F a c u l t a d d e C i e n c i a y T e c n o l o g í a

Estudio de una molécula relacionada con D7 (D7r) en el

mosquito vector de la malaria Anopheles albimanus

Ciro Montero,1, 2 y 4
Karina Rodríguez,3 Mario Henry Rodríguez5 y Fidel Hernández1 y 2
1
Universidad Simón Bolívar, Cinvestav-Instituto Politécnico Nacional, 3Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco,
2

4
CIP-Instituto Nacional de Salud Pública, 5CISEI-Instituto Nacional de Salud Pública

Resumen

Las moléculas D7 son abundantes en la saliva de diversas especies de mosquitos y se les ha

relacionado con proteínas de unión a componentes aromáticos que se desprenden de los
alimentos y del hábitat. En este trabajo estudiamos el cDNA relacionado con D7 en glándulas
salivales de An. albimanus (AnaD7r). AnaD7r se aisló de una genoteca de glándulas salivales
de An. albimanus y está presente sólo en glándulas salivales del mosquito adulto hembra y
no en otros órganos. La proteína deducida de AnaD7r tiene un tamaño molecular de 16.6
kDa y un pI de 7.6. AnaD7r contiene un péptido señal y probables sitios de fosforilación.

Abstract

The D7 molecules are abundant in the saliva of different mosquitoes species. D7 proteins has
been related to the odourant-binding proteins associated with food and habitat. In order to
know about the D7 proteins in the An. albimanus mosquito, a D7-related cDNA isolated from
a salivary glands cDNA library of An. albimanus (AnaD7r) was studied. AnaD7r is a salivary
gland-specific molecule expressed in the female adult mosquitoes and was absent in others
mosquito organs. The molecular weight of AnaD7r is 16.6 kDa and the isoelectric point of
7.6. AnaD7r have a signal peptide and putative phosphorylation sites.

Introducción quitos transmiten los parásitos del género Plasmo-

Entre los insectos hematófagos, los mosquitos son
los más importantes desde el punto de vista de salud
pública. Estos insectos pueden adquirir microorganis-
mos patógenos cuando se alimentan con la sangre
de un animal o de una persona infectada, los cuales
se desarrollan y reproducen en el interior del insecto,
y son transmitidos cuando éste inyecta su saliva en
un hospedero sano.
Los mosquitos son vectores de una gran variedad
de microorganismos patógenos como Plasmodium,
el virus del dengue y el virus del Nilo, entre otros.
Los mosquitos son organismos holometábolos
(metamorfosis completa) y pertenecen a la familia
Culicidae, suborden Nematocera y orden Diptera.
Dentro de la familia Culicidae se encuentra el géne-
ro Anopheles. Las hembras de este género de mos-
dium, que provocan malaria en el hombre. Las dife-
rentes especies de Anopheles se encuentran distri-
buidas en todo el mundo. En México, los vectores de
malaria son An. albimanus, An. pseudopunctipennis
y An. vestitipennis (Loyola, Arredondo, Rodríguez y
Bown, 1991).
Los ciclos sexual y esporogónico del Plasmodium se
producen en el mosquito Anopheles (Figura 1). El
producto del ciclo esporogónico son los esporozoítos,
los cuales invaden las glándulas salivales del mosquito
y permanecen allí hasta que son transmitidos a un
hospedero vertebrado (Vaughan, Noden y Beier, 1992).
Los mosquitos hembra de Anopheles tienen un par
de glándulas salivales y cada glándula está compuesta
de tres lóbulos, dos laterales idénticos y uno medio,
más corto y ancho, que están conectados a un ducto
salival común (Clements, 1992) (Figura 1). La glándula

28 I N V E S T I G A C I Ó N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AÑO 3, Nº3, DICIEMBRE 2004

 F a c u l t a d d e C i e n c i a y T e c n o l o g í a

salival contiene sustancias que antagonizan la respuesta hemostática en el vertebrado y permiten una rápida y
exitosa alimentación (Ribeiro, 1987; Ribeiro y Francischetti, 2003). La saliva de los insectos hematófagos contiene
al menos un anticoagulante, un antiplaquetario y un vasodilatador y, en muchos casos, existe más de una molécula
de cada categoría en un solo organismo.

