ART

A QUIMICA DOS
COMPOSTOS BIOLOGICOS

Itulo

pH E SOLUc;OES-TAMPAO

Neste capitulo sao discutidas algumas propriedades quimicas das solu<;:6esaqu a , como uma introdUl;:ao ao estudo da ionizac;:aodos eletr61itos fracos. Segue-se um 1 descric;:aode sistemas-tampao, apresentando-se exemplos de diferentes tamp6es. D I maneira, 0 estudante poden~ entender os diversos exemplos, que encontrara no d( correr do texto, de compostos ionizaveis e 0 efeito do pH sobre suas estruturc .

As celulas vivas contem carboidratos, lipideos, aminoacidos, proteinas, id II nucleicos, nucleotideos e compostos relacionados em quantidades variaveis. Emb r 1 ses compostos tenham um numero quase infinito de estruturas quimicas, sua ma sri constituida quase que inteiramente por somente seis elementos - carbona ( ), hidrogenio (H), oxigenio (0), nitrogenio (N), f6sforo (P) e enxofre (S). Alem dis do is dos elementos, hidrogenio e oxigenio, combinam-se para formar 0 mais abun dante componente celular, H20, que nao esta incluida dentro de quaisquer categoria ima mencionadas. Mais de 90% do plasma sanguineo e H20, 0 musculo cont 111 r a de 80% de H20 e a agua constitui mais da metade da maioria dos outros tecid . tnimais ou vegetais. Conquanto a H20 seja 0 mais abundante componente celular, e tambem Uill composto indispensavel a vida. Os nutrientes que a celula consome, 0 oxigenio u c do na oxidac;:ao dos mesmos e 05 proautos residuals formados sao todos transport d pela H20. Por essa razao e util notar que esse familiar composto quimico tem 1I11\ numero excepcional de propriedades que 0 faz peculiar e bem apropriado para (I desempenho como solvente da vida.

Muitas das propriedades fisicas da H20 sao singularmente excepcionais. id remos, por exemplo, 0 grupo de compostos que se encontrarn na Tab. 1 -1 . ompo (os pod em ser comparados com a H20, seja pelas suas boas propried ad Iventes ou porque eles tern 0 mesmo numero de eletrons (isoeletr6ni os). II HI p d ver, a H20 tern 0 mais elevado ponto de ebulic;:ao, 0 mais alto al r.p.((:III(,(I d Vtlp riza ao e tambem 0 ponto de fusao mais elevado de todos 111, OhiO!, I 1LI1in 'xpr U 0 comportamento anomalo da H20 de outra man ire, rnpm 111<10 II (' 111 hidr I S (I Illr 1m nl s do ,rllp VI d lAb 1,1I ri Ii ,( H,. 11,(,;'; 1 II, III I I III )Ido COll1 (W:'I, , l11illll II 10. II " porle Ii 1I11(l', ill{(111I11 lllli ,I II 0 'I'll
11111 111111111 II" Idlllill dO Ill'

100 ,,(

I III

1I1II1II

ill

I 100 ,,(

1011111 "I

OIl.IIVIl

I) ,1111111111\ h Ii

11111\

'I

'J' IH,h. \.1. AI un!u

P"oprl'dndos

flsi us du

{lgUIl

oulros

01111'0111011

P nl do fusao
(0C)

Ponto de ebulic;:ao (OC) 100 78 65 56 77 61 -33 -60 19

Calor de vaporizayao (cal/g) 540 204 263 125 102 59 327 132 360

Capacidade calorffica (cal/g) 1,000 0,581 0,600 0,528 0,459 0,226 1,120

Calor d fusao (cal/g) 80 24,9 22 23

II (
1111111 Mlllillol 1II0ill AI III 110(I lila ( 111101 Jll11i t J II, II " III -114 -98 -95 -84 -63 -78 -83 -92

84 16,7 54,7

1\ m I eula de agua e tortemente polarizada devido a eletronegatividade do I xigenio, que tende a atrair os elE!lrons dos atomos de hidrogenio, produzindo 11111' (. Hga eletropositiva efetiva em torno do pr6ton. Devido a essa polarizayao, as 111111 1;111, de agua comportam-se como dipolos, uma vez que elas podem ser orien11111 In ambas as direy6es como ions positivos e negativos. Essa propriedade da a I III I um ingular capacidade para atuar como solvente. Moleculas dipolares de agua I'lldl 111 netrar na rede cristalina formada pelos ions negativos e positivos, os quais o , lubilizados. Uma vez em soluyao, os ions com cargas positivas ou negativas I I 0 nv Ividos pelas eamadas protetoras de molecuJas de agua e a interayao existente 11I11t Iqu les Ions de cargas opostas sera, eonseqUentemente, diminuida. H levados pontos de ebuliyao e de fusao da agua e seu alto calor de vapo" II III 50 resultado de uma interayao entre moleculas de agua adjacentes, conhecida \1111111 Il ntes de hidrogenio. Em sfntese, 0 termo ponte de hidrogenio se refere inteI II 111 d um Momo de hidrogenio que esta covalentemente ligado a um Momo ele111'"11 Illivo com um segundo atomo eletronegativo. Ha uma tendencia do atomo de II tlllI I III a associar-se com um segundo atomo eletronegativo, compartilhando 0 I'll tli II II ns livres deste ultimo, formando-se uma Iigac;:aofraca de aproximadamente I I I, ,iI/IIIO!. [Em material biol6gieo. os dois atomos mais comumente envolvidos em 1'''1110 ill III Ir genio sao 0 nitrogenio (N) eo oxigenio (0).] Na agua liquida pequenas tll, '" II IIIlil6rias de moleculas de agua ocorrem devido a essa interac;:ao.
1IIlfliO

H" /H

O .... H-

H I _----9--H
:

'-- ..

