PROPIEDAD ANTIBACTERIANA Y FUNGICA DE MACERADOS ETANLICOS Y EN AGUA DE ANDRES WAYLLA, WIRA WIRA Y LAMPAYA 1.

INTRODUCCION Los medicamentos herbarios ancestrales siguen utilizndose ampliamente en la actualidad y tienen una importancia en el comercio internacional (I). Las plantas medicinales son importantes para la investigacin farmacolgica ayudando a la Microbiologa Mdica e incluso Parasitologa frente al desarrollo de propiedades antibacterianas, fngicas y parasitarias fundamentadas en base a ciencia e Investigacin y no solo por sus usos teraputicos conocidos tradicionalmente, sino tambin porque son fuentes potenciales para la sntesis de medicamentos, pero que actualmente derivan de productos naturales (12,13), pero sin uso Industrial ni patentas y mucho peor determinado frente a qu agente causal patgeno puede actuar como ser Cocos Gram (+),Gram (+),Staphylococcus spp, o Enterococcus y Candida albicans(Hongo).

Bolivia cuenta con elevadas ventajas comparativas en relacin al uso de plantas medicinales. Entre estas se pueden citar a la gran biodiversidad y el conocimiento sobre su uso y manejo dado por la Medicina Tradicional y el conocimiento tnico (III). Ese tesoro boliviano que son sus Medicinas autctonas, ese conocimiento y habilidad que dio origen al nombre mismo del pas en el incario pues se llamo Qollasuyo, que significa Regin de Mdicos y Medicinas, estn actualmente en franca decadencia y en vas de desaparicin y deben ser revalorados y rescatados por nosotros mismos, los bolivianos.(5).

Las hojas, los cogollos tiernos y aun las flores del Cestrum Parqui LHerit Hierba santa (Tarija), Hediondilla, Andres Waylla (aymara y quechua), Nariswaylla (aymara quechua), Wajchi (aymara), Jasq`o (aymara Larecaja), Siruntilla (callawaya), Rama verde (Vallegrande), Juimonej (chiriguano) se emplean como desinfectantes en forma de cataplasma en los abscesos; la infusin de un cogollo tierno en una taza de agua hirviente para las inflamaciones gstricas y para las inflamaciones biliosas .De las hojas tiernas y molidas se prepara una pomada para curar la sarna tia, eczemas, etc. En Cochabamba el cocimiento de las hojas se emplea como excelente sudorfico; las hojas aplicadas exteriormente sirven para curar las ulceras y edemas. (5) Las propiedades medicinales de este arbusto que, en la regin de Torotoro (Norte Potosi) y el ro Caine se conoce con el nombre de Andres waylla reportan su uso para hacer secar las ampollitas y granos que salen en el cuerpo a causa de algunas enfermedades de la piel, las hojas tiernas molidas y aplicadas como pomada curan las
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caracha-sarna, la tina o Qara, El Pajtu o Llipira (fuego en los labios), etc. (11). Es necesario decir que en el departamento de Cochabamba las variedades ms comunes de esta especie vegetal son dos: una con flores de color caf casi negro, que es venenosa; y otra con flores amarillas que, como mencionamos tiene muchos usos medicinales. (11) Ejemplo el Andres wuaylla se usa en caso de la sarna o escabiosis es una ectoparasitosis de tipo familiar que ha afectado al hombre desde la antigedad. En 1687 cuando se relaciona con la presencia de un acaro en la piel. Sin embargo, slo a fines del siglo XIX se acept que el Sarcoptes scabiei es su agente causal. (1) La sarna es una ectoparasitosis cosmopolita, ms frecuente en pases templados y fros. Por ser su mecanismo de transmisin directo, es una enfermedad de tipo familiar o de grupos cerrados, en los cuales se observa que la posibilidad de contagio es de un 73-85%, siendo, por lo tanto, importante los factores de hacinamiento y promiscuidad. La posibilidad de infeccin a travs de fmites es escasa. (1)

2. PLANTEAMIETO DEL PROBLEMA

Cul de las plantas medicinales utilizadas tendrn mayor actividad antibacteriana y fngica?