En Anopheles se han descrito diversas moléculas salivales que actúan sobre la hemostasia, como la apirasa
(Cupp, Cupp y Ramberg, 1994) y la anofelina (Valenzuela, Francischetti y Ribeiro, 1999; Francischetti, Valenzuela
y Ribeiro, 1999), y una peroxidasa de ~65 kDa con actividad vasodilatadora (Ribeiro y Nussenzveig, 1993;
Valenzuela et al., 1999). Otras moléculas de la saliva de Anopheles ampliamente caracterizadas incluyen a
gp65 de An. albimanus (Montero et al., 2004) y D7, reportada originalmente en Aedes aegypti (James et al.,
1991) y actualmente descrita en algunas especies de Anopheles (Suwan, Wilkinson, Crampton y Bates, 2002).
También se han reportado proteínas relacionadas con D7 (D7r) en una gran variedad de dípteros hematófagos
(Valenzuela et al., 2002). D7 es una proteína de 37 kDa muy abundante en saliva y específica del mosquito
hembra adulto, pero su función aún se desconoce (Suwan et al., 2002).

En este trabajo se aisló el RNAm que codifica para una nueva proteína de An. albimanus, AnaD7r, y se estudió
su expresión en diferentes órganos y estadios de desarrollo de este mosquito vector.

Figura 1. Ciclo biológico de Plasmodium spp. en el mosquito vector

E GS

Tomado de Touray et al., 1992.

Cuando el mosquito se alimenta con sangre infectada de parásitos de Plasmodium, éstos llegan al estómago (E) del
vector, y las fases sexuales (gametocitos y ) (1) se desarrollan para formar los gametos (2). El gameto macho fertiliza
al gameto hembra y se produce el cigoto, éste se alarga (3) y da lugar a la formación del ooquineto, forma invasiva que
penetra las células epiteliales del estómago (4). En el exterior de este órgano se forma el ooquiste (5). En el interior del
ooquiste se producen, por división nuclear, miles de esporozoítos (6) que son liberados a la hemocele (HC) para invadir
selectivamente a las glándulas salivales (GS) (7), órgano en el que los esporozoítos permanecen hasta ser transmitidos a
un nuevo hospedero vertebrado durante una nueva alimentación del mosquito vector (8).

I N V E S T I G A C I Ó N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AÑO 3, Nº3, DICIEMBRE 2004 29

