OBJETIVOS:

Que el alumno aprenda a identificar a bacterias por diferentes métodos.

Aplicar la prueba especifica para la determinación de bacterias del genero de

Neisseria “prueba de la oxidasa” mediante diferentes reacciones, tales como
las reacciones en placa y en disco.

De igual forma observar la presencia de mycobacterium en una muestra de

esputo.

Aplicar la tinción BAAR para ver si la mycobacterium es resistente o no a esta

tinción.

MARCO TEÓRICO

Mycobacterium es el único género de la familia de las bacterias

Mycobacteriaceae. El género incluye patógenos que causan graves
enfermedades en los mamíferos, incluyendo tuberculosis y lepra. El prefijo
latino "myco" significa tanto hongo como cera; su uso aquí se relaciona con los
compuestos cerosos de la pared celular. Las micobacterias tienen forma de
bacilos rectos o ligeramente curvados y miden 0,2-0,6 µm de ancho por 1,0-10
µm de largo.

Características microbiológicas

Las micobacterias son bacterias aerobias y no móviles (con excepción de la

especie M. marinum, que ha mostrado ser móvil dentro de los macrófagos).
Son típicamente alcohol ácido-resistentes, no producen endosporas ni cápsulas
y suelen considerarse Gram-positivas. Aunque las micobacterias no parecen
encajar en la categoría Gram-positiva desde un punto de vista empírico, se
clasifican como bacterias ácido-resistentes Gram-positivas. Todas las especies
de Mycobacterium comparten una característica pared celular, más gruesa que
la de muchas otras bacterias; hidrofóbica, cerosa, y rica en ácidos
micólicos/micolatos. Esta pared celular proporciona una contribución sustancial
a la resistencia de este género de bacterias.

Muchas especies de Mycobacterium se adaptan fácilmente al crecimiento en

sustratos muy simples, utilizando amoníaco o aminoácidos como fuentes de
nitrógeno y glicerol como fuente de carbono en presencia de sales minerales.
La temperatura óptima de crecimiento varía ampliamente según la especie
desde 25 ºC a más de 40 °C.

Algunas de las especies pueden ser extremadamente difíciles de cultivar y

puede llevar más de dos años desarrollar su cultivo. Además, algunas especies
tienen también ciclos de reproducción muy largos. M. leprae puede tardar más
de 20 días para completar un ciclo de división. Aunque jamas se ha podido
aislar de manera artificial a esta especie, haciendo que el cultivo en laboratorio
sea un proceso lento.

Clasificación médica

Las micobacterias pueden clasificarse en varios grupos con objeto de

diagnóstico y tratamiento:

• Complejo M. tuberculosis, que causa tuberculosis: M. tuberculosis, M.

bovis, M. africanum y M. microti.
• M. leprae, que causa lepra.
• Micobacterias no tuberculosas (NTM), que comprende a todas las otras
especies de micobacterias que pueden causar trastornos pulmonares
que se asemejan a tuberculosis, linfadenitis, trastornos en la piel, etc.

Algunas especies

• M. abscessus, que es también un contaminante común del agua y fue

hasta hace poco considerado como una subespcie de M. chelonae.
• Mycobacterium avium complex (MAC), que es un complejo causante de
infecciones letales en pacientes con SIDA. Incluye: M. avium, M. avium
paratuberculosis, que ha sido implicado en la enfermedad de Crohn en
humanos y la enfermedad de Johne en ovejas, M. avium silvaticum, M.
avium "hominissuis"

• M. chelonae, contaminante común del agua.

• M. kansasii, que puede causar infección grave en pacientes

inmunodeprimidos.
• M. leprae, que causa la lepra.
• M. lepromatosis, que causa la lepra lepromatosa difusa o DLL.
• Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC), cuyos miembros causan la
tuberculosis en humanos y animales. Incluye las especies: M.
tuberculosis, la principal causa de la tuberculosis en humanos, M.
africanum, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, etc
• M. ulcerans, que causa la úlcera de Buruli.
• Y muchas más.

Neisseria

El género Neisseria recibe su nombre del bacteriólogo alemán Albert Neisser,

que fue el primero en describir Neisseria gonorrheae. Además, codescubrió el
patógeno causal de la lepra, Mycobacterium leprae. Estos estudios fueron
hechos posibles por el desarrollo de nuevas técnicas de tinción.
Las Proteobacterias son uno de los principales grupos de bacterias. Incluyen
una gran variedad de patógenos, tales como Escherichia, Salmonella, Vibrio,
Helicobacter, Neisseria gonorrhoeae y muchos otros.

La Neisseria es un género de bacterias, perteneciente a las proteobacterias,

un gran grupo de bacterias Gram-negativas. Son diplococos, que se asemejan
a granos de café al ser observados con el microscopio óptico. El género incluye
las especies Neisseria gonorrhoeae (llamada también gonococcus), causante
de la gonorrea, y Neisseria meningitidis (llamada también meningococcus), que
es una de las más comunes causas de meningitis bacteriana y agente causal
de sepsis meningocóccica.

