POSIBLE PAPEL DE UN bADRENOCEPTOR EN LA REGULACIN DE LA LIBERACIN DE NORADRENALINA POR EL ESTIMULACIN DEL NERVIO A TRAVS DE UN MECANISMO DE UNA RETROALIMENTACIN POSITIVA

O La

liberacin de noradrenalina por estimulacin nerviosa parece ser regulado a travs de un mecanismo de retroalimentacin negativo mediado por adrenoceptores presinapticos

O La evidencia experimental que llev a la

postulacin de este mecanismo se basa en la inhibicin de la liberacin de transmisor en presencia de -adrenoceptor

O Existe

poca informacin sobre los transmisores liberado por estimulacin nerviosa sobre los efectos de agonistas y antagonistas de -adrenoceptores.

O Propranolol

y otros agentes de bloqueadores de -adrenoreceptores se utilizan en el tratamiento de la hipertensin

O Estudiar los efectos de isoprenalina y

propranolol sobre la [3H]-noradrenalina liberada por la estimulacin del nervio en aurculas aislados de conejillo de Indias.

NOORADRENALINA
Es un neurotransmisor que se libera entre la fibra postganglionar del sistema simptico y el rgano efector. Perteneciente a la familia de las catecolaminas.

Los receptores 1, 1 y 2 son receptores postsinpticos, mientras que 2 son principalmente presinpticos e interviene en la regulacin de la noradrenalina.
Agonistas 1 vasoconstrictores y antihipertensores Lo agonistas 2 como hipotensores

Los agonistas 1 cardioselectivos como antianginosos

Los agonistas 2 como broncodilatadores

Mtodos

Aislamiento de la membrana nictiante del gato.

O Gatos de 1.8 a 3.6 kg y de ambos sexos. O Anestesia Pentobarbital sdico (35 mg/Kg) O Canulacin de la traquea. O Globo ocular suprimido con la menbrana

nictiante, fue sacado de orbita.

O Colocado en una caja de Petri con una solucin

de krebs equilibrada (95% de O2 y 5% CO 2. )

O Solucin de Krebs (mM):

O NaCl: 118.0 O KCl: 4.7 O CaCl2: 2.6 O MgCl2: 1.2 O NaH2PO4: 1.0 O NaHCO3:25.0 O Glucosa: 11.1 O EDTA: 0.004 O cido ascrbico: 0.11

O El msculo medio fue disectado con sus fibras

sinpticas post-ganglionares.

O Extremo superior, conectado a un transductor

de desplazamiento de la fuerza y la tencin temperatura se mantuvo burbujeando 95% de O2 y 5% CO 2. a

O La

37C

O Se coloc en un electrodo de platino, para la

estimulacin

O Fibras

simpticas post-ganglionares fueron estimuladas con frecuancias de: 0.1, 0.2, 0.4, 0 .8, 1.6, 3.2, 6.4, 12.5, 25 y 50 Hz.

O Se intensifico cada que la respuesta al estmulo

se volvia estable.

O Elaboracin de dos curvas de respuesta

frecuencia por un intervalo de 40minutos.

O 20

minutos despus de la segunda determinacin se realiz una curva de concentracin- respuesta.

O Mediante

la adicin de noradrenlina, acumulativamente, de tal manera que la concentracin final , fue aumentando por un factor de aproxiamadamente de 3 veces ms, cada que se lograba una repuesta constante a la concentracin anterior.
utilizaron los siguientes frmacos: Clorhidrato de Propanolol, Isoprenalina y Fentolamina y Monohidrato de bitartrato de noradrenalina.

O Se

Neuronas noradrenrgicas.
O Las

neuronas noradrenrgicas se encuentran en varias reas discretas del cerebro pero principalmente en el rea denominada Locus Coeruleus (LC), el cual fue descrito por primera vez en 1809 por el neuroanatomista alemn Reil.