 F a c u l t a d d e C i e n c i a y T e c n o l o g í a
Metodología
Material biológico. Para el desarrollo de este
trabajo se utilizaron larvas, pupas y adultos hembras
y machos de una colonia de mosquitos An. albimanus
cepa franja blanca (Chan et al., 1994), establecida
en el Centro de Investigación de Paludismo en Tapa-
chula, Chiapas, México. También se utilizó una ge-
noteca construida a partir de cDNA de glándulas
salivales del vector An. albimanus hembra (Montero
et al., 2004).
Identificación del RNAm que codifica para D7r
de An. albimanus (AnaD7r). A partir de la genoteca
de cDNA de glándulas salivales de An. albimanus, se
aislaron clonas al azar y cada una de estas clonas de
cDNA se secuenciaron parcialmente con el sistema
Big Dye (Perkin Elemer) y se analizaron los productos
en el secuenciador automático ABI-PRISM™ (Perkin
Elmer). La secuencia del inserto de una de las clonas
se identificó como una molécula relacionada con D7,
la cual se le denominó AnaD7r y se eligió para conti-
nuar con este trabajo.
Digestión enzimática del plásmido que con-
tiene el cDNA que codifica para AnaD7r. El plás-
mido que contiene el cDNA de AnaD7r se digirió
con 1U de cada una de las endonucleasas Eco RΙ y
Xho Ι (Gibco-BRL, N.Y. USA) a 37 ºC durante 4 horas
y los productos se analizaron en un gel de agarosa
(Invitrogen, Nueva Zelanda, USA) al 1.5% adicio-
nado de 0.2 µg/ml de bromuro de etidio (Sigma,
St. Louis MO, USA).
Análisis de secuencia. Para el análisis y compara-
ción de secuencias, se utilizó el programa BLASTP
v.2.2.6 (Altschul et al., 1997), disponible en la página
Web del Centro Nacional para Información Biotecno-
lógica (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). El análisis del
probable producto de traducción, alineamientos y
posibles modificaciones postraduccionales de ese
producto, se obtuvo a través de los programas SIX-
FRAME, CLUSTALW (V.3.2) y PROSEARCH, respectiva-
mente, disponibles en la página Web del Centro de
Cómputo de San Diego (http://www.sdsc.edu). La
predicción del péptido señal se realizó mediante el
programa SPORT, disponible en su servidor Web
(http://psort.nibb.ac.jp/).
Extracción de RNA de diferentes órganos y
estadios de desarrollo de An. albimanus. Para
aislar RNA, los diferentes órganos del mosquito se
disectaron y se colocaron en Trizol™ (Gibco-BRL), así
como la cabeza y tórax de diferentes estadios de
30 I N V E S T I G A C I Ó N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AÑO 3, Nº3, DICIEMBRE 2004
desarrollo del mosquito. La extracción de RNA con
Trizol™ se hizo de acuerdo con las instrucciones del
proveedor. El RNA aislado de cada muestra se cuan-
tificó en un espectrofotómetro BECKMAN (modelo
DUR 640), a una longitud de onda de 260 nm.
Transcripción en reversa y reacción en cadena de
la polimerasa (RT-PCR). La expresión del gen AnaD7r
se estudió por medio de RT-PCR. Para cada reacción de
RT-PCR, se utilizó 1 µg de RNA de los diferentes órganos
y estadios de desarrollo de An. albimanus. La primera
cadena de cDNA se sintetizó con el iniciador AP
(5'-GGCCACGCGTCGACTAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTT-3')
y la retrotranscriptasa recombinante SuperScript II
(Gibco-BRL). Después de la transcripción en reversa
(42 ºC durante 50 min) y de la inactivación de la
enzima (70 ºC durante 15 min), se hizo una reacción
de amplificación de 35 ciclos con los parámetros
siguientes: 95 ºC, 20 s; 50 ºC, 20 s y 72 ºC, 1 min con
los iniciadores D7-N (5'-TGTGAACTGCGCCAGTACAC-3')
y D7-C (5'-GATCTGCCCGGCGTTGAATG-3').
Resultados
Identificación del cDNA de AnaD7r. Las clonas
aisladas al azar de la genoteca de cDNA de glándulas
salivales se secuenciaron en sentido y contrasentido. Se
analizaron las secuencias obtenidas, y una de ellas tuvo
alta homología con moléculas D7r de diferentes especies
de Anopheles existentes en la base de datos. Para
conocer el tamaño aproximado del cDNA que traduce
para AnaD7r, el plásmido que lo contiene se digirió con
las endonucleasas Eco RΙ y Xho Ι. Esta digestión produjo
un inserto con un tamaño de ~700 pb (Figura 2).
Figura 2. Digestión enzimática del plásmido pBluescript SK(+/-)
conteniendo el cDNA que codifica para AnaD7r
pb
— 2,900
— 700
carril 1 carril 2
El plásmido pBluescript se digirió con la enzima Eco RΙ y Xho Ι,
liberando un producto de ~700 pb. En el carril 1 se muestra el
marcador de número de pares de bases (100 bp DNA Ladder, Gibco-
BRL) y en el carril 2, el plásmido con el producto liberado.
 F a c u l t a d d e C i e n c i a y T e c n o l o g í a

Obtención de la secuencia completa del cDNA que codifica para AnaD7r. Para conocer la secuencia
completa del cDNA de AnaD7r, se diseñaron los iniciadores internos D7-N y D7-C (Figura 3A), a partir de la
secuencia de cDNA parcialmente secuenciada. Con estos iniciadores se llevaron a cabo reacciones de secuenciación,
lo que nos permitió completar la secuencia de nucleótidos del cDNA de AnaD7r. El cDNA completo de AnaD7r
consiste de 629 pb y codifica para un probable producto de traducción de 169 aminoácidos. La proteína AnaD7r
tiene un probable péptido señal de 20 aminoácidos y varios sitios probables de fosforilación (Figura 3A). El peso
molecular (PM) y el punto isoeléctrico (pI) teórico de la proteína AnaD7r madura son de 16.6 kDa y 7.6,
respectivamente.

