NVEL DE BIOSSEGURANA (NB) Existem quatro nveis de biossegurana: NB-1, NB-2, NB-3 e NB-4, crescentes no maior grau de conteno

e complexidade do nvel de proteo. O nivel de biossegurana de um experimento ser determinado segundo o organismo de maior classe de risco envolvido no experimento. Quando no se conhece o potencial patognico do OGM resultante, dever ser procedida uma anlise detalhada e criteriosa de todas as condies experimentais. (a) NVEL DE BIOSSEGURANA 1 - NB-1 : adequado ao trabalho que envolva agente com o menor grau de risco para o pessoal do laboratrio e para o meio ambiente. O laboratrio, neste caso, no est*Eseparado das demais dependncias do edifcio. O trabalho conduzido, em geral, em bancada. Os equipamentos de conteno especficos no so exigidos. O pessoal de laboratrio dever ter treinamento especfico nos procedimentos realizados no laboratrio e devero ser supervisionados por cientista com treinamento em Microbiologia ou cincia correlata. O organismo receptor ou parental classificado como classe de risco 1 deve ser manipulado nas condies especificadas para o Nvel de Biossegurana 1. Apenas os OGMs classificados no Grupo I podero ser trabalhados nas condies descritas para o NB 1. Os OGMs classificados no Grupo II devero ser manipulados sob as condies previstas para os Nveis de Biossegurana 2, 3 ou 4, conforme a classificao de risco do organismo receptor ou parental que deu origem ao OGM . PRTICAS MICROBIOLGICAS EXIGIDAS PARA O NB-1 O acesso ao laboratrio deve ser limitado ou restrito de acordo com a definio do Pesquisador Principal, quando estiver sendo realizado experimento. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas uma vez ao dia ou sempre que ocorrer derramamento de material vivel. Todo resduo lquido ou slido contaminado deve ser descontaminado antes de ser descartado, assim como todo material ou equipamento que tiver entrado em contato com o OGM. Deve-se utilizar dispositivo mecnico para pipetagem, pois imprprio e arriscado pipetar com a boca. proibido comer, beber, fumar e aplicar cosmticos nas reas de trabalho. Alimentos devem ser guardados em reas especicas para este fim, fora do laboratrio. Antes de deixar o laboratrio, devem ser lavadas as mos sempre que tiver havido manipulao de organismos contendo DNA/RNA recombinante. Objetivando a prtica de higiene pessoal, pias para lavagem das mos e roupas para proteo (uniformes e jalecos) devem ser utilizados para minimizar o risco de exposio ao OGM. PRTICAS LABORATORIAIS ESPECIAIS PARA O NB-1 Materiais contaminados s podem ser retirados do laboratrio em recipientes rgidos e `a prova de vazamentos. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle de insetos e roedores. EQUIPAMENTOS DE CONTENO EXIGIDOS PARA O NB-1 Em geral para o NB-1 no so exigidos equipamentos de conteno de agentes classificados no Grupo de Risco I. INSTALAES LABORATORIAIS PARA O NB-1 O laboratrio deve ser desenhado de modo a permitir fcil limpeza e descontaminao. recomendvel que a superfcie das bancadas seja impermevel `a gua e resistente a cidos, lcalis, solventes orgnicos e a calor moderado. Os espaos entre as bancadas, cabines e equipamentos devem ser suficientes de modo a permitir acesso fcil para limpeza. Cada laboratrio deve possuir uma pia para lavagem das mos.