3. ANTECEDENTES

Los factores socioeconmicos en barrios periurbanos y comunidades rurales son de mayor importancia de Cochabamba inciden en infecciones de heridas, o Candida albicans, Sarcoptes scabiae, o bacterias que ocasionan enfermedades Humanas comunes de ndole sistmico como ser Staphylococcus spp, o Enterococcus dentro de la familia Gram positivos. La informacin etnobotnica evidencia el uso de Cestrun Parqui LHerit para el tratamiento de Sarcoptosis, adems esta especie es apreciada por sus propiedades cicatrizantes y antibacterianas sobre la piel, Lampaya (Lampaya medicinalis F. Phil) usos tradicionales en afecciones renales, vas urinarias y de la prstata; afecciones hepticas; dispepsia, wira wira (Pseudognaphalium viravira (Mol.) A. Anderb.) de uso tradicionales tos, asma, bronquitis, resfro; fiebre. Considerando que la poblacin de estas zonas tiene por tradicin una mayor aceptacin en el uso de plantas medicinales frente a los tratamientos comerciales de sarcoptosis, se elaboraron formas farmacuticas alternativas y a bajo costo en base a extractos de Cestrun Parqui LHerit. Las pruebas in vitro evidenciaron que los extractos etanlicos y agua de Cestrun Parqui LHerit,(Andres Wuaylla), Lampaya (Lampaya medicinalis F. Phil) wira wira (Pseudognaphalium viravira (Mol.) A. Anderb.) Presentan actividad antibacteriana frente A Staphylococcus spp, o Enterococcus dentro de la familia Gram positivos y actividad antifngica frente a Candida albicans (ATCC 96934) e inhibicin contra el caro Sarcoptes scabiae. Se formularon titulaciones a diferentes concentraciones del extracto. Se realiz el control de calidad fisicoqumico y microbiolgico de los productos y pruebas preliminares de sensibilidad. Los mejores resultados se obtuvieron con formulaciones solucin madre 1:1 100 ul Inhibicion dentro de los estndares del CIM, ,1/4,1/8.

Palabras clave: Gram (+),Staphylococcus spp, o Enterococcus, etnobotnica, antifngica, pruebas in vitro, formulaciones galnicas.
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4. JUSTIFICACION

Los cocos Gram positivos son un grupo heterogneo de bacterias. Las caractersticas que tienen en comn son su forma esfrica, su reaccin a la tincin de Gram y la ausencia de endoesporas. La presencia o ausencia de actividad catalasa es una prueba sencilla que se utiliza para subdividirlas en varios gneros. Las catalasas son enzimas que catabolizan perxido de hidrgeno en agua y oxgeno gaseoso. Cuando se pone en contacto una gota de solucin de perxido de hidrgeno con una colonia productora de catalasa, aparecen burbujas a medida que se forma oxgeno gaseoso. En este trabajo de investigacin se exponen los gneros aerobios catalasa-positivos (como Staphylococcus (Bacteria de Ensayo), Micrococcus, Kocuria, Kytococcus y Alloiococcus); mientras que los gneros aerobios catalasa-negativos (Streptococcus, Enterococcus y microorganismos relacionados) se especifican Staphylococcus aureus,Staphylococcusepidermidi, Staphylococcussaprophyticus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus haemolyticus son la enfermedades Cutneas (carbuncos, foliculitls, fornculos, imptigo infeccin de heridas); mediadas por toxinas (intoxicacin alimentaria, sndrome de la piel escaldada, sndrome del shock txico); otras (artritis sptica, bacteriemia, empiema, endocarditis, osteomielitis, neumona), Bacteriemia; endocarditis; heridas quirrgicas; infecciones del tracto urinario; infecciones oportunistas de los catteres, anastomosis, prtesis y dispositivos de dilisis peritoneal Infecciones del tracto urinario; infecciones oportunistas Artritis, bacteriemia, endocarditis, infecciones del aparato genitourinario e infecciones oportunistas Bacteriemia, endocarditis, infeccin de heridas, Infecciones seas y articulares, Infecciones oportunistas e infecciones del tracto urinario y en el mismo caso tenemos a los Enterococcus ssp, teniendo el potencial en plantas medicinales con un gran poder antibacteriano y Fngico no se da la importancia respectiva que pueden ayudar en la economa de cada una de nuestras familias tanto cochabambinas o de otras regiones, dando un uso correcto de cada uno de los principios activos en concentraciones estandarizadas y puedan ser aplicables en PRO- DE LA MICROBIOLOGIA MEDICA PARASITOLOGIA. Por ejemplo en el caso de la sarcoptosis y/o problemas fngicos que se presenta en la poblacin, en diferentes regiones del cuerpo (principalmente en el pie). Los causantes de esta infeccin pertenecen a la familia de las cndidas, que es un caso muy comn como patologa, pero con tratamientos de elevados costos. 5. OBJETIVOS

5.1 Objetivo General

Determinar el grado de propiedad antibacteriana y fngica de macerados etanlicos y en agua de andres waylla, wira wira y lampaya frente al Enterococcus, Staphylococcus spp,candida albicans.

