Lab de Histologia y Anatomia

Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANLISIS CLNICOS LABORATORIO DE HISTOLOGA Y ANATOMA Q.F.
BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LICENCIATURA: QUMICO FARMACOBILOGO REA ESPECFICA DE ANALISIS CLINICOS
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO
ASIGNATURA DE: CDIGO: FECHA DE ELABORACIN:
HISTOLOGIA Y ANATOMIA LQF 215L MARZO DE 2006 FORMATIVO CB
NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: TIPO DE ASIGNATURA:
PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIN: D.C BERTHA ALICIA LEN CHVEZ M.C. MARISELA TORRES Y SOTO M.C. AIDA OSORNO TECPA M.C. RAFAEL MUOZ BEDOLLA M.C. SARA SILVIA DOMNGUEZ BAEZ M.C. LOURDES MARTINEZ MORENO M.C. MARTHA ALICIA SALGADO JUREZ M.C. ROSA MARIA AGUILAR GARDUO HORAS PRCTICA. 2 TOTAL DE CRDITOS: 0
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANLISIS CLNICOS LABORATORIO DE HISTOLOGA Y ANATOMA Q.F.B
LABORATORIO DE HISTOLOGA Y ANATOMA PRCTICAS

I.- Estudio del lquido seminal. 2.- Desarrollo embrionario. 3.- Manejo de las tcnicas histolgicas. 4.- Diseccin de animal de laboratorio, preparacin de soluciones y colorantes. 5.- Procesamiento de tejidos para su inclusin en parafina. 6.- Realizacin de Cortes histolgicos. 7.- Desparafinacin e hidratacin de los cortes y Tincin de hematoxilina-eosina (de los 4 tejidos). 8- Observacin de tejido epitelial 9. Observacin de tejido conectivo: cartlago y hueso 10.- Tincin de Mallory y observacin de tejido muscular 11.- Observacin de clulas sanguneas en un frotis 12.- Tincin de Golgi y para mielina. Observacin de tejido nervioso
BIBLIOGRAFIA Manual de Tcnicas Histolgicas. Elvira estrada Flores, Leonor Peralta Zamora, Patricia Rivas Manzano. AGT editor, S.A.
PRACTICA No. 1 ESTUDIO DEL LQUIDO SEMINAL

INTRODUCCION.OBJETIVO.- Que el alumno aprenda a manejar las variables que nos pueden dar informacin acerca de la capacidad fecundante de un lquido seminal. MATERIAL Y MTODO.- Portaobjetos, cubreobjetos, pipeta Pasteur, cmara de Neubauer, microscopio. MATERIAL BIOLGICO.- Muestra de semen recin emitida. REACTIVOS.- Solucin salina fisiolgica, solucin de Saunders y Macomber (*) colorantes de Giemsa y May Grenwald. (**) PROCEDIMIENTO.Lo primero que debe realizarse es la observacin microscpica de una gota de semen entre portaobjetos y cubreobjetos, para tener una visin panormica del material examinado en lo referente a la cantidad aproximada, a la morfologa y a la motilidad de los espermatozoides. INTRODUCCIN. El estudio del semen suele ser parte de la investigacin completa de una infertilidad que comprenda a los cnyuges de un matrimonio estril. En relacin con la investigacin de la esterilidad, es importante reconocer el objetivo propio del examen del semen. En primer lugar, slo constituye una historia detallada y una exploracin fsica general. Tambin pueden estar indicados procedimientos especializados, como las pruebas tiroideas, de funcin suprarrenal e hipofisiaria, o incluso una biopsia testicular.
El estudio del semen tiene una limitacin inherente, que consiste en que los estndares de calidad del semen se basa en los resultados de estudios de una poblacin de varones pertenecientes a parejas frtiles e infrtiles. En consecuencia, estos estndares de calidad son ndices relativos y no absolutos de fertilidad o de esterilidad (con la nica excepcin de una aspermia completa). Adems, se recomienda generalmente que, en caso de un resultado anormal en el estudio del semen, se repita la prueba una o ms veces.
FISIOLOGA DEL LIQUIDO SEMINAL. El semen o lquido seminal esta formado por la secrecin de los tbulos seminferos del aparato reproductor masculino y de las glndulas relacionadas (vesculas seminales, prstata y bulbouretrales o de Cowper). consta de espermatozoides suspendidos en el plasma seminal. Su funcin consiste en facilitar un medio nutritivo de osmolalildad y volumen adecuados para vehiculizar los espermatozoides hacia el moco endocervical, donde termina su contribucin al proceso de fertilizacin. Recin eyaculado el semen, es lquido, coagula con rapidez y experimenta una licuacin alrededor de los 15 minutos despus de haber sido emitido. No contiene ni protrombina ni trombina, pero s fibringeno y tromboplastina, aun cuando no se conoce muy bien el mecanismo de la coagulacin, ste parecera producirse por la transformacin de fibringeno en fibrina. La licuacin ulterior ocurre por la actividad enzimtica de la fibrinolisina. El estudio analtico del lquido seminal se denomina espermiograma o espermatograma. TESTCULOS. Los espermatozoos, que comprenden menos del 5% del volumen del semen, son el nico tipo de clulas presentes en nmero apreciable en el semen normal. Se depositan abundantemente en las porciones ampollares de los conductos deferentes hasta el momento de eyaculacin. Los espermatozoides almacenados en el epiddimo son prcticamente inactivos por las elevadas concentraciones de carnitina y de glicerilfosforilcolina y de la disminucin de suministro de oxgeno, sobreviven aproximadamente hasta un mes.
VESCULAS SEMINALES. Aproximadamente el 60% del volumen del semen se deriva de las vesculas seminales. Este lquido amarillo o incluso muy pigmentado, como resultado de su elevado contenido en flavina. Las vesculas seminales son la fuente principal de fructuosa, tambin contiene potasio y cido ctrico y en menor cantidad cido ascrbico, ergotionena y fosforilcolina. Tambin proporciona el sustrato que permite la coagulacin del semen despus de la eyaculacin. PRSTATA. La prstata constituye aproximadamente al 20% del volumen total del semen. Su liquido lechoso es ligeramente cido, con un pH aproximadamente de 6.5, resultante fundamentalmente de su elevado contenido en cido ctrico. Tambin contiene enzimas proteolticas y en fosfatasa cida. MODO DE RECOLECCIN. La muestra de semen se recomienda recoger despus de un periodo de continencia de 3 das. La muestra ms satisfactoria es la que se recoge en la consulta del mdico o en el laboratorio de patologa clnica mediante masturbacin. La muestra se puede recoger en un frasco de vidrio de boca ancha, limpio, sin detergente o en recipiente adecuados de plsticos o de polietileno. Aunque el polietileno disminuye la motilidad de los espermatozoides. La muestra debe tener menor de 3 o 3 horas de preferencia de 30 minutos. EXAMEN MACROSCOPICO. CARACTERISTICAS FSICAS. El semen recin eyaculado es un coagulo muy viscosos, opaco blanco o grisceo, que puede tener un olor mohosos o acre. Despus de 10 a 20 minutos, el coagulo se licua espontneamente para formar un lquido translucido, turbio y viscoso, que es ligeramente alcalino, con pH alrededor de 7.7. Volumen del semen normal equivale a 1 a 5 ml.
EXAMEN MICROSCOPICO. RECUENTOS DE ESPERMATOZOIDES. Despus de la licuefaccin del semen, los espermatozoides pueden contarse en la cmara de recuento de un hemocitmetro, tras una dilucin inicial efectuada en una pipeta de leucocitos. Se mezcla bien el semen y se absorbe una muestra hasta la marca 0.5 de la pipeta. Despus se diluye hasta la marca 11 con la solucin siguiente: Bicarbonato sdico Formalina (neutra) Agua destilada 5 gr 1 ml 100 ml
Despus de cargar la cmara del hemocitmetro (cmara de Neubauer) siguiendo la misma tcnica que para el recuento de leucocitos, se deja que los espermatozoides inmovilizados sedimenten durante 2 minutos. Se cuentan entonces en 2 mm2 (2 cuadriculas grandes). Esta cifre, multiplicada por 100,000 dar el nmero de espermatozoides por mililitro. Valores de referencia > de 20 millones/ml La cantidad normal por mililitro es de 28 225 millones y se considera en general como lmite inferior de la fecundidad del semen un mnimo de 60 millones/ml. En el grabado de la pgina siguiente aparece la cuadrcula de la Cmara de Neubauer. Solamente deben contarse los cuadros L y al final se aplica la frmula: N x 20 x 10 / 4 por 1000 MOTILIDAD. Se coloca una pequea gota de semen lquido en el portaobjeto de un microscopio, precalentado hasta la temperatura corporal y despus se tapa con un cubreobjetos en el que se ha untado un circulo de vaselina. La motilidad se valora observando varios campos con el objetivo seco ms potente hasta que se haya contado por lo menos un total de 200 espermatozoides. Es esencial enfocar a travs del grosor total de cada campo, de modo que se incluyan los espermatozoides inmviles que hayan podido asentar en el fondo del medio. Se registra el % de espermatozoides que muestra una autentica motilidad, as como clasificarlos en rpidos, lentos e inmviles.
Referencia: En un eyaculado normal examinado entre 30 y 60 minutos aproximadamente son mviles el 90% de los espermatozoides. 61% mviles, pueden ser rpidos, lentos o de balanceo MORFOLOGA. La observacin morfolgica de los espermatozoides se hace sobre material recogido en portaobjetos, dejados secar al aire y coloreados por distintos mtodos. Uno de los mtodos ms utilizados es el de May-Grenwald-Giemsa o hematoxilina. La extensiones se preparan en portaobjetos limpios de modo idntico a las de la sangre. Teir con hematoxilina. 1) Con formalina al 10% (v/v) durante 1 minuto. 2) Lavar con agua, 3) Hematoxilina de Harris, durante 2 minutos 4) Lavar con agua 5) Secar al aire 6) Observar con objetivo de inmersin en aceite. La observacin microscpica en los espermatozoides muestra una cabeza de forma ovalada, un cuello, un segmento intermedio y por ltimo una cola.Las anomalas morfolgicas pueden consistir en alteraciones de la cabeza del espermatozoide, segn su tamao, puesto que a veces se observan espermatozoides biceflicos. Las formas anormales pueden presentar a veces cabezas muy aguzadas o bien redondeadas en exceso. La cola del espermatozoide puede ser atpica y presentar una mala implantacin o una duplicacin. Algunos autores aceptan hasta un 10% de formas anmalas en sus distintos tipos. El semen normal contiene menos del 30% de formas anormales, presencia de hemates, leucocitos y clulas epiteliales.
Un hombre que presenta entre un 20 y un 60% de espermatozoides anmalos, las probabilidades de tener un hijo sano oscilan entre el 55 y el 58.9%. De un 60 a un 80% de formas anmalas producen una tasa de fertilidad del 46.2%. Si existe ms de un 80% de formas anmalas, la fertilidad potencial desciende al 14%. FORMAS ANORMALES. 2 cabezas, 2 colas, macromegalia (cabeza grande), micromegalia (cabeza pequea)
NOTA: Recin obtenida la muestra, se debe determinar el pH y se anotar el color, aspecto, viscosidad y volumen. (*) La solucin de Saunders y Macomber debe prepararse en el momento. Para 100 ml de agua destilada, agregar 5 gramos de bicarbonato de sodio y un mililitro de formol. (**) En lugar de los colorantes citados, se puede teir el extendido de semen con la tincin rpida para frotis sanguneo, fijando con metanol previamente y despus introduciendo la preparacin 10 segundos en el colorante A, enjuagando y 10 segundos en el colorante B, enjuagando y secando al aire.
PRACTICA NO. 2 DESARROLLO EMBRIONARIO
INTRODUCCION.Los cordados a los que pertenece la especie humana son tripoblsticos, es decir, se desarrollan a partir de tres hojas germinativas o capas embrionarias. A partir de las primeras etapas del desarrollo, las clulas resultantes de la segmentacin del huevo tienden a ordenarse en grupos celulares claramente distinguibles. Las mas superficiales se distribuyen formando una capa continua que por su situacin externa se denomina ectodermo, y las mas internas constituyen una hoja que circunda una cavidad y toma el nombre de endodermo. Entre ambas capas se forma mas adelante un tercer grupo celular distribuido en forma mas irregular que conocemos con el nombre de mesodermo. En diferentes grupos de cordados en los que la vida embrionaria es larga, aparecen diversas estructuras y mecanismos accesorios que aseguran la alimentacin y proteccin del embrin. La nutricin se asegura fundamentalmente mediante la creacin de reservas en el citoplasma del huevo (vitelo). En el embrin humano la gastrulacin (consiste especialmente en desplazamientos celulares) se desarrolla en forma muy similar a la del embrin de pollo. El huevo propiamente dicho (la yema) presenta citoplasma activo nicamente en uno de los polos, el resto del huevo esta ocupado por vitelo. Una cscara calcrea sirve de proteccin mecnica, aunque como es porosa permite el intercambio de gases; una sustancia mucoproteica (la clara) acta como depsito acuoso. Cuando el huevo empieza a desarrollarse solo se segmenta el citoplasma activo del polo y por lo tanto se forma un embrin plano, colocado como un pequeo vidrio de reloj, apoyado sobre la yema. Este comienza luego a plegarse, transformndose en un cilindro.
Por encima del embrin se forma una cmara acuosa, el saco amnitico, que permite el desarrollo del embrin en un medio lquido, libre de compresiones y malformaciones. La yema ha quedado encerrada asimismo en un saco, el saco vitelino en cuya pared hay vasos que llevan el material nutritivo hacia el embrin. Una estructura adicional, la alantoides, en cuya pared tambin existen vasos sanguneos, permite el intercambio gaseoso a nivel de cscara. El hombre como todos los mamferos, se desarrolla a partir de huevos con muy poco vitelo, pero tiene las siguientes caractersticas: a) El embrin adopta en un principio la forma de un disco plano y secundariamente se pliega, transformndose en cilndrico. b) El saco amnitico (aunque se forma por un mecanismo distinto) c) La alantoides (en el embrin humano muy poco desarrollada). d) El saco vitelino (pequeo y sin funcin nutritiva). La embriologa experimental ha permitido conocer los movimientos celulares de la gastrulacin en diversas clases de vertebrados. Los embriones de mamferos por desarrollarse en el interior del tero materno no se prestan para el estudio experimental. Sin embargo, la gran similitud entre el proceso de gastrulacin en los mamferos y el mismo proceso en las aves, ha permitido aplicar en los mamferos y el hombre algunas de las conclusiones extradas de la experimentacin de aquellas. En el pollo, la blstula esta constituida por un disco (blastodisco) formado por dos capas celulares, ectoblasto y endodermo, disco que se halla situado en el polo superior de la yema. Tambin en el pollo, aparece una lnea primitiva con un ndulo de Hensen. OBJETIVO.- Identificar el blastodisco, as como los anexos que le son caractersticos a l embrin de pollo y hacer una comparacin con las caractersticas de un embrin de mamfero.
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MATERIAL Y METODO.- Caja de Petri, pinzas,tijeras, solucin salina fisiolgica para anfibios, y como material biolgico un huevo de 4 das de incubacin. PROCEDIMIENTO.- Utilice un huevo de cuatro o cinco das de incubacin. La incubacin puede hacerla en una estufa a 30C y una humedad relativa de 56%, lo cual se logra poniendo un recipiente con agua en la estufa, cerca de los huevos que debern voltearse cada 12 horas para que el calor se propague uniformemente. Despus de cuatro o cinco das puede comprobar el crecimiento del embrin, observando el huevo en un cuarto obscuro e iluminndolo con un foco. Si desea observar el blastodisco y las membranas anexas que se han formado, perfore cuidadosamente el cascarn del lado romo y con las tijeras corte el cascarn en la cmara de aire, para evitar daar la alantoides y que pueda ocasionar un sangrado de los vasos sanguneos contenidos en ella. Vierta el contenido del huevo en un recipiente que contenga solucin salina al 0.7% a 39C para que el embrin se mantenga con vida durante ms tiempo, pueda hacer las observaciones detalladas de las estructuras que se han mencionado anteriormente. De la coleccin de fetos que hay en el laboratorio observe el tamao de la cabeza a las nalgas de cada uno, para calcular la edad.
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PRACTICA 3 MANEJO DE LAS TCNICAS HISTOLGICAS