(b) NVEL DE BIOSSEGURANA 2 - NB-2 : semelhante ao NB-1 e adequado ao trabalho que envolva agentes de risco moderado para as pessoas e para o meio ambiente. Difere do NB-1 nos seguintes aspectos: (1) O pessoal de laboratrio deve ter treinamento tcnico especfico no manejo de agentes patognicos e devem ser supervisionados por cientistas competentes; (2) O acesso ao laboratrio deve ser limitado durante os procedimentos operacionais; (3) Determinados procedimentos nos quais exista possibilidade de formao de aerossis infecciosos devem ser conduzidos em cabines de segurana biolgica ou outro equipamento de conteno fsica. Todo OGM classificado no Grupo II e originado a partir de receptor ou parental classificado na classe 2 deve obedecer aos parmetros estabelecidos para o NB-2. PRTICAS MICROBIOLGICAS EXIGIDAS PARA O NB-2 As prticas microbiolgicas exigidas para o NB-2 so as mesmas j descritas para o NB-1. PRTICAS ESPECIAIS PARA O NB-2 Alm das prticas especiais descritas para o NB-1 devem ser includas para o NB 2 as prticas a seguir discriminadas: O Pesquisador Principal tem a responsabilidade de limitar o acesso ao laboratrio. Cabe ao Pesquisador Principal a responsabilidade de avaliar cada situao e autorizar quem poder entrar ou trabalhar no laboratrio. O Pesquisador Principal deve estabelecer polticas e procedimentos com ampla informao a todos que trabalhem no laboratrio sobre o potencial de risco relacionado ao trabalho, bem como sobre os requisitos especficos para entrada em laboratrio e em salas onde ocorra manipulao de animais. No interior do laboratrio, os frequentadores devem utilizar roupas apropriadas tais como jalecos, gorros, mscaras etc. Antes de sair do laboratrio para reas externas (biblioteca, cantina, escritrio administrativo), a roupa protetora deve ser retirada e deixada no laboratrio. Quando organismos contendo molculas de DNA/RNA recombinantes estiverem sendo manipulados so exigidos requisitos especiais para a entrada de pessoal no laboratrio (por exemplo a vacinao). Deve ser colocado um aviso sinalizando o risco, identificando o agente e o nome do Pesquisador Principal, endereo completo e diferentes possibilidades de sua localizao ou outra pessoa responsvel. Todos os requisitos necessrios para a entrada no laboratrio devem estar assinalados na porta de entrada. proibida a admisso de animais que no estejam relacionados ao trabalho em execuo no laboratrio. Cuidados especiais devem ser tomados para impedir contaminao da pele com organismos contendo molculas de DNA/RNA recombinantes; devem ser usadas luvas no manejo de animais em experimentao e sempre que houver possibilidade de contato da pele com o OGM. Todo lixo de laboratrio e da sala de animais deve ser adequadamente descontaminado antes de ser descartado. Agulhas e seringas hipodrmicas devem ser usadas somente para inoculao parenteral e para aspirao de fluidos de animais de laboratrio e de garrafas de diafragmas. Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa ou agulha e seringa em uma unidade nica nas atividades de injeo ou aspirao de fluidos contendo molculas de DNA/RNA recombinantes. Extrema precauo deve ser tomada quando forem manuseadas agulhas e seringas de modo a evitar a auto-inoculao e a produo de aerossis durante o uso e o descarte. As agulhas no devem ser entortadas, quebradas, recapeadas ou removidas da seringa aps o uso. Agulha e seringa devem ser imediatamente colocadas em recipiente resistente a prova de perfuraes e descontaminados, preferencialmente autoclavados antes do descarte. Desaconselha-se a reutilizao de seringas. Derramamentos ou acidentes que resultem em exposio a organismo contendo molculas de DNA/RNA recombinante devem ser imediatamente notificados `a CIBio e `a CTNBio, com providncias de avaliao mdica, vigilncia e tratamento, sendo mantido registro dos acidentes e das providncias adotadas. Quando apropriado, dependendo do agente manipulado, para referncia futura, devem ser mantidas

amostras referncia de soro do pessoal do laboratrio ou de outras pessoas possivelmente expostas ao risco, inclusive pessoal de limpeza e de manuteno. Amostras adicionais de soro devem ser colhidas periodicamente dependendo do agente manipulado ou em funo das instalaes laboratoriais. Um Manual de Biossegurana deve ser preparado de acordo com as especificidades das atividades realizadas. Todo o pessoal deve ser orientado sobre os possveis riscos e para a necessidade de seguir as especificaes de cada rotina de trabalho, procedimentos de biossegurana e prticas estabelecidas no Manual. EQUIPAMENTOS DE CONTENO PARA O NB-2
Devem ser utilizadas cabines de segurana biolgica (Classe I ou II), conforme Apndice 4, ou outro dispositivo de conteno pessoal ou dispositivos de conteno fsica sempre que:

