CROMATOGRAFA

Separacin Historia M. Tswett (1903)

Determinacin

Martin y Synge (1941)

CROMATOGRAFIA

Definicin: Es una tcnica capaz de separar compuestos en base a diferencias de su afinidad por una fase estacionaria y una mvil . Sistema Cromatografico: Soluto Fase Mvil Fase Estacionaria

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el que los componentes de la muestra se distribuyen entre dos fases, una de las cuales es fija o estacionaria y la otra mvil. La velocidad de desplazamiento es funcin del coeficiente de distribucin de cada componente entre las dos fases.

[A ]FE D= [A ]FM

FE slido lquido gel

FM gas lquido fluido sc

PROCESO CROMATOGRAFICO
El proceso cromatografico ocurre como un resultado de repetidos estados de sorcin y desorcin durante el movimiento de los componentes de la muestra a lo largo de la fase estacionaria y la separacin se debe a diferencias en los coeficientes de distribucin de los componentes individuales de la muestra

Fundamento del proceso cromatogrfico

Forma de realizar dicho proceso

tipos de cromatografas
la naturaleza de las fases mvil y estacionaria y la clase de equilibrios implicados en la transferencia de los solutos entre las fases, es decir, el mecanismo de interaccin

tcnicas cromatogrficas
dispositivo utilizado para conseguir el contacto entre la fase mvil y la estacionaria

CLASIFICACION
Fundamento del proceso cromatogrfico

Forma de realizar dicho proceso

CLASIFICACION

PROCESO CROMATOGRAFICO
Proceso fsico - qumico que rige la separacin:

CLASIFICACION

COMPONENTES PRINCIPALES DE UN CROMATOGRAFO LIQUIDO DE ALTA EFICIENCIA

Proceso por el cual la FM atraviesa la columna

Eluyente columna eluato

Velocidad de flujo (mL/min.)

volumen de disolvente que atraviesa la columna por minuto

Velocidad de flujo lineal (cm./min.)

longitud de columna atravesada por el disolvente en un minuto

Representacin grfica de la respuesta del detector en funcin del tiempo, volumen de eluyente o distancia en el lecho cromatogrfico Informacin analtica relativa a la muestra funcionamiento del sistema cromatogrfico

NOMENCLATURA DE UN CROMATOGRAMA

La lnea base es cualquier parte del cromatgrama donde slo la fase mvil surge de la columna El mximo del pico es el punto ms alto del pico.
Mximo del pico

El punto de inyeccin es aquel punto en el tiempo / la posicin en el tiempo cuando/donde la muestra es colocada sobre la columna. El punto muerto es la posicin del mximo del pico de un soluto no retenido.

de Punto in c inyec

El tiempo muerto (to) es el tiempo transcurrido entre el punto de inyeccin y el punto muerto. El volumen muerto (Vo) es el volumen de fase mvil que pasa por la columna entre el punto de inyeccin y el punto muerto.As, Vo = Qto donde Q es el caudal en mL/min.

de Punto in c inyec

El tiempo de retencin (tr) es el tiempo transcurrido entre el punto de inyeccin y el mximo del pico. Cada soluto tiene un tiempo de retencin caracterstico. El volumen de retencin (Vr) es el volumen de fase mvil que pasa por la columna entre el punto de inyeccin y el mximo del pico. As, Vr = Qtr donde Q es el caudal en mL/min. Cada soluto tambin tendr un volumen de retencin caracterstico

El tiempo de retencin corregido (t'r) es el tiempo transcurrido entre el punto muerto y el mximo del pico. (t'r)= (tr - to) El volumen de retencin corregido (V'r) es el volumen de fase mvil que pasa por la columna entre el punto muerto y el mximo del pico. Esto tambin ser el volumen de retencin menos el volumen muerto. As, V'r = Vr - Vo = la Q (tr - to) donde la Q es el caudal en mL/min.

La altura mxima (h) es la distancia entre el mximo del pico y la lnea base geomtricamente producida bajo el pico.

La anchura del pico (w) es la distancia entre cada lado de un pico medida a 0.6065 de la altura del pico (aprox. 0.607h).. El ancho del pico medido en esta altura es equivalente a dos desviaciones estndar (2s) de la Campana de Gauss y as tiene la importancia cuando se trata de la teora cromatografca La anchura del pico a la mitad de la altura (w0.5) es la distancia entre cada lado de un pico medida en la mitad de la altura del pico. La anchura del pico medida a media altura no tiene ninguna importancia con respecto a la teora cromatografica.

La anchura mxima en la base (wB) es la distancia entre las intersecciones de las tangentes dibujadas a los lados del pico y la base del pico geomtricamente producida. La anchura mxima en la base es equivalente a cuatro desviaciones estndar (4s) de la Campana de Gauss y as tambin tiene la importancia cuando se refiere a la teora cromatografca.

CROMATOGRAFIA LINEAL
Los equilibrios de distribucin implicados en cromatografa se describen por ecuaciones sencillas que suponen la transferencia de un analito entre la fases estacionaria y mvil. A mvil A estacionaria La constante de equilibrio K para un soluto se denomina constante de distribucin o coeficiente de distribucin: K= Cs/CM Donde :Cs es la concentracin molar del soluto en la fase estacionaria CM es la concentracin molar en la fase mvil. Idealmente, K es constante en un amplio intervalo de concentraciones de soluto; de este modo Cs es directamente proporcional a CM . La cromatografa en la que es aplicable la razn anterior se denomina CROMATOGRAFIA LINEAL y , en tal caso los picos son curvas gaussianas simtricas caractersticas y los tiempos de retencin son independientes de la cantidad del analito inyectado.

CROMATOGRAFIA LINEAL

ISOTERMAS

CROMATOGRAFIA LINEAL
1. En el caso ideal la razn de particin es constante en una amplia gama de concentraciones de soluto; es decir, Cs es directamente proporcional a Cm. Pero con mayor frecuencia hay relaciones no lineales. La relacin ideal mostrada por la curva C es por equilibrios de distribucin entre dos lquidos inmiscibles, siempre y cuando no se produzcan reacciones de asociacin o disociacin en uno de los disolventes. Cuando existen tales equilibrios es ms probable una relacin de distribucin similar a B o D. La curva A es una isoterma de adsorcin tpica que relaciona la cantidad de soluto que es adsorbido sobre la superficie de un slido con la concentracin del soluto en la solucin que hace contacto con el slido. Se supondr frecuentemente una constante K en la derivacin de ecuaciones practicas.

2.

3.

4.

CROMATOGRAFIA LINEAL
Las representaciones graficas sugieren que esta aproximacin no introducir graves errores en los limites inferiores de concentracin, donde todas las curvas son aproximadamente lineales. Por lo que K no varia con la concentracin del soluto. Las concentraciones en una columna cromatografca son por lo general bajas. La cromatografa que se lleva a cabo bajo condiciones tales que es constante se denomina CROMATOGRAFIA LINEAL

PICOS ASIMETRICOS

PICOS ASIMETRICOS