OBJETIVO. El alumno conocer la importancia de la preservacin de los tejidos para su estudio histolgico. Introduccin. Las clulas cuando son extradas de los organismos mueren por falta de nutrientes y de factores de su micro-ambiente y sufren procesos de descomposicin debido a la accin de enzimas como proteasas, lipasas, DNAasas, RNAasas que comienzan a destruir el tejido. Los tejidos deben ser tratados para su preservacin, por lo que se utilizan diversas tcnicas de preservacin para mantener las estructuras conservadas de la clula. La tcnica a utilizar depende del tipo de estudio y del tipo de tejido a utilizar. Si desean realizar un estudio rpido del tejido se utiliza la tcnica por congelacin la cual permite detener la actividad de las enzimas. Si desea realizar un estudio ms completo de la estructura celular y requiere mayor tiempo de realizacin se puede utilizar la preservacin por fijacin del tejido. Los estudios ms finos de la clula como la observacin de su ultraestructura el tejido pasa por fijacin mas rigurosa para poder obsrvalo por microscopio electrnico. Existen reactivos aclaradores que actan borrando o moderando los ndices de refraccin de los elementos tisulares. Mientras menos contrastes ms claros aparecern los preparados y ms fcil ser la apreciacin de los elementos coloreados. Entre los ms usados tenemos esencias o aceites de clavo, de cedro o de organo, xilol, tolueno y cerosota. Reactivos opacantes actan de modo contrario a los reactivos aclarantes, oscureciendo el contorno celular y robando transparencia a la preparacin. Este efecto es til cuando se observan clulas sueltas, filamentos libres y superficies que exhiben expansiones delicadas ( aire, alcohol, ter, acetona, agua corriente). Reactivos aisladores liberando los elementos celulares de los tejidos o al menos, facilitando su disociacin mecnica. Los ms usados son el cido ntrico al 25%, potasa al 40%, alcohol al 30%, cido sulfrico diluido, cido pcrico a saturacin.
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Reactivos ablandantes se usan para reblandecer los tejidos excesivamente duros, como hueso y dientes, en virtud que disuelven las sales de calcio. Tenemos a los cidos ntricos, tricloractico, crmico, clorhdrico y pcrico que se emplea en saturacin. Reactivos inofensivos, tambin llamados soluciones fisiolgicas, lquido de Ringer, de Locke, de Bizozero, solucin amortiguadora de fosfatos (PBS). Reactivos generales: a) colorantes naturales, extrados de productos animales o vegetales, como el carmn, la hematoxilina, la orcena y la safranina. b) Colorantes artificiales, conocidos como colorantes de anilina, colorantes de carbn o colorantes sintticos. Reactivos conservadores son aquellos que protegen a los tejidos de la putrefaccin, conservan el color y evitan cambios que pudieran sufrir las preparaciones histolgicas. Estos reactivos eliminan el agua del preparado, evitando todo crecimiento bacteriano, otra veces sustituyen el agua por materias resinosas imputrescible. Tenemos a la glicerina, blsamo de Canad, resinas sintticas, gelatina, licor de Apathy y licor de Ferrant. Mtodos histolgicos. La clula es la estructura bsica vital del organismo y esta compuesta principalmente de protenas, hidratos, lpidos y sales inorgnicas, por lo que el objetivo principal de la fijacin es la preservacin de los componentes celulares para as evitar la autolisis y la proliferacin que altera los componentes celulares, conservando la arquitectura y composicin tisular lo ms semejante a como se encuentra en el organismo vivo, as como tambin el de seleccionar el agente fijador. Los tipos de fijacin son variados y depende del tejido. Algunos funcionan deshidratando los tejidos como son los alcoholes (etanol, metanol), o combinados con cidos (cido actico, pcricos), cidos crmicos. Otros fijadores polimerizan para formar un red entre la clula y de esa formar conservar la estructura celular, tales como formaldehdo, formol y paraformaldehdo, glutaraldehdo. Otros ms son compuestos ms colorantes son sustancias que permiten distinguir detalles estrucutrales invisibles o poco aparentes al microscopio, encontramos dos tipos
fuertes como cacodilato o sales de osmio, platino y mercurio.
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Las desventajas del uso de los fijadores es que son txicos para las clulas vivas de nuestro cuerpo, pueden ser irritantes, fijan las clulas y algunos son cancerigenos, por lo que se deben utilizar con las medidas adecuadas (guantes, gafas protectoras, mascarillas). El tiempo de fijacin oscila entre 30 minutos a 12 horas dependiendo del grosor del tejido, las clulas libres requieren solo de 30 minutos, tejido delgado de 2 horas y ms grueso hasta de 12 horas, entre ms delgado sea el tejido mejor se fijar. Una imagen igual ha de observarse en todos los tejidos idnticos obtenidos de diferentes individuos de una misma especie. Su reproducibilidad en todas las preparaciones histolgicas obtenidas de los tejidos, independientemente del proceso de fijacin. Principios generales de la fijacin. No existe un mtodo universal de fijacin No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido Un defecto de fijacin jams puede ser corregido Es imposible realizar un estudio histolgico sobre un material con graves defectos de fijacin. FORMALDEHDOS (ALDEHIDOS) Concentracin patrn: 4% p/v en agua Formula qumica HCHO Descripcin. Monoaldehdo, el mas simple de la familia de los aldehdos, gas incoloro, muy soluble en agua, precipita en un sedimento blanco (polmero paraformaldehdo). El formol comercial tiene 40% de formaldehdo y 10-15 metanol. La formalina comercial es 10% formol (4% formaldehdo) con 1 1.5% de metanol en tampn de fosfatos. Ionizacin mnima Reaccin con las protenas. Aditivo, se integra a los tejidos y clulas, gelifica las protenas no las coagula, retiene parte de los grupos reactivos de las protenas. Reaccin con los lpidos. Los lpidos son preservados pero no necesariamente fijados. Reaccin con cidos nucleicos: El ADN y ARN son reducidos parcialmente por la formalina.
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GENERALIDADES. Cantidad. Por lo menos de 10 a 15 volmenes de fijador deben de ser utilizados por cada volumen de tejido. Penetracin: ningn fijador penetrar ms de 2 a 5 mm, en tejido dolido, y 0.5 cm en tejido poroso, en un periodo de 24 horas. Tiempo: la mayora de los tejidos deben de permanecer en fijacin por lo menos 12 horas. Temperatura: la mayora de los fijadores se realizan a temperatura ambiente. Calor: el calor coagular las protenas, pero no se recomienda para la fijacin. Una vez fijado el tejido se procede a realizar cortes del tejido para su observacin al microscopio. El grosor de las rebanas oscilan entre 300 micras a 100 amstrong. Para cortar el tejido se utilizan microtomos, existen diferentes tipos: tenemos el criostacto (congelacin), vibratomo (vibracin), microtomos de deslizamientos simples o por congelamiento y los ultramicrotomos. Las cuchillas que se utilizan para cortar el tejido tenemos de acero inoxidable (microtomos) y de vidrio o de diamante (ultramicrotomos). El filo de las cuchillas tienen un lado con un ngulo y otro recto, la parte recta del filo se coloca hacia abajo y la parte con ngulo se coloca hacia arriba. El procesamiento de corte del tejido depende del microtomo a utilizar, si el corte se realiza con un vibratomo este no requiere la fijacin del tejido, puesto que se realiza cortes de un grosor entre 100 a 300 micras, este tipo de estudio se utiliza para el estudio del tejido en rebanas donde la clula se requiere que este viva, la clula se mantiene viva por un tiempo determinado mantenindola en una solucin fisiolgica y oxigenada. Por congelacin el tejido es fijado y posteriormente se pasa a una solucin de sacarosa al 10% en solucin isotnica por 12 horas, este procedimiento proteger el tejido de la congelacin. Posteriormente, se congela el tejido con CO2 (-15 a 20 C) y se prosigue a realizar cortes entre 6 micras a 50 micras. Si se utiliza un microtomo de deslizamiento simple, el tejido debe ser protegido con un polmero extra como es la parafina y lograr rebanas de grosor de 8 micras. El tejido una vez fijado, se procede a deshidratarlo con alcoholes al 70%, 80%, 96% y 100%. Posteriormente, se pasa a xilol 100% y despus a la parafina, se realizan bloques de parafina y estos son cortados en fro. Las rebanas son colocadas en portaobjetos y desparafinadas.
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La parafina se quita calentando los portaobjetos durante 20 minutos en una estufa, despus se pasan a un proceso de hidratacin (xilol, alcohol al 100%, 96%, 80% y 70%) y en una solucin isotnica, para su posterior proceso de tincin. Los ultramicrotomos se utilizan para microscopio electrnico, el tejido es fijado con una mezcla de paraformaldehido (4%) -glutaraldehdo (2%), posteriormente se pasan una solucin de osmio (2%) la funcin del osmio es fijadora y tiedora. El tejido fijado pasa a un proceso de polimerizacin con resinas plsticas. Se realizan bloques con la resina plstica y se procede a cortar en los ultramicrotomos, se utilizan las cuchillas de vidrio o de diamante, logrando cortes hasta de 100 amstrong. La tcnicas de tincin varia de la estructura a observar, tenemos colorantes bsicos y cidos que van a teir macromolculas cidas o alcalinas (hematoxilina, eosina, wright). Tenemos otros colorantes con afinidad a ciertas grupos qumicos como son los colorantes proteicos que se unen a grupos aminos libres, sulfhdricos libres o hidroxilo libres, ejemplos de estos tenemos Coomassie, cristal violeta, nitrato de plata, azul de metileno). O tenemos otros especficos a estructuras como dicromatos para teir protenas de la matriz extracelular. Existen otro tipo de colorantes fluorescentes que solo son visibles con una lmpara de tungsteno, donde emite longitudes de onda de ultravioleta, existen las tcnicas de inmunofluorescencia donde se utiliza anticuerpos que reconocen un antgeno especifico, y posteriormente se utiliza un segundo anticuerpo conjugado con un fluormetro (FICT, rhodamina), o con una enzima y se visualiza con el sustrato colorimtrico (peroxidasa, fosfatasa alcalina, etc). Las rebanas una vez teidas pueden ser conservadas por muchos aos una vez que son protegidas del medio exterior utilizando resinas sintticas o blsamo de Canad.
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CUESTIONARIO. 1.- Investigue la definicin de un fijador. 2.- Investigue la definicin de un colorante. 3.- Cual es el fundamento de los colorantes de hematoxilina y eosina, que tipo de color se tien las diferentes estructuras celulares. 4.- Que estudios pueden realizar con el procesamiento de tejidos.
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PRACTICA NO 4 DISECCIN DE ANIMALES DE LABORATORIO.

