Les micro-algues, mme si elles ne sont pas encore suffisamment explores, sont actuellement considres comme une source

potentielle de substances bioactives dans lindustrie alimentaire et pharmaceutique. Ces substances possdent une grande valeur sur le march international et leur demande augmente au mme rythme que le dveloppement de la technologie industrielle, la biotechnologie et la demande internationale de nouveaux mdicaments et denres alimentaires. Le prsent travail prtend donner une vision globale sur les possibilits de la biotechnologie avec des micro-algues comme une activit conomique, potentiellement viable dans des territoires comme les les Canaries ou le Maroc. De mme, cette tude ambitionne doffrir des donnes exprimentales vrifies, quant au possible dveloppement et la mise en service dune usine pilote de production de micro-algues.

Developpment potentiel de nouvelles activits conomiques associes la biotechnologie aux Canaries et au Maroc

Hctor Salvador Mendoza Guzmn Adelina de la Jara Valido Patrcia Alexandra Clemente Janeiro de Assuno Karen Freijanes Presmanes Laura Carmona Duarte Eduardo Portillo Hahnefeld Najat Elkhiati Mohammed Ramdani

Ce manuel a t labor dans le cadre du projetr Techmarat (http://techmarat.org/ ) Projet co-financ par le programme Poctefex (http://www.poctefex.eu/ ) Institutions partenaires du projet Techmarat: Universidad de Las Palmas de Gran Canaria (ULPGC) Facultad de Ciencias del Mar. Campus de Tafira. 35017 Las Palmas de Gran Canaria, Espagne Instituto Tecnolgico de Canarias, SA (ITC) Playa de Pozo Izquierdo, s/n 35119 Santa Luca, Espagne Universit Hassan II, Facult des Sciences An Chock Km 8, Route dEl Jadida BP 5366 Casablanca CP 20100 Maroc Universit Mohamed V Agdal - Institut Scientifique, Rabat Dpartement de Zoologie & Ecologie Animale Avenue ibn Batouta, BP 703, Rabat, Maroc Centre Spcialis de Valorisation et Technologie des Produits de la Mer (C.S.V.T.P.M) Institut National de Recherche Halieutique (INRH) B.P 5221, Quartier industriel Agadir, 80004, Maroc

TABLE DE MATIRES 1. Introduction 2. Espces cultives 3. Systmes de culture 4. Produits et marchs pour les micro-algues 5. Production de carotne et Dunaliella salina 6. Produire des micro-algues aux Canaries 7. Produire des micro-algues au Maroc 8. Activits d'aquaculture des micro-algues 9. Usine pilote de culture de micro-algues 9.1 Recommandations demplacement 9.2 Slection de ceps de culture 9.3 Procds de culture 9.3.1 Laugmentation du volume de culture : la mise lchelle ou scale-up 9.3.2 Gestion de culture 9.3.3 Rcolte de culture 9.3.4 Traitement de biomasse 9.4 Lgislation 10. Budgets 10.1 Budgets dquipements 10.1.1 Budget de laboratoire 10.1.2 Budget de culture et de traitement 10.2 Budget de gnie civil 10.3 Rsum du budget Total 10.4 Dveloppement en chelle 11. pilogue 12. Rfrences bibliographiques 5 9 15 23 27 31 37 41 45 46 47 49 49 51 55 57 59 61 62 62 62 64 65 66 69 70

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1.

INTRODUCTION
Les micro-algues ont t, depuis les annes 1950, objet dun grand intrt socio-conomique en tant que source alternative dalimentation et de substances bioactives. Bien que dans un premier temps elles ont t considres comme une source de protines (protine unicellulaire), elles sont aussi apprcies que dautres vgtaux et beaucoup moins chres.

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Les tudes dveloppes tout au long de la dcennie des annes 80 du 20me sicle ont dmontr que la productivit et les cots des cultures intensives de micro-algues sont loin dtre entirement comptitifs face lagriculture traditionnelle. Actuellement, les micro-algues sont considres une source potentielle, pas encore suffisamment explore en tant que substances bioactives dintrt dans lindustrie alimentaire et pharmaceutique. Ces substances atteignent une grande valeur sur le march international et leur demande augmente progressivement au mme rythme que le dveloppement de la technologie industrielle, la biotechnologie et la demande internationale de nouveaux mdicaments et des composs dalimentation. Les micro-algues constituent un groupe de microorganismes dont les emplois potentiels nont pas t suffisamment tudis. On a dcrit plus de 40.000 espces de micro-algues. Nanmoins, moins de 1% ont t soumises aux travaux de screening pour lidentification de nouvelles substances bioactives ou potentielles applications industrielles ou agricoles. Ces vgtaux unicellulaires constituent lune des plus importantes rserves de nouveaux produits ainsi que de nouvelles applications. Cela justifie le grand intrt quelles suscitent actuellement.

Les premiers travaux sur lexploitation commerciale des micro-algues datent de la dcennie des annes 50 du 20me sicle. cette poque apparaissait le premier recueil sur la culture grande chelle de micro-algues pour la consommation humaine Algal culture from laboratory to pilot plant (Burlew, 1953). partir de ce moment, les emplois potentiels attribus aux microalgues et les perspectives recherches deviennent de plus en plus nombreux. Les utilisations de ces organismes vgtaux microscopiques ont concern tout dabord lutilisation comme fourrage pour les animaux jusqu lobtention dhormones, comme les auxines et les gibbrellines, tout en passant par leur utilisation comme bio-fertilisants, ou dans le traitement des eaux rsiduaires. Nanmoins, et malgr ces premiers espoirs, comme il sagit de cultures assez techniques et relativement coteuses, lexploitation commerciale des micro-algues sest vue limite un nombre rduit despces et des pays ayant un grand potentiel technologique. La culture de micro-algues est une activit qui nest pas encore pleinement tablie avec des niveaux de production relativement limits dans laquelle concident une srie de facteurs:

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Dans des conditions de rayonnement lumineux lev, les micro-algues possdent une efficience photosynthtique faible, ainsi quune troite marge de rponse aux variations de rayonnement. Ceci peut affecter avec des faibles taux de croissances et avec la difficult doptimiser leur culture grande chelle. Les cultures dans des grands tangs ciel ouvert, mme si elles sont moins chres et plus simples, sont extrmement vulnrables la pollution cause des micro-prdateurs ou des algues opportunistes. Elles sont aussi extrmement sensibles aux variations des conditions environnementales. Tout cela rend difficile le contrle et la stabilit des cultures grande chelle dans ce type de systmes, tout en rduisant la quantit despces cultivables: celles hautement adaptes aux conditions extrmes de culture et qui rendent difficile la pollution provoque par des organismes concurrents ou par des prdateurs. Tel est le cas de Dunaliella salina, qui est lune des algues les plus halotolrantes des organismes connus, ou de la Spirulina, une cyano-procaryotes qui vit dans des habitats alcalins.

Les systmes de cultures fermes (photobioracteurs), mme sils permettent datteindre des productions leves, sont coteux et compliqus. long terme, leur efficience productive se rduit et ce cause de la pollution ou de la perte de surface illumine par effet des adhrences organiques, prcipitations, marques ou gratignures, ainsi qu cause de lexistence de zones dangles morts de turbulence faible ou de renouvellement. Nanmoins, la culture des algues grande chelle est dj une activit qui a favoris lapparition de grandes et rentables exploitations. Celles-ci, malgr leur rentabilit, se concentrent dans la production dun nombre limit despces cultivables dans de grands tangs de culture ciel ouvert. Certaines dentre elles sont des exploitations semiextensives de grands lacs salins naturels ou de salines abandonnes.

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2.

Espces cultives
Les espces de micro-algues exploites commercialement sont actuellement peu nombreuses. Celles-ci se bornent au nombre rduit despces cultivables dans des grands systmes de culture ouverte. Il sagit despces ayant de grands taux de croissance et trs adaptes aux conditions qui limitent la croissance dautres microorganismes. Parmi ces espces on peut remarquer les suivantes:

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Chlorella a t la premire espce de micro-algue verte tre isole et cultive. Elle se produit, fondamentalement, dans des bassins de culture ciel ouvert. Nanmoins, actuellement il y a de plus en plus dexploitations de cultures dans des photo-bioracteurs ferms, et mme dans des fermenteurs de croissance htrotrophique. ce genre appartiennent, gnralement, des espces dulaquicoles. Elles sont capables de maintenir des taux levs de croissance dans des systmes ouverts, et constituent un polluant habituel dans des cultures intensives dautres espces. Leurs applications fondamentales sont le dveloppement daliments fonctionnels ou la dittique humaine. Nanmoins, leurs usages ont t trs varis: depuis la nutrition animale jusquau traitement des eaux rsiduaires. Le march mondial pour cette espce peut tre estim environ 2.000 tonnes annuelles, essentiellement dans des pays industrialiss.