El género contiene otras muchas especies, algunas de ellas apatogénas, tales

como:

• Neisseria cinerea
• Neisseria elongata
• Neisseria flavescens
• Neisseria lactamica
• Neisseria mucosa
• Neisseria polysaccharea
• Neisseria sicca
• Neisseria subflava

Otras son de vida libre, e incluyen muchas de las bacterias responsables de la

fijación del nitrógeno. El grupo se establece principalmente en términos de
secuencias de ARN, y se denominan así en honor al dios griego Proteus, el cual
podía cambiar de forma, dada la gran diversidad de formas encontradas en
ellas.

Tinción de Ziehl Neelsen

La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial

rápida y económica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos
parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico)
de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de
resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes
básicos. Por esto se denominan bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR. Las
micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos
como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol
resistencia.

M. tuberculosis es una Bacteria Alcohol-Ácido resistente frecuentemente

incolora, aeróbica estricta. Su crecimiento está subordinado a la presencia de
oxígeno y al valor del pH circundante. Es muy resistente al frío, la congelación
y la desecación y por el contrario muy sensible al calor, la luz solar y la luz
ultravioleta. Su multiplicación es muy lenta (se divide cada 16 a 20 horas) y
ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente, pudiendo retrasar
su multiplicación desde algunos días hasta varios años. El reservorio natural
del M. tuberculosis es el hombre, tanto el sano infectado como el enfermo.

La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el

colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. La tinición fue
descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 to
1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patólogo.
 OBSERVACIONES

NEISSERIA

En la siguiente practica tomamos una muestra de un paciente con molestias de

garganta. Para posteriormente inocular en placa y esperar observar a la
bacteria conocida como Neisseria.

Posteriormente a la inoculación, y con 24 horas de incubación observamos en

el medio de Agar chocolate se crecieron colonias muy favorablemente, a las
cuales procedimos a hacerle la prueba de oxidasa especifica para la
determinación de Neisserias.

Según sus morfologías macroscópicas estas son redondas de superficies y

bordes rugosos, con aspecto húmedo y brillante con una coloración
amarillenta.

Posteriormente realizamos frotis para observar al microscopio y ver su

morfología microscópica para comprobar si efectivamente se trataba de este
género.
Al terminar con los frotis lo teñimos con la técnica de Gram.
Al terminar de teñirlos los observamos al microscopio, para ver si
efectivamente se trataba de diplococos que nos indicaba que si se trataba de
neisseria.

Determinando con esto que efectivamente se trataba de la bacteria Neisseria.

Seguido a esto, como pudimos identificar microscópicamente la presencia de

estas bacterias proseguimos a la determinación de la prueba de la oxidasa
para corroborar nuestras sospechas. Lo cual lo hicimos tomando una colonia
sospechosa en un portaobjetos agregándole reactivo de Kovacs para ver si esta
cambiaba de coloración, lo cual esto fue observable ya que la colonia paso de
ser amarillenta a negra, dando así positiva esta prueba.
De igual forma esta misma prueba ser realizo pero utilizando un disco de
oxidasa, poniendo a la colonia sospechosa sobre dicho disco, observando
también el cambio de coloración en esta.

EXPECTORACION

Con la muestra de esputo primeramente tomamos una porción de esta siendo

de la parte mas amarilla, para la elaboracion de el frotis directo el cual fue
teñido con Ziehl-Neelsen.
Para el caso de el frotis indirecto, agregamos a la muestra de esputo una
proporción similar a esta de NaOH , dejando incubar por treinta minutos a 37º,
seguido a esto centrifugamos a 3000 rpm.

Posteriormente a esta solución le agregamos 1 gota de fenolftaleína y

neutralizamos con una gota de HCl 2 N, y nuevamente centrifugamos 10
minutos a 3000 rpm y teñimos al sedimento nuevamente con Ziehl-Neelsen.

Posteriormente a esto observamos en el microscopio para determinar la

presencia de mycobacterium.
 UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CAMPUS IV.- TAPACHULA

LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA II

REPORTE DE LA PRÁCTICA No. 3

“ ”

CATEDRÁTICO: QFB Y LMRT LUIS HUMBERTO ROSALES

FURUKAWA

GRADO: SEXTO SEMESTRE

GRUPO: A

INTEGRANTES: CORZO GÓMEZ JOSELIN CAROLINA

FIERRO RABANALES ELIZABETH

FLORES MORENO AIDE ISELA

GARCIA GÓMEZ DULCE TERESA

LOPEZ PEREZ ADRIANA

 TAPACHULA CHIAPAS A 06 DE
MARZO DE 2009
BIBLIOGRAFIA

Titulo: Introducción a la Microbiología

Autor: John L. Ingraham y Catherine A. Ingraham

Editorial: Reverté

Titulo: Manual de microbiología médica

Autor: Ernest Jawetz, Edgard A. Adelberg

Editorial: El manual moderno

Edicion: Octava edición

WEBGRAFÍA

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Micobacterium.htm

http://es.wikipedia.org/wiki/Neisseria