O La mitad de las neuronas noradrenrgicas

del encfalo estn encerradas en este pequeo ncleo. Est compuesto por 18.000 clulas en cada lado y es la ms extensa red de vas que emanan de cualquier ncleo cerebral. Es el origen de virtualmente todas las aferencias noradrenrgicas al cerebro.

O Las catecolaminas

se sintetizan en las terminales nerviosas de las neuronas adrenrgicas y se almacenan en vesculas especializadas que pueden contener dopamina, noradrenalina o adrenalina.

O El

cualquiera de los tres casos se almacenan combinadas con ATP en proporciones estequimtricas definidas. Con la llegada del estmulo despolarizante las catecolaminas son liberadas a la hendidura sinptica por exocitosis.

O Una vez en la hendidura sinptica pueden ocurrir

3 situaciones.
O La

mayor parte del NT es rpidamente recapturado en la membrana presinptica por un simportador NT/Na+ el cual puede operar a bajas o altas concentraciones de noradrenalina.

O El NT es rpidamente inactivado por la

monoaminoxidasa (MAO), simultneamente puede ser biotransformado por la catecolorto-metil-transferasa (COMT).

O Las catecolaminas que difundan libremente

interactuaran de modo reversible con los receptores adrenrgicos provocando diferentes reacciones.

Receptores adrenrgicos.
O En

base a mecanismos comunes de acoplamiento receptor-efecto, se pueden distinguir 3 grandes grupos de adrenoceptores.

O a1: Producen un aumento de los niveles de

IP3/DAG (inositol trifosfato/diacilglicerol), va protena Gq11 fosfolipasa C.

O a2:

Todos tienen en comn disminucin de la actividad adenililciclasa, va protena Gi.

una de

O b: Producen un aumento de los niveles de

AMP cclico, va protena GS activan la adenililciclasa.

O El isoproterenol es agonista de todos los

subtipos y el propranolol, su bloqueante. Ambas drogas son selectivas para distinguir receptores b de a.

Recepto r a1

Respuesta Contraccin del msculo liso (iris, arteriolas, esfnteres, vescula seminal). Glucogenlisis y glucognesis. Inhibicin presinptica de la liberacin de NA. Disminucin de la produccin de humor acuoso. Disminucin de la secrecin de insulina. Mediacin de la agregacin plaquetaria.

Mecanismos moleculares. Proteinas G acopladas a fosfolipasa C; que produce IP3 (Inositol trifosfato) y DAG (Diacilglicerol). Protenas G acopladas a la inhibicin de adenilato ciclasa; por lo que disminuye la concentracin de AMP Cclico. Liberacion de pptidos opiodes endgenos. Proteinas G acopladas a la activacin de adenilato ciclasa; por lo que incrementa la concentracin de AMP Cclico.

a2

b1

Incremento de la frecuencia, contractilidad y conduccin cardacas. Incremento en la secrecin de renina.

b2

Relajacin del musculo liso bronquial, GI, uterino, vesical y vascular en msculo esqueltico. Glicogenlisis heptica y en msculo esqueltico. Captacin de K+ en el musculo esqueltico.
Liplisis en los adipocitos.

Protenas G acopladas a la activacin de adenilato ciclasa; por lo que incrementa la concentracin de AMP cclico.
Protenas G acopladas a la activacin de adenilato ciclasa; por lo que incrementa la concentracin de amp cclico.

b3

O AGONISTAS ADRENRGICOS O (CATECOLAMINAS Y DROGAS

SIMPATICOMIMTICAS) O Pueden ser clasificados desde varios puntos de vista, entre los cuales se destacan:

De acuerdo al mecanismo de accin

O Agonistas de accin directa O su afinidad y actividad intrnseca, provocan

un estmulo de los receptores adrenrgicos ubicados postsinpticamente en los tejidos. O Ejemplos: noradrenalina, adrenalina, dopamina, isoproterenol.