Les sites web de certaines compagnies productrices de Chlorella sont : www.sunchlorellausa.com www.taiwanchlorella.com

Figure 1.- Culture de haute densit de Chlorella pyrenoidosa (x200)

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Spirulina constitue actuellement une des espces la plus cultive. Il sagit dune cyanobactrie filamenteuse capable de maintenir des taux de croissance levs dans des milieux alcalins qui limitent la croissance despces polluantes. Ceci permet lexploitation dans des systmes semiextensifs dans des grands lacs o cette micro-algue pousse naturellement. Lintrt de cultiver cette espce repose sur ses teneurs levs en protines, pouvant reprsenter jusqu 60% du poids sec, et en vitamines varies. Actuellement, il sagit de lune des espces de micro-algues la plus demande commercialement et nombreuses sont les entreprises ddies cette production. On estime une demande annuelle dans les pays industrialiss denviron 3.000 tonnes.
Voici des sites web dentreprises productrices : www.cyanotech.com www.earthrise.com www.dic.co.jp/eng/products/lina Page gnrique dintrt : www.spirulinasource.com/algaedirectory

Figure 2.- Spirulina sp. (x400)

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Dunaliella est le genre le plus tudi quant sa culture en masse. En effet, Dunaliella est lespce dominante parmi celles les plus utilises en aquaculture. Elle peut pousser dans des milieux hypersalins et il sagit de lun des micro-organismes ayant la plus grande osmotolrance connue.

Figure 3.- Dunaliella salina (x400) en phase de synthse et accumulation de carotne. Pendant cette phase, normalement provoque par des conditions de stress, les cellules synthtisent et accumulent une grande quantit de -carotne.

Elle prsente des contenus levs en -carotne, lun des pigments le plus demand dans lindustrie alimentaire. En outre, grce la prsence de provitamine A, elle possde aussi dimportantes applications dans lindustrie pharmaceutique. Les milieux hypersalins o lon cultive la Dunaliella salina permettent son exploitation dans des systmes ouverts, aussi bien intensifs que semi-extensifs sans aucun risque de pollution avec dautres espces. Dunaliella salina a t la premire micro-algue cultive pour la production commerciale de substances dapplication industrielle en chimie fine pour lobtention de -carotne et de glycrol. Actuellement, il y a plusieurs compagnies ddies la culture commerciale grande chelle de cette espce, situes fondamentalement en Isral, en Australie et aux tats-Unis. Lestimation de la demande mondiale en -carotne est denviron 500 tonnes avec un volume de march approximatif de 300 millions de dollars. Les plus grandes entreprises productrices de -carotne partir de la culture de Dunaliella salina sont:

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AquaCarotene Limited : Exploitations semi-extensives dans des lacs salins en Australie (www.aquacarotene.com). Nature Beta Technologie (NBT) : entreprise de capital japonais qui appartient la Nikken Sohonsha Corporation (www.chlostanin. co.jp/english/e_left.html). Elle a t dveloppe lombre des recherches du professeur BentAmotz dans le National Institute of Oceanography dIsrael dans la localit isralienne dEliat (http://www.chlostanin.co.jp/ english/e_e_1.html). Il sagit dune des rares entreprises ddies la production intensive de Dunaliella salina dans des tangs ouverts type raceway. Las entreprises Betatene Ltd y Western Biotecnologies, toutes les deux australiennes, sont des exploitations semi-extensives de Dunalilla salina dans des grands lacs hypersalins du Sud de lAustralie. Les deux entreprises, subsidiaires de la grande multinationale chimique Henkel

Corporation ont t vendues en 2001 un grand consortium de socits financires tout en intgrant lentreprise chimique Cognis (http://www.cognis. com/cognis.html). Congnis est actuellement lun des plus grands producteurs et fournisseurs mondiales de -carotne naturel provenant de Dunaliella salina sous la marque enregistre de Betatene. (http://www.cognis.com/ framescout.html?/ProductCatalog/ FindYourProduct.html). Comme cas particulier mritant une mention spciale, on a lentreprise chilienne Norbiotech (http://www.pez. cl/directorio/empresas/Norbiotech%20 Chile.htm). Il sagit dune petite exploitation en tangs de culture ciel ouvert qui sest installe dans le dsert dAtacama pendant la dcennie des annes 90 du sicle prcdant. Cette petite exploitation pourrait tre un modle appropri pour le dveloppement de petites exploitations locales aux Canaries, associes dautres cultures de zones arides comme lAloe vera.

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3.

Systmes de culture
Les systmes massifs de culture de micro-algues peuvent tre classs en deux grandes catgories: Systmes ouverts: - Bassins naturels ou artificiels (systmes extensifs ou semi-extensifs) - Raceway ou systmes type champ de course et drivs. - Systmes de couche fine et drivs. Systmes ferms et semi-ferms (photo-bioracteurs tubulaires et plats)

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En gnral les systmes ferms permettent un contrle effectif des cultures, spcialement de la temprature et des niveaux dinjection de CO2 et rduisent les risques de pollution. Nanmoins, les systmes ferms ou photo-bioracteurs sont, gnralement, plus chers et ne permettent que le travail avec un volume de culture qui nest pas assez grand, tant substantiellement plus petit que le volume employ dans les systmes ouverts. Les systmes ferms constituent des systmes de culture hautement intensifis et nombreux sont les rendements que lon peut atteindre. Quelques modles permettent mme le contrle absolu sur des paramtres abiotiques de culture comme la lumire ou la temprature. On distingue deux modles fondamentaux de photobioracteurs, les photobioracteurs tubulaires et les bioracteurs plats ou alvolaires.

Les photo-bioracteurs tubulaires varient depuis des structures simples cylindriques jusqu des systmes avec des kilomtres de tuyauterie transparente de petit diamtre (30200 mm). Lun des types de photobioracteur tubulaire le plus tendu est celui que lon appelle Biocoil. Celui-ci consiste en une structure hlicodale tube flexible transparent en polythylne, dans laquelle la culture reste en constante circulation au moyen des pompes ou systmes de pompage par airlif (systmes dimpulsion pneumatique). On a dvelopp des expriences dans lesquelles on a dmontr avec la possibilit de cultiver des micro-algues avec ce photo-bioracteur, que de leur utilisation dans des milieux isols, comme dans le cas des preuves de survivance sous-marine.
(http://news.cnet.com/2300-11395_36178101-4.htmll).

Figure 4.- Photo-bioracteur tubulaire conventionnel cylindrique (tests de matriaux constructifs ITC-2006)

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Les photo-bioracteurs plats ou alvolaires sont moins tendus, et consistent en des structures plates, transparentes, dans lesquelles la relation surface/volume est leve. Dans ce type de photo-bioracteurs, lagitation des cultures est, gnralement, obtenue au moyen dun systme de bouillonnement. Les photo-bioracteurs sont des systmes couteux et complexes et les entreprises les utilisant sont peu nombreuses. Parmi celles-ci, on peut citer Aquaserch Inc., qui utilise un dessin propre de photo-bioracteur tubulaire (AGM) pour la production en systme mixte (en photobioracteur et en raceway) de Haematococcus pour lobtention dastaxanthine (carotnode trs utilis en aquaculture et en industrie alimentaire).

Actuellement, les systmes de culture ouverte continuent tre les plus utiliss. Il sagit de moyens qui ne permettent pas un contrle effectif des conditions de culture, par consquent ils sont exposs aux conditions environnementales et possdent de grands risques de pollution. Tout ceci fait que ce systme de culture se limite un nombre rduit despces extrmophiles, capables de maintenir des taux levs de croissance dans des conditions limites pour la plupart des microorganismes, et aux environnements ayant un climat doux et une grande quantit dheures dillumination solaire. Il nest donc pas surprenant que la plupart des exploitations de micro-algues se localisent dans des rgions comme lAustralie, Isral ou Hawa. Bien quils tendent prsenter des rendements plus faibles que les systmes ferms, lutilisation de moyens grande technicit de monitoring, dautomatisation et de serres climatises datmosphre contrle les rapprochent aux caractristiques et rendements de quelques systmes ferms plus simples. Parmi les systmes de culture ouverte, le plus frquent et le plus connu est celui appel raceway ou culture en champ de course. Schmatiquement, ce systme consiste en un dpt allong divis longitudinalement en deux circuits communiquant dans les extrmits. Dans ces circuits, leau doit tre constamment en mouvement, et elle est impulse par un systme de pelles afin dviter la sdimentation des algues. Dans le raceway, leau natteint pas plus de quinze ou de vingt centimtres de hauteur, ce qui permet lexposition maximale de la culture au rayonnement solaire.

Figure 5.- Photo-bioracteur tubulaire cylindrique vertical

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Figure 6.- Culture despces marines de micro-algues dans des systmes type champ de course double circuit sous serre (test dans lusine de culture ITC-2006)

Les systmes de culture en couche fine se basent sur des tangs inclins dans lesquels la culture circule dans une fine lame d peine un centimtre dpaisseur. Le systme de couche fine est extrmement productif, mais les cots de pompage tendent faire monter les cots de manire importante. Actuellement, on essaye la combinaison de systmes de culture mixtes, o lon combine des phases de croissance dans des systmes ferms et ouverts.

Nombreux sont les brevets sur de nouvelles conceptions de photobioracteurs, tant donn que lingnierie des cultures est lun des aspects le plus tudi et dans lequel le plus grand effort de recherche sest dvelopp pendant les dernires annes, spcialement dan le secteur priv. Daprs certains auteurs, tout cela tourne loublie de la composante biologique.