-</ H
I H

utra pr pri dades ineomuns da flgua faz m-n um It1 I vivo. Por exemplo 0 calor especifieo da H20 num aria p ra I var a temperatura de 1 9 de flgua de 15 para 160 ionalm nle elevado em comparac;:ao com outros solventes (elanol, O. 8; m I 11I. ,0, ce tona, 0,53; elorof6rmio, 0,23; acetato de etila, 0,46). Somenle 0 da am nlu II "tiilll mais alto, 1,12. Quanto maior e 0 calor especffico de uma substan i , m n r variayao da temperatura que resulta quando uma determinada quantidad d I I absorvida por aquela substancia. Devido a isso, a agua e muito apropriada para ,Oil servar relativamente cor-stante a temperatura dos organismos vivos. Foi essa propri ctldl da flgua que fez dos oceanos um meio ideal para a origem da vida e a evoluy' (II formas primitivas. calor de vaporiza9ao da H20, como ja foi mencionado, e singularment lito Expresso como calor especifico de vaporizac;:ao (calorias absorvidas por gramo v p) rizada) 0 valor para a agua e 540 em seu ponto de ebulic;:ao e ainda mais elev d (111 temperaturas menores. Esse valor elevado e de grande utilidade para manter con l Ill! a temperatura dos organismos vivos, uma vez que uma grande quantidade d 0101 pode ser dissipada por vaporizac;:ao de H20. elevado calor de fusao da agua (80 cal/g, comparado com 25 para 0 I nol, 22 para 0 metanol, 17 para 0 H2S, 23 para 0 aeetona) e tambem de grande signif ,1l11I na estabilizac;:ao do meio ambiente biol6gico. Embora a agua da eelula ramnll 1111 se congele nos organismos superiores, 0 calor libertado pela agua ao se eong I II um dos fatores principais que diminui essa possibilidade de abaixamento da l mpl ratura de uma massa d~ agua durante 0 inverno. Assim, 1 9 de H20 deve perder 011 lilt vezes mais calor, ao congelar-se a OC, do que perderia ao passar da temper tuy 1 de 1 C para 0 C, exatamente antes de congelar-se. Pode citar-se, por ultimo, outra propriedade da agua com importancia biol6 I, t. que e 0 fato del a possuir densidade maxima a 4C. Isso a faz expandir-se ao 011 dificar-se, portanto 0 gelo e menos denso. Esse fenomeno e raro, mas a sua imporl n I em biologia foi reconhecida ha tempos. Se 0 gelo fosse mais pesado que a agua liquid I deveria afundar-se ao congelar-se. Isso significaria que os oceanos, lagos e rios se n gelariam do fundo para a superfieie e uma vez eongelados seria dificil fundir m I novamente. Essa situac;:ao tornaria impossivel a utilizayao das massas de flgua 1111 constituem 0 habitat de muitos seres vivos. que acontece, entretanto, e que a t\ )IJ , quente Iiquida vai para 0 fundo em qualquer lago e 0 gelo flutua na superfleie nlll o calor do meio ambiente facilmente pode fundi-Io. Outras propriedades adieionais da agua tais como alta-tensao supe.rficial e I vlld, eonstante dieletriea tem importaneia biologiea. Entretanto, aconselhamos que III dante consulte a publicac;:ao c1assieade L. J. Henderson, The Fitness of the Environlll/ /II, na qual esse problema e discutido com mais detalhe e em lugar disso diseutir m II mecanismo pelo qual a coneentrac;:ao do ion de hidrogenio (H +) e controlad I \111 soluy6es aquosas. Para esclarecer isso, revisaremos a lei de ar;ao das massas e 0 pr (111111 i6nico da agua.

I H

: 7 0"
H

1\ WI r ia necessana para romper a ponte de hidrogenio (4-10 kcal/mol) e muito 1III1IIIli quo a requerida para quebrar uma Iigayao covalente 0- H, e em soluyao 11111111 I d Ilidrogenio sao rompidas e formadas rapidamente. efeito aditivo das un," 11111 pont d hidrogenio e um dos principais fatores que explicam muitas da pr pri iI Iill In mun da H20. Assim, a energia extra necessaria para ferv r a a ua II flI11III " 11111. pocl " r Atribuida m rand pmt a grand num r ct JlOIlll jllf 111(1111 I 1110

m que dois reagentes A e B int ragem para formar dois produtos C r v r xpr ao

II

1IIIIIIIili

x .x
X _

1,01 x 10 '4 1,01 X 10 , .

II

x=CII+=C

=1,Ox10

~mol/litr.

m 1909, Sorensen introduziu 0 terrno pH como uma maneira onv ni nil (l<pr ar concentrac;ao de H + por meio de uma func;ao logaritmica; pH pdt d finido como pH = log -1

(II
I

all+

= -log

all +,

nd all' e definido como a atividade do H +. Neste texto nao se faz nenhuma di till ntre atividades e concentrac;6es, assim sendo, aA=CAxy, r (1-3) r a atividade e C A a concentrac;ao da substancia. 0 coeficiente de atium valor constante, mas varia segundo as condic;6es consideradas. Em muito baixas, 0 coeficiente de atividade se aproxima da unidade, por I dip qu na ou nenhuma interac;ao das moleculas do soluto entre si. Em uma () nlinita a atividade e a concentrac;ao sac iguais. Para a finalidade deste livro II tin uir mos atividades de concentrac;6es; fica quase sempre p ultimo term muitas reac;6es bioquimicas as concentrac;6es dos reagentes sac muito tidao nao sEm~ modificada de maneira apreciavel. AIl~m disso a concentrana maioria dos tecidos biol6gicos e aproximadamente 10 - 7 mol/litro e ntrac;ao 0 coeficiente de atividade sera igual a unidade. I I OCIAc;Ao A
It lUll

1 pH = log [H +] = -log

[H

+]

Alem disso as concentrac;6es serao indicadas utilizando-se colchetes. De , 101111 I, concentr;c;ao de H + (C II +) e representada como [H +]. Podemos mostrar a dif I( II 1 ntre atividades e concentrac;6es com 0 seguinte exemplo: 0 pH do HCI 0,1 M qu lIdo medido com um pH-metro e 1,09. Esse valor pode ser substituido na Eq. (1 - ), lJl1l I vez que 0 pH-metro mede as atividades e nao as concentrac;6es (veja 0 Ap ndi ( ~). 1,09 = log-, all+ all+=10-1,09, all + = antilog 2,91, all+ =8,1 x 10-2 mol/litro.