De acuerdo al mecanismo de accin

O Agonistas de accin indirecta. Aquellos que

se incorporan a las terminales adrenrgicas perifricas por captacin neuronal, ingresan a las vesculas sinpticas y desplazan a la noradrenalina almacenada, la cual difunde y activa a los receptores postsinpticos correspondientes. O agonista indirecto: tiramina

De acuerdo al mecanismo de accin

O Antagonistas:
O bloqueantes de la captacin neuronal

(cocana)
O deplecionantes del contenido endgeno

de noradrenalina (reserpina).

De acuerdo al mecanismo de accin

O Agonistas de accin mixta. Son

aquellos que actan por la suma de una accin directa y otra indirecta.
O Ejemplos: anfetamina, metanfetamin

y efedrina.

Por grado de selectividad agonstica sobre los diferentes receptores adrenrgicos

O Agonistas

a y adrenrgicos,

representados principalmente por noradrenalina y adrenalina.

O Agonistas

a 1-adrenrgicos

selectivos, representados, primordialmente, por fenilefrina y metoxamina.

Por grado de selectividad agonstica sobre los diferentes receptores adrenrgicos

O Agonistas

a 2-adrenrgicos

selectivos, siendo sus principales ejemplos: clonidina, a-metildopa (prodroga), guanfacina y guanabenz.
O Agonistas no selectivos, por

ejemplo, el isoproterenol.

Por grado de selectividad agonstica sobre los diferentes receptores adrenrgicos

O Agonistas 1-adrenrgicos selectivos,

representados principalmente por el prenalterol.

O Agonistas 2-adrenrgicos selectivos, que

comprenden un numeroso grupo de frmacos, entre los cuales se destacan salbutamol, pirbuterol, fenoterol y ritodrina.

AGONISTAS a Y ADRENRGICOS
O Noradrenalina

O Es liberado por las terminales

adrenrgicas perifricas. Se caracteriza por presentar una mayor afinidad por los receptores a 1, a 2 y 1.

Acciones farmacolgicas.
O Aumento de la presin diastlica, debido al

efecto vasoconstrictor perifrico, estmulo de los receptores a 1 y a 2 msculo liso vascular. O - Aumento de la presin sistlica, estmulo 1 cardaco. O - Disminucin de la frecuencia cardaca incremento reflejo de la actividad vagal.

por del por por

Adrenalina
Presenta una elevada afinidad por los receptores a 1, a 2, 1 y 2, con mayor potencia sobre los . Sus acciones farmacolgicas, en los diferentes tejidos, dependen de la densidad de los subtipos de receptores presentes, as como de la dosis administrada.

Acciones farmacolgicas.
O Aumento

de la presin sistlica, proporcional a la dosis y dependiente del estmulo de receptores 1 cardacos. O Aumento de la frecuencia cardaca, por estmulo 1 y 2 en el ndulo sinusal. O Disminucin o aumento leve de la presin diastlica, en funcin de la dosis.

Acciones farmacolgicas.
O Dosis pequeas provocan vasodilatacin

arteriolar por estmulo de receptores 2.

O Dosis

mayores estimulan tanto a los receptores 2 (vasodilatacin), como los a 1 y a 2 adrenrgicos (vasoconstriccin arteriolar de piel, mucosas y rin).

Acciones farmacolgicas.
O Cuando la adrenalina se administra por va

subcutnea o intravenosa en infusin, en las dosis recomendadas, se observa, en general, disminucin de la presin diastlica (predomina el estimulo 2 vasodilatador)

Acciones farmacolgicas.
O Los efectos directos de la adrenalina

sobre el corazn se observa:

O Efecto inotrpico positivo (1). O Efecto cronotrpico positivo (1 y

2).

Acciones farmacolgicas.
O Aumento de la velocidad de la

conduccin y de ascenso de la tensin isomtrica (1).

O Aumento de la velocidad de

relajacin (1).
O Aumento de la excitabilidad (1)

Fentolamina
O Es un potente bloqueante a O En dosis teraputicas el efecto bloqueante a

producido no es completo; para producir un efecto bloqueante a mximo se necesitan dosis imposibles de tolerar.