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Nouveaux brevets

MICRO-ALGUES PHOTO-BIORACTEURS

Annes

Figure 7. - Nouveaux brevets propos de la culture de micro-algues. Source: Espacenet (http://www.epo.org/searching/free/espacenet.html)

Les amliorations dans les modles des systmes de culture, mme si elles permettent daugmenter lefficience et de rduire les cots de production ne permettront pas de dpasser les limites des systmes biologiques, cest-dire, les limites imposes par les propres espces cultives. Il faudrait souligner la grande diversit de photo-bioracteurs gnrs par la recherche applique (tant la plupart des variations partir des mmes

principes ou modles) par rapport la faible quantit despces qui restent actuellement en culture, et qui sont essentiellement les mmes que lon a commenc cultiver dans la seconde moiti du XXme sicle. En outre, et malgr le niveau de sophistication atteint pour le dessin des photobioracteurs, le systme de culture le plus employ dans les grandes usines de production continue tre celui des bassins ouverts type champ de course.

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Figure 8.- Dessins de photo-bioracteurs. Evaluation de matriaux constructifs. (ITC-2005)

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cause des innombrables innovations, une attention particulire est accorder la culture des micro-algues en milieux solides, savoir les cultures immobilises o les algues se tiennent dans un substrat solide au moyen des techniques dimmobilisation ou dabsorption. Il sagit de systmes hautement productifs, avec des rendements levs par unit de surface. En outre, elles offrent une alternative aux systmes de rcolte des cultures traditionnelles utilisant des centrifugeuses ou des tamis industriels (plus compliqus et plus coteux). Nanmoins, ces cultures ne se librent pas du problme biologique, car toutes les espces ne sont pas cultivables moyennant ces systmes. De ce fait, un important travail de slection despces et de souches reste mettre en place. Au cours de ces dernires annes, le dveloppement des cultures htrotrophiques ou mixotrophiques a connu une grande importance. Il sagit de systmes de cultures dans des grands fermentateurs industriels dans lesquels on utilise des sources organiques de nutriments, de carbone et de nitrogne ou encore une combinaison de ces sources avec celles des cultures phototropiques o lon utilise des moyens inorganiques et de lumire. Ce type de culture est caractris par son efficience productive leve, ayant des rendements pouvant dpasser les 10 g/L jour, cest-dire, entre dix vingt fois suprieurs aux rendements obtenus par les cultures traditionnelles de micro-algues. Les fermentateurs constituent des systmes de culture ferms o on peut maintenir, de trs prs, le contrle des diffrents paramtres de culture. Ce sont des systmes trs bien tablis

et qui possdent une vaste exprience, ainsi quune grande offre sur le march technologique. La non-dpendance du rayonnement de la lumire pour la croissance des algues fait que ces cultures ne se trouvent pas soumises aux inconvnients drivs de la grande relation surface-volume ncessaire dans les cultures phototrophiques. Cependant, le principal inconvnient rside dans la dpendance dune source organique de nutriments, ce qui rend impossible une des avantages stratgiques des microalgues, celle dtre des cultures primaires dont les seules exigences sont la lumire et les fertilisants inorganiques. Les cultures par fermentation sont une activit industrielle ayant une consommation dnergie et un capital technologique levs. Par consquent, il sagit dune activit loin des activits agricoles ou aquacoles o il serait possible de placer la production traditionnelle de micro-algues. Le fort investissement industriel, exig par la mise en service dune usine de production de microalgues par fermentation, ne serait commercialement viable que par la gnration dune biomasse haute valeur ajoute. On a dj dmontr que cette formule commerciale est actuellement possible. Dans ce sens, on peut souligner que lentreprise Martek (http://www.martek.com/) est lune des plus importantes du secteur de la biotechnologie bleue. Martek est spcialise dans la production dacides gras du type 3 pour la consommation humaine partir de micro-algues, spcialement pour le dveloppement de formules pour la nutrition infantile.

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De la mme faon, la production htrotrophe de micro-algues se voit aussi limite par le faible nombre despces adaptes cette culture. Les seules espces produites grande chelle dans des fermentateurs industrielles sont: Crypthecodinium cohnii et Schizochytrium. A cet inconvnient, il faut ajouter le cot et la complexit de gestion des sources organiques de nutriments et des cultures propres. Nanmoins, des tudes dveloppes par lInstitut Technologique des Canaries (ITC) proposent des alternatives qui ouvrent la possibilit lutilisation comme nutriments de dchets issus de lindustrie alimentaire. Ainsi, le projet PROCYRP et LACTOALGA (ITC 20032009) proposaient la rutilisation de lactosrums originaires des fromageries industrielles pour la culture de Crypthecodinium cohnii et de Schizochytrium pour la production dacides gras -3 aptes pour la consommation humaine. Le projet a dmontr la viabilit de cette activit ainsi que la possibilit dune complmentarit pleine entre le secteur agroalimentaire plus traditionnel et plus enracin, comme lindustrie fromagre, et une biotechnologie davant-garde base sur les micro-algues, o celles-ci permettraient lobtention dune biomasse haute valeur ajoute ainsi que la revalorisation de ce qui nest quun dchet trs polluant et de gestion complexe comme les lactosrums.

Figure 9.- Crypthecodinium cohnii

Figure 10.- Fermentateur de laboratoire. Les matriaux transparents permettent la culture mixotrophique de micro-algues (aussi bien avec des sources organiques quinorganiques de nutriments)

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4.

Produits et march pour les micro-algues

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Mis part lindustrie (restreinte un nombre rduit de produits) et la production destine laquiculture, la plupart du march pour les produits obtenus partir des micro-algues correspond dabord aux aliments dittiques et fonctionnels, et ensuite au march dadditifs alimentaires, spcialement carotnodes comme lastaxanthine et le -carotne. Actuellement, la production dacides gras polyinsaturs longue chane -3 et -6 pour la consommation humaine partir des micro-algues devient de plus en plus importante. En effet, ces algues se prsentent comme une alternative du futur optimal face la source traditionnelle de ces substances: les huiles de poisson. prsent, il y a une grande entreprise productrice dacides gras -3 et -6 pour la consommation humaine partir des micro-algues (http://www. martekbio.com/home.asp). Jusqu aujourdhui, la production mondiale de micro-algues a t absorbe par le vaste march de la dittique, la parapharmacie et les aliments fonctionnels. Nanmoins, dans ce contexte il faut mentionner lexistence dune lgislation restreignant les produits des micro-algues au milieu des plantes mdicinales ou la dittique, sans leur permettre la pleine expansion dans le milieu des aliments conventionnels.

La rcente rglementation europenne sur de nouveaux aliments et de nouveaux ingrdients alimentaires consolide, dun ct les relles possibilits dexpansion des aliments fonctionnels, et dun autre ct lindustrie alimentaire fonde sur le dveloppement dune biotechnique davant-garde dans laquelle, sans doute, les micro-algues joueront un rle trs important. Rcemment, le march de la dittique et de la parapharmacie a subi une grande expansion lombre du dveloppement du march numrique, car on peut trouver souvent sur internet de nombreuses rfrences commerciales labores partir des microalgues. Cette norme diversit doffre contraste sur le nombre rduit dentreprises commerciales, productrices de biomasse partir de micro-algues. Ceci dclenche le soupon de lexistence dun march informel rel dans des entreprises productrices enregistres ou nonenregistres. Cest un fait que la production de micro-algues continue tre une activit assez restreinte un nombre rduit dentreprises dans un march encore peu transparent.

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Estimation du march pour des produits obtenus partir de micro-algues (Pulz y Gross, 2003)
PRODUIT Biomasse Nourriture naturelle Aliments fonctionnels Additifs Aquaculture Applications agricoles Colorants Astaxanthine Phycocyanine Phycoeritrine Antioxydants -carotne Superoxyde dismutase Tocopherol Extraits - AO Acides gras ARA EPA DHA Extraits Produits spciaux Toxines Isotopes 30-80 US $ KG-1 15-28 25-52 10-130 50-150 >10 >3.000 >500 >10.000 >750 >1.000 30-40 20-35 TAILLE DE MARCH US $ 106 180-200 En augmentation Dveloppement rapide Dveloppement rapide Dveloppement naissant >50 >10 >2 >25 Dveloppement naissant March tanch 10-20 20 >500 30 10 1-3 >5

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5.

Production de -carotne et Dunaliella salina

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Dunaliella salina est lun des microorganismes ayant la plus grande quantit de -carotnes, pouvant atteindre des concentrations suprieures 10% du poids sec de lalgue. Cette quantit dpasse de loin les traditionnelles sources naturelles de -carotne comme la carotte, qui nen atteint que 2%. En plus, le -carotne de Dunaliella salina prsente une composition isomrique optimale avec dimportants contenus dans les formes isomriques cis, plus stables et possdent un pouvoir antioxydant suprieur aux trans, prdominantes dans le -carotne synthtique.
Malgr lexistence dimportantes entreprises ddies la production de -carotne partir de sources naturelles, la plupart du -carotne consomm actuellement est dorigine synthtique. On estime que la demande mondiale de -carotne est denviron 500 tonnes, dont le volume de march est denviron 300 millions de dollars, tant pour le -carotne dorigine naturel suprieur 25 millions. Le -carotne constitue lun des pigments alimentaires le plus demand, de mme il est trs important dans la nutrition humaine, car il agit comme la provitamine A.

La dficience de cette vitamine est considre, de nos jours, lun des plus grands problmes de lalimentation humaine au niveau global, son manque est le responsable de troubles multiples et graves, particulirement parmi les enfants. Face tout cela, certains organismes internationaux comme lUNICEF ont dvelopp de grandes campagnes de distribution de vitamine A dans des pays pauvres.
(http://www.unicef.org/spanish/newsline/ pr/2001/01pr10sp.htm).