5.2 Objetivo Especifico Comparar en cul de las cepas tiene mayor actividad antibacteriana y fngica Utilizar el extracto con mayor halo para demostrar su potencia frente a cepas utilizadas Estandarizar las titulaciones para definir sus propiedades antibacterianas y fngicas de los extractos etanolicos y en agua. 6. MARCO TEORICO 6.1 Enterococcus: Los enterococos (cocos entricos) se clasificaron previamente como estreptococos del grupo D debido a que poseen el antgeno de la pared celular del grupo D, un cido teicoico con glicerol que se asocia a la membrana citoplsmica . A pesar de este dato, se observ que estos microorganismos diferan de los restantes estreptococos del grupo D (conocidos como estreptococos del grupo D no enterocccos [p. ej., Streptococcus bovis]). Los grupos enterocccos y no enterocccos se diferenciaron inicialmente por sus propiedades fisiolgicas y a travs del anlisis de cidos nucleicos. En el ao 1984, lo enterococos se clasificaron en el nuevo gnero Enterococcus, el cual consta actualmente de 29 especies. Las especies que se aislan con una mayor frecuencia y que son clnicamente las ms importantes son Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium. Enterococcus gallinarum y Enterococcus casseliflavus tambin constituyen frecuentes colonizadores del aparato digestivo del ser humano y revisten importancia debido a su posible confusin con E, faecium resistente a vancomicina, aunque rara vez se asocian a enfermedad en el ser humano 6.2 PATOGENIA E INMUNIDAD Los enterococos son microorganismos comensales que no fabrican ninguna toxina potente ni otro factor de virulencia definido. En consecuencia, por lo general se considera que estas bacterias poseen una limitada capacidad patgena, aunque las enfermedades potencialmente mortales, en especial en sujetos hospitalizados, se han convertido en un grave problema. Estas bacterias presentan adhesinas de superficie que facilitan su unin a las clulas que tapizan los tejidos intestinales y vaginales del organismo anfitrin humano, y secretan enzimas extracelulares con actividad hemoltica (citolisinas) y proteoltica (p. ej.,
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gelatinasa, serina proteasa). Normalmente, las bacterias no son capaces de evitar su fagocitosis y destruccin por parte de las clulas fagocticas. Los enterococos pueden producir tambin bactericinas que inhiben a otras bacterias competidoras. Quiz tenga una mayor trascendencia la resistencia inherente de los enterococos a muchos de los antibiticos que se usan con una frecuencia mayor (p. ej: oxacilina, cefalosporinas), o bien hayan adquirido genes de resistencia (p. ej., a aminoglucsidos, a vancomicina). Por tanto, los enterococos que forman parte de la microflora normal de sujetos tratados con antibiticos de amplio espectro (y que generalmente presentan enfermedades graves) son capaces de proliferar y originar enfermedad.

6.3 DIAGNSTICO DE LABORATORIO Los enterococos crecen con facilidad en medios no selectivos como el agar sangre (en uso) y el agar chocolate. A pesar de que pueden remedar a S. pneumoniae en las muestras teidas con la tincin de Gram, estos microorganismos se pueden diferenciar fcilmente mediante reacciones bioqumicas sencillas (p. ej., los enterococos son resistentes a la optoquina, no se disuelven cuando se exponen a la bilis y producen L-pirrolidonil arilamidasa (la prueba PYR se efecta habitualmente como una prueba de 5 minutos). Son necesarias pruebas fenotpicas (p. ej., la produccin de pigmento, la motilidad), bioqumicas y de secuenciacin de cidos nucleicos para distinguir entre E. faecalis, E. faecium y otras especies de Entorococcus.