DA AGUA

E SEU PRODUTO

IONICO. Kw

um eletr61ito fraco e a sua dissociac;ao para formar H + e OH -

muito

Como a concentrac;:ao de H + no HCI 0,1 1', pode ser calculado,

Me
all+

0,1 mol/litro,

coeficiente de atlv d

1(11,

,Ill/Ill 1,

n tante de equilibrio para essa reac;:aode dissociac;:ao foi cuidadosamente 25C tem um valor de 1,8 x 10 -1 6 moles/litros. Ou seja, K eq CII+COII-=1,8x10-16.

y = [H +] , 0,081

=~
=0,81. ~ importante frisar que 0 pH e uma func;:ao logaritmica, portanto quan \( 0 I'll duma soluc;:iio diminui de 5 para 4, a concentrac;:iio de H + aumenta 10 VI/l lit 10 eM a 10 - . M. Quando 0 pH aumenta de 3 decimos de unidade, d ,0 111111 3 concentrac;:ao de H + diminui de 10 - 6 M para 5 x 10 - 7 M. , , J. aplicarmos agora a equac;:aodo pH ao produto 'J>.' lunlCO d a agua pura, It" 1'11111 , II utra expressao util: [H +] x [OH -] = 1,0 garitmo d
8
X

1120

ntrac;:i'lode H20 (CII20) na agua pura pode ser calculada como 1 000/18 /litro. Ja que a concentrac;:ao de H20 em soluc;:6es aquosas diluidas e imutavel, esse valor pode ser considerado constante. Com efeito, ele incorpora na expressao para a dissociac;:iio da agua, para dar

C II ' COli - = 1,8 x 10 -1 6 X 55,5 = 1,01 x 10 - ''', = K w = 1,01 x 10 - ''',

10-'4.

qutlC;
I

"'111 11/1111

I II III ; 1 I 10I

II

(1, 111,

I 9 [ H ) como pOH, de forma semelhante a de pH, teremos r 10 I na 0 pH e 0 pOH em qualquer solu<;:ao aquosa,

Iri Am nt n utI' I' a iu m H" para f rmor hidrAt d , H I, U I n d hidr6nio. Na t rmi, I gi d d I' n t d, p la ioniza<;:ao contribui com um prot n p ra f rmar H I, um novo acido de Bronsted, e 0 CI ,a ba

CHI (Acido conjugado) ,

I d fini<;:oes de acidos e bases, a de maior utilidade em bioqulmica e aquela I r Bron ted. Ele definiu um acido como qua/quer substancia que pode d" 1/ IJlI fillS, ums base como uma substancia que pode aceitar protons. Embora 111111 \ I Ilnl s de acidos, em especial aquela proposta POl' G. N. Lewis, sejam muito III" II I I, conceito de Bronsted deve ser detalhadamente compreendido pOl' estutlllllll <It bi qulmica. /\ (uint ubstancias indicadas esquerda da equa<;:ao sac exemplos de I III I elt (. n t d:

H20 (Base conjugada)2

H30" (Acido conjugado)2

CI

(Base conjugada),

Illir I'II1IHI II

Nesse caso, para formal' 0 ion na pratica, omitir do HCI, um acido

lembremos que nao s6 0 pr6ton fornecido pelo HCI hidrat II II de hidr6nio (H30 +), mas que 0 CI- tambem e hidratado. I1lll1ll a agua de hidrata<;:ao em rea<;:oesquimicas e representar a i nl,t! (I forte como uma simples dissocia<;:ao de acordo com a Rea<;:8 (1 )

HCI ----> H + + CI-, CH3COOH ---->H + + CH3COO -, NH; ----> NH3 + H +. 9 neralizada seria

Um acido fraco, em contraste com um acido forte, apenas parcialment em solu<;:ao aquosa. Considere-se a ioniza<;ao de um acido fraco generic HA (Acido conjugado), + H20 (Base conjugada)2

n 1 11111 HI\

spondentes

sac vistas abaixo

reagindo

com um pr6ton.

pr6ton doado pelo HA e recebido pela H20 para formal' H 30 +. A constante de equilibrio para essa rea<;:ao de ioniza<;ao constante de ioniza<;ao, K :on:

H30 + (Acido conjugado)2

A(Base conjugada),.
0

(1 10)

ion de hidr 111(), conhecida 011111

CI- + H + ---->HCI, CH3COO - + H + ---->CH3COOH, NH3+H+ ---->NH;. rr pondente para 0 acido fraco generico Aacido-base HA Como ja vimos, a concentra<;:ao de H20 em solu<;:ao aquosa e por si mesmA 11.1 I constante, 55,5 moles/litro; podemos assim combinar K,nn e [H20] para obi r (If.) I nova constante, K", K,,=K:on[H20]= Alem disso, devido [H30 +] ser igual que K" torna-se [H30 +] [A -] [HA] .

+ H+

---->

HA.

como segue: HA e 0 acido de Bronsted porque de A - e chamado de base conjugada porque acido HA. FORTES

concentra<;:ao de ion de hidrogenio,

VI 1110

IAyAO

DE ELETROLITOS

fortes sac substancias que, em solu<;:ao aquosa, sac quase comiados em particulas carregadas, conhecidas como ions. cloreto omo Na + e CI -, mesmo em forma cristalina ou s6lida. Podemos cia<;ao do NaCI como sendo completa, da seguinte forma:

Essa expressao POI' sua vez identica constante de equilibrio que p tel' escrito se HA fosse considerado como um acido fraco que se disso ia mente para fornecer pr6tons e anions de A -, HA H +

Na +CI -

---->Na + + CI -. dissociados (HCJ),

.