Rcemment le -carotne a subi une forte explosion dclenche par les tudes qui le mettent en relation avec la prvention de nombreuses affections, entre autres le cancer. Nanmoins, les recherches sont encore trop loin pour pouvoir tablir trs clairement cette relation, cest pourquoi lon trouve souvent des donnes contradictoires dans la bibliographie. En tout cas, le -carotne est un puissant antioxydant qui peut rduire laction nuisible des radicaux libres dans lorganisme. Le -carotne a t le premier carotnode tre synthtis artificiellement.

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Sa production industrielle a dbut en 1954. Les deux plus grandes entreprises productrices, Hoffman La Roche et BASF, contrlent plus de la moiti du march mondial de cette substance. En gnral, ces deux entreprises possdent ce que lon peut considrer comme une activit stratgique pour le dveloppement de lhumanit : la production et la distribution de vitamines, dont le -carotne. Un des plus grands scandale sur le march pharmaceutique international se produit en 2001, lorsque La Roche et BASF ont t sanctionnes par la Commission europenne avec plus de 800 millions deuros cause des pratiques illgales de monopole. Il sagit de la sanction la plus leve impose une entreprise par cette raison jusqu aujourdhui. Thoriquement, aprs tout cela, les portes pour la recherche de nouvelles alternatives souvrent sur ce march, car on reconnaissait lintrt stratgique et on favorisait le dveloppement dune production dcentralise non-monopolistique. Cest un fait que, longtemps avant, la culture intensive de Dunaliella salina pour la production de -carotne

apte pour la consommation humaine avait commenc son dveloppement provoqu par la croissance de la demande de -carotne naturel, dont le prix sur le march international peut arriver doubler ceux du -carotne synthtique. Il a quelques annes, lutilisation de pigments synthtiques avait commenc tre restreinte dans quelques pays et les produits naturels ont trouv un march croissant dans les pays occidentaux. Rfrences de produits commerciaux partir de Dunaliella salina (march numrique de produits de dittique, daliments fonctionnels, parapharmacie, etc.) :
www.herbalremedies.com/dusabeca.html http://qualitycounts.com/fpdunaliella.html www.auravita.com/products/AURA/ LIFP10000.asp www.myvitanet.com/macafrdusaal.html www.herbaladvisor.com/shop/xq/asp/ ptid.18746/qx/productDetail.html

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6.

Produire des microalgues aux Canaries

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Les les Canaries constituent sans doute, un endroit idal pour le dveloppement de la culture intensive grande chelle de micro-algues. Comme rgion, les Canaries y offrent des conditions environnementales optimales (un climat doux et une insolation approprie). En outre, le dveloppement de cette nouvelle activit pourrait constituer une opportunit pour les les. La culture de micro-algues est une activit ayant un faible impact environnemental, un faible niveau de demande deau douce et un potentiel de dveloppement et de croissance levs. Les Canaries reprsentent un territoire fragile, dficitaire dans son secteur industriel et o le secteur primaire perd, de manire acclre, son poids conomique en faveur dun secteur tertiaire qui dpend fortement du tourisme. Le dveloppement de lindustrie et du secteur agricole est fortement conditionn par linsularit, il ne pourrait que se rorienter vers de nouvelles activits peu explores ayant un grand potentiel de dveloppement technologique et commercial et avec un faible impact environnemental. La culture intensive de micro-algues possde ces caractristiques. En fait, dans un territoire comme celui des les Hawa, partageant des similitudes environnementales et conomiques avec les Canaries, se sont installes quelques-unes des plus grandes entreprises de production de microalgues.

Cultiver Dunaliella salina est, peut-tre, la meilleure voie pour commencer le dveloppement de cette activit aux Canaries. Les techniques de culture de cette espce sont pleinement tablies et leur viabilit est largement dmontre dans des pays diffrents. Le march international du -carotne, mme sil est trs comptitif, est trs stable et son dveloppement est trs probable. En outre, la production de Dunaliella salina aux Canaries pourrait avoir de nouvelles dimensions qui ne sont pas encore suffisamment explores. Les possibilits dassocier la culture de cette micro-algue lexploitation commerciale des salines contribueraient la revitalisation de cette activit, qui possde une grande signification culturelle et paysagre des les. Les salines sont des endroits dindubitable valeur naturelle. Aux Canaries, il y a eu une surface dexploitation de sel suprieure aux deux millions de mtres carrs. Actuellement, la plupart des vieilles salines ont disparu ou sont trs mal gardes. La surface des salines fonctionnant encore natteignent pas les 500.000 mtres carrs. La totalit de ces salines se situe Lanzarote. Les structures de ces marais salants, spcialement les carreaux ou bassins, sont de vrais tangs de culture de micro-algues.

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Figure 11.- Saline. La coloration rougetre des eaux des salines est due la croissance naturelle de Dunaliella salina. Les salines traditionnelles sont de vrais milieux de cultures naturelles de cette micro-algue.

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Figure 12.- Aux Canaries, il y avait presque une cinquantaine de salines. Actuellement il nen reste quune dizaine srieusement menaces de disparition. La culture de micro-algues peut tre une alternative pour la revalorisation et la rcupration des salines

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La culture de Dunaliella salina pourrait aussi sassocier la rutilisation de leau de rejet des usines de dessalement. Lun des cots le plus important dans la production de Dunaliella salina est le sel ncessaire pour llaboration des moyens hyper-salins. Aux Canaries, le sel constitue un dchet dont la production est en train daugmenter cause du fonctionnement des usines de dessalement, lesquelles deviennent de plus en plus nombreuses. Nanmoins, pour linstant on na pas valu limpact de ce rsidu. Actuellement, il y a aux Canaries environ 223 usines de dessalement avec une production de plus de 400.000m3 deau par jour. La rutilisation des eaux de rejet (saumure) gnres dans le processus constitue une mesure optimale pour la transformation des dchets en ressources, tout en utilisant, dans des activits alternatives, les infrastructures de pompage et de stockage des propres usines de dessalement. En outre, cette rutilisation constituerait aussi une impulsion pour aborder la pleine tude et caractrisation de ce nouveau dchet et son impact dans les les. Actuellement, on a essay, avec succs, lutilisation de cultures intensives de micro-algues comme moyen pour la bio-filtration de gaz de combustion dans des processus industriels. Ce but acquiert un intrt spcial dans un territoire comme les Canaries, o il y a une forte

dpendance des combustibles fossiles et dans lequel la production de CO2 par habitant est lune des plus leve dEurope. Les cultures intensives de Dunaliella salina se caractrisent par leur haute efficience photosynthtique et leur capacit de fixation de CO2 dans des conditions environnementales comme celles que lon trouve aux Canaries. En outre, la demande nergtique des systmes de culture grande chelle nest pas leve et il serait pleinement durable moyennant des nergies propres comme lolienne et la solaire. Aux Canaries, les salines font partie des plus anciens et traditionnels exemples de lutilisation du vent comme source nergtique.

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7.

Produire des microalgues au Maroc

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La Fondation MAScIR Moroccan Foundation for Advanced Science, Innovation and Research, cre en 2007 est une institution publique but non lucratif qui vise la promotion de la recherche scientifique au Maroc. Les axes stratgiques de la recherche de cet organisme vont de lenvironnement lnergie, en passant par la sant, leau et la technologie. Son objectif est de cibler les secteurs technologiques de pointe pour en capter des parts de march tout en attirant sur le territoire national des entreprises spcialises. A cet gard, des travaux sont en cours dans le dveloppement de biocarburants partir de souches marocaines de micro-algues en partenariat avec lOffice Chrifien des Phosphates (OCP). Une quipe de jeunes chercheurs de ce centre de recherche a mis en place un processus permettant lobtention de biocarburants de 3ime gnration partir de micro-algues marines dorigine marocaine. Ce projet, qui a permis dlaborer la premire algothque de souches marocaines possdant diffrents profils lipidiques, vise obtenir, dans un horizon de 5 ans, une production industrielle de biocarburant optimis et conomiquement viable. Cet objectif est ralisable, selon les responsables du centre, du fait que, les rsultats prliminaires en laboratoire ont permis disoler une souche ayant un contenu lipidique initial de plus de 30 %, avec une croissance rapide prouvant la faisabilit technique du processus.

Spirulina La production Spirulina au Maroc se limite quelques investisseurs marocains et trangers. A cet effet, il ny a que cinq producteurs reconnus au Maroc. - Vitaspiruline est lentreprise, BIO3DAKHLA, installe Dakhla spcialise dans la production de microalgues et de cyanobactries dans des bassins sous-serres, et ce, depuis le 28 juin 2007. Actuellement, elle produit de la Spiruline et travaille sur dautres microalgues pour des industriels Europens. Son personnel jouit dune exprience de plus de vingt ans dans le domaine de lalgoculture. A cet effet, la socit a dvelopp des outils et dispens des formations ncessaires la production locale, durable, de la spiruline. Les intrants de ses produits sont soigneusement slectionns et son laboratoire de microbiologie est install sur place pour le suivi des cultures, en plus des analyses rgulires de Spirulina confies lInstitut National dHygine (INH) et au Laboratoire Officiel des Analyses et Recherches Chimiques (LOARC)
www.vitaspiruline.com/bio3dakhla.php

- Spiruline Vitalgue, la Spiruline de Marrakech dont le Responsable de production est Patrick CLEMENT - Domaine Spiruline situ au cur de la fort de Ben Abid (Sidi Yahya Zaers) aux environs de

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Rabat est la troisime ferme dans le monde produire Spirulina certifie 100% bio par Ecocert et 100% Organic par Nop (USDA). La souche qui vit actuellement au Maroc, sest parfaitement adapte son environnement. La souche marocaine a dailleurs t brevete. Cest surtout vers lexport que les propritaires destinent leurs produits, notamment vers des laboratoires faonneurs. La demande est principalement europenne. Les producteurs de micro algue prvoient un investissement dextension pour rpondre au march international. - Un entrepreneur belgo-marocain a fond sa propre marque de spiruline Agadir quil a baptis Vitalina il y a cinq ans.