6.4 Staphylococcus El nombre del gnero Staphylococcus procede del griego staphyl, racimo de uvas .Por tanto, la designacin Staphylococcus se refiere a que las clulas de estos cocos se desarrollan en un patrn que recuerda a un racimo de uvas; sin embargo, los microorganismos presentes en muestras clnicas aparecen como clulas aisladas, en pares o en cadenas cortas. La mayor parte de los estafilococos tiene un dimetro de entre 0,5 y 1 mm y son anaerobios facultativos (es decir, crecen aerobia y anaerobiamente) inmviles capaces de crecer en un medio con una elevada concentracin de sal (p. ej., cloruro sdico al 10%) y a temperaturas desde 18 hasta 40 C. Estas bacterias estn presentes en la piel y las mucosas del ser humano. En la actualidad, el gnero comprende 35 especies y 17 subespecies, muchas de las cuales se encuentran en el ser humano. Algunas especies se desarrollan en nichos muy especficos en los que se encuentran habitualmente. Por ejemplo, Staphylococcus aureus coloniza las narinas anteriores, Staphylococcus capitis crece en regiones con glndulas sebceas, (como la frente) y Staphylococcus haemolyticus y Staphylococcus homnis se hallan en zonas dotadas de glndulas apcrinas. (como la axila). Las bacterias del gnero Staphylococcus conforman un importante grupo de patgenos en el
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ser humano y originan un amplio espectro de enfermedades sistmicas que pueden poner en peligro la vida, infecciones de la piel, las partes blandas, los huesos y el aparato genitourinario e infecciones oportunistas (tabla 22-2). Las especies que se asocian con mayor frecuencia a enfermedad en el ser humano son S. aureus (el miembro ms virulento y mejor conocido del gnero), Staphylococcus epidermidis, S. haemolyticus, Staphylococcus lugdunensis y Staphylococcus saprophyticus. Las colonias de S. aureus son doradas debido a los pigmentos carotenoides que se forman durante su crecimiento, de ah el nombre de la especie. Igualmente, representa la nica especie colonizadora del ser humano que produce la enzima coagulasa. Cuando se suspende una colonia de S. aureus en un tubo con plasma, la coagulasa se une a un factor srico y el complejo convierte el fibringeno en fibrina, lo que da lugar a un cogulo. Dado que las restantes especies estafiloccicas carecen de la capacidad de producir coagulasa, son conocidas colectivamente como estafilococos coagulasa-negativos 6.5 PATOGENIA E INMUNIDAD Bacteriemia relacionada con el catter, Endocarditis subaguda asociada a patologa valvular previa o a vlvulas protsicas, Infeccin de derivacin en el sistema nervioso central, Infeccin de las heridas quirrgicas cuando existe un cuerpo extrao (p. e., sutura, prtesis, soporte), Las enfermedades pigenas incluyen el imptigo, la foliculitis, los fornculos, el carbunco y las infecciones de las heridas. Otras enfermedades sistmicas (que generalmente se asocian con bacteriemia) son la neumona (tpicamente despus de una infeccin respiratoria viral), el empiema (complicacin de la neumona o de la intervencin quirrgica), la artritis sptica, la osteomielitis, la endocarditis aguda. 6.6 DIAGNOSTICO DE LABORATORIO EN CULTIVO AGAR SANGRE Las muestras clnicas se deben inocular en medios de agar enriquecidas complementados con sangre. Los estafilococos crecen rpidamente en los medios no selectivos, tanto aerobia como anaerobiamente, y se pueden apreciarcolonias lisas de gran tamao en el plazo de 24 horas . Como se ha mencionado anteriormente, las colonias de S. aureus adquieren gradualmente una coloracin dorada en especial cuando los cultivos se incuban a temperatura ambiente. Casi todas las cepas de S. aureus y algunas cepas de estafilococos coagulasa-negativos producen hemolisis en el agar sangre de carnero. La hemolisis se debe sobre todo a citotoxinas, fundamentalmente la toxina a. Cuando la muestra contiene una mezcla de varios microorganismos (p. ej., una muestra respiratoria o de una herida), se puede aislar de forma selectiva S. aureus en un medio de agar complementado con cloruro sdico al 7,5% (el cual inhibe el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos), y de manitol (fermentado por S. aureus, pero no por la mayora de las restantes especies de estafilococos).
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6.6.1 AGAR SANGRE Medio rico en nutrientes. Adems es un medio diferencial: beta-hemlisis (Hemlisis total), Alfa Hemlisis (Hemlisis parcial), gamma (Sin Hemlisis) 6-6.2 AGAR MUELLER HILTON Medio que se puede enriquecer aadiendo sangre.

6.6.3 CANDIDA FRENTE A LOS EXTRACTOS Se debe tener en cuenta que hay muchos hongos que crecen en medio de agar Saboureaud y se puede identificar especficamente al agente causante. Se realizara la investigacin mediante los siguientes pasos: Observacin en microscopio con lactofenol.(LABISMED) Cultivo en agar Sabouraud (especial para fungos). Auxonograma (Se emplea para la identificacin de hongos levaduriformes, para la orientacin si es C. Krusei, C. Galabrata, C. Guillermondi). (97) LABISMED Identificacin mediante tcnica de difusin.