+ A-;
.

sac eletr61itos que estao quase completamente

=---cq

[H+] [A-] [HA]

1\ i01111 I (II 1111\' Ilil 11111 II III I 11111111111111 tOil

ell

fll11111P I (1111,III do 1I1111111:11 1,011111 IH1111 III II, IIl1dl III if 1111 II III HII 1I111I11

OH

B' + OH
b

IIII

1,1111111111111

PItIIIl'J [H ') [OH

K" [HA]

K I
Ii I

cq

=K

[B+) [OH-) =---[BOH)'

Iq

),

It 1110

] -K .,
K b [A [HA) ]

hidr6xido de am6nio (NH40H). a Kb e dada pelos manuais de quimica 11111111 I,ll 10 - 5. E impartante par essa razao admitir que a capacidade de dissocia<;ao Ii I Nil )11 e identica a do acido acetico (CH3COOH; Ka = 1,8 x 10 -5). A diferen<;a IIIIPIIII 1111(, naturalmente, e que 0 NH40H se dissocia para formar ions de hidroxila ( II ), "1uanto que 0 CH3COOH para formar protons (H +) e que 0 pH de solu<;6es 1,I M II as duas substancias nao apresentam semelhan<;:as. l J", los tipos de base fraca mais comumente encontrado em bioquimica e 0 Jllqlll iiI 11 minado aminas organicas (por exemplo, os aminogrupos dos aminoacjdos). I I 1.(1111) stos, quando representados pela formula geral R- N H2' nao contem grupos till ItldlO II s que possam se dissociar como na rea<;:ao(1 -15). Par outro lado, tais 1111111111 It podem se ionizar na H20 para produzir ions de hidroxila, IlNH2 (Base 1.011 llgada), Nil H20 (Acido conjugado) 2

[A

K,,Kb=K
ub tituindo
0

..

valor de K w a 25 oC, temos

RNH;
(Acido conjugado) ,

OH (Base conjugada)2'

log KG + log Kb = log Kw' -log KG -log Kb = -log Kw Entao, da mesma forma como pK" e pKb como -log KG e -log
0

pH foi definido como -log

[H +], podemo

d fill

Kb, respectivamente. A Eq. (1-25) fica

I It I 0, a H20 serve como acido, doando um proton para a base R-NH2. lJ II1do a defini<;ao de base como sendo uma substancia (A -) que aceita um Pi 111111, t undo Bronsted, podemos escrever a expressao geral

A(Base (, Iljugada), /\
Will I

H20 (Acido conjugado)2

HA
(Acido conjugado) ,

OH( Base conjugada)27 Henderson e Ha~selbalch aplicaram a lei da a980 das massas a ioniza<;" (I acid os fracos e obtiveram uma expressao muito util que se conhece como aqua 1(1 de Henderson-Hasselbalch; se considerarmos a ioniza<;:aode um acido fraco qual qUI r

nstante de equilibrio K10n para essa ioniza<;:ao pode ser escrita em analogia I q. (1-11) como [HA) [OH -)

HA.
HA H + +A -, [H+] [A-)
=---G

K,on=----[A -] [H20]

K,
[HA] [OW] ---[K]

Ion

=K

[HA)

K= " /\

q. (1 -19) pode ser usada para calcular a [OW] de uma solu<;:aode uma base 1 xtos de qUlmica apresentam os valores para a K" de tais substancias. 0 pOH pili ,II' v .' pode ser calculado e a partir dal 0 pH pode ser obtido [Eq. (1-8)]. Entre11111111 I xl ,t uma rela<;:aodireta entre a K" de uma base fraca e a K" de seu acido conju1111111 qlll util na obten9ao direta do pH de misturas de bases fracas e seus sais. Itl .olv ndo a Eq. (1-19) para [OH -]. temos

Ii

1111,

log [H +) = log KG + log

[HA) [A _]

Kb [A -]
[HA] -log -log K"
K" [HA]

[H+] =-logK,,-log--log [A ]/[HA] 1/\ ]

[HA] [A ] sub titui -log

dafinido como pK"

[HAJ/lA

J,

I(

I~' )

r/\ 1

I'll

pfililiol

111/\ I

(1'/

1 II

I pll IIIAI

I d, IIHill f)l p r" id 1 tlllill

till I

Ii'

cl 9 rol m njugado":

QU

II nd r n-H ' elbal I p d I ub titulmos [A ] pelo termo

como uma conjugada"

pH = pK

II

+ log

[Base conjugada] -------[Acido conjugado]

val r d x (v j Ap ndl 0,0042 M. A n ntr I 0,0042 M 0, 8 M. A 2 C Ima ociada ou ionizada som nte em 0,4%. 0 pH d Ion de hidrogenio e de 0,0042 M, pode pH = -log 0,0042 = -log (4,2 x 10 -3), = -log 4,2 -log 10 -3, =- 0,62 + 3, = 2,38.

sa expressao pode entao ser aplicada nao somente para os acidos fracos tal (: m acido acetico, mas tambem para a ioniza;:ao de ions de amenia e aqueles amiII grupos encontrados nos aminoacidos. Nesse caso, os NH; ou os aminogrupos pr lonados R-NH; saG os acidos conjugados que se dissociam para formar pr6tons I bases conjugadas NH3 e R-NH2, respectivamente NH; RNH; Apll Ando a Eq. (1 -28)

NH3

+ H +, RNH + H +.
2

ao aminogrupo

protonado, [RNH2] [RNH;]

temos

E possivel simplificar a solu;:ao da Eq. (1 -30). Considerando-se a ioniza;: solu;:6es relativamente concentradas de eletr61itos fracos, 0 denominador ~1 pode ser simplificado, deixando de corrigir a quantidade de acido que se dlsso .Ia uma vez que esta e muito pequena. No exemplo dado a quantldade que se dl . (somente 0,4%) pode ser desprezada. Quando essa aproxima;:ao e feita, tem
x2 = 1,8 x 10 - 5, x= .j18X 10-6, x=4,2 x 10-3,
[H +] = [CH3COO -] = 0,0042 M. Outra rela;:ao importante e salientada pelo calculo da concentra;:ao d quando a concentra;:ao do anion e igual a do acido fraco nao-dissociado., Tal r I existiria em uma solu;:ao preparada pela mistura de 0,1 mol de acetato de sodlo (8, com 0,1 mol de acido acetico (6,0 g) em agua suficiente para fazer 1 litro de solu Nessas condi;:6es, [CH3COO -] = [CH3COOH] = 0,1 M e quando esses valor substituidos na Eq. (1-13), [H +] [CH3COO-] --------= [CH3COOH] 1,8
X