(a) sejam realizados procedimentos com elevado potencial de criao de aerossis, como centrifugao, triturao, homogeneizao, agitao vigorosa, ruptura por sonicao, abertura de recipientes contendo material onde a presso interna possa ser diferente da presso ambiental, inoculao intranasal em animais e em cultura de tecidos infectados; (b) altas concentraes ou grandes volumes de organismos contendo DNA/RNA recombinante. Tais materiais s podero ser centrifugados fora de cabines de segurana se forem utilizadas centrfugas de segurana e frascos lacrados. Estes s devero ser abertos no interior da cabine de segurana biolgica. INSTALAES LABORATORIAIS PARA O NB-2 As instalaes laboratoriais exigidas para o NB-2 devem atender as especificaes estabelecidas para o NB-1 acrescidas da seguinte exigncia: Uma autoclave deve estar disponvel para descontaminao no interior ou prximo ao laboratrio de modo a permitir a descontaminao de todo material previamente ao seu descarte. (C) NVEL DE BIOSSEGURANA 3 - NB-3: aplicvel aos locais onde forem desenvolvidos trabalhos com OGM resultantes de agentes infecciosos Classe 3, que possam causar doenas srias e potencialmente letais, como resultado de exposio por inalao. O pessoal do laboratrio deve ter treinamento especfico no manejo de agentes patognicos e potencialmente letais, devendo ser supervisionados por cientistas com vasta experincia com esses agentes. Todos os procedimentos que envolverem a manipulao de material infeccioso devem ser conduzidos dentro de cabines de segurana biolgica ou outro dispositivo de conteno fsica. Os manipuladores devem usar roupas de proteo individual. O laboratrio dever ter instalaes compatveis para o NB-3. Para alguns casos, quando no existirem as condies especficas para o NB-3, particularmente em instalaes laboratoriais sem rea de acesso especfica, ambientes selados ou fluxo de ar unidirecional, as atividades de rotina e operaes repetitivas podem ser realizadas em laboratrio com instalaes NB-2, acrescidas das prticas recomendadas para NB-3 e o uso de equipamentos de conteno para NB-3. Cabe ao Pesquisador Principal a deciso de implementar essas modificaes, comunicando-as a CIBio e CTNBio. PRTICAS MICROBIOLGICAS PARA O NB-3 Alm das prticas microbiolgicas estabelecidas para o NB-2, o trabalho com agentes de risco 3 exige que menores de 18 anos de idade no entrem no laboratrio. Se forem realizados experimentos com agentes que exigirem nvel de conteno inferior a NB-3, eles devem ser conduzidos de acordo com as prticas laboratoriais estabelecidas para o NB-3. PRTICAS ESPECIAIS PARA O NB-3 Alm das prticas estabelecidas para o NB-2 devem ser obedecidas para o NB-3 as prticas a seguir discriminadas: As superfcies de trabalho das cabines de segurana e de outros equipamentos de conteno devem ser descontaminadas sempre ao trmino do trabalho com molculas de DNA/RNA recombinantes.

Toalhas absorventes com uma face de plstico voltado para baixo, recobrindo as superfcies das bancadas, facilitam o trabalho de limpeza. Deve ser usado uniforme completo especfico para as reas de trabalho com OGM. proibido o uso dessas roupas fora do laboratrio. As mesmas devem ser descontaminadas antes de serem encaminhadas a lavanderia ou para descarte. Devem ser usadas mscaras faciais apropriadas ou respiradores nas salas onde so manipulados animais de experimentao. Animais de laboratrio em NB-3 devem ser mantidos em sistemas de confinamento parcial (sistemas de caixas com filtros e paredes rgidas ou sistemas de conteno de caixas equipados com radiao ultravioleta e refletores). Os sistemas convencionais de caixas s podero ser usados quando todo o pessoal utilizar dispositivos e roupas protetoras. Esses dispositivos devem incluir roupa completa do tipo escafandro e respiradores. Todo o pessoal dever tomar banho ao deixar essas reas de trabalho. As linhas de vcuo devem estar protegidas com filtro de ar com elevada eficincia (filtros HEPA, High Efficiency Particulated Air) e coletores com lquido desinfetante. EQUIPAMENTOS DE CONTENO PARA O NB-3 Cabines de segurana biolgica (Classes I, II ou III), ou outra combinao apropriada de dispositivos de proteo pessoal e conteno fsica devem ser usados em qualquer operao com OGM. Estas incluem manipulao de culturas e de material clnico ou ambiental, operaes de desafio de animais, cultivo de tecidos ou fluidos infectados de animais em experimentao ou ovos embrionados, e necropsia de animais em experimentao. INSTALAES LABORATORIAIS PARA O NB-3 O laboratrio dever estar separado das reas de trnsito irrestrito do prdio. exigido um sistema de dupla porta como requisito bsico para entrada no laboratrio a partir de corredores de acesso