OBJETIVO. El alumno conocer los diferentes rganos y aparatos que componen un ser vivo. INTRODUCCIN. Un ser vivo cuenta con una serie de rganos y aparatos para su sobrevivencia, todos ellos funcionan como un todo para el procesamiento de alimentos, obtencin de nutrientes y oxigeno y la coordinacin del movimiento, proteccin del medio exterior. El aparato digestivo funciona como un proveedor de nutrientes obtenidos del medio exterior, lo procesa desde su degradacin mecnica y qumica hasta su absorcin al organismo. As tenemos en la degradacin mecnica y qumica el alimento pasa por boca, esfago, estomago e intestino. Su absorcin se lleva a cabo en el intestino delgado y grueso. El aparato circulatorio transportar los diferentes nutrientes a todo el organismo, la fuerza motriz de la circulacin de los nutrientes por la sangre la realiza el corazn. Uno de los nutrientes esenciales para la vida es el oxigeno que es capturado por el aparato respiratorio. Los nutrientes son metabolizados y eliminados por rin, pulmn y piel. El sistema nervioso se encarga de la planeacin, control y regulacin de las funciones del organismo, por lo que, aparte del corazn es primeramente nutrido que otros rganos o sistemas. MATERIAL Y REACTIVOS. 1. Equipo de diseccin (tijeras, pinzas hemostticas, pinzas de diseccin, bistur, etc). 2. Tabla de diseccin. 3. frasco de vidrio de 2 litros 4. frascos de plsticos de 100 ml, boca ancha 5. frasco de vidrio de mayonesa de 500 ml 6. ter 7. solucin de cido ntrico al 5% 8. 250 ml solucin salina isotnica
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9. 2 litro formol al 10%. 10. algodn 11. bolsa amarilla para deshecho de animales. 12. guantes, gafas protectoras, navajas, (traer los alumnos) METODOLOGA. Llevar una rata por equipo y un hueso de pierna de pollo fresco colocarlo en formol al 10%. 1.- El animal ser anestesiado con ter en el frasco de 2 litros. 2.- Una vez dormido el animal, se coloca en la tabla de diseccin y se sujeta a esta. 3.- Se realiza una incisin en la parte media del abdomen y se corta la piel hacia los lados. Despus se corta el msculo y se expone los rganos que se encuentra en el abdomen. Se identifica el estmago, intestinos, hgado, pncreas, bazo, rin y aparatos reproductores. Se prosiguen a extraer el corazn abriendo el trax del animal, los pulmones, timo, tiroides, paratiroides. Y por ltimo se extrae el cerebro. 4.- Los rganos extrados sern depositados en solucin salina para lavar la sangre y pasarlos a frascos de plsticos con formol al 10%. 5.- El hueso de pollo en un frasco con formol al 10% que se mantuvo por 12 horas. Se lava con agua corriente, por 10 minutos. Se durante 48 horas. 6.- Los restos del animal sern llevados al bioterio para su incineracin. CUESTIONARIO. 1.- Para que se usa el formol al 10% 2.- En que consiste la descalcificacin 2.- Que rganos compone el aparato digestivo 3.- Que rganos compone el aparato respiratorio 4.- Que rganos compone el aparato cardiovascular 5.- Que rganos compone el aparato urinario 6.- que rganos componen el aparato reproductor. le realiza el procedimiento de descalcificacin. Se pasa a un frasco una porcin del hueso con cido ntrico al 5%
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BIBLIOGRAFA. 1.- Manual de Tcnicas histolgicas. Elvira Estrada Flores, Leonor Peralta Zamora y Patricia Rivas Manzano. Edit. AGT.
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PRACTICA 5 PROCESAMIENTO DE TEJIDOS PARA INCLUSIN EN PARAFINA.