Acciones farmacolgicas.
O Causa taquicardia. O La fentolamina puede emplearse para

descender la presin arterial, si sta alcanza cifras alarmantes.

Acciones farmacolgicas.
O la fuerza de contraccin cardaca se explica por: O El efecto histamino smil. O El aumento de la liberacin de noradrenalina

por bloqueo de los receptores a2 presinpticos.

O El incremento reflejo de la descarga simptica,

por la vasadilatacin perifrica y la disminucin del tono vagal por igual mecanismo.

Propranolol.
O El propranolol es el frmaco patrn de

los bloqueantes adrenrgicos.

O El ismero levgiro es 100 veces ms

potente como bloqueante que el dextrgiro, pero ambos estereoismeros son igualmente potentes para la accin estabilizante de membrana.

Acciones y efectos farmacolgicos

O Dependen de su capacidad bloqueante competitiva de

los receptores 1 y 2. Los efectos ms importantes son:

O Disminucin del volumen minuto cardaco

(1).

O Disminucin de la liberacin de noradrenalina

por el estmulo nervioso (1).

O Inhibicin de la secrecin de renina (1).

Acciones y efectos farmacolgicos

O Disminucin del tono simptico, por bloqueo

a nivel del SNC, favoreciendo la accin a2 central, que es inhibitoria del tono simptico. en la baroreceptores. sensibilidad de los

O Cambio

Acciones y efectos farmacolgicos

O Estimulacin de la produccin de

prostaciclinas por el endotelio vascular en los hipertensos respondedores a los bloqueantes .

O Efecto antianginoso, porque disminuye el

consumo de oxgeno del miocardio (1).

Acciones y efectos farmacolgicos

O Efecto antiarrtmico cardaco (1).

O Antagonismo de sntomas

cardiovasculares del hipertiroidismo (las hormonastiroideas inducen una upregulation de receptores 1).
O Disminucin de la secrecin de insulina

en respuesta al aumento de la glucemia (2).

Acciones y efectos farmacolgicos

O Disminucin de la liberacin de glucosa por el

hgado en respuesta a la hipoglucemia(2).

O Disminucin de la taquicardia en respuesta a

la hipoglucemia, lo que priva a diabticos insulino dependientes de un sntoma que los alerta sobre la hipoglucemia.

Resultados:
O Respuestas cronotrpicas a una estimulacin del

nervio accelerans y a noradrenalina exgena:

O El aumento mximo de la frecuencia auricular

(112 21 latidos / min) se obtuvo normalmente con una frecuencia de estimulacin de 12,5 Hz y esto no difiri significativamente de la obtenida con noradrenalina exgena (130 5 latidos / minuto). hubo diferencia entre dos curvas de frecuencia-respuesta en condiciones de control (Figura 1 a).

O No

O En presencia de propranolol (1,0 x 10-7M)

hubo un desplazamiento marcado hacia la derecha (Fig. 1 b) y despus de la exposicin a la fentolamina, (3,1 x 10-6M) la curva tiende a desplazarse hacia la izquierda, pero no en un grado significativo (Figura 1c).

O En

presencia de propranolol, hubo un desplazamiento similar a la derecha en la curva de concentracin-respuesta a noradrenalina exgena (Figura 2).

Desbordamiento del transmisor provocado por estimulacin del nervio accelerans.

O En un grupo de control de las aurculas no hubo

diferencia entre las respuestas cronotrpicas y los lanzamientos fraccionarios por choque observado con dos perodos consecutivos de la estimulacin del nervio. efecto cronotrpico positivo sostenido, siendo el mximo de 98 11 lat / min (media de 6 observaciones). 20 min ms tarde el aumento de la tasa an era 84 12 latidos / min, cuando un segundo perodo de estimulacin del nervio se aplic.

O Al agregar isoprenalina (1,2 x 10-8M) se obtuvo un

Desbordamiento del transmisor provocado por estimulacin del nervio accelerans.