ou para outras reas contguas. A separao fsica entre laboratrio de elevada conteno e os demais laboratrios ou corredores de acesso, pode ser por sistema de dupla porta, com sala para troca de roupas, chuveiros, bloqueio de ar e outros dispositivos, para acesso ao mesmo em duas etapas. As superfcies das paredes internas, pisos e tetos devem ser resistentes a gua, de modo a permitir acesso fcil para limpeza. Toda a superfcie deve ser selada e sem reentrncias, para facilitar limpeza e descontaminao. As superfcies das bancadas devem ser impermeveis a gua e resistentes aos cidos, lcalis, solventes orgnicos e a calor moderado. O mobilirio do laboratrio deve ser rgido, com espaamentos entre as bancadas, cabines e equipamentos para permitir acesso fcil para limpeza. Prxima `a porta de sada cada laboratrio deve ter pelo menos uma pia para lavar as mos. A torneira deve ter um sistema automtico de acionamento ou sistema de pedais. As janelas do laboratrio devem ser fechadas ou lacradas. As portas de acesso ao laboratrio ou ao mdulo de conteno devem possuir fechamento automtico. Deve existir autoclave para a descontaminao de resduos, localizada no interior do laboratrio ou em rea contgua, preferencialmente com sistema de dupla porta. O laboratrio deve ter um sistema de ar independente, com ventilao unidirecional, onde o fluxo de ar penetra no laboratrio pela rea de entrada. No deve existir exausto do ar para outras reas do prdio. O ar de exausto no deve, portanto, ser recirculado e dever ser filtrado atravs de filtro HEPA antes de ser eliminado para o exterior do laboratrio. Deve haver verificao constante do fluxo de ar no laboratrio. O ar de sada das cabines de segurana biolgica com filtros HEPA de elevada eficincia (Classe I ou Classe II) deve ser retirado diretamente para fora do edifcio por sistema de exausto. O ar de sada das cabines pode recircular no interior do laboratrio se a cabine for testada e certificada anualmente.

(d) NVEL DE BIOSSEGURANA 4 - NB-4: este nvel de conteno deve ser usado sempre que o trabalho envolver OGM resultante de organismo receptor ou parental classificado como classe de risco 4 ou sempre que envolver organismo receptor, parental ou doador com potencial patognico desconhecido. PRTICAS ESPECIAIS PARA O NB-4 Devem ser obedecidas as prticas especiais estabelecidas para o NB-3 acrescida das exigncias a seguir discriminadas: Nenhum material dever ser removido do laboratrio de conteno mxima, a menos que tenha sido autoclavado ou descontaminado, exceo feita aos materiais biolgicos que necessariamente tenham que ser retirados na forma vivel ou intacta. Suprimentos e materiais a serem usados no laboratrio devem ser descontaminados em autoclave de dupla porta, cmara de fumigao, ou sistema de ante-cmara pressurizada. O material biolgico vivel, a ser removido de cabines Classe III ou do laboratrio de conteno, deve ser acondicionado em recipiente de conteno inquebrvel e selado. Este, por sua vez, deve ser acondicionado dentro de um segundo recipiente tambm inquebrvel e selado, que passe por um tanque de imerso contendo desinfetante, ou por uma cmara de fumigao ou por um sistema de barreira de ar. Equipamentos ou materiais que no resistam a temperaturas elevadas devem ser descontaminados utilizando-se gases ou vapor em cmara especfica. Somente pessoas que trabalham no laboratrio devem ter permisso para entrar. O supervisor tem a responsabilidade final no controle do acesso ao laboratrio. Por questo de segurana o acesso ao laboratrio deve ser bloqueado por portas hermeticamente fechadas. A entrada deve ser controlada pelo Pesquisador Principal, ou por outra pessoa responsvel pela segurana do prdio. Antes de adentrar ao laboratrio as pessoas devem ser avisadas sobre o potencial de risco e instrulas sobre as medidas apropriadas de segurana. As pessoas autorizadas devem cumprir com rigor as instrues de procedimento para entrada e sada do laboratrio. Deve haver um registro, por escrito, de entrada e sada de pessoal, com data, horrio e assinaturas. Devem ser definidos protocolos para situaes de emergncia. A entrada e a sada de pessoal do laboratrio deve ocorrer somente aps uso de chuveiro e troca de roupa. A entrada e sada de pessoal por ante-cmara pressurizada somente deve ocorrer em situaes de emergncia. Para adentrar ao laboratrio a roupa comum, de rua, deve ser trocada por roupa protetora completa e descartvel. Antes de sair do laboratrio para a rea de banho, a roupa protetora deve ser deixada em rea especfica para descontaminao antes do descarte. Deve ser organizado um sistema de notificao de acidentes, exposio e absentesmo do pessoal do laboratrio, bem como um sistema de vigilncia mdica. Deve-se ainda, prever uma