OBJETIVO. El alumno aprender a procesar los tejidos para su estudio histolgico. Introduccin. Se denomina mtodo o tcnica histolgica al conjunto de operaciones destinadas a demostrar la disposicin estructural de los tejidos. Cada mtodo incluye una serie de actos tcnicos para determinar cada particularidad de una estructura dada. Existen un gran numero de mtodos, por lo cual se mencionar dos grupos generales. 1.- Mtodos para examen en vivo. Este se puede realizarse en lquidos orgnicos, en tejidos disociables y en membranas transparentes, mantenindose en un reactivo inofensivo o bien mediante el mtodo de los cultivos celulares. 2.- Mtodos para el examen de tejidos privados de vitalidad. La dificultad de ver directamente con el microscopio la arquitectura natural de la mayora de los tejidos, por su grosos y opacidad, y sobre todo por la rpida descomposicin que experimentan, ha dado lugar a una serie de operaciones indispensables para evidenciar la estructura tisular y consrvala durante mucho tiempo en preparaciones fijas, las que son muy tiles en todos los campos de la biologa. En este curso solo se mencionar este tipo de mtodos. Procedimiento de inclusin en parafina. Casi todos los tejidos pueden ser cortados mediante su inclusin en sustancias especiales, obtenindose en general cortes ms finos que con la congelacin. Este procedimiento es especialmente til para tejidos no excesivamente duros, y no se debe usar en piezas que hayan sufrido la accin de endurecedores energticos, ni en tejidos que tengan estructuras muy laxas. Las operaciones necesarias para este procedimiento son: fijacin, lavado, deshidratacin, inclusin y corte. Fijacin. Se lleva a cabo mediante cualquier fijador, segn se requiere. Lavado. Despus de la fijacin es casi siempre necesario el lavado en el disolvente adecuado, segn el fijador, en muchos casos se utiliza el lavado abundante en agua de la llave, con tiempo variable de acuerdo al fijador. Deshidratacin. Los disolventes de la parafina empleada en la inclusin como el xilol, no se mezclan con el agua, por lo que es preciso una deshidratacin de la pieza con alcoholes graduales, hasta el absoluto, para que la sustancia de inclusin penetre bien en los tejidos.
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Inclusin. Es la operacin mediante la cual se hace penetrar en la pieza deshidratada una materia solidificante que tiene a lo mas consistencia del tejido y facilita la ejecucin de cortes finos. MATERIAL Y REACTIVOS 1 kg de parafina 2 litros de alcohol al 80% 2 litros de alcohol al 96% 2 litros de alcohol absoluto 2 litros de xilol 20 bolsas de gasa (5 por equipo, traer el alumno) guantes (por alumno) gafas protectoras por alumno navajas (por el alumno) INCLUSIN EN PARAFINA. 1.- Fijar en formol al 10% por 24 horas, como mnimo. 2.- Lavar en agua corriente de 15 a 30 minutos, como mnimo. El hueso descalcificado es cortado como los dems tejidos. 3.- colocar los tejidos cortados en cortes delgados y colocarlos en las cpsulas o cassettes y despus en la canastilla. Programar el aparato para que lleve a cabo la deshidratacin con alcoholes de concentracin ascendente, de 80, 96 y 100%, permanecer 1 hora en el histokinet cada uno. 4.- posteriormente, pasarn los tejidos a xilol y al ltimo a la parafina derretida a 60 C. 5.- El procesamiento dura aproximadamente entre 12 horas. 6.- Realizar los bloques en parafina CUESTIONARIO. 1.- Investigue cuales son las acciones de los fijadores. 2.- Que desventajas presentan los fijadores. 3.- Investigue la funcin de los agentes fijadores y cuales son (cidos minerales, sales metlicas, cidos orgnicos, reductores orgnicos, formol).
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PRACTICA 6 REALIZACIN DE CORTES HISTOLGICOS

OBJETIVO. El alumno aprender a preparar los bloques de parafina para obtener cortes delgados en el microtomo. INTRODUCCIN. La variacin de imgenes microscpicas depende esencialmente de su calidad tcnica, la cual viene determinada tanto por el microscopio como por la naturaleza del objeto (tejido), que se examina. Muchas veces no se conoce precisamente a esta ltima condicin la suficiente importancia en la investigacin de las preparaciones histolgicas. La diferencia de la imagen, debidas al objeto, se suelen checar al microscopio, cuando en numerosas ocasiones han de atribuirse a la imperfecta confeccin de los cortes obtenidos con el micrtomo. La precisin ptica del microscopio deber correr con la precisin mecnica de micrtomo, si se quiere que el resultado de todo el empeo tcnico, no depender exclusivamente de las circunstancias sugestivas, como son la destreza y la experiencia en el empleo del micrtomo y del microscopio. En la actualidad los micrtomos se valoran en base a otros criterios que los empleados hace aos, ya no son decisivas nicamente las precisiones tcnicas de un micrtomo, sino tambin el grado de eficacia con que el usauario puede llevar a la prctica el potencial ofrecido. El micrtomo es un instrumento mecnico con el que se realizan secciones tisulares translcidas de un espesor micromtrico y lo suficientemente delgadas, susceptibles de ser colocadas para permitir el potencial ofrecido. Todos los micrtomos tienen principios bsicos semejantes en su funcionamiento, los cuales son: a) Un portabloques es en el que se sostiene el material que se va a cortar, el cual avanza discontinuamente sobre una cuchilla, debido a un mecanismo regulable de cremallera. De manera peridica se hace incidir el bloque sobre la cuchilla, obtenindose secciones tisulares de grueso equivalente al previamente seleccionado en el tornillo micromtrico que controla el mecanismo de avance. En los portabloques antiguos, la fijacin del bloque se realiza adhirindolo, con parafina previamente calentada a la superficie rugosa del portaobjetos, los micrtomos modernos poseen un mecanismo de pinza, en que se adapta a cualquier tipo de base o molde con el que esta fabricado el bloque. Es
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conveniente que el portabloques este tambin provisto de orientacin que garantice su parelismo con la cuchilla. b) Un portacuchillas clsico. El cual consiste en un dispositivo de fijacin basado en una pinza orientable especialmente, esta pinza permite variar el angulo de inclinacin de la cuchilla, as como tambin su grado de aproximacin al portaobjetos. c) Mecanismo de avance del portabloques sobre la cuchilla, este es un sistema mecnico electrnico que proporciona cortes sucesivos de tejido a partir del bloque. El continuo perfeccionamiento de los sistemas de avance, as como su monitorizacin ha permitido una progresiva mejora de las tcnicas de corte. Existen diversos tipos de micrtomos, entre los cuales destacan los siguientes: 1.- Micrtomo oscilatorio o de balance 2.- Micrtomo de rotacin o tipo Minot 3.- Micrtomo de deslizamiento 4.- Criostato o criotomo 5.- ultramicrtomo. MATERIAL Y REACTIVOS 1 kg de parafina 1 vaso de precipitado de 1 litro 1 varilla de vidrio 1 bolsa de hielo (por grupo) 100 portaobjetos papel aluminio (por los alumnos) o cajitas de cartn grueso diseadas por el alumno de 2 X 3 cm o laminas de acero inoxidable gruesas (0.2 0.3 cm) de 2 x 4 cm (4 por equipo). EQUIPO: Refrigerador Micrtomo rotatorio tipo Minot Cuchillas Bao de flotacin Plancha con termostato para fijar las preparaciones histolgicas
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Horno o estufa para desparafinado PROCEDIMIENTO: 1.- Previo al corte se realiza afilado y asentado de cuchillas 2.- Cortes histolgicos en micrtomo rotatorio tipo Minot. a) Enfriamento del bloque en refrigerador o hielo. b) Fijacin del portabloques en el micrtomo c) Orientacin del bloque d) Orientacin de la cuchilla del micrtomo, con el bloque para su desbastado. e) Seleccin del espesor del corte. f) Realizacin de las secciones. Rebajar el corte hasta que el tejido se vea integro. Cortar a 5 micras Colocacin del corte y extensin con un pincel en el bao de flotacin. Marcar las laminillas con el nmero correspondiente a la muestra. Seleccin y colocacin del corte en el portaobjeto Escurrir el exceso de agua en las preparaciones histolgicas Fijacin a calor de las preparaciones histolgicas (plancha con termostato a 56 58 C) Desparafinado de los cortes histolgicos en horno o estufa a 60 C durante 30 min. RESULTADOS: cortes bien elaborados, sin mellas y plegamientos. CUESTIONARIO. 1.- Que funcin tiene la parafina 2.- Cual es la importancia de realizar cortes histolgicos, en que lo aplicaras. 3.- Que estudios realizaras con cortes por criostato. 4.- Que estudios realizaras con cortes por ultramicrtomo. 5.- Que problemas tuvieron en realizar los cortes histolgicos en el laboratorio.
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PRACTICA 7 DESPARAFINACIN E HIDRATACIN DE LOS CORTES Y TINCIN CON HEMATOXILINA Y EOSINA.