Figure 13.- Produire de Spirulina au Maroc (Vitaspiruline, Dakhla).

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8.

Activits daquaculture des micro-algues

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Points faibles - Dans une activit trs rcente, lexprience nest pas assez grande. Mme sil y a des tudes varies de productivit, elles possdent un norme caractre estimatif et il est ncessaire la consolidation de travaux de recherche chelle dusine pilote. - Dans le dveloppement effectif dun projet de production on doit tablir clairement les objectifs finalistes ainsi que le seuil de production que lon prtend atteindre: production de biomasse, extraits ou laboration de produit final. - Parmi les dbilits on doit tenir en compte celles qui drivent de la propre insularit et de lloignement des marchs finaux et des fournisseurs de la technologie. - Le commerce associ aux aliments fonctionnels bas sur les microalgues est un march rcent, et les produits possdent une faible pntration commerciale. tout ceci, elles se sont jointes les anciennes normatives qui taient trs restrictives. Points forts - Les Canaries, plus spcialement les les orientales de larchipel, constituent un endroit appropri pour le dveloppement de cette activit. Tout ceci grce aux conditions climatiques (avec un climat doux), la grande quantit dheures de lumire solaire, et la situation gostratgique

ayant accs lun des marchs internationaux ayant la plus grande demande de ce type de produits. - De mme, la lgislation en matire dutilisation alimentaire de microalgues est encore trs restrictive, seul dans le cas de la production de -carotne, la Dunaliella salina a t accepte et reconnue rcemment comme source naturelle de -carotne demploi alimentaire, conformment aux critres tablis par le Comit Mixte FAO/OMS dExperts en aditifs alimentaires (JECFA).
www.fao.org/ag/agn/agns//jecfa_ guidelines_es.asp

- Aux Canaries il y a dimportants centres de recherche dans le domaine de la biotechnologie avec des micro-algues. Parmi ces centres on peut souligner le Centre de Biotechnologie Marine de lUniversit de Las Palmas de Grande Canarie ULPGC (http://www. cbm.ulpgc.es/), sige de la Banque Nationale de Germoplasme dAlgues (BANA) (http://www-cbm. ulpgc.es/bangal.html); lInstitut Canarien de Sciences Marines
(http://www.gobcan.es/iccm/ index_flash.html) dveloppant des

travaux dans ce domaine, et plus spcifiquement dans lapplication de la biomasse provenant des micro-algues en aquiculture. - La biotechnologie, et plus spcifiquement celle en rapport avec le dveloppement de laquaculture, constitue lobjectif

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prioritaire dans les plans de dveloppement technologique en Espagne et plus spcialement aux Canaries. En fait, elle constitue lobjectif prioritaire de financement dans les plans nationaux, europens et locaux dI+D. - Le dveloppement de laquiculture comme une activit avec entit propre aux Canaries peut ouvrir les portes un nouveau march pour labsorption de produits drivs des micro-algues. Menaces - Le march pour les produits drivs des micro-algues est encore petit et peu transparent. - La production de -carotne partir de Dunaliella salina est un secteur dactivit contrl par un nombre rduite dentreprises directement attaches aux multinationales puissantes. La pleine comptitivit dans ce march repose sur lamlioration de la qualit des produits offerts. Possibilits - Aux Canaries il existe un grand march, celui du tourisme national et international. Ce march touristique peut tre une voie approprie pour la commercialisation des produits labors partir dune production locale de microalgues, spcialement lombre du dveloppement du tourisme de sant et de lcotourisme.

- Les activits locales caractre agroalimentaire, comme la production de sel ou de fromage, pourraient sassocier ce type dactivit. Actuellement, on explore le besoin dutiliser la biomasse venant des micro-algues pour llaboration des fourrages de haute qualit, spcialement en aviculture et aquaculture, de mme que dans llaboration daliments pour la consommation humaine ayant les micro-algues comme additif. - Lpuration tertiaire des eaux rsiduaires et le dessalement des eaux sont des activits qui peuvent tre associes lusage et au dveloppement de technologie lie lexploitation des micro-algues. - Le dveloppement de laquiculture aux Canaries finira par gnrer de la demande de biomasse originaire de micro-algues. - Les projets de biotechnologie avec des micro-algues on t initialement dirigs aux systmes de culture en tang ouvert, spcialement pour la production de -carotne partir de Dunaliella salina. Nanmoins, le dveloppement de ce type de projet peut constituer le point de dpart optimal dune srie dactivits conomiques lies au dveloppement de la biotechnologie aux Canaries, tout en faisant des progrs dans des projets de dveloppement avec une plus grande demande en technologie davant-garde.

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9.

Usine pilote de culture de micro-algues

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9.1. Recommandations demplacement

- La disponibilit dinstallations pralables, comme des salles de laboratoires, systmes de pompage, stockage deau et emmagasinages pour ractifs permettront la diminution de cots en infrastructures. Ce qui est une alternative optimale est celle dassocier le dveloppement et construction dune usine pilote de micro-algues des installations exprimentales ou agroindustrielles dj tablies. La culture de micro-algues peut tre une activit complmentaire aux exploitations agricoles conventionnelles. En fait, il est possible le dveloppement de cultures de micro-algues dans les surfaces marginales nonexploitables. Ceci permettrait une diversification alternative des exploitations agroindustrielles. - Disponibilit deau bas prix. Il est recommand que lemplacement de lusine soit dans des zones proches la mer. Une saline serait donc lemplacement appropri. Lusine peut tre associe une usine de dessalement, ce qui permettra une disponibilit deau optimale ainsi quune utilisation des propres infrastructures de pompage, conduite et stockage de leau de lusine. Pour la culture de Dunaliella salina, la disponibilit de sel ou deau saumtre favorise les travaux et rduit les cots.

Les cultures de Dunaliella salina pourraient se dvelopper avec leau de rejet de lusine de dessalement ou tout en utilisant le sel fournit par le propre marais salant. Leau de rejet pourrait tre employe comme source deau dans les carreaux ou bassins du marais salant, tout en fermant de cette manire le cycle de production de sel. En cas de culture despces de microalgues dulaquicoles (Chlorella), lusine de micro-algues pourrait sassocier avec des cultures traditionnelles. De cette manire, on pourrait rutiliser leau de rejet des cultures de micro-algues pour larrosage des plantations. - La zone ne doit pas tre expose au vent et elle doit disposer daccs faciles. - La zone plate du terrain favorisera les travaux de construction de lusine. - La temprature moyenne annuelle de la zone ne doit pas tre suprieure 30C. En outre, la zone doit tre peu expose des zones dombre.

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9.2. Slection de ceps en culture

On recommande la slection de ceps locaux de micro-algues. Dans ce sens, et pendant les travaux dvelopps par lITC dans le cadre du projet SAL, on a dmontr la viabilit disolement et de slection de ceps autochtones de Dunaliella salina spcifique des salines traditionnelles. Actuellement, ces ceps sont recueillis dans une collection spcifique du projet SAL dans les installations de Biotechnologie de lITC Grande Canarie (http://www. itccanarias.org/). La collection de ceps locaux est spcialement grande dans la Banque Espagnole dAlgues (BEA). Il nest pas difficile disoler les ceps locaux de Chlorella, trs bien adapts aux conditions de culture des Canaries. Dans ce sens, le BEA dispose dune grande collection de ceps de microalgues et de cyanophytes (Spirulina) pralablement cultives dans les laboratoires des Canaries. Il existe un nombre considrable de collections de micro-algues qui peuvent nous proportionner le matriel biologique ncessaire :

Figure 14.- Collection despces et de ceps de micro-algues de lITC (moyens agariss et liquides)

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ACOI. Collection dalgues de lUniversit de Coimbra, Portugal. www.uc.pt/botanica/ACOI.htm ALGOBANK. Banque de micro-algues de lUniversit de Caen. France. www.unicaen.fr/unicaen/ufr/ibfa/lbbm/ algobank ATCC Collection Amricaine de cultures type, Rockyilli, Maryland, USA www.atcc.org/SearchCatalogs/Protistology.cfm CAUP Collection des algues de lUniversit de Charles de Prague, Rpublique Tchque http://botany.natur.cuni.cz/algo/caup.html CALA Collection dorganismes autotrophyques de lInstitut Botanique de Trebon, Rpublique Tchque. www.butbn.cas.cz/ccala/ccala.htm CCMP Centre National Provasoli-Guillar, pour le Phytoplancton marin, Main, USA. http://ccmp.bigelow.org CAMARC CSIRO Microalgae Reserach Centre, Hobart, Tasmania, Australia www.marine.csiro.au/microalgae IAM Collection de cultures de lInstitut de microbiologie applique de lUniversit de Tokio, Japon www.iam.u-tokyo.ac.jp/misyst/ColleBOX/ IAMcollection.html SVCK Sammlung von Conjugatenkulturen, Inst. Allgem. Botanik Hamburg, Alemagne www.biologie.uni-hamburg.de/b-online/ d44_1/44_1.htm UTEX Collection de cultures dalgues de lUniversit dAustin, Texas, USA www.utex.org CIBNOR Centre de Recherches biologiques du Nord-ouest, Mexique www.cibnor.mx/ecibnor.php