unidade de quarentena, isolamento e cuidados mdicos para o pessoal suspeito de contaminao. EQUIPAMENTOS DE CONTENO PARA O NB-4 As manipulaes com agentes de classe de risco 4, conduzidas no laboratrio, devem ser realizadas em cabine de segurana biolgica Classe III, ou cabines Classes I ou II, neste caso usadas em associao com roupas de proteo pessoal com presso positiva, ventiladas por sistema de suporte de vida. INSTALAES LABORATORIAIS PARA O NB-4 A unidade de conteno mxima deve estar localizada em prdio separado ou em rea claramente demarcada e isolada do edifcio. Devem ser previstas cmaras de entrada e sada de pessoal separadas por chuveiro. Deve ser previsto, ainda, um sistema de autoclave de dupla porta, cmara de fumigao, ou sistema de ventilao com ante-cmara pressurizada para o fluxo de materiais

para o interior do laboratrio. Paredes, tetos e pisos do laboratrio devem ser construdos com sistema de vedao interna, para permitir maior eficincia da fumigao, e evitar o acesso de animais e insetos. As superfcies internas do laboratrio devem ser resistentes a lquidos e produtos qumicos. O sistema de drenagem do solo deve conter depsito com desinfetante quSico eficaz para o agente em questo, conectado diretamente a um sistema coletor de descontaminao de lquidos. O sistema de esgoto e ventilao deve estar acoplado a filtros HEPA de elevada eficincia. O sistema de suprimento de luz, dutos de ar e linhas utilitrias devem, preferencialmente, estar posicionados verticalmente para evitar o acmulo de poeira. A descontaminao de material deve ser realizada por meio de sistema de autoclave de dupla porta com controle automtico, para permitir a retirada de material pelo lado oposto. Materiais e equipamentos que no possam ser descontaminados na autoclave devem passar por tanque de imerso com desinfetante, ou cmara de fumigao. O lquido efluente, antes de ser liberado do laboratrio, deve ser descontaminado com tratamento por calor. Os lquidos liberados de chuveiros ou de sanitrios devem ser descontaminados com produtos qumicos ou pelo calor. O sistema de ar no laboratrio deve prever uma presso diferencial e fluxo unidirecional de modo a assegurar diferencial de presso que no permita a sada do agente de risco. No sistema de ar devem estar acoplados manmetros, com sistema de alarme, que acusem qualquer alterao sofrida no nvel de presso exigido para as diferentes salas. O sistema de exausto dever estar acoplado a filtros HEPA de elevada eficincia. O ar liberado pelas cabines de segurana biolgica Classe I e Classe II pode ser eliminado para dentro ou fora do ambiente do laboratrio desde que no sistema de exausto esteja acoplado filtros HEPA. A cada seis meses as cabines biolgicas devem ser testadas e certificadas. A exausto de ar das cabines Classe III deve ser realizada sem recirculao usando sistema de dupla filtragem com filtros HEPA em srie, por sistema de exausto do laboratrio. O laboratrio deve ter local para o pessoal vestir roupas especficas com presso positiva e sistema de suporte de vida. O sistema deve prever alarmes e tanques de respirao de emergncia. O laboratrio deve ter chuveiro para a descontaminao quSica das superfcies da roupa antes da sada da rea. O ar deve ser insuflado atravs de filtros HEPA e eliminado para o exterior atravs de dutos de exausto, cada um com dois filtros HEPA colocados em srie e com alternncia de circuito de exausto automatizado. A entrada de ar de insuflamento dever estar protegida com filtro HEPA. Deve haver um sistema de descontaminao, com autoclave de dupla porta. As instalaes de filtros e esgotos devem estar confinados `a rea de conteno.
OGM a sigla de Organismos Geneticamente Modificados, organismos manipulados geneticamente, de modo a favorecer caractersticas desejadas, como a cor, tamanho etc. OGMs possuem alterao em trecho(s) do genomarealizadas atravs da tecnologia do DNA recombinante ou engenharia gentica. Na maior parte das vezes que se fala em Organismos Geneticamente Modificados, estes so organismos transgnicos. OGMs e transgnicos no so sinnimos: todo transgnico um organismo geneticamente modificado, mas nem todo OGM um transgnico. Um transgnico um organismo que possui uma sequncia de DNA, ou parte do DNA de outro organismo, pode at ser de uma espcie diferente. Enquanto um OGM um organismo que foi modificado geneticamente, mas que no recebeu nenhuma regio de outro organismo. Por exemplo, uma bactria pode ser modificada para expressar um gene bem mais vezes. Isso no quer dizer que ela seja uma bactria transgnica, mas apenas um OGM, j que no foi necessrio inserir material externo. Sempre que inserimos um DNA exgeno em um organismo esse passa a ser transgnico. Podem haver vantagens e desvantagens.