O Las respuestas a la estimulacin nerviosa

en presencia de isoprenalina se redujo significativamente y esto es atribuible a la alta tasa auricular antes de la estimulacin del nervio. La Tabla 1 tambin muestra que la exposicin a la isoprenalina aument significativamente la liberacin de [3 H]noradrenalina por la estimulacin nerviosa.

Desbordamiento del transmisor provocado por estimulacin del nervio accelerans.

O Propranolol, (1,0 x 10-7M) no afect la tasa

espontnea pero disminuy significativamente las respuestas a la estimulacin nerviosa cronotrpica. En la presencia del agente de bloqueo del badrenoceptor, hubo una reduccin significativa en el transmisor liberado por la estimulacin del nervio, a juzgar por la relacin S2 / SI (Tabla 1).

Desbordamiento del transmisor provocado por estimulacin del nervio accelerans.

O 1-4 de exposicin a la fentolamina (3,1 x

l06M) redujo la frecuencia espontnea ligeramente, pero no afect el efecto cronotrpico positivo provocado por la estimulacin nerviosa. Esta concentracin del agente de bloqueo de los receptores aadrenrgicos aumento ms de tres veces el transmisor liberado por la estimulacin del nervio (Tabla 1)

Efectos de la isoprenalina, propranolol y fentolamina en la captacin neuronal de [3 H]noradrenalina.

O Los cambios en el desbordamiento del transmisor

provocados por la estimulacin nerviosa en presencia de isoprenalina, propranolol o fentolamina pudieron ser debido a un efecto de estos frmacos sobre la captacin neuronal de noradrenalina.

O Esta posibilidad se explor en los experimentos en los

que se determin la absorcin y retencin de [3 H]noradrenalina despus de la exposicin a estos frmacos.

contenido de noradrenalina endgena de los grupos estudiados.

O La Tabla 2 muestra que no hubo diferencia entre el

Efectos de la isoprenalina, propranolol y fentolamina en la captacin neuronal de [3 H]noradrenalina.

O La exposicin a la isoprenalina, propranolol o

fentolamina en las concentraciones a las que estos frmacos modificaron el desbordamiento del transmisor durante la estimulacin del nervio, no afect a la acumulacin de [3 H]noradrenalina en las aurculas. O Por consiguiente, los efectos de estos frmacos sobre la liberacin del transmisor no se relacionaron con cambios en la absorcin neuronal de noradrenalina.

Efectos de propranolol o b-metil-TM 10 en las respuestas de la membrana nictitante aislada de gato a la estimulacin nerviosa y de la noradrenalina exgena.
O Se ha informado que el propranolol reduce las respuestas a la

estimulacin del nervio, causando bloqueo neuronal adrenrgico (Mylecharane y Raper, 1970; Eliash & Weinstock, 1971). Por consiguiente, era de inters determinar si la concentracin de propranolol empleado en nuestros experimentos afectaba las respuestas a la estimulacin nerviosa simptica en la preparacin nervio-msculo aislado de la membrana nictitante de gato. curvas frecuencia-respuesta o bien en los controles (n = 9) o en preparaciones tratadas con propranolol (1,0 x 1 0-7M) (Figura 3a).

O No hubo diferencia entre los dos perodos consecutivos de

Efectos de propranolol o b-metil-TM 10 en las respuestas de la membrana nictitante aislada de gato a la estimulacin nerviosa y de la noradrenalina exgena
O En contraste, la exposicin al agente de bloqueo

adrenrgico neuronal b-metil-TM 10 (3,9 x 10-6M) disminuy la pendiente de la curva de la estimulacin del nervio produciendo un desplazamiento hacia la derecha y una depresin de la mxima (Figura 3b ).

O A estas concentraciones, ni el b -metil-TM 10 (7

preparaciones), ni el propranolol (6 preparaciones) modific los valores PD2 o el desarrollo mximo de la tensin en respuesta a la noradrenalina exgena por comparacin con los controles (35 preparaciones).

Discusin de los resultados

O La exposicin a la fentolamina, en una

concentracin que no inhibe la captacin de la [3H} noradrenalina se increment ms de 3 veces el transmisor liberado por la estimulacin nerviosa.
O Este efecto se atribuye al bloqueo de los -

adrenoreceptores pre-sinpticos.