OBJETIVO. El alumno aprender a procesar los cortes en parafina para su tincin. Los mtodos de coloracin se puede dividir en las siguientes categoras. 1.- Coloracin generales y especificas. Las primeras se basan en el teido intenso de los ncleos y dbil del protoplasma, o en la fuerte coloracin de ambas partes con colorantes distintos. 2.- Coloraciones progresivas y regresivas. El tejido adquiere la coloracin lentamente y progresivamente, se usa sobre todo con los colorantes que dan coloraciones muy slidas o difciles de diferenciar, por ejemplo, el azul de metileno, azul de algodn, carmn y hematoxilina. 3.- Coloraciones simples y combinadas. Los colorantes simples son aquellas que se obtienen con un solo colorante, cido o bsico. Segn su naturaleza son monocromticos o metacromticos. En el primer caso, todos los elementos son teidos en el tono del bao colorante, en el segundo caso ciertos elementos tisulares viran el color a un tono diferente. Tenemos de los metacromticos al violeta de metilo, azul de anilina, violeta de cresil, azul de cresil, azul de toluidina, rojo neutro, safranina, verde jano, etc. Las coloraciones combinadas pueden ser paracticadas haciendo actuar diversos colorantes. El fundamento de cualquier mtodo de tincin radica en la propiedad que poseen los tejidos para incorporar y fijar de modo variable diversas sustancias coloreadas llamadas colorantes. La clula que es un porcin de materia orgnica, tiene una composicin determinada que vara discretamente segn el tipo de tejido y unas caractersticas fsicas propias, que determinan la posibilidad de ser teidas. Se debe de tomar en cuenta que en su estado normal las clulas presentan muy poco contraste, por lo que hay un segundo elelmento que es el colorante que se aada para aumente el contraste de las diferentes estructuras celulares. Los colorantes pueden ser usados para colorear tanto tejido vivo como tejido
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fijado y el propsito de tincin es marcar los constituyentes del tejido y la clula de la manera ms evidente. En la actualidad se acepta que existe una serie de mecanismo interrelacionados fisicoqumicamente que actan en el complejo mecanismo de la tincin celular. Se distinguen dos mecanismos que son: electro-adsorcin y adsorcin por tensin superficial que actan simultneamente. La electro-adsorcin se da por reaccin de cargas elctricas de polaridad opuesta (+ y -) y si se tiene en cuenta el carcter anftero de las protenas, se entiende la importancia que tiene el pH en este proceso de coloracin en relacin con el punto isoeltrico de las estructuras a teir. La adsorcin por tensin superficial se da por adherencia de las sustancias a la superficie. Los diversos mecanismos de este fenmeno pueden darse sin intervenir fuerzas electrostcticas (apolar). Esta capacidad de adsorcin aria de una sustancia a otra, pues la tensin superficial de las diferentes estructuras tambin varia. En las coloraciones por medio fsicos se trata de una pura difusin del colorante (coloracin por impregnacin) y en las coloraciones por adsorcin se originan precipitaciones. La coloracin qumica exclusiva se da por la reaccin entre el colorante y el sustrato segn un proceso qumico bien diferenciado, un ejemplo es la demostracin del hierro (tincin de Perls). Tincin de hematoxilina y eosina. (hematoxilina de Harris-eosina alcohlica). 1.-Para teir los cortes es indispensable desparafinar los cortes e hidratarlos, par lo cual se pasan a xilol y a cambios de alcohol, en concentraciones descendentes de la siguiente manera. a) colocar en 2 cambios sucesivos de xilol, de 5 minutos cada uno. b) Alcohol-xilol (50-50%) 10 baos c) Colocar en alcoholes de 100, 96, 80, solucin isotnica, 10 baos (durante 2 minutos). 3.- Lavar los cortes en agua corriente. 4.- Teir con hematoxilina de Harris 3 minutos 5.- lavar con agua de la llave 5 min.
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6.- diferenciar con alcohol cido al 70% bao rpido 7.- lavar en agua corriente, solucin saturada de carbonato de litio baos., lavar en agua corriente. 8.- Contrastar con eosina alcohlica de 1 a 3 min 9.- deshidratar con alcoholes de 96 (dos cambios) y absoluto, durante 5 min en cada alcohol, alcohol-xilol, 10.- Aclarar con xilol durante 2 min. 11.- montar las preparaciones histolgicas con resina y cubreobjetos, retirando el exceso de este. 12.- Colocar en laminilla, en la parte superior una etiqueta con el nombre del tejido. RESULTADOS. Ncleos y cartlago Protoplasma y sustancias intercelulares Preparacin de los colorantes. Hematoxilina de Harris - hematoxilina (Merck) oxido rojo de mercurio y alcohol etlico absoluto agua destilada eosina azulosa orange G alcohol de 70 1.0 g 100 cc 1.0 g 0.5 gr 10 cc 200 cc 1.0 g azul morado de naranja a rojo
sulfato de aluminio y amonio o potasio (alumbre) 20 g
- Eosina alcohlica
1.- Disolver la hematoxilina en el alcohol absoluto 2.- El alumbre en el agua destilada con ayuda de calor 3.- retirar del calor y aadir el xido de mercurio lentamente 4.- Calentar hasta un color prpura oscuro. 5.- Retirar de la frama, inmediatamente colocar en agua fra hasta que enfre
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6.- El colorante se coloca en un frasco oscuro y esta listo para usarse 7.- agregar de 2 a 4 ml de cido actico por 100 ml de solucin. NOTA. Como regla general en la preparacin de esta hematoxilina tiene que tomarse en cuenta que todos los componentes de la formula deben agregarse en el orden establecido y deben de estar disueltos totalmente antes de agregar el siguiente. Se mezcla todo en fro y se filtra. Cuestionario. 1.- Que estructuras observ en las laminillas 2.- Dibuje y seale cada estructura tisular de los diferentes cortes de tejido realizado
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PRACTICA NO. 8 OBSERVACION DE TEJIDO EPITELIAL
INTRODUCCION.- El tejido epitelial es un conjunto de clulas que cumple con funciones de revestimiento, secrecin o absorcin. De acuerdo a la funcin que desempea, la forma de las clulas se adapta a las necesidades de dicha funcin. As por ejemplo, si se trata de la funcin de revestimiento o proteccin, la clula adquiere en su citoplasma, sustancias que la hagan resistente (queratina). Si la funcin es de secrecin o bien de absorcin, la clula sufre modificaciones en su borde libre (cilias, microvellosidades, flagelos) que le permiten aumentar la superficie de absorcin o secrecin. Las cluklas del tejido epitelial carecen de sustancia intersticial y se apoyan en una estructura llamada membrana basal. Debido a la existencia de esta membrana, la clula epitelial adquiere polaridad, es decir, la orientacin de sus organelos, que hacen distinguir en ella una regin basal y otra apical. El tejido epitelial tiene su origen en su mayor parte en el ectodermo, aunque tambin procede del mesodermo y del endodermo. El tejido epitelial de revestimiento lo encontramos en la piel; el de secrecin en las glndulas y mucosas y el de absorcin en la mucosa intestinal, que cumple tanto con funciones de absorcin como de secrecin. El tejido epitelial de secrecin o Glandular, puede ser de secrecin interna (glndulas endocrinas) o de secrecin externa (glndulas exocrinas). Ejemplo de las primeras lo encontramos en el ovario, cuyo producto de secrecin (estrgenos) pasan a la circulacin; y ejemplo de secrecin externa, las glndulas salivales que vierten su contenido en la cavidad bucal. OBJETIVO.- Observar las caractersticas morfolgicas de las clulas epiteliales que cumplen con las funciones antes mencionadas.
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MATERIAL
MTODO.-
Microscopio,
portaonjetos,
agujas,
pinzas,
cubreobjetos, abatelenguas, azul de metileno, verde de metilo, y como material biolgico: clulas epiteliales de la mucosa bucal humana, de piel de rana y ciliadas de la mucosa bucal de rana. (*) Para observar glndulas y otros ejemplos de epitelio solicitar al maestro(a) las preparaciones. (*) Puede cambiar la muestra por el tejido ciliado de una almeja. PROCEDIMIENTO.- Primera parte: introduzca un abatelenguas en la cavidad bucal y rasspe la cara interna del carrillo. Deposite ese raspado en algodn y haga un segundo raspado. Deposite el contenido de ese segundo raspado en un portaobjetos que contenga una gota de agua. Extienda la preparacin y caliente a la llama del mechero hasta desecacin sin que llegue a quemar el portaobjetos el dorso de la mano. Agregue unas gotas de azul de metileno sobre toda el rea de extensin realizada. Deje actuar el colorante un par de minutos e incline el portaobjetos para tirar el colorante en exceso. Lave con agua utilizando un gotero para no eliminar la muestra, hasta que ya no se desprenda colorante. Coloque un cubreobjetos de forma que ste caiga como se cierran las tapas de un libro, para evitar la formacin de burbujas de aire. Localice el rea ideal para la observacin (clulas aisladas) con seco dbil y enfoque y observe con seco fuerte. NOTA.- Puede observar con objetivo de inmersin, si despus de lavar, seca al aire la preparacin y agrega una gota de aceite de inmersin. La preparacin debe parecer como un mosaico de clulas planas, poligonales, mas o menos irregulares; abundan las clulas aisladas, en cuyas caras se observa los trazos de insercin de unas clulas con otras. El material observado procede de la capa superficial o capa de descamacin del epitelio pluriestratificado de la mucosa bucal. En su mayora son clulas muertas o clulas que estn en periodo de degeneracin. El azul de metileno tie intensamente el ncleo, y con menos color el citoplasma, que presenta un cierto aspecto granuloso. Segunda parte: En el agua del acuario o de los recipientes en donde se tienen ranas, se depositan trozos de piel muy fina y transparente, que procede del epitelio de la piel de las ranas. Con unas pinzas finas tome con cuidado estos trozos de piel y corte un trozo no mayor a un par de cm2. El trozo de epitelio de rana, tomado del acuario se monta sobre un portaobjetos. Con una tira de papel filtro se limpia el exceso de agua, sin que el papel pase
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por el epitelio. Se tie agregando unas gotas de verde de metilo-actico (colorante y fijador al mismo tiempo), se coloca un cubreobjetos y se observa con seco fuerte. Con esta tcnica de tincin, los ncleos y las membranas celulares se tien de color verde mas intenso que el que toma el resto de la clula. El aspecto general de la preparacin es el de un epitelio pavimentoso. Se puede observar muy claramente la forma poligonal de las clulas unidas y acopladas, sin aspecto de discontinuidad por sus bordes. Tercera parte: sujete una rana entre las manos, procurando que mantenga la boca abierta. Raspe el paladar de la rana, preferiblemente en su zona mas baja, con un abatelenguas (teniendo cuidado de no sangrar el tejido por exceso de presin al raspar). En un portaobjetos ponga una gota de suero salino para anfibios (NaCl al 0.7%) y deposite el producto obtenido. Aydese con una aguja para desprender el raspado del abatelenguas y depostelo y extindalo en el suero. Con poco aumento localice la zona en donde se encuentran los grupos de clulas que se han conseguido con la escarificacin del paladar de la rana y observe a aumento fuerte. Si no se pudiera trabajar con una rana, consiga una almeja viva y abra las valvas para que con un abatelenguas haga un raspado del tejido mucoso del interior, depositndolo en un portaobjetos conteniendo una gota de suero fisiolgico y coloque un cubreobjetos. Busque con seco dbil el sitio donde se localizan las clulas con las microvellosidades en movimiento. Observe adems las preparaciones de coleccin.
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Figura 10. Epitelio seudoestratificado columnar ciliado. Hematoxilina-eosina de trquea Figura 11. Epitelio estratificado de transicin- Hematoxilina-eosina, vejiga urinaria
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PRACTICA NO. 9 OBSERVACION DE TEJIDO CONECTIVO