Mediante estas tcnicas podremos identificar a los principales causantes de estas infecciones fngicas, lo mas resaltante se observa trabajando con la muestra identificada frente al extracto de Andres Wuaylla, (presenta actividad Fngica). 7. MATERIALES Y METODOS 7.1 TRATAMIENTO DE LA PLANTA MEDICINAL Recoleccin.- Las hojas de (Cestrun Parqui LHerit - Andres Wuaylla), Lampaya (Lampaya medicinalis F. Phil) wira wira (Pseudognaphalium viravira (Mol.) A. Anderb fueron recolectadas en zonas de valle bajo cercanas a los ros del departamento de Cochabamba, con la colaboracin de la gente del lugar. Valoracin.- La valoracin que se realizo fue en funcin de los siguientes aspectos: Forma, color y olor de las hojas, de la planta conocida como Andres Waylla, Lampaya (Lampaya medicinalis F. Phil) wira wira (Pseudognaphalium viravira (Mol.) A. Anderb Lavado.- El lavado se realizo primero en el lugar de recoleccin, posteriormente con solucin diluida hipoclorito de sodio. Secado de hojas.- Una vez clasificadas las hojas fueron colocadas por
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separado sobre laminas de papel a temperatura ambiente, protegidas del sol hasta que presenten un aspecto seco y quebradizo. Valoracin organolptica de la muestras de hoja Entera Cestrum Parqui L`Herit. Cestrun Parqui LHerit,(Andres Wuaylla), Lampaya (Lampaya medicinalis F. Phil) wira wira (Pseudognaphalium vira vira Esta valoracin se realizo bajo las siguientes caractersticas:

Olor. Color. Sabor y consistencia. Valoracin Microscpica

Recopilacin de la informacin medicinal de la Cestrum Parqui L`Herit. Cestrun Parqui LHerit,(Andres Wuaylla), Lampaya (Lampaya medicinalis F. Phil) wira wira (Pseudognaphalium viravira (Mol.) - la recopilacin sobre estas plantas que presenta actividad se realizo con los siguientes pasos: o Primero se efectu la bsqueda de informacin de plantas que presentan actividad y uso contra algunas enfermedades, en las comunidades de Cochabamba de uso tradicional y con ayuda de literatura por su propiedades qumicas.. Se seleccion la planta para realizar estudio. su

Se confirm la identificacin botnica de la planta usada en las comunidades comparndola con datos de herbarios de plantas medicinales.

7.2 PREPARACIN DE EXTRACTOS. Extracto etanlico al 96 % Los extractos se prepararon por maceracin a partir del material seleccionado, utilizando como solvente de extraccin etanol: agua (9:3) en una relacin de 1 10 materia prima solvente. Despus del macerado por 7 dias, se procedi al filtrado con ayuda de filtro Micropor y se hasta 1/8 del volumen para obtener un
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extracto blando. Se determin el porcentaje de slidos totales en el extracto por mtodo gravimtrico. 7.3 ACTIVIDAD BIOLGICA 7.3.1 ACTIVIDAD ANTIBACTERIANAS Preparacin del inculo. Se prepar como inculo una suspensin bacteriana de un cultivo de 24 horas de crecimiento en caldo Triptic Soy Broth (T.S.B.) con una turbidez semejante al tuno N 4 de la escala de Mac Farland. Actividad de los extractos. Una vez preparada las placas, se procedi a la adicin asptica de los extractos a probar, se colocaron 100 microlitros de extracto en cada aforacin. Se us como blanco un solvente solucin de ClNa (6.5%) medio ideal para bacterias de concentracin semejante al la fase lquida del extracto. Incubacin y lectura. Las cajas petri, se dejaron secar a temperatura ambiente. La incubacin se realizo en una estufa de cultivo a 37 centgrados por 24 hrs., al cabo de las cuales se realizaron las lecturas. Los halos de inhibicin en colonias de Staphylococcus spp, o Enterococcus y Candida albicans(Hongo) , se leyeron en milmetros desde el borde del orificio hasta la zona de total inhibicin. 7.3.2 ACTIVIDAD ANTIFUNGICA Se aislaron la candida Albicans a partir del tejido infectado de una persona diagnosticada con Candida Albicans de las zonas de estudio. Los hongos se incubaron en un medio de cultivo con agar sangre. La actividad se evalu por las tasas de sobre vivencia (Reproducibilidad) del hongo en presencia de los extractos etanlicos de Cestrum Parqui LHerit. No llevo el Proceso de comparacin con agua porque No es estable los principios de del Andres Wuaylla

