 minutos de administrado los tratamientos. Para determinar los niveles de glucosa en sangre de ratas se us un kit comercial, el glucmetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche. La muestra de sangre se obtuvo luego de hacer una pequea incisin en el pice de la cola hasta obtener una gota de sangre homognea y aplica directamente sobre la tira reactiva del glucmetro. Fig. 12

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Coloque la tira reactiva en el dispositivo.

Realice una pequea incisin en el pice de la cola de la rata hasta obtener una gota de sangre homognea.

Cuando aparece el smbolo de un reloj de arena coloque una gota de sangre sobre la tira reactiva.

A continuacin aparecer el resultado de la prueba.

Fig. 12: Determinacin de la actividad hipoglicemiante

III. RESULTADOS 3.1. Ensayo de solubilidad Se realiz utilizando solventes en funcin a su polaridad creciente (etanol y agua destilada); para lo cual se pes 1 gramo del extracto hidroalcohlico seco y se coloc en tubos de ensayo, a los cuales se les agreg 2 ml de cada solvente para verificar su solubilidad. Agua Alcohol ++ ++++

3.2. Anlisis Cualitativo Fitoqumico del extracto Se realizaron pruebas cualitativas para determinar la presencia de metabolitos secundarios presentes en el extracto hidroalcohlico de tallo de Pasuchaca Farmacologa II Pgina 22

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COMPONENTES Grasas y aceites Alcaloides Lactonas y Cumarinas Triterpenos y/o esteroides Catequinas Resinas Azucares reductores Saponinas de tipo esteroidaly triterpenoide Fenoles y taninos Aminoacidos libres o aminas Quinonas Flavonoides Antocianidinas Principios amargos

RESULTADO + + ++ + + + + + +

Fig. 13: Anlisis Fitoqumico del extracto de Geraniun ruizii Hieron

3.3. Resultado de la determinacin del efecto Hipoglicemiante

Control de Glucemia en Ratas Induccin Glucemia con Hipoglicemiantes Basal Glucosa (mg/dL) (ml) (mililitros) 100 88 71 71 82 94 84 76 71 80 76 70 66 75 74 111 107 112 108 98 1.68 1.51 1.34 1.12 1.02 1.5 1.5 1.086 1.338 1.056 1.78 1.36 0.84 1.236 1.074 0.91 1.52 1.33 1.42 1.164 0.5 0.5 0.362 0.446 0.352 1.188 + 0.594 0.908 + 0.454 0.628 + 0.314 0.824 + 0.412 0.716 + 0.358 0.76 1.27 1.11 1.18 0.97

Grupo

Cdigo I II

Peso (g) 280 252 224 187 170 250 250 181 223 176 297 227 157 206 175 152 254 222 236 194

Tiempo (min) 30' 159 112 106 84 105 103 113 118 101 140 130 108 126 110 118 67 65 70 58 67 60' 132 97 98 73 98 122 115 153 100 124 122 103 104 101 115 71 62 55 57 53 120' 108 88 94 60 94 124 106 131 97 105 100 103 98 87 94 60 49 50 49 45 180' 104 90 85 80 90 107 99 102 78 98 76 98 91 74 86 67 51 64 70 41

Negras

III IV V I II

Rojas

III IV V I II

Verdes

III IV V I II

Azul

III IV V

Fig. 14: Cuadro general de Resultados del efecto hipoglicemiante de la Pasuchaca Farmacologa II Pgina 23

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Cuadros comparativos por grupos de estudio NEGRAS(Glucosa) 30' 60' 120' 159 132 108 112 97 88 106 98 94 84 73 60 105 98 94 180' 104 90 85 80 90

Ratn 1 Ratn 2 Ratn 3 Ratn 4 Ratn 5

NEGRAS
200 Glucemia mg/dL 150 100 50 0 30' 60' 120' 180' Ratn 1 Ratn 2 Ratn 3 Ratn 4 Ratn 5

Fig. 15: Grupo A (Glucosa) ROJAS(Glucosa+500mg/KgPasuchaca) 30' 60' 120' 180' Ratn 1 103 122 124 107 Ratn 2 113 115 106 99 Ratn 3 118 153 131 102 Ratn 4 101 100 97 78 Ratn 5 140 124 105 98

ROJAS
180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 30' 60' 120' 180' Glucemia mg/dL Ratn 1 Ratn 2 Ratn 3 Ratn 4 Ratn 5