[Ii

Manuais de bioquimica geralmente apresentam rela;:6es de K (ou pK para os lidos conjugados de substancias normal mente consideradas como bases (por exempi , NH40H, aminoacidos, animais organicas). Se isso nao acontece, 0 Kb [ou pKb; v j Eq. (1-19)] para a ioniza;:ao de base fraca sera certamente indicado e K (ou pK d ve primeiramente ser calculado, antes de empregar a equa;:ab geral de HendersonHasselbalch. Embora se tenha que tomar muito cuidado para identific-ar corretamente , pares acido-base conjugados naquela expressao, seu usa leva diretamente ao pH IJ misturas de bases fracas e seus sais.
II II ) II II)

10-5, 10-5
5,

Calculemos a concentra;:ao de H + em uma solu;:ao de acido acetico (CH3COOH) 1, M e determinemos entao 0 seu grau de ioniza;:ao a essa concentra;:ao. Antes de r: me;:armos, devemos considerar que se 0 acido acetico fosse total mente ionizado, mo 0 HC!. um acido mineral forte, a [H +] seria 1,0 mol/litro. Todavia, uma vez que Beido acetico e um acido fracamente ionizado, a Eq. (1 -13) deve ser empregada. eonsiderarmos x como a concentra;:ao de H + formado pela ioniza;:ao do acido Ii co, entao x tambem sera a concentra;:ao de CH3COO-, uma vez que esses do is I n ao formados em quantidades iguais quando 0 acido acetico se ioniza. A q'uanIklRde de CH3COOH restante, ap6s estabelecer-se 0 equilibrio da ionlza;:ao, sera de 1 x, consequentemente cdncentra;:ao iniclal (mol/litro) [CH3COOH] = 1,00, [H +] = 0,00, [CH3COO -] = 0,00,
II)

[H+] [0,1] =18x [0,1] ,

[H +] = 1,8 x 10 pH = 4,74.

pH = 5 - log 1,8,

concentra;:iio ap6s 0 equilibrio da loniza;:ao (mol/litro) [CH3COOH] = (1,00 -x), [H +] = x, [CH3COO -] = x. no equilibrio na expressiio para a ioniza;:ao

Dessa forma H + = K., quando a concentrac;:ao do anion do acido igual con (1\ tra;:ao do acido nao-ionizado. Como os diferentes acidos ,fracos tem dife~ nl (constantes de dissocia;:ao) as misturas equlmolares desses aCldos e seus sals pondentes, terao pH diferentes. _ ., Note que a equa;:ao de Henderson-Hasselbalch [Eq. (1-28)] nao ria ulll 110 calculo da [H +] de uma solu;:ao contendo apenas 0 Bcido fraco. Conludo no pr IJI 11111 em que calculamos a [H +] de uma mistura contendo aC,etalo de s6dio 0,1 ,M (10 acetico 0,1 M, a equa;:ao de Henderson-Hasselbalch e partlcularm nl ulll. NI' II caso a Eq. (1 -28) torna-se (1 '11)

lib tiluindo os valores existentes Id a etico, temos x2 --=

1 -

1,8 x 10-"

f:Ollt)C 11111

) tit 1/ dl

11111111111111111

d 1111

10 It II 1'1, I II, ( 11,1 )1 1I111'1I1 ,

(III,
dl'

III

11\lIltllll\ II

III I

),1 M
11.1111

'1/'1111', 11111 lit

1 pil II IlIIIIII

111111111

11111111111

I II,
", dl

,1 M mais a pequena quantidade a de ion de acetato produzido riormente mencionada. Portanto a Eq. (1-31) torna-se [0,1

+a]

pH = pKaHAC

+ log

[0,1 _ a]

Il1lb ra seja possivel calcular a, a quantidade e geralmente desprezivef e pode ser I JI1 rada. Essa aproxima9ao, juntamente com a aproxima9ao previamente introduzida III lituindo atividades por concemrayoes [Eq. (1-3)]. podem ser incorporadas na \ x r sac para a constante de equilibrio, usando-se uma constante de equillbrio (,orri ida, K~q' Essa constante mudara obviamente com a concentra9ao dos reagentes, 1 I' ondi90es para seu uso podem ser e:;pecificadas, geralmente em termos de forya K" para 0 acido acetico e 1,8 x 10 - 5 mol/litro; pKa e portanto -log (1,8 x 10 - 5) 1111 11,74. Substituindo esse valor e desprezando a, a Eq. (1-32) torna-se 0,1 pH =4,74+ log-, 0,1

() ( 'ludante deve se familiarizar com calculos em que se utilize a equa9ao de HendersonII I selbalch. No Apendice 1 existem problemas que ilustram seu uso.

A curva de titula9ao obtida quando 100 ml de CH3COOH 0,1 N e titulado com No H 0,1 N, mostrada na Fig. 1 -1. Essa curva pode ser obtida experimental mente 11 laborat6rio medindo-se 0 pH do CH3COOH 0,1 N antes e ap6s a adiyao de difeI nl s aliquotas de NaOH 0,1 N. A curva tambem pode ser calculada pela equa9ao de II nderson-Hasselbalch para todos os pontos exceto 0 primeiro, onde nao foi adi-