INTRODUCCION.- El tejido conectivo tiene como funcin principal, unir los otros tres tejidos del cuerpo (epitelial, muscular y nervioso). El tejido conectivo se desarrolla a partir de la capa media del embrin, o sea del mesodermo. Este tejido se caracteriza por poseer diversos tipos de clulas y fibras, todo contenido en una matriz de sustancia amorfa. Las variedades celulares, las diferentes fibras y la composicin qumica de la sustancia amorfa son muy variadas dependiendo de la funcin que cada tejido conectivo tenga asignada. Habitualmente la clasificacin del tejido conectivo se basa en el tipo de clulas, fibras y sustancia amorfa que posee y en la proporcin entre ellas. Por esta razn se le clasifica en dos grandes grupos, tejido conectivo propiamente dicho y tejido conectivo especial. El primero se subdivide segn la proporcin de los elementos que lo componen, en tejido conectivo laxo y denso. El tejido conectivo laxo forma la capa de refuerzo de los epitelios, como en el tejido subcutneo de la piel, o forma endotelios que protegen y sujetan los rganos como la pleura y la membrana mesentrica. Tambin forma parte de otros tejidos como el perimisio de los msculos, que forman los tendones (conectivo fibroso).
OBJETIVO.- Localizar las zonas que nos pueden proporcionar tejido conectivo y observar las caractersticas de sus partes integrantes. MATERIAL Y METODO.- Microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, pinzas, navajas, agujas. El material de observacin debe buscarse en las zonas que se mencionaron anteriormente de ranas, conejos o mamferos pequeos. PROCEDIMIENTO.- Primera parte: para explorar bien y aprender mas acerca de las clulas y sustancias intercelulares del tejido conectivo laxo ordinario, interesa cortar pequeas partes del mismo y ponerlas encima de portaobjetos. Tales preparaciones se logran fcilmente en animales de prueba pequeos, como el ratn. La piel y el tejido subcutneo se separan de los msculos del muslo; esto desgarra el tejido
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areolar (tejido conectivo) siguiendo el plano de despegamiento y puede tomar con pinzas, pequeas porciones de tejido a este nivel. Corte y monte en portaobjetos esas porciones. Debe evitar las porciones que contienen grasa visible. Monte las porciones logradas en solucin salina isotnica y extindalas con ayuda de agujas. Se tratan con azul de metileno durante dos minutos y se coloca un cubreobjetos. Se observa con seco fuerte. Segunda parte: Corte un trocito de membrana mesentrica del intestino. Deposite la muestra en un portaobjetos y extindala con ayuda de agujas. Fije la preparacin durante 5 minutos con alcohol de 96. Se puede emplear otro fijador como formol diluido, para evitar alteraciones con los constituyentes celulares, ante los tratamientos que se desarrollan a continuacin. Lave con agua con ayuda de un cuentagotas. Verifique que el tejido est bien extendido y agregue entonces hematoxilina. Deje actuar el colorante durante 15 minutos. Lave con agua. Agregue alcohol-actico durante unos segundos y vigile el proceso de decoloracin hasta que el tejido presente una tonalidad violeta suave. Este paso se hace con objeto de llevar a cabo la diferenciaicin, es decir, por lo general se tien con exceso en la hematoxilina y es preciso quitar el colorante de aquellas estructuras celulares que no son especficas de la hematoxilina y que la retienen con poca intensidad. El alcohol-actico se prepara uno a uno. Se lava con agua. Se neutralizan los restos de cido con agua carbonatada (carbonato de sodio al 5%) durante un minuto. Se lava con agua. Se tie con eosina durante 5 minutos y se lava con agua. Con una tira de papel filtro se seca el exceso de agua de la preparacin y se pone una gota de glicerina. Se coloca un cubreobjetos y se comprime ligeramente para hacer salir (si se form) alguna burbuja de aire. Observe con aumento fuerte y ponga atencin a las diferentes estructuras teidas por la hematoxilina o la eosina segn su afinidad. Tercera parte: Tejido conectivo fibroso. Corte un trozo de tendn de una pata, de los llamados vulgarmente nervios de la carne. Los tendones unen los msculos al hueso. El trozo de tendn se pone sobre un portaobjetos con suero salino fisiolgico y se extiende con ayuda de las agujas. Se pone un cubreobjetos cuidando que no quede la preparacin sin lquido. Observe a seco dbil para localizar la zona mas apta y cambie a seco fuerte. El tendn es un tejido muy duro formado por la asociacin de haces de fibras colgenas y elsticas, en posicin paralela y orientada en la direccin que ejerce el msculo su fuerza. Se destacarn algunas clulas conectivas moldeadas y comprimidas entre las fibras.
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Deposite en el borde superior de la preparacin una gota de cido actico al 1%. Las fibras se hinchan en una masa comn. Los ncleos de las clulas se hacen mas visibles.
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Figura 30. Tejido conectivo alveolar, mtodo de Verhoeff Figura 31. Tejido conectivo alveolar, Brazilina
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Figura 36. Tejido conectivo alveolar. Tcnica de Sudan IV, clulas grasas y tendn
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ESTUDIO DE TEJIDO CARTILAGINOSO