Discusin de receptores
O Un aumento en la liberacin del transmisor

se observ en presencia de isoprenalina pero esto era mucho menos pronunciada que la obtenida con fentolamina.

Discusin de resultados
O La concentracin de propanolol empleado

en los experimentos produjeron un desplazamiento a la derecha de la curva de frecuencia de respuesta

Discusin de los resultados.

O El aumento en la liberacin del transmisor

observada en presencia de isoprenalina y de la disminucin en la liberacin del transmisor obtenida durante la exposicin al agente receptor,b-bloqueante, propranolol, indican que estos agentes pueden influir en la liberacin del transmisor al actuar sobre, b-adrenoceptores.

Discusin de los resultados.

O Los resultados obtenidos son compatibles con la

existencia en terminaciones nerviosas adrenrgicas de un mecanismo de regulacin de la liberacin de noradrenalina por la estimulacin nerviosa mediada a travs de badrenrgicos.

O Se supone que la activacin de este mecanismo

por agonistas b-adrenrgicos conduce a un aumento en la liberacin del transmisor durante la estimulacin nerviosa

Discusin de los resultados.

O De acuerdo con la hiptesis de trabajo, el

mecanismo de retroalimentacin positiva mediado a travs de b-adrenoceptores presinpticos se activa durante la liberacin de noradrenalina hasta que el transmisor en el espacio sinptico alcanza la concentracin umbral que desencadena el mecanismo de retroalimentacin negativa mediado por a-adrenoceptores, resultando en la inhibicin de la liberacin.

Discusin de los resultados.

O Por lo tanto, la liberacin de noradrenalina por

estimulacin nerviosa puede ser modulada por dos mecanismos presinpticos diferentes:

O El primero, mediada por b-adrenoceptores, sera

activado por bajas concentraciones del transmisor, lo que lleva a un aumento en la liberacin de noradrenalina por estmulo. O La segunda, mediada a travs de a-adrenoceptores, se activara cuando mayores concentraciones de noradrenalina se alcanzan en la brecha sinptica, dando lugar a la inhibicin de la liberacin del transmisor.

Discusin de los resultados.

O Compatible con esta hiptesis es el hallazgo

de que las concentraciones de noradrenalina requerida para activar a los receptores a-adrenrgicos postsinpticos en general son al menos 30 a 100 veces mayor que las necesarias para la activacin de los b-adrenoceptores.

Discusin de los resultados.

O Los resultados obtenidos en los presentes

experimentos no excluyen la posibilidad de que el propranolol y otros, B-adrenrgicos tengan un efecto bloqueante adrenrgico neuronal bajo ciertas condiciones experimentales, pero en los experimentos de Mylecharane y Raper (1970) y por Eliash & Weinstock (1971) el bloqueo por el propranolol de b-adrenoceptores presinpticos relacionados con un mecanismo de retroalimentacin positiva puede haber contribuido a la disminucin de la liberacin de noradrenalina por estimulacin nerviosa.

Discusin de los resultados.

O El mecanismo de accin de los antagonistas

de los receptores b-adrenrgicos en el tratamiento de la hipertensin esencial no es claro. Es posible que una disminucin en la liberacin del transmisor obtenida con propranolol contribuya significativamente a los efectos hipotensores de este agente y otros agentes de bloqueo de los receptores en los pacientes hipertensos.

Discusin de los resultados.

O Varios efectos provocados por la estimulacin de

b-receptores se han atribuido a la activacin de la adenil-ciclasa y la consecuente aumento de los niveles tisulares en la adenosina ciclica-3 ', 5'-monofosfato (AMP).

O Es

posible que el mecanismo de retroalimentacin positiva propuesto, que se dispara por la activacin de b-adrenoceptores presinpticos puede ser mediados a travs de un aumento en los niveles de AMP cclico en las terminaciones nerviosas adrenrgicas.