No H uillm, nd sa juntou uma quantidad N I H ,1 N (100 ml). Logicamente, a equat;:ao de Hend rson-Hass Ibel r II Ada para determinar 0 pH nos limites da titula<;ao, onde a r la<; Id z ro ou infinita. Con id rando a curva de titula<;ao do flcido acetico em seu aspecto ral, vamo visualmente que a mudan<;a de pH por unidade de alcali adicionado m XliII I n inlcio e no fim de titula<;ao, enquanto que a menor varia<;ao de pH por unldn ( d alcali adicionado e obtida com metade da titula<;ao completa. Em outras pal vr, uma mistura equimolecular de acetato de s6dio e acido acetido, mostra meno v I ria<;ao no pH, quando se junta um acido ou um alcali do que uma solu<;ao que cont nil, mais acido acetico ou mais acetado de s6dio. Denomina-se a980 tamponante a capacidade de uma solu<;ao de resistir 11111 dan<;as de pH, e pode-se demonstrar que uma solu<;ao tampao apresenta sua capa id Hit maxima quando atitula<;ao esta na metade, ou seja, quando 0 pH e igual ao pK" I q, (1-31 )]. Na Fig. 1-1 0 ponto de maxima a<;ao tamponante esta em pH 4,74. Outra forma de representar a condiyao que existe quando 0 pH de uma mi rur 1 de acido acetico e acetato de s6dio e igual ao pKa e estabelecer que 0 acido, n ( pH, esta 50% ionizado. Isto e, a metade do "acetato total" se encontra present II forma nao-dissociada de CH3COOH, enquanto que a outra metade esta sob f de ion de acetato, CH3COO -. Como no pKa qualquer acido fraco estara 50% i nl essa 6 uma das maneiras mais uteis para distinguir os diferentes acidos fraco, I K" tambem e uma propriedade caracteristica de cada acido, porque a constante dill za<;iio e uma funyao das propriedades inerentes do acido fraco. A curva de titula<;ao do HCI 0,1 N tambem esta representada na Fig. 1 -1 . A equA () de Henderson-Hasselbalch nao e utilizavel para calcular a curva do HCI, uma v III! ela se aplica somente aos eletr61itos fracos. Porem, 0 pH de qualquer ponto da curv do HCI pode ser calculado determinando-se os miliequivalentes de HCI que restarnl11 e corrigindo-se 0 volume. Dessa forma, quando foram adicionados 30 ml de NaOH 0,1 N, permaneceram 7,0 meq de HCI, em um volume de 130 ml. A concentra<;ao d H + seraportanto 7,0/130 ou 0,054 M. Se 0 coeficiente de atividade e desprezad , ) pH pode ser calculado a partir da Eq. (1-7) e e de 1,27. A curva 3 na Fig. 1 -1 e a curva de titulayao obtida quando 100 ml de N H4 CI 0,1 N sac titulados com NaOH 0,1 N. Nessa titulayao os pr6tons fornecidos pelo NH: 0 neutralizados pelos OH - provenientes do NaOH:

NH;

+ OH -

->

NH3

+ H 0.
2

Figura 100 ml ml de NH4Cl

I-I. Curvas de titu!a9ao de de CH3COOH 0,1 N (I), 100 HCI 0,1 N (2), e 100 ml de 0,1 N (3) com NaOH 0,1 N

Outra vez, a equac;;ao de Henderson-Hasselbalch nao e utilizavel para 0 calcul to pH da soluc;;ao de NH4CI antes da adic;;ao de NaOH. 0 pH dessa soluc;;ao pod (r calculado usando-se a Eq. (1-19) para se obter a [OH -] primeiramente. A [H I I. ou pH, po de entao ser calculada a partir das Eqs. (1 -5) ou (1 -8). Entretanto a equ 0 de Henderson- Hasselbalch pode ser empregada para determinar qualquer ponto d 1 curva quando algum NH4CI tiver sido neutralizado. Ate agora consideramos somente 0 acido monobasico, acido acetico. Os a Id polibasicos ou poliprot6nicos, comumente encontrados em bioquimica, sac acid capazes de ionizar-se e liberar mais de um pr6ton por molecula de acido. Em cada a magnitude da dissociac;;ao dos pr6tons individuais pode ser descrita por um K (01" ou K". No caso do acido fosf6rico (H3P04) tres pr6tons podem ser obtidos na ionl7; () om pi ta de um mol d fl id

urn pM 0 .12 prim ir i nizac;:ao do H P "e de 50%; todavia Ira I ni c;: do H3PO" eja de 50% 0 pH devera ser de 12.32. A um fr qUentemente encontrado na cE'dula, 0 segundo pr6ton do H 3 PO" P 7.21) tara cerca de 50% dissociado. Nesse pH, ambos os mono e dianions III! ",' ido fosf6rico ou esteres fosfato estarao presentes aproximadamente em iguais 11111(, ntrac;:6es. Para 0 acido fosf6rico as duas especies ienicas predominantes serao II 1'0';- e H PO~ -. No caso do a-glicerol fosfato os do is ions seguintes estarao preIII1l em concentrac;:6es aproximadamente iguais a pH 7,0:
H H

HCOH I HCOH 0 I II HC-O-P-OH H I

0-

HCOH HtOH 0 I II HC-O-P-OH

6-

Muitos dos acidos organicos poliprotenicos; por exemplo, llllit esquema:

II

comuns encontrados no metabolismo intermediario acido succinico se dissocia de acordo com 0 se-

COOH I
CH,

H,

'<=P=K=".=;=4=,2=

tH, tH,

COO- + H+
=PK=",=;=S=,6="

tH, tH,

COO-

COOH

tOOH

too- +

H+

A apacidade de ionizac;:ao e uma propriedade importante de muitos comp f.1() 16gico . Acidos organicos, aminoacidos, protefnas, purinas. pirimidinas e . t f( f fatas sac exemplos de compostos bioquimicos que se ionizam em graus vari v m sistemas biol6gicos. Uma vez que 0 pH de muitos fluidos biol6gicos e pr6ximo d grau de dissocia<;:ao de alguns desses compostos pode ser total. Cons qU mente. a primeira ioniza<;:ao do H3PO" sera completa; a segunda ionizac;:ao (pK", era de 50% aproximadamente. Uma das propriedades qualitativas caracterfsticas de uma molecula e 0 pK" It qualquer grupo dissociavel que ela possui. Por essa razao, a determina<;:ao exp rim nllli do pK" de grupos dissociaveis e um procedimento importante na descric;:ao de IIi! priedades de uma substancia desconhecida. 0 pK" pode ser determinado no lab rOllllll. medindo-se experimental mente a curva de titula<;:ao com um pH-metro. A medid qlll quantidade~conhecidas de alcali ou de acido sac adicionadas a uma soluc;:ao-probl\ 11111, o pH e determinado, e 0 gratico da curva de titula<;:ao pode ser construido. A p.lI t i dessa curva 0 ponto de inflexao (pK,,) pode ser determinado por metodos adequndu