INTRODUCCION.- El cartlago es un tipo de tejido conectivo especial denso con funciones de sostn. Est formado por fibras colgenas y en algunos casos fibras elsticas que estn conmtenidas en una sustancia amorfa en estado de gel muy firme. Sus clulas se denominan condrocitos. El cartlago se clasifica en tres tipos: hialino, elstico y fibroso. El mas abundante es el hialino. Es de color blanco perlino debido a la constitucin de la sustancia intercelular constituda principalmente por cido condroitnsulfrico y colgena. Las clulas o condrocitos se encuentran en los espacios de la sustancia amorfa en grupos o nidos celulares. Los condrocitos son clulas maduras que se han rodeado de sustancia intercelular que fue producida por sus antecesores o clulas jvenes llamadas condroblastos, las cuales son activas y producen las sustancias que forman la matriz amorfa o sustancia intercelular. Estas clulas son intensamente basfilas, caracterstica que disminuye en las clulas maduras. OBJETIVO.- Comprobar las caractersticas tintoriales y morfolgicas de este tejido. MATERIAL Y METODO.- Microscopio, microtomo (navaja), portaobjetos, cubreobjetos, pinzas, agujas, y como material biolgico para observacin de cartlago hialino, puede utilizar el esternn de la rana o bien la cabeza del fmur de conejo o ejemplares jvenes de aves. Para la observacin de cartlago fibroso y elstico se pueden utilizar los discos intervertebrales, la epiglotis y el pabelln de la oreja. Puede utilizar el cartlago de la pechuga de pollo para cartlago hialino. PROCEDIMIENTO.- Haga un corte de las muestras antes mencionadas o de la cabeza del fmur de alguno de los animales ya indicados. Haga el corte de la zona blanda cuidando de no forzar el corte. Si se observa resistencia al cortar, nos indica que se ha agotado la zona de cartlago. Una vez obtenido el corte, se procede a teir como sigue: se fija el corte con alcohol de 96 o formol al 10% durante 5%. Se lava con agua y se tie con azul de metileno al 1 %
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durante dos minutos. Se lava con agua y seca el exceso de agua con una tira de papel filtro, se agrega una gota de glicerina y se cubre con el cubreobjetos. Deber observar la matriz amorfa del tejido teida de violeta uniforme y difana, en el caso de cartlago hialino y de aspecto fibroso en los otros tipos. Las clulas cartilaginosas o condroblastos rodeadas de un anillo que contrasta con las sustancias restantes del tejido. Haga otro corte y tia segn la tcnica de hematoxilina-eosina como sigue: fije la muestra con alcohol de 96 o formol al 10% durante 5 minutos, agregue hematoxilina durante 15 minutos, lave con agua antes y despus de la aplicacin de hematoxilina. Agregue alcohol-actico para lograr la diferenciacin, lave con agua, neutralice con agua carbonatada y lave con agua, agregue eosina durante 5 minutos y lave con agua. Seque el exceso de agua con una tira de papel filtro y agregue una gota de glicerina tapando despus con un cubreobjetos. Deber observar la sustancia intercelular o amorfa teida de rojo por la eosina y los condroblastos teidos por la hematoxilina, los ncleos bien diferenciados y teidos. Las clulas las podr observar en pareja o en grupos. ESTUDIO DE TEJIDO OSEO INTRODUCCION.- El hueso es un tejido conectivo especializado en funciones de sostn y proteccin, cuya matriz intercelular calcificada le proporciona dureza y rigidez. El tejido seo o hueso consta de una sustancia amorfa o intercelular calcificada o mineralizada de fibras colgenas y clulas llamadas osteoblastos (activas o maduras) que producen la sustancia intercelular como el tropocolgeno o precursor de la colgena y mucopolisacridos cidos. Estas clulas se rodean de la sustancia intercelular que producen y pasan a ser osteocitos o clulas maduras. La matriz intercelular o calcificada est formada por unidades llamadas laminillas sea. La disposicin de estas unidades determinan dos variedades de hueso que son: hueso poroso o esponjoso y hueso compacto. El hueso esponjoso tambin llamado reticular se observa como una red cuya proyeccin tridimensional corresponde a un conjunto de lminas que delimitan un laberinto de cavidades. El hueso compacto en cambio, es una masa slida sin cavidades visibles. Sin embargo, microscpicamente est formado por los sistemas de Havers que son espacios o conductos conocidos como Conducto de Haver
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rodeado de laminillas dispuestas concntricamente. Entre estos sistema s se disponen otras laminillas a manera de relleno y forman los sistemas intersticiales. Las clulas estn dispuestas en la superficie de las laminillas seas. Los espacios que deja la matriz calcificada se encuentran inervados y vascularizados. Para realizar estudios de preparaciones de hueso, es necesario descalcificarlo. OBJETIVO.- Identificar cada uno de los componentes del tejido seo. MATERIAL Y METODO.- Microscopio, portaobjetos,, cubreobjetos, navaja, pinzas, agujas y como material biolgico un hueso largo de rata, ratn, rana o ave. PROCEDIMIENTO.- Primera parte: Observacin de un hueso en forma longitudinal. El fmur se introduce en una solucin descalcificadora (cido ntrico al 10 %). La descalcificacin es completa si se atraviesa fcilmente el hueso con una aguja. Se neutraliza el hueso introducindolo en una solucin de carbonato al 10% y se lava con agua corriente. Con una navaja se hace un corte longitudinal de todo el hueso, o al menos de parte de la caa o difisis y de una de las cabezas o epfisis. En la cabeza se observar, la configuracin articular de esta regin, el cartlago articular que la recubre, la mdula sea esponjosa o mdula roja del hueso, el cartlago de conjuncin que separa las epfisis de las difisis, el hueso compacto de las difisis ya en la caa o cuerpo del hueso y la mdula sea amarilla alojada en la difisis o tutano del hueso, adems el periostio o membrana envolvente del hueso. Segunda parte: Se introduce el hueso en una solucin fijadora como formol al 20% durante 3-5 das. Se lava con agua abundante y se pasa a una solucin descalcificadora, hasta que el hueso se pueda atravesar fcilmente con una aguja. Se vuelve a lavar durante una hora como mnimo y se neutraliza en una solucin de agua carbonatada al 10% hasta que el hueso al contacto con papel indicador ya no d indicios de contener cido. Se fija con formol al 10% durante 24 horas y se hacen los cortes, lavando antes en forma abundante. Se tie con azul de metileno durante 3 minutos yn se hace otra preparacin con la tcnica de hematoxilina-eosina. NOTA.- Vea la tcnica en la prctica anterior.
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Figura 50. Cartlago hialino costal. Hematoxilina-eosina
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Figura 56. Hueso compacto, sistema de Havers, Hematoxilina-eosina
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PRACTICA NO. 10 OBSERVACION DE TEJIDO MUSCULAR