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9.3. Procds de culture

9.3.1. Laugmentation du volume de culture : la mise lchelle ou Scale-up Lun des points critiques dans la production grande chelle de microalgues cest le transfert des collections type jusquaux grands systmes de croissance. Les algues sont transfres de systmes agariss en milieu contrl, d peine 20 ml de culture, jusquaux systmes de grande envergure de milliers de litres ciel ouvert ou sous serre. Ce pas exige de gnrer le volume appropri de culture permis par linoculum des grands systmes. De mme, il est aussi ncessaire ladaptation progressive des algues un environnement assez changeant. On peut maintenir une mise lchelle ou scale-up (augmentation du volume) optimale avec des volumes dinoculum (culture de densit moyenne en croissance exponentielle) de 1/10. Pour les systmes de culture proposs, on peut maintenir des bassins de type raceway de faible volume (raceway de production chelle ou scaleup) de 3-10 m2 (300-1.000 litres de culture) pour la culture pralable avant le transfert des raceway de plus grande envergure. Les cultures chelle sont faciles construire avec des matriels peu coteux comme les fibres synthtiques. Pour linoculum des bassins type raceway de production chelle, il ne suffit quavec 30 ou 50 litres de culture venant directement de la chambre de culture. Les espces slectionnes sont peu exigeantes, par consquent la mise lchelle (scale-up) de la culture peut seffectuer directement de la chambre de maintien jusquaux bassins type raceway externes. En gnral, on considre que les temps de la mise lchelle pour linoculum dun raceway de 100 m2 est dentre une ou deux semaines.

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Figure 15.- chelle progressive de cultures. Le but de la mise chelle est celui de gnrer de la biomasse ncessaire pour linoculum des systmes de culture massive, et ladaptation progressive des algues aux conditions finales de production.

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9.3.2. Gestion de cultures Comme des stratgies fondamentales on recommande maintenir la culture de la Spirulina et Chlorella en mode de culture semi-continue dans une seule phase avec une squence dune ou deux rcoltes par semaine. Dans le cas des cultures de Dunaliella salina on essayera avec la production en mode semi-continu dans un raceway et avec la production en double phase. La croissance de Dunaliella salina et la synthse de -carotne viennent dtermines par le rayonnement incident. Le contenu de -carotne en Dunaliella salina est dtermin par le rapport entre le taux de croissance cellulaire et le rayonnement. Les contenus les plus levs de -carotne sont atteints dans des conditions de croissance limite et de rayonnement lev. En gnral, laugmentation dans le contenu des carotnodes dans les algues a t mise en relation avec des conditions de stress cellulaire. Ceci reprsente lune des plus grandes difficults pour la production grande chelle de -carotne partir de la culture intensive de Dunaliella saline, la phase de synthse maximale de -carotne se produit dans des conditions limitant la croissance de la culture. Les techniques de culture en double phase permettent dharmoniser la production de biomasse avec lobtention de concentrations leves de -carotne. Dans une premire phase les algues sont cultives dans des conditions de croissance optimale, avec une grande disponibilit de nutriments et avec des densits cellulaires relativement leves. Ensuite les cultures sont soumises une deuxime phase de culture ou phase dinduction de synthse et daccumulation du carotne. Cette phase est caractrise par la suppression de nutriments dans le milieu, une plus grande salinit et une densit cellulaire infrieure, tout en augmentant lexposition de la culture au rayonnement solaire.

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Modle exprimental de gestion dune culture de Dunaliella salina en double phase

Rcolte et transfert 1,20 1,10 1,00 0,90 0,80 0,70 0,60 0,50 Fertilisation 0,40 0,30 0,20 Temps en jours 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32

Figure 16.- Cycle de rcolte et de fertilisation dune culture en semi-continu de Dunaliella salina

Dans la figure 16, on peut apprcier le modle classique de variation de densit cellulaire dans une culture semi-continue de Dunaliella salina. Les rcoltes ont t faites tous les trois jours avec un volume de rcolte de 50% de la culture. Dans chaque cycle de rcolte on apprcie une diminution lente de la densit cellulaire maximale atteinte par la culture dans le cycle suivant, ce qui fait recommandable lalternance de phases de drainage de la culture, le nettoyage des raceway et la remise lchelle. Dans les cultures en semi-continu de Dunaliella salina, il ne serait possible de maintenir des taux levs de production de -carotne quau moyen de rcoltes en cycle court, gnralement de 24 heures, tout en maintenant une faible densit cellulaire. Ce systme peut faire monter les prix et compliquer les processus dentretien des cultures. Dans une culture en double phase, le volume repris (50% de la culture en phase verte dans des cycles de trois jours) est transfr vers un nouveau raceway une dilution 1/3. Dans des cycles qui ne sont pas suprieurs trois jours (selon les donnes exprimentales du projet PRODEM), on peut atteindre des productions de -carotne en culture denviron 05 grammes par m2 et jour (en surface de culture de phase rouge on atteindrait des productions de 034g/m2 jour). Ces niveaux de production sont significativement plus levs que les niveaux atteints par des cultures en continu (Garca-Gonzlez et al, 2003).

Densit optique (750 nm)

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Traitement

Transfert de 50% de la culture en phase verte (RW de 100 m2 et 10.000 litres de culture) culture en phase rouge (RW de 100 m2 et 10.000 litres de culture)

Stockage

Rcolte

Le systme de culture en double phase peut tre soutenu en raceway de 100 m2 avec une capacit de 10.000 litres de culture dans la phase verte 15 cm de colonne) avec une dilution en phase rouge de 1/3 et avec deux rcoltes par semaine. Les flux de CO2 en phase verte sont denviron les 00003l/minute par litre de culture. Ceci implique des consommations par jour denviron une bouteille de 20 kg de CO2 par semaine et par raceway de 100 m2. Avec ces flux on peut travailler avec des systmes autonomes de CO2 sans rampe, ce qui permettrait de rduire les cots dinvestissement grce la simplification des installations. Le systme autonome dinjection de CO2 serait compos dun mano-rducteur jusqu 16 bar, une lectrovalve tout ou rien connecte un temporisateur programmable, un rotamtre de 0`1 1 litre/minute et de microdiffuseurs en porcelaine. Tout ce systme peut tre connect au moyen de tuyaux flexibles. Linjection de CO2 sera programme en squences temporelles en fonction du rayonnement incident, tout en tablissant comme optimal environ 8 heures par jour dinjection.
Fournisseurs dquipements : http://www.comaquinsa.com/ http://www.carburos.com/

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Figure 17.- Cultures de Dunaliella salina en phase rouge et en phase verte. La culture en double phase est lun des systmes indiqus pour la production de mtabolites secondaires, comme le -carotne, associs des conditions de stress cellulaire. Il sagit dun systme de culture posant dimportants problmes de gestion oprative. Nanmoins, ces problmes sont justifis par la grande valeur des substances objet de production.

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9.3.3. Rcolte des cultures La rcolte est lun des procds le plus couteux dans la culture de Dunaliella salina, car on ncessite des quipements trs rsistants loxydation. On a essay avec diffrentes techniques alternatives la rcolte par centrifugation : Floculation : cest un systme efficace avec Dunaliella salina et avec dautres micro-algues. Ce systme montre une efficacit leve dans des essais raliss avec des sels ferriques (aussi bien avec Dunaliella quavec Chlorella). Nanmoins, les hautes concentrations de dchets dtects dans les concentrations de biomasse ne rendent pas viable ce systme pour des applications alimentaires. Lemploi de diffrents polylectrolytes commerciaux a montr des rsultats trs htrognes, tant peu efficaces dans des cultures de salinit leve. Le chitosane (polymre dactyl-glucosamine) a dmontr son norme efficacit dans la rcolte de Chlorella. En outre il prsente lavantage de son innocuit et de son ample utilisation dans lindustrie alimentaire malgr son prix lev. Centrifugation : il sagit du systme le plus efficace et le plus utilis pour la rcolte de micro-algues. Nanmoins ils sont peu nombreux les tudes et les travaux de recherche sur cette technique. La ncessit dutiliser des quipements trs rsistants la corrosion fait monter les prix considrablement dans le chapitre dinvestissements dans la culture de Dunaliella. Face aux dcanteurs ou aux hydrocyclones efficaces dans la combinaison des procds de floculation, les quipements qui offrent les meilleurs rsultats dans la rcolte de micro-algues sont les centrifugeuses verticales auto-lavables permettant des travaux de rcolte en continu. Ces centrifugeuses sont beaucoup plus efficaces que les centrifugeuses tambour de procds en discontinu.
Fournisseurs dquipements (entreprises consultes): www.westfalia-separator.com/en/index.htm www.alfalaval.com www.flottweg.com/spanish/worldwide_sp.html www.iaf.es/enciclopedia/pieralisi/index.htm

Filtrage : cest une technique trs inefficace avec la plupart des espces unicellulaires. Nanmoins, le filtrage offre les meilleurs rsultats dans la rcolte de Spiruline. En fait, cette technique se montre trs efficace dans les petits systmes de filtrage du type artisanal (mailles de filtration) ainsi que dans les systmes de filtrage tamis vibrant. Une technique trs rcente est celle de la rcolte au moyen de filtrage tangentielle. Nanmoins, elles sont peu nombreux les tudes comparatifs quant lefficacit et aux cots entre les diffrentes techniques de rcolte. Ceci constitue lun des objectifs tudier dans les diffrents projets de recherche de lITC.
Fournisseurs dquipement (entreprises consultes) : Tamis : www.allgaier.de/index_es.html Filtration tangentielle : www.asiain-sesores.com/rev3/pag31.htm www.sartorius.com/en/contact/index.php

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Figure 18.- Tambour de rcolte dune centrifugeuse daxe vertical et flux continu.