Fig. 16: Grupo B (Glucosa+500mg/KgPasuchaca) Farmacologa II Pgina 24

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VERDES(Glucosa+250mg/KgPasuchaca) 30' 60' 120' Ratn 1 130 122 100 Ratn 2 108 103 103 Ratn 3 126 104 98 Ratn 4 110 101 87 Ratn 5 118 115 94

180' 76 98 91 74 86

VERDES
140 Glucemia mg/dL 120 100 80 60 40 20 0 30' 60' 120' 180' Ratn 1 Ratn 2 Ratn 3 Ratn 4 Ratn 5

Fig. 17: Grupo C (Glucosa+250mg/KgPasuchaca)

AZUL(Glucosa+5mg/Kg Glibenclamida) 30' 60' 120' Ratn 1 67 71 60 Ratn 2 65 62 49 Ratn 3 70 55 50 Ratn 4 58 57 49 Ratn 5 67 53 45

180' 67 51 64 70 41

AZUL
80 Glucemia mg/dL 60 40 20 0 30' 60' 120' 180' Ratn 1 Ratn 2 Ratn 3 Ratn 4 Ratn 5

Fig. 18: Grupo D (Glucosa+5mg/Kg Glibenclamida)

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Cuadro General La figura 19 refleja los efectos del extracto de Pasuchaca en los niveles de glucosa de taras albinas normoglicmicas. Cada valor representa la medida del grupo y las diferentes estadsticas se establecen con el valor basal (glicemia =0)

140 120 100 Glicemia (mg/dL) 80 60 40 20 0 0 30 60 120 180 Grupo B(Glucosa+500mg/Kg Pasuchaca) Grupo C (Glucosa+250mg/Kg Pasuchaca) Drupo D(Glucosa+5mg/KgGlib enclamida)

Grupo A (Glucosa3g/Kg)

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IV. DISCUSIN En el presente trabajo se han determinado varios puntos a discutir, en primer lugar el mtodo que se emple para la induccin de las ratas a hiperglucemia; como se sabe existen dos mtodos muy convencionales de realizar este estudio y el primero se basa en la administracin va intraperitoneal de Haloxano 130mg/Kg de peso 1; sin embargo este mtodo no fue aplicado en este diseo debido al gran dao que este puede producir a nivel de las clulas pancreticas generando la destruccin de estas en menos de 5 da de administrada la dosis, punto parte que obtendramos un tipo de Diabetes I dependiente de insulina, es por ello que se indujo a hiperglucemia mediante la administracin de glucosa 3g/Kg de peso generando Diabetes de tipo 2 en las ratas de experimentacin (modelo experimental de diabetes mellitus no insulino-dependiente) Una vez inducida las ratas a hiperglucemia se administraron las dosis respectivas de 500mg, 250 mg del extracto hidroalcohlico de la Pasuchaca y 5mg/Kg de Glibenclamida, al observar los resultado se pudo evidenciar y corroborar la actividad hipoglicemiante de la Pasuchaca ya que hubo una disminucin progresiva en las cifras de glicemia as como tambin lo demuestran otros trabajos experimentales ya realizados anteriormente2; sin embargo este no present una diferencia significativa en comparacin con la Glibenclamida, hipoglicemiante oral de la clase de las sulfonilureas utilizado en el tratamiento de la Diabetes mellitus tipo 2. Con respecto al extracto hidroalcohlico del Geranium ruizii a dosis de 250 mg/kg, este demostr ser mucho ms efectivo que el de 500mg/Kg ya que logr mejorar el nivel de glucosa en un 60% en el grupo experimental, con respecto a su glicemia inicial despus de los 30min de administrada la primer a dosis, esta diferencia podra deberse a algunos errores en la determinacin y preparacin de las concentraciones del extracto. Segn los resultados obtenidos el Geranium ruizii podra ser considerado como una terapia natural o un complemento (de los frmacos utilizados) contra la diabetes mellitus de tipo II, por presentar una actividad hipoglicemiante; sin embargo se recomienda mejorara las concentraciones a administrar de este extracto.

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V. CONCLUSIONES

Se demostr el efecto hipoglicemiante de Geraniun ruizii Hieron en rata Albinas inducidas a hiperglucemia mediante glucosa. El extracto hidroalcohlico de Pasuchaca en las dosis utilizadas de 500mg y 250 mg por Kg de peso present una una diferencia poco significativa en comparacin con la Glibenclamida. El mayor efecto hipoglicemiante del extracto Geranium ruizii Hieron se evidenci a una dosis de 250mg/Kg de peso con una disminucin progresiva en las cifras de glicemia a los 30min de administrado el extracto.

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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

VII. ANEXOS

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