INTRODUCCION.- El tejido muscular esta formado por clulas fusiformes llamadas fibras musculares, que poseen la caracterstica de acortarse, siguiendo su eje mayor al ser estimuladas; esta propiedad se conoce como CONTRACTILIDAD muscular. El tejido muscular se clasifica segn su morfologa en estriado y liso, es decir, si las fibras musculares estn atravesadas transversalmente por estras, o no lo estn, respectivamente. Se hace otra clasificacin desde el punto de vista fisiolgico en voluntario e involuntario, si depende su contraccin de la voluntad o no. El msculo estriado puede ser esqueltico o cardiaco siendo este ltimo de tipo involuntario. Las fibras musculares estn rodeadas por una membrana citoplasmtica o sarcolema. El citoplasma o sarcoplasma contiene a los componentes fundamentales de la clula como sarcosomas (mitocondrias) y retculo sarcoplsmico (REL).
OBJETIVO.- Observar las caractersticas del tejido muscular y destacar las diferencias entre el msculo estriado y liso. MATERIAL Y METODO.- Microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, pinzas, agujas, y como material biolgico, muestras de msculo esqueltico, cardiaco y liso (intestino o vejiga). PROCEDIMIENTO.- Primera parte: corte un trozo pequeo de msculo esqueltico (fresco) de unos 5 mm de longitud por unos dos de grosor y colquelo sobre un portaobjetos encima de unas gotas de suero fisiolgico. Con las agujas procure separa la muestra minuciosamente, procurando que quede bien desflecado. Durante esta manipulacin debe cuidarse que el material no se quede seco. Tia segn la tcnica de hematoxilina-eosina. Puede observar los ncleos de color violeta debido a que captan la hematoxilina y el resto de fibra con sus estriaciones, aparece impregnada de rojo intenso que le da la eosina.
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Las fibras musculares son 1000 veces mas largas que anchas, poseen una membrana fina o sarcolema que contiene a su citoplasma no diferenciado o sarcoplasma. Las clulas son sincicios y sus ncleos guardan una posicin perifrica debajo del sarcolema. Si es posible, es decir, si cuenta con una muestra de tejido muscular cardiaco, haga una preparacin y tia como lo hizo con el esqueltico, y podr observar que las fibras cardiacas tienen mayor longitud que las voluntarias y que se ramifican con las fibras vecinas. Segunda parte: debido a que no hay rganos formados exclusivamente por fibras musculares lisas, ya que stas forman tnicas en muchos rganos, se obtienen de la disociacin de los rganos que las contienen. Obtenga un corte transversal de intestino o vejiga urinaria de un mamfero joven como conejo o rata (que haya permanecido en alcohol durante 8 das), colquelo en un portaobjetos, discielo cuidadosamente con las agujas cuidando que est hmedo con alcohol o formol al 10% )fijador). Tia segn la tcnica de hematoxilina-eosina. Observar las fibras alargadas con los extremos afilados y con un ncleo oval grande casi central. Mtodo tricr{omico de Gallego 1.- fijar en formol al 10% 2. hacer cortes por micrtomo 3. lavar en agua destilada 1. teir con la solucin de fucsina, durante 5 min. Conviene teir el mismo da que se hicieron los cortes 2. pasar los cortes al virofijador, durante 5 minutos, aqu se dejan todos los cortes y uno por uno se montan en el portaobjetos t se van pasando por: 3. lavar en agua destilada 4. hacer una coloracin de fondo con picrocarmin de indigo, durante 1 min. 5. deshidratar en trs cambios con alcohol de 96 , de 1 a 3 min. Cada uno
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6. aclarar en dos cambios de xilol, de 1 a 3 min cada uno 7. cubrir con balsamo de Canad o resina. Resultados Ncleos Hacer colgeno Fibras musculares Queratina y eritrocitos Preparacin de las soluciones - solucin de fucsina formol al 1% fucsina fenicada de Ziehl cido actico - virofijador formol al 1% cido actico 10 cc 2 a 4 gotas 10 cc 5 gotas 1 gota rojo violceo azul verdoso verde amarillento amarillo
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Figura 72. Msculo esqueltico. Tcnica de plata
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PRACTICA NO. 11 OBSERVACION DE CLULAS SANGUNEAS EN UN FROTIS INTRODUCCION.- La sangre es un tipo de tejido conectivo especial, constituido por una sustancia lquida que se mantiene en movimiento permanente dentro del sistema cardiovascular. La sangre est formada esencialmente por dos componentes: una sustancia intercelular lquida o plasma y elementos figurados, entre los que se encuentran los eritrocitos, hemates o glbulos rojos, leucocitos o glbulos blancos y restos o fragmentos citoplasmticos derivados de clulas especiales de la mdula sea, llamados plaquetas. Las funciones de la sangre son variadas y complejas como son: transporte de elementos necesarios para el funcionamiento de los distintos rganos, como oxgeno, agua y sustancias alimenticias, recoleccin de elementos de desecho, transporte de secreciones que regulan el funcionamiento de algunos sistemas y contribucin a la defensa del organismo. La morfologa de las clulas sanguneas se estudia habitualmente por el mtodo del frotis, que consiste en extensiones delgadas, homogneas, de una gota de sangre perifrica sobre un portaobjetos. OBJETIVO.- Aprender a diferenciar las clulas sanguneas. MATERIAL Y METODO.- Lancetas estriles, portaobjetos, microscopio, colorante de Giemsa, colorante de Wright, colorante de May Grenwald. NOTA: se puede sustituir la muestra por una obtenida por puncin venosa y utilizando los colorantes para tincin rpida. PROCEDIMIENTO.- Si elige la tcnica de la lanceta estril, pique la yema de uno de los dedos o del lbulo de la oreja y deposite una gota en un portaobjetos limpio en uno de sus extremos, y con otro portaobjetos extienda la gota en forma horizontal de derecha a izquierda y procurando se forme entre los dos portaobjetos un ngulo de 45. Deje secar al aire y tia con cualquiera de los colorantes segn se indica a continuacin; pero si se utiliza sangre de puncin venosa con anticoagulante, el frotis debe hacerse colocando una gota de
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sangre en la parte media inferior del portaobjetos, y con otro se extiende hacia arriba uniformemente la gota y se deja en contacto los dos portaobjetos deslizando lentamente el de arriba hasta que forme el extendido central. Se deja secar al aire, se fija con metanol y se tie con la tcnica rpida, colocando el frotis 15 segundos en el colorante A, lavando con agua, y 15 segundos en el colorante B, se lava y se seca para observar con una gota de aceite de inmersin con el objetivo de 100X. Coloracin de Giemsa 1. Fije el frotis con alcohol metlico durante 5 minutos. 2. Agregue solucin diluida de colorante de Giemsa recin preparada (3 gotas de colorante de Giemsa concentrada por cada ml de agua destilada) y cuente 20 minutos. 3. Lave con agua corriente. 4. Seque al aire y observe con objetivo de inmersin. Coloracin de Wright 1. Cubra el frotis con un nmero conocido de gotas de colorante de Wright durante 2 minutos. 2. Aada el mismo nmero de gotas de agua destilada, mezcle y deje actuar la mezcla durante 8 minutos. 3. Lave con agua corriente. 4. Seque al aire y observe con objetivo de inmersin. Mtodo Panptico de Pappenheim 8. Cubra el frotis con 4 gotas de colorante de May Grenwald durante 3 minutos. 9. Aada la misma cantidad de agua destilada procurando que se mezclen y deje actuar la mezcla durante un minuto. 10. Escurra el lquido y sin previo lavado, aada solucin diluida de Giemsa recin preparada, dejndola actuar durante 10 minutos. 11. Seque y observe con objetivo de inmersin.
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Figura 146. Frotis sanguneo. Linfocito pequeo, mtodo de Wright Figura 147. Frotis sanguneo. Linfocito mediano, mtodo de Wright
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Figura 148. Frotis sanguneo. Monocito y plaquetas, mtodo de Wright Figura 149. Frotis sanguneo. Polimorfo basfilo, mtodo de Wright Figura 150. Frotis sanguneo. Polimorfo neutrfilo, mtodo de Wright Figura 151. Frotis sanguneo. Polimorfo eosinfilo, mtodo de Wright
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PRACTICA NO. 12 TINCIN DE GOLGI. OBSERVACION DE TEJIDO NERVIOSO
INTRODUCCION.- En el tejido nervioso, las clulas se han
especializado
especficamente para transmitir impulsos de una parte del cuerpo a otra. . Este proceso es rpido y prosigue por tractos circunscritos, compuestos de clulas nerviosas en serie. El impulso pasa de una clula a otra a travs de brechas submicroscpicas conocidas como sinapsis. Cada clula nerviosa posee por lo menos una prolongacin citoplsmica muy larga, de manera que el nmero de unidades requeridas para transmitir el impulso se mantenga al mnimo. La unidad bsica del tejido nervioso es la neurona una clula nerviosa y todas sus prolongaciones citoplsmicas . La gran mayora de las clulas nerviosas tienen muchas prolongaciones citoplsmicas y se denominan por lo tanto, neuronas multipolares,; en estas clulas nerviosas, solo una de las prolongaciones, el axn, conduce el impulso del cuerpo celular hacia fuera. Las dems prolongaciones, llamadas dendritas, conducen el impulso hacia el cuerpo celular. Algunas clulas nerviosas solo poseen dos prolongaciones, un axn y una dendrita y se denominan neuronas bipolares. Finalmente algunas clulas nerviosas pueden dendrita, estas clulas se conocen como neuronas seudounipolares. Los cuerpos neuronales del sistema nervioso central yacen en la materia gris, o en acumulos localizados en la materia blanca. La materia gris comprende vastas reas de clulas nerviosas y sus neuroglias de sostn, que se encuentran en las cortezas del cerebro y del cerebelo y en la regin central de la mdula espinal. La materia blanca esta compuesta de las prolongaciones citoplasmticas de las clulas nerviosas y sus neuroglias de sostn. Los acumulos de neuronas que se encuentran en la materia blanca, son, usualmente aunque no siempre, llamados ncleos, se encuentran en todas las partes del sistema nervioso central. OBJETIVO.- Que el alumno conozca macroscpicamente las partes del sistema nervioso y la imagen microscpica del tejido nervioso. exhibir solo una prolongacin celular que se divide casi inmediatamente, a manera de T, en un axn y una
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MATERIAL Y METODO.- microscopio MATERIAL BIOLOGICO.- Coleccin de partes del sistema nervioso humano contenidos en resina y laminillas con cortes de cerebro, cerebelo y mdula espinal. PROCEDIMIENTO.a) Observar los bloques de resina que contienen las muestras de fragmentos de cerebro, cerebelo y mdula espinal humanos. b) Observar al microscopio las preparaciones de coleccin de tejido nervioso. c) Comentar para ambos casos las imgenes con la informacin terica de la bibliografa. Tincin de Golgi 1.- Realizacin de cortes de 150 m (desde aqu se puede realizar cortes a 10 m) 2.- Inmersin en solucin fijadora 24 horas a temperatura de 4 C. 3.- Fijacin. Mezclar dicromato de potasio paraformaldehido Ac actico glacial 2% (p/v) 40% (p/v) 50 ml 10 ml 5 ml
Adicionar 15 ml por bloque de tejido, durante 48 hrs a 25 C (oscuridad) 4.- Lavado en agua desionizada, agitando por 30 min. 5.- Impregnacin. Solucin de nitrato de plata 0.75% (p/v), adicionar 15 ml/bloque de tejido, 24 horas a temperatura ambiente y oscuridad. 6.- Realizar cortes a 10 m 7.- Deshidratar y montar los portaobjetos.
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Figura 113. Sistema nervioso central. Corteza cerebral, tcnica de plata
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANLISIS CLNICOS LABORATORIO DE HISTOLOGA Y ANATOMA Q.F.

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

ASIGNATURA DE: CDIGO: FECHA DE ELABORACIN:

HISTOLOGIA Y ANATOMIA LQF 215L MARZO DE 2006 FORMATIVO CB

NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: TIPO DE ASIGNATURA:

LABORATORIO DE HISTOLOGA Y ANATOMA PRCTICAS

PRACTICA No. 1 ESTUDIO DEL LQUIDO SEMINAL

PRACTICA NO. 2 DESARROLLO EMBRIONARIO

PRACTICA 3 MANEJO DE LAS TCNICAS HISTOLGICAS

fuertes como cacodilato o sales de osmio, platino y mercurio.

PRACTICA NO 4 DISECCIN DE ANIMALES DE LABORATORIO.

PRACTICA 5 PROCESAMIENTO DE TEJIDOS PARA INCLUSIN EN PARAFINA.

PRACTICA 6 REALIZACIN DE CORTES HISTOLGICOS

PRACTICA 7 DESPARAFINACIN E HIDRATACIN DE LOS CORTES Y TINCIN CON HEMATOXILINA Y EOSINA.

sulfato de aluminio y amonio o potasio (alumbre) 20 g

PRACTICA NO. 8 OBSERVACION DE TEJIDO EPITELIAL

PRACTICA NO. 9 OBSERVACION DE TEJIDO CONECTIVO

ESTUDIO DE TEJIDO CARTILAGINOSO

Figura 50. Cartlago hialino costal. Hematoxilina-eosina

Figura 56. Hueso compacto, sistema de Havers, Hematoxilina-eosina

PRACTICA NO. 10 OBSERVACION DE TEJIDO MUSCULAR

Figura 72. Msculo esqueltico. Tcnica de plata

PRACTICA NO. 12 TINCIN DE GOLGI. OBSERVACION DE TEJIDO NERVIOSO

INTRODUCCION.- En el tejido nervioso, las clulas se han

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