Figure 19.- Pte dalgues aprs la rcolte avec un contenu en poids sec de 5%

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9.3.4. Traitement de la biomasse Quand partir de la rcolte on obtient le concentr cellulaire ou pte, on effectue le traitement de la biomasse. Actuellement, surtout avec des espces de micro-algues marines pour son application en aquaculture, on commence travailler avec de la biomasse sans traiter, congele ou rfrigre. Nanmoins la plupart des applications commerciales de la biomasse originaire des micro-algues ncessite diffrents traitements. - Dshydratation. Normalement la pte doit avoir une concentration en solides dentre 5 et 15% et elle doit tre traite rapidement, car des petites expositions environnementales impliquent sa dgradation. Ceci est particulirement certain dans le cas de Dunaliella salina (qui est trs sensible la photooxydation). Le systme de dshydratation plus utilis est celui du schage par atomisation. Cependant le schage par lyophilisation et en tambour ont montr aussi des bons rsultats. Tous ces systmes ont t essays avec succs dans les espces proposes (Dunaliella, Chlorella et Spiruline). La lyophilisation est trs chre et dans les procds de schage par atomisation on a observ une certaine dgradation de la biomasse. Pourtant, le schage par atomisation continu tre le plus tendu. En plus, il sagit dun systme trs compatible avec des traitements de dshydratation dautres produits comme le lait, les lactosrums, jus dAlos, etc. Le schage de la biomasse simplifie les procds de conservation et dextraction de mtabolites. Par consquent, il est recommandable le schage avant la phase dextraction. La pte non-dshydrate offre la possibilit de conservation pendant des priodes de temps relativement longues ainsi que des niveaux de dgradation acceptables. Ceci permettrait de varier les travaux de culture et de traitement de la biomasse, tout en concentrant ainsi les travaux de traitement dans le temps et dans une seule usine. Ceci favoriserait un dveloppement en conomie dchelle de lensemble de lactivit, une seule usine de traitement pourrait tre destine au traitement de la production de diffrentes exploitations. Pour la conservation de la pte et du produit dshydrat il est fondamental de disposer dquipements appropris pour le conditionnement sous vide ou sous atmosphre modifie (produit dshydrat) ainsi que pour la conglation et la rfrigration.
Fournisseurs dquipements (entreprises consultes) : Atomiseurs : www.niroinc.com/html/niro contacts/spain Machines emballer et sceller : www.tecnotrip.com

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- Homognisation et rupture cellulaire. Grce la meilleure digestibilit de la biomasse et la simplification des procds dextraction de mtabolites comme les pigments, les traitements dhomognisation de la biomasse et la rupture cellulaire favorisent les applications alimentaires des algues. On a employ des supprimer diffrentes techniques dhomognisation et de rupture cellulaire comme celles de lultrason, mais celles qui offrent les meilleurs rsultats sont les traitements au moyen dhomognisateurs de haute pression. Dans les espces proposes, le traitement dhomognisation nest utilisable quavec Chlorella, car elle prsente une solide paroi cellulaire. Cependant la Dunaliella ne possde pas cette paroi et pour obtenir cette rupture cellulaire il serait suffit la simple rcolte par centrifugation, les traitements de choc osmotique ou la conglation. Les traitements dhomognisation peuvent se faire sur la biomasse pralablement congele, ce qui amliore les rsultats.
Fournisseurs dquipements (entreprises consultes) : Homognisateurs : www.niroinc.com/html/niro contacts/spain www.cbmills.com/CB_Mills_Products/ horizontalmills.htm

Figure 20.- Rupture cellulaire de Chlorella dans des traitements avec des moulins

- Extraction de mtabolites. De lensemble despces proposes, ce processus naurait de sens que dans le cas de lextraction de -carotne en Dunaliella salina. Lextraction de -carotne est un processus simple dans le cas de cette espce et sont possibles les traitements dextraction au moyen de lhuile ou de solvants comme lhexane.

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9.4. Lgislation
La nouvelle rglementation europenne sur des nouveaux aliments et des nouveaux ingrdients alimentaires (Rglement CE 258/97) permet de dpasser la barrire limitant, traditionnellement, la commercialisation de produits labors partir des algues. Cette rglementation est applicable aux aliments et aux nouveaux ingrdients alimentaires qui ntaient pas consomms auparavant en grande quantit dans lUE et que lon peut classer dans les catgories suivantes: Aliments ou ingrdients composs ou contenant des organismes gntiquement modifis Aliments et ingrdients alimentaires produits partir dorganismes gntiquement modifis Aliments et ingrdients alimentaires prsentant une structure molculaire primaire nouvelle ou dlibrment modifie Aliments et ingrdients alimentaires composs de micro-organismes, de champignons ou dalgues ou isols partir de ceux-ci Aliments et ingrdients alimentaires composs de vgtaux ou isols partir de ceux-ci et les ingrdients alimentaires isols partir danimaux, lexception des aliments et des ingrdients alimentaires obtenus par des pratiques de multiplication ou de reproduction traditionnelles et dont les antcdents sont srs en ce qui concerne lutilisation en tant que denres alimentaires Aliments et ingrdients alimentaires auxquels a t appliqu un procd de production qui nest pas couramment utilis, lorsque ce procd entrane dans la composition ou dans la structure des aliments ou des ingrdients alimentaires des modifications significatives de leur valeur nutritive, de leur mtabolisme ou de leur teneur en substances indsirables Dun autre ct, lutilisation des microalgues dans lindustrie alimentaire a reu une nouvelle reconnaissance lgale, grce la rcente acceptation du -carotne venant de Dunaliella salina, dans la normative espagnole didentit et de puret pour les colorants alimentaires (Ordre SCO/ SCO/1052/2002 BOE 14/5/2002), qui transpose la Directive Europenne 2001/50 (UE). Il reste ainsi dfinit comme mlange de carotnes obtenu de ceps naturels de lalgue Dunaliella salina, cultive dans des grands lacs salins Whyalla, Australie du Sud. La lgislation se fonde sur des critres tablis par la FECFA, qui tablit en mme temps des critres moins restrictifs quant llaboration des extraits de carotne partir de Dunaliella salina et sa possible culture. Ceci garantit la possibilit dune reconnaissance lgale de ce produit provenant dautres cultures et qui est soumis dautres procds de traitement et dextraction
www.fao.org/ag/agn/jecfa-additives/details. html?id=698

Lenregistrement sanitaire des exploitations, les salles de traitement et le produit final doivent sen tenir la lgislation en vigueur en matire alimentaire ainsi quaux procds denregistrement tablis.
www.aesa.msc.es

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10.

Budgets
On ouvre cette section comme rfrent de ce qui pourrait tre un projet pour la construction dune usine pilote de culture de micro-algues. La prsente proposition envisage la construction et lquipement dun petit laboratoire pour le suivi, contrle et entretien des cultures, comme celui dune usine de culture base sur deux tangs ouverts type raceway double circuit de 100 m2. Cette chelle est suffisante pour le dveloppement dexpriences pilote de culture grande chelle de micro-algues. Tout ceci pourrait tre utile comme une plateforme approprie pour des projets denvergure suprieure. Les budgets signals sont titre indicatif et caractre estimatif. Heureusement le march technologique est un march en expansion et en dveloppement o loffre est diversifie et la concurrence augmente. videmment, lquipement ncessaire pour la mise en service dun laboratoire pourrait tre plus nombreux, mais lquipement signal ici peut tre considr comme la base fondamentale pour un bon commencement.