Comparación de la secuencia de aminoácidos de AnaD7r con D7r de otros mosquitos vectores. El

probable producto de traducción del cDNA de AnaD7r se comparó con secuencias D7r disponibles en la base de
datos. AnaD7r tiene alta identidad con D7r3.2 (82%) y D7r3.1 (85%) de An. darlingi (Calvo, De Bianchi, James y
Marinotti, 2002), D7r3 de An. gambiae (57%) (Arca et al., 2002), D7r3 de An. arabiensis (60%) (Valenzuela et al.,
2002) y D7r4 de An. stephensi (58%) (Valenzuela et al., 2003). La identidad entre AnaD7r con D7r de otros
mosquitos Anopheles, se demostró mediante la alineación de las secuencias de aminoácidos de esas moléculas
(Figura 3B).

Figura 3. Representación esquemática y alineamiento de la proteína AnaD7r con D7r de otros mosquitos Anopheles

NH2 COOH

1 20 40 60 80 100 120 140 160

D7-N D7-C

En A se muestra un esquema del probable producto de traducción del cDNA de AnaD7r, el cual produjo una secuencia de 169 aminoácidos
(señalados en orden de 20 aminoácidos en la base del esquema). Dentro de esa secuencia se esquematiza el probable péptido señal (marcado
en gris) en la región N-terminal (NH2) y varios sitios probables de fosforilación (marcados en blanco) a través de la secuencia hasta la región
carboxilo terminal (COOH). D7-N y D7-C son los iniciadores internos que se utilizaron para completar la secuencia del cDNA. En B se muestra
el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de AnaD7r con D7r de An. darlingi (AndD7r 3) y An. gambiae (AngD7r-3 y AngD7r2) obtenidos
de la base de datos. Los aminoácidos idénticos entre esas secuencias se señalan con un asterisco(*).

I N V E S T I G A C I Ó N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AÑO 3, Nº3, DICIEMBRE 2004 31

 F a c u l t a d d e C i e n c i a y T e c n o l o g í a

Análisis de la expresión de AnaD7r en órganos y estadios de desarrollo de An. albimanus. Para

conocer la expresión de AnaD7r en diferentes órganos y estadios de desarrollo de An. albimanus, se hicieron
ensayos de expresión por RT-PCR. Este análisis nos sugiere fuertemente que AnaD7r se expresa específicamente
en la glándula salival del mosquito vector y no en otros órganos (Figura 4A). Con la misma estrategia, se
demostró también que AnaD7r se expresa solamente en mosquitos hembra adulto y no en machos o en
estadios más tempranos del desarrollo del mosquito hembra (Figura 4C).

Figura 4. Análisis de expresión por RT-PCR de AnaD7r

Para analizar la expresión de AnaD7r en los órganos de mosquitos hembras de An. albimanus y de mosquitos machos completos de la misma
especie, se aisló RNA total de glándulas salivales (GS), estómagos (E), ovarios (Ov), cadáveres (Cad) y machos completos (M). A. Para el análisis
por estadios de desarrollo se obtuvo el RNA de larvas de 2º (L2), 3º (L3) y 4º (L4) estadio, pupas (P) y adultos hembra (AH) de An. albimanus.
B. Las reacciones de amplificación se hicieron con los iniciadores D7-N y D7-C. Para verificar la calidad del cDNA, cada una de las muestras se
amplificaron con un gen de expresión constitutiva, actina (B y D).