7.4 SCREENING FITOQUMICO Se determin la presencia de metabolitos secundarios en los extractos etanlicos de Cestrun Parqui LHerit Cestrun Parqui LHerit - Andres Wuaylla), Lampaya (Lampaya medicinalis F. Phil) wira wira (Pseudognaphalium viravira (Mol.) mediante ensayos de identificacin cualitativa de Flavoniodes, Alcaloides, Saponinas y Taninos.(Bioquimica FARMACIA UMSA Laboratorio de Productos Galenicos). Los resultados del Secreening Fitoqumico de los extractos son los siguientes: Los
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metabolitos secundarios presentes en los extractos pueden tener las siguientes acciones farmacolgicas relacionadas con el tratamiento de la Neumonas, problemas de piel bacteriano y fngico e incluso parasitario como la Sarcoptosis: Taninos. Por va externa impermeabilizan las capas de la piel y mucosas, tienen efecto vasoconstrictor, antimicrobiano, antifngico y hemostticos. Algunos alcaloides tienen actividad antiparasitaria. Los flavonoides presentan actividad biolgica en los procesos antiinflamatorios y antialrgicos.

Materia prima Cestrun Parqui LHerit

Alcaloides

Flavonoides

Saponinas

Quinonas

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7.5 RESULTADOS Y DISCUSIN.7.5.1 CARACTERIZACIN DE EXTRACTOS.- Los extractos desecacin a peso constante presentaron los siguientes resultados: sometidos a

Materia Slido Color p Densid prima s H ad Cestrun 12.52 Ver 6.1 totales Parqui de (%) Fuente: UMSS -oscu ( PROFAC) LHerit ro 7.5.2 PRUEBAS IN VITRO

7.5.2.1 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA Los resultados preliminares presentaron actividad antibacteriana del extracto etanlico Agua frente a la cepa Staphylococcus spp, Enterococcus dentro de la familia Gram positivos y actividad antifngica frente a Candida albicans (ATCC 96934)

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El extracto tambin inhibe el crecimiento de Candida albicans (ATCC 96934)

7.5.2.2 ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA Y FUNGICA Los extractos presentaron inhibicin del crecimiento en cultivos in vitro basndonos en la tcnica de Inmunodifusin de la siguiente Manera:

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TITULACION EN AGUA + SOLUCION FISIOLOGICA .-1/4 - 1/8

TITULACION EN ETANOL + SOLUCION FISIOLOGICA .-1/4 - 1/8

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7.5.2.3 COMPRACION ANTIBACTERIANA EN AGUA Y ETANOL

Los extractos diferente manera:

presentaron

inhibicin

del crecimiento en el cultivo de

1:1 titulacin extractos etanol y agua hasta 1/8 Enterococcus: Agar con sangre Mueller Hilton Staphylococcus spp, Sin sangre Mueller Hilton

Control de calidad Promedio Siembra de 3 por cada Bacteria para cada extracto 8. CRONOGRAMA Acti Primera Semana Segunda Tercera Semana Cuarta Semana vida de Agosto Semana de de Agosto de Agosto des Agosto L MMJ V S D L MMJ V S D L MMJ V S D L MMJ V S D L Selec cin de Plant as Mac eraci n FILT RAC ION TIT ULA CIO N LEC TUR A DE LOS HAL OS DE INHI
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BICI ON

PRESUPUESTO: SE UTILIZO 1850.70 BS

9. BIBLIOGRAFIA 1. Atias, Antonio. Mediterrneo Santiago de Chile; Parasitologia Mdica 1995: 484-487 Editorial

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GRAFICAS

Etapa 1 Para Staphylococcus spp: Lampaya en Etanol Madre 18 mm Titulacin 1/2 16 mm Titulacin 13 mm Titulacin 1/8 10 mm

Etapa 2 Para Staphylococcus spp: Lampaya en Etanol Madre 18 mm Titulacin 1/2 16 mm Titulacin 13 mm Titulacin 1/8 12 mm

Etapa 3 Para Staphylococcus spp: Lampaya en Etanol Madre 18 mm Titulacin 1/2 15 mm Titulacin 12 mm Titulacin 1/8 11 mm

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