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10.1. Budget dquipements

10.1.1.Budget de laboratoire 10.1.2.Budget de culture et de traitement

QUIPEMENT

COSTE

QUIPEMENT Syst. Injection CO2 Supports Rotamtres Mano rducteurs Connexions Electrovalves et temporisateurs Diffuseurs Monitorage de cultures Senseurs CO2 Sondes de temprature Cblage Ordinateur de contrle

COSTE 180 1.000 550 90 350 100 1.200 650 600 1.200 3.000 43.000 1.000 1.800 1.200 3.000 15.200 110.000 24.000 208.120

Centrifugeuse thermostatise Spectrophotomtre Oxymtre pH mtre Conductimtre Refractomtre Jeu de pipettes automatiques Microscope invers Balances de prcision Balances Agitateurs-chauffants Pompe de vidange Systme de filtration Chambre de culture Agitateur va-et-vient et orbital Rfrigrateur Chambre flux laminaire Systme deau distille Autoclave TOTAL

7.900 9.000 1.100 550 900 300 1.200 4.000 1.200 600 600 800 300 12.000 1.800 600 5.000 6.000 5.000 58.850

Raceway de mise chelle

Centrifugeuse axe vertical (4.000 l/h) Pompes Syst. Nettoyage haute pression Coffrets rfrigrateurs Machine isoler et emballer sous vide Machine tamiser vibrante Atomiseur Homognisateur haute pression TOTAL

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FRAIS COURANTS DUSINE DE CULTURE

Consommation Cot/unit Kwh/an Consommation dnergie (sans traitement de dshydratation) Consommation deau CO2 Moyens de culture Autres frais Total/an 14.800 m3/an 1.500 kg/an 3.000 kg/an 2.500 Kw/h 0,09 m3 0,6 kg 1,57 kg 0,5 1.250 1.325 9.517 4.710 900 Cot (Euros) 1.332

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10.2. Budget de Gni civil: usine de culture et btiment de laboratoires et traitement

RSUM PAR CHAPITRE 1. Mouvements de terre 2. Fondation 3. Rseau deau douce 4. Rseau deau de mer/hypersaline 5. Rseau dassainissement 6. Canalisations lectriques 7. Rseau ligne de sonde 8. Maonnerie 9. Systmes dagitation 10. Structures en bton 11. Impermabilisation 12. Gni civil 13. Installation lectrique 14. Urbanisation Budget excution matriel 5 % de Frais Gnraux 12 % de Bnfice industriel 5% IGIC Budget dexcution par contrat

COT 2.469 8.142 2.513 2.313 6.165 1.636 876 6.736 14.832 168 8.550 52.080 18.540 9.800 134.820 6.741 16.178 7.887 165.626

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10.3. RSUM DU BUDGET TOTAL

Cest le cot qui correspond une construction dune nouvelle usine sans des installations pralables et qui assume des phases de culture et de traitement de biomasse (traitement de dshydratation).

Construction dune nouvelle usine (culture et traitement) quipement de laboratoire quipement usine de culture Gnie Civil Systme de culture Btiment de laboratoire et traitement TOTAL 66.830 98.796 432.596 58.850 208.120

FRAIS COURANTS DUSINE DE CULTURE Consommation Cot/unit Kwh/an Consommation dnergie (sans traitement de dshydratation) Consommation deau CO2 Moyens de culture Autres frais Total/an 14.800 m3/an 1.500 kg/an 3.000 kg/an 2.500 Kw/h 0,09 m3 0,6 kg 1,57 kg 0,5 1.250 1.325 9.517 4.710 900 Cot (Euros) 1.332

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10.4. Dveloppement chelle

On na pas estim les cots du personnel. Comme on a donn priorit aux travaux objet dtude, le caractre exprimental de lusine prfigure les cots de personnel. Des usines oprationelles caractre industriel-commercial permettent le dveloppement dconomie dchelle, tout en rduisant les cots, spcialement dans le chapitre ddi au personnel. En gnral, dans ce chapitre, on estime des cots de 26 euros par m2 de culture par an, avec une relation en heures de 1/6 (techniciens suprieurs/ ouvriers dusine). Le modle dusine de culture propos correspondrait des tangs ouverts type raceway double circuit de jusqu 100 m2, avec une surface totale en usine de 200 m2 dtangs de culture (2 raceway oprant simultanment). La proportion de surface oprative et de travail pour ce type de systme peut tre denviron 20% de la surface totale de lusine de culture. Ceci impliquerait une relation de surface entre tangs et surfaces spcifiques de culture de 3 1 (pour chaque 3 m2 dtangs de culture, on ncessiterait environ 1 m2 de zones ddies au passage et au travail). Daprs ce calcul, on devrait disposer dune surface totale de 250 m2 pour une centrale de culture de 200 m2 dans des tangs de culture. Dans des territoires comme les les, la disponibilit du sol constitue lun des principaux facteurs limitant ce type de projets ainsi que lun des plus importants frais du chapitre ddi au capital.

En outre, cause de la nature de lactivit, cheval entre le secteur primaire et lindustriel, ce problme sintensifie parce que le caractre du terrain ne reste pas pleinement typifi. Ainsi, le cot moyen du sol industriel dans des les comme Grande Canarie peut osciller actuellement entre 300 et 600 euros par m2. Lusine pilote propose correspond un modle dusine sur une structure rigide dtangs en bton impermabiliss avec des traitements en fibres, et peintures epoxyques aptes au contact alimentaire. Il ny a pas de doute quil sagit dun modle trs test et avec une qualit assez vrifie. Nanmoins, on peut aussi construire des tangs de culture sur des structures nonrigides, des bassins creuss dans le sol et les impermabiliser avec des go-membranes en PVC. Ce modle de construction permet une diminution denviron 61% des cots du capital. Cela implique de passer dun cot de 176 euros par m2 68 euros. En gnral, les cots de capital prsentent une rponse trs favorable aux dveloppements en conomie dchelle. Ceci est spcialement certain dans le cas des travaux de rcolte et de traitement de la biomasse. En effet, dans ces procds on peut atteindre une diminution des cots damortissement dquipement denviron 96% par m2, en cas datteindre la pleine oprativit des quipements de rcolte et de traitement.

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Dans des travaux antrieurs on peut dduire que la diminution des cots associe la taille de lusine de culture est proche aux 0,001 euros par kg de biomasse produite par chaque m2 daugmentation dans la surface totale dexploitation. Ceci peut impliquer une pargne de presque 79% sur le cot total de production dans le point optimal dchelle (Borowitzka, 1999). Le rendement en culture est le facteur qui dtermine les cots finaux de production. La productivit est trs varie en fonction des espces des systmes de culture. Les rendements maximaux en raceway dcrits jusqu aujourdhui correspondent la culture de Chlorella avec une productivit qui a oscill entre les 25 et les 30 grammes de biomasse sche par m2/jour (Kawaguche, 1980). Cette espce est lune des premires tre cultive grande chelle et sur laquelle il y a normment dtudes publies. La Chlorella constitue donc un rfrent optimal pour une valuation compare de cots et rendements potentiels. Dans les projets dvelopps lITC, on a obtenu des productions continues de Chlorella en raceway de 15 grammes par m2/jour, ce qui nous permet de faire la suivante estimation des cots de production par kilogramme de biomasse dshydrate, dans lusine pilote de culture de micro-algues propose:

Cot de production (/kg de biomasse)

Cots dopration Cots de capital Entretien TOTAL 6,78 23,26 1,33 31,37

Cot dopration par kg de biomasse

Consommation dnergie (kw/kg) 30,20 Consommation deau (m3/kg) 1,00 Nutriments (kg/kg) 1,20 Consommation de CO2(kg/kg) 2,00 1,21 0,85 0,78 /kg 3,02

Ces cots quivalent ceux indiqus dans des travaux antrieurs, la seule exception de lenvergure de lexploitation, une usine pilote de culture, qui dtermine un pourcentage lev dans les cots de capital.

Structure de frais
(cot par kg de biomasse dshydrate)

100 80 60 40 20 0tudes pralables Usine pilote

Pourcentage

Cots dentretien Cots de capital Cots doperation

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11.

pilogue
Ce travail prtend donner une vision globale sur les possibilits de la biotechnologie avec des micro-algues comme une activit conomique potentiellement viable dans des territoires comme les les Canaries ou le Maroc. De mme, on ambitionne doffrir des donnes exprimentales vrifies sur le possible dveloppement et la mise en service dune usine pilote pour la culture de micro-algues. Malgr le caractre exprimental et imprvu de cette proposition, elle constitue un rfrant appropri pour ce qui pourrait tre des futures dveloppements plus ambitieux et plus grande envergure dpassant le seuil de lexprience pilote. On considre que, le travail dvelopp par lInstitut Technologique de Canaries tout au long de ces dernires annes dmontre la viabilit technique de la culture de microalgues comme une activit productive. De mme, ce travail fixe les fondements pour le dveloppement de la culture de micro-algues comme une possible activit conomique dans des territoires comme larchipel Canarien ou le Maroc.

Rfrences bibliographiques Avron M y Be-Amotz (1992) Dunaliella: Physiology, biochemistry and biotechnology. Boca Ratn, Florida, EEUU. Borowitzka M (1999) Ecomic evaluation of microalgal processes and products. Cohen (ed.) Chemical from microalgae (387-409) Wellington, Surrey United Kingdom. Butler WL (1953) (ed), Algal culture from laboratory to pilot plant. Washington DC Carnegie Institut. Cohen Z (1999) Chemical from microalgae. Wallington, Surrey United Kingdom. Consejera de Agricultura y Pezca (varios autores) (2000) Biotecnologa del cultivo de Dunaliella salina en el litoral Andaluz. Sevilla, Espaa. Garca- Gonzlez M, Moreno j, Caavate JP, Anguis V, Prieto A, Manzano FJ y Guerrero MG (2003) Conditions for open-air outdoor culture of Dunaliella salina in sothern Spain. Journal of Applied Phycology, 15:177-184. Kawaguchi K (1980) Microalgae production system in Asia. Shelef y Soeder (eds), Algae biomass production and use (2533), Amsterdam: Eselvier/North Holland Biomedical Press. Pulz O. y Gross W (2004) Valuable products from biotechnology of microalgae. Appl. Microbiol. Biotechnol., 65, 635648. Richmond A (2003) Microalgae culture. Biotechnology and applied phycology. Oxford United Kingdom