32 I N V E S T I G A C I Ó N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AÑO 3, Nº3, DICIEMBRE 2004

 F a c u l t a d
Discusión
Las glándulas salivales de mosquitos vectores son
órganos que hospedan a los parásitos antes de que
éstos sean transmitidos a un hospedero vertebrado.
Además, esos órganos contienen moléculas que le
facilitan al vector la alimentación con sangre al
mismo tiempo que muchas de las moléculas saliva-
les son transmitidas, junto con los parásitos, al
hospedero vertebrado (Ribeiro, 1995). Sin embargo,
la función de muchas de esas moléculas aún se
desconoce.
En este trabajo se reporta el estudio del cDNA que
traduce para una proteína relacionada con D7 (D7r)
en el mosquito vector de la malaria An. albimanus
(AnaD7r). La molécula D7 –reportada por vez
primera en la glándula salival de Ae. aegypti (James
et al., 1991)– tiene un PM de 37 kDa, mientras que
las D7r de mosquitos Anopheles oscilan entre los
15-18 kDa (Valenzuela et al., 2002). AnaD7r tuvo
el mayor porcentaje de identidad con D7r3-1, una
molécula relacionada con D7 de An. darlingi
(AndaD7r3-1) con un PM de 16.4 kDa y un pI de 5.4
que se expresa específicamente en la glándula
salival de ese mosquito adulto hembra (Calvo et
al., 2002) y que recientemente lo identificaron
como una molécula implicada en la alimentación
con sangre (Calvo et al., 2004). AnaD7r tuvo un
patrón de expresión similar al identificado para la
mayoría de las D7r, excepto para AngD7r4, una D7r
de An. gambiae, que inicia su expresión a partir de
estadio de pupa tardía (Arca et al., 2002). El tamaño
molecular de AnaD7r (16.6 kDa) es muy similar al
observado para la mayoría de las D7r, incluyendo a
AndaD7r3-1; sin embargo, el pI es muy diferente
entre AnaD7r y AndaD7r3-1; esto corresponde a lo
observado por Valenzuela et al. (2002) en un
estudio sobre la familia de proteínas D7 en diferen-
tes dípteros hematófagos, lo cual sugiere que el
rango en los valores de pI para esa familia de pro-
teínas es muy amplio, desde 4.3 observado para
Anga-D7r3, hasta 9.6 para AeAe-D7Cclu23.
La función de D7 y D7r se desconoce, pero la pre-
dicción de estructuras secundarias y terciarias de la
proteína D7 de An. darlingi sugiere una similitud
con proteínas que se unen a componentes aromá-
ticos que se desprenden de los alimentos, del hábitat
y de substratos de oviposición (Breer et al., 1990).
Esta observación sugiere que D7 puede estar impli-
cada en el transporte de moléculas hidrofóbicas en
I N V E S T I G A C I Ó N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AÑO 3, Nº3, DICIEMBRE 2004
d e C i e n c i a y T e c n o l o g í a
la saliva del mosquito (Calvo et al., 2002), pero este
mecanismo de transporte no es exclusivo de mos-
quitos hembra (Breer et al., 1990). AnaD7r y D7r de
otros mosquitos Anopheles y Aedes contienen un
péptido señal en la región N-terminal, lo que nos
indica que esta familia de moléculas están destinadas
a ser secretadas (Suwan et al., 2002).
Conclusiones
A través del trabajo que aquí reportamos, obtuvimos
la molécula completa de cDNA que codifica para una
proteína relacionada con D7 en el mosquito vector
de la malaria An. albimanus, también analizamos
su localización y expresión en el mosquito. Con esto
hemos logrado un gran avance que nos permitirá
continuar con la expresión de AnaD7r recombinante
y realizar estudios bioquímicos que nos acerquen a
conocer la función de esa molécula salival.
Referencias
Altschul, S. F., Madden, T. L., Schaffer, A. A., Zhang, J., Zhang, Z.,
Miller, W. y Lipman, D. J. (1997). Gapped BLAST and PSI-BLAST
a new generation of protein database search programs. Nucl.
Acids Res., 25: 3389-3402.
Arcà, B., Lombardo, F., De Lara Capurro, M., Della Torre, A.,
Spanos, L., Dimopoulus, G., Louis, C., James, A. A. y
Coluzzi, M. (1999). Salivary gland-specific gene expression
in the malaria vector Anopheles gambiae. Parassitologia,
41: 483-487.
Breer, H., Boekhoff, I., Strotmann, J., Raming, K. y Tareilus, E.
(1990). Molecular elements of olfactory signal transduction
in insect antennae. En Schild, D. (Ed.), Information
processing of chemical sensory stimuli in physiological and
artificial systems (pp. 77-86). Berlín: Springer-Verlag.
Calvo, E., De Bianchi, A. G., James, A. A. y Marinotti, O. (2002).
The major acid soluble proteins of adult female
Anopheles darlingi salivary glands include a member of
the D7-related family of proteins. Insect Biochem Mol.
Biol., 32: 1419-1427.
Calvo, E., Andersen, J., Francischetti, I. M., De Lara Capurro, M.,
De Bianchi, A. G., James, A. A., Ribeiro, J. M. y Marinotti, O.
(2004). The transcriptome of adult female Anopheles
darlingi salivary glands. Insect Mol. Biol., 13: 73-88.
Chan, A. S. T., Rodríguez, M. H., Torres, J. A., Rodríguez, M. C. y
Villarreal, C. (1994). Susceptibility of three laboratory strains
of Anopheles albimanus (Díptera: Culicidae) to coindigenous
Plasmodium vivax in Southern Mexico. J. Med. Emtomol.,
31: 400-403.
33
 F a c u l t a d d e C i e n c i a y T e c n o l o g í a

Clements, A. N. (1992). The Biology of Mosquitoes (primera
edición). USA: Chapman y Hall.
Cupp, E. W., Cupp, M. S. y Ramberg, F. B. (1994). Salivary apyrase
in African and New World vectors of Plasmodium. Am J.
Trop. Med. Hyg., 50: 235-240.
Francischetti, I. M., Valenzuela, J. G. y Ribeiro, J. M. (1999).
Anophelin: kinetics and mechanism of thrombin inhibition.
Biochemistry., 38: 16678-16685.
Valenzuela, J. G., Francischetti, I. M. B., Pham, V. M., Garfield, M.
K. y Ribeiro, J. M. C. (2003). Exploring the salivary gland
transcriptome and proteome of the Anopheles stephensi
mosquito. Insect Biochem. Mol. Biol., 33: 717-732.
Vaughan, J. A., Noden, B. H. y Beier, J. C. (1992). Population
dynamics of Plasmodium falciparum sporogony in
laboratory-infected Anopheles gambiae. J. Parasitol., 78:
716-24.

James, A. A., Blackmer, K., Marinotti, O., Ghosn, C. R. y

Racioppi, J. V. (1991). Isolation and characterization of the
gene expressing the major salivary gland protein of the
female mosquito, Aedes aegypti. Mol. Biochem. Parasitol.,
44: 245-254.

Loyola, E. G., Arredondo, J. I., Rodríguez, M. H. y Bown, M. A.

(1991). Anopheles vestitipennis, The probable vector of
Plasmodium vivax in the Lacandon forest of Chiapas, Méx.
Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg., 85: 171.

Montero Solís, C., González Ceron, L., Rodríguez, M. H., Cirerol,

B. E., Zamudio, F., Possanni, L. D., James, A. A. y Hernández
Hernández, F. C. (2004). Identification and characterization
of gp65, a salivary-gland-specific molecule expressed in the
malaria vector Anopheles albimanus. Insect Mol. Biol.,13:
155-164.

Ribeiro, J. M. C. (1987). Role of saliva in blood-feeding by

arthropods. Ann. Rev. Entomol., 32: 463-478.

Ribeiro, J. M. C. (1995). Blood-feeding arthropods: live syringes

or invertebrates pharmacologists? Infect. Agents Dis. 4:
143-152.

Ribeiro, J. M. C. y Nussenzveig, R. H. (1993). The salivary catechol

oxidase/peroxidase activities of the mosquito Anopheles
albimanus. J. Exp. Biol., 179: 273-287.

Ribeiro, J. M. C. y Francischetti, M. B. (2003). Role of arthropod

saliva in blood-feeding: sialome and post-sialome
perspectives. Ann. Rev. Entomol., 48: 73-88.

Suwan, N., Wilkinson, M. C., Crampton, J. M. y Bates, P. A. (2002).

Expression of D7 and D7-related proteins in the salivary
glands of the human malaria mosquito Anopheles stephensi.
Insect Mol. Biol., 11: 223-232.

Valenzuela, J. G., Francischetti, I. M. y Ribeiro, J. M. C. (1999).

Purification, cloning, and synthesis of a novel salivary anti-
thrombin from the mosquito Anopheles albimanus.
Biochemistry, 38: 11209-11215.

Valenzuela, J. G., Charlab, R., González, E. C., De Miranda Santos,

I. K. F., Marinotti, O., Francischetti, I. M. B. y Ribeiro, J. M. C.
(2002). The D7 family of salivary proteins in blood sucking
diptera. Insect Mol. Biol., 11:149-155.

34 I N V E S T I G A C I Ó N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AÑO 3, Nº3, DICIEMBRE 2004