Na celula a pH 7,0 0 acido succinico existira predominantemente como 0 dianion C -CH2 -CH2 COO -. Alem disso a maio ria dos acidos organicos que atuam IPlllO metab61icos (por exemplo: acido palmitico, lactico e piruvico) estao presentes 1111'10seus anions (palmitato, iactato e piruvato). Isso levou ao usa dos nomes dos 1/l1I.\' quando esses compostos sao discutidos em bioquimica. Contudo ao escrever II I' es quimicas serao utilizadas neste livro as formas do acido nao-dissociado. Na Tab. 1 -2, aparece a relac;:aodos pK" para os diversos acidos organicos comuns '1111 sao encontrados no metabolismo intermediario. Se ainda nao 0 fez ate agora, 0 estudante de bioquimica devera revisar seus co11111 .imentos de estequiometria quimica. Os significados de moleculas grama e equiv III nte grama (mol e equivalente, respectivamente) e 0 significado de molaridade. II 111olalidade, e de normalidade devem ser perfeitamente compreendidos. A bioquimica

acetico (CH3COOH) acetoacetico (CH3COCH2COOH) citrico (HOOCCH2C(OH)(COOH)CH2COOH) f6rmico (HCOOH) fumarico (HOOCCH = CHCOOH) DL-glicerico (CH20HCHOHCOOH) DL-Iactico (CH3CHOHCOOH) DL-malico (HOOCCH2CHOHCOOH) piruvico (CH3COCOOH) .11 Ini (HOOCCH2CH2COOH)

4,74 3.58 3,09 3.62 3,03 3,55 3.86 3,40 2.50 4.1

Com um conhecimento completo da ioniza<;:ao dos eletr61itos fracos e p discutir solu<;:6es-tampao. Uma solut;ao-tampfw (ou mistura-tampao ou SiSl 1111 -tampao) aquela que resiste a uma variat;ao do pH quando se adiciona acid alcali. Geralmente, uma solu<;:ao-tampao consiste de uma mistura de acido fra Bronsted e sua base conjugada; por exemplo, misturas de acido acetico e aeet t s6dio ou de hidr6xido de amenia e cloreto de amenio sac soluc;:6es-tampao. Existem muitos exemplos da importancia das solu<;:6es-tampao em biolo capacidade de impedir mudan<;:as bruseas de pH e uma propriedade important organismos biol6gieos intatos. Os Iiquidos citoplasmaticos contem proteina solvidas. substratos organicos e sais inorganieos e resistem as mudan<;:as exe IV I do pH. 0 plasma sanguineo e uma solu<;:ao-tampao muito efetiva. feita quase idealm 1111 para conservar os valores do pH do sangue em 7,2-7,3, com varia<;:ao de 0.2 unidndl de pH; os valores situados fora desses limites sao incompativeis com a vida, P d I ter uma aprecia<;:ao, mais completa do poder tamponante das celulas vivas. s r 01 darmos que muitos dos metab6litos, que constantemente estao sendo produzid I utilizados pelas celulas. sao acidos fracos de Bronsted. Alem disso, todas as n7lm.11 que catalisam as rea<;:6esdas quais participam esses eletr61itos apresentam ua m Ixlill 1 ac;:ao catalitica dentro de limites definidos de pH. (Cap. 8). No laborat6rio, 0 bioquimico deseja examinar reac;:6es in vitro sob qu a variac;:ao de pH e minima. Ele obtem essas condic;:6es pelo u 0 d tamp i nt ,pr fereneialmente aqu I s in rtes as reac;:6 que inv ti Am, 1l0t!<m in Illir id frn, .. t Ii' m id f f ri . a Ii ,01111. ri~ 111111'4111 IIIl hll. ( , f, , ". 11j., <:011'0, 1111 1111.!liIiOln. III!, (hi Iroxil11l1li1) II) IIItlrlll 1 Ill() .( /11,1110 I( Ill( ) 11111 1111 III I 1111 d 11111 0 fill II 111111\ )1" I() I III1P 0 I t II,t I. 11111 III I 1111111 III H IIIIIt I I ilil I'll llllillil" I 1(11 I III 1111, III (liOI I 11111'111. N Illil

,,1"1

/I

urn mi tura de acido acetico (CH300H) Quinte rea;ao:

e acetato de potassio (CH3COOK)

ocorre

a rea;80 estabelece que 0 OH - reage com os pr6tons produzidos pela dissocia9ao acido fraco e formam H20,

Ao acrescentar alcali ha uma dissocia;ao adicional do CH3COOH para fornecer mais pr6tons e dessa forma conservar a concentra9ao de H + OU 0 pH sem variar. Quando se adiciona acido a uma solu9ao de tampao de acetato, se efetua a seQuinte rea9ao:

s pr6tons adicionados (em forma de HC!, por exemplo), combinam-se instantaneamente com 0 a~i~n CH3COO.- presente na mistura-tampao (como acetato de potassio) para formar 0 aCldo fraco nao-dlssoclado CH3COOH. Em conseqUencia, a mudan9a de pH resultante e muito menor do que ocorreria se a base conjugada estivesse ausente. Na discussao dos aspectos quantitativos da a9ao tamponante, veremos que do is fatores determinam a eficiencia ou capacidade tamponante da solucao. Um deles bviamente, e a concentra9ao molar dos componentes do tampao. A c'apacidade tam~ ponante e diretamente proporcional concentra9ao dos componentes do sistema. Aqui encontramos a conven9ao utilizada ao referir-se as concentra90es dos tampoes. A concentra9ao de um tampao refere-se soma das concentra90es do acido fraco sua base conjugada. Dessa forma, um tampao de acetato 0,1 M, pode conter 0,05 mol de acido acetico e 0,05 mol de acetato de s6dio em um litro de H20. Tambem pode onter 0,065 mol de acido acetico e 0,035 mol de acetato de s6dio em um litro de H 0. segundo fator que influi na eficiencia de uma solu9ao-tampao e a rela;iio ,ntr~ a concentra9.ao de base conjugada e do acido fraco. Pode se observar que, quantit t1vamente, a solu9ao-tampao mais eficiente sera aquela que tiver a mesma con,ontrat;iio de acido e de base, uma vez que essa mistura pode proporcionar igual quanfldade de componentes acidos e basicos para reagir com base e acido, respectivamente. bservando a curva de titula9ao do acido acetico (Fig. 1 -1), analogamente, pode-se v r que a mudan9a minima no pH resultante da adi9ao de uma unidade de alcali (ou Ido) ocorre no pK" do acido acetico. Nesse pH ja vimos que a rela9ao de CH3COOp ra CH3COOH e 1. Por outro lado, em valores de pH distantes do pK (e portanto m rela;oes de base conjugada para acido bem diferentes da unidade)", a mudan9a 11 pH por unidade de acido ou alcali adicionado e muito maior. Conhecendo-se os do is fatores que influenciam a capacidade tamponante, poI mos decidir qual e 0 tampao mais eficiente para 0 valor do pH desejado, por exemplo, pH 5,0. Logicamente, deve selecionarse um acido fraco que tenha pK" de 5,0. Se nao e possivel, 0 acido fraco que tenha pK" mais pr6ximo de 5,0 sera.0 mais adequ do. Alem disso, desejar-se-a a concentra9ao mais alta possivel, que seja comp lliv I com as caracteristicas do sistema, ja que as altas concentra90es de sais freII I nt mente inibe~ a atividade de enzimas e outros sistemas fisiol6gicos. A solubiI II let do componentes do sistema-tampao, tambem pode ser um fator limitante da ntra; QU e pode utilizar, 1\ ob. 1 r lu i na 0 pK" d f11 un 1 mp comument n ntrad

A ido acetico Acido carbl>nico Acido c1trico Acido 2- (N-morfolino) -etanossulf6nico (MES) Acido fosf6rico Acido fumarico Acido maleico Acido N - (2 -acetamido) - iminodiacetico (ADA) Acido N-2-hidroxietilpiperazina-N' -2etanossulf6nico (HEPES) Acido N- Tris- (hidroximetil) -metil-2-aminoetanossulf6nico (TES) Acido pirofosf6rico Cloreto de am6nio Dietanolamina Etanolamina Glicina I Glicilglicina Histidina Trietanolamina Tris- (hidroximetil)aminometano (Tris) Verona I (dietilbarbiturato de s6dio) Versene (acido etilenodiaminotetracetico)

10,3 4,7

Na Sec. 1.13, fez-se refen3ncia as diversas classes de compostos biol6gico I pazes de sofrer ioniza9ao; Qutros serao discutidos mais tarde. Pode-se perguntar (lll II desses compostos funcionarao, no organismo, como tampoes fisiologicamente impQI tantes. A resposta dependera de varios fatores, inclusive daqueles relacionad 111 se9ao precedente, ou seja, a concentra980 molar dos componentes do tamp I 1 rela9ao entre a concentra9ao da base conjugada e a do acido fraco. primeiro d i fatores ja excluiria diversos compostos encontrados no metabolismo interm cll. I iI, cujas concentra90es raramente sac elevadas, tais como os esteres fosf6ricos da gli II HI, os acidos organicos do cicio de Krebs e os aminoacidos livres. Nas plantas, entr t 1110, alguns acidos organicos - malico, citrico e isocitrico - podem acumular11 vacuolos e, nesse caso, desempenham um papel primordial no estabeleciment 10 pH daquela parte da celula. As leveduras tambem podem acumular conc ntr I relativamente altas de esteres fosf6ricos durante a glic6lise. Nos animais, existe um sistema-tampao complexo e vital no sangu ir componentes desse sistema sac: CO" -HC03-; NaH"P04 -Na"HP04.; 0 xi n da e d oxigenada dA h moglobina; e as protelnas plasmati a . D I mpnnt ra di ulld, rn. m pK,doH:a O~ ,1,Ar 11111 I.) 1 njllf) 11 klo Ir 10 ) prox mod 1111 nl . 1, n Itil rvnl 11 IIflll ,I! 'pll du 111 1111 , 1:11 1/1 I COil Hili 11111 Illi 1111 ,I pI r II I i I qlll 0 ,I t In I It, , 11.0,

ql/llIl (,I

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III,

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111 11II II 1111,

(I Ill,

H" 0 - HC03um tampao extrema mente importante para 0 sangue. xpll ado pelo fato de 0 acido fraco H2C03 entrar rapidamente em equillbrio 0.:1dissolvido no plasma (Eq. 1-33). Esse equillbrio e catalisado pela enzima carb6nica, encontrada nos gl6bulos vermelhos do sangue. H2C03 :;:=:C02 diss + H20. (1-33)

0.:1dissolvido, por sua vez, esta em equillbrio com 0 CO2 da atmosfera e, depenJ ndo dl;! pressao parcial de CO2 da fase gasosa, escapara para 0 ar (como nos pulm6es, onct 0 CO2 e expirado) ou penetrara no sangue (como nos tecidos perifericos, onde o CO2 e produzido pela respira<;ao das celulas). Assim, 0 sistema-tampao H CO _ 3 HCO; funciona, nao pela altera<;ao da razao 20:1 entre base conjugada (HC0 3-): ,Id fraco (H2CO;), mas, pelo contrario, mantendo essa razao como 20:1 e aumenIllIdo ou diminuindo a quantidade total dos componentes do tampao (H2C03 + HC03-). outro tampao importante do sangue e constitufdo pelas duas formas da hemo"nhlna (hemoglobina oxigenada, HHb02, e hemoglobina desoxigenada, HHb). Sua , Ip I Idade tamponante, que se deve aos grupos imidaz61icos dos residuos de histidina , I tontes em ambas as formas, e muito maior do que a das protefnas plasmaticas, uII, <;ao tamponante se deve a diversos grupos dissociaveis nelas encontrados. A " moglobina de um litro de sangue pode tamponar 27,5 meq de H +, ao passo que protefnas plasmaticas neutralizarao apenas 4,24 meq de H +. As duas form as da moglobina tambem diferem em seus pKa; HHb02 e 0 acido mais forte e se dissocia m um pKa1 de 6,2:

rfl mid pora AdA mid H[, " mp n nl da lu<; o-tam'pao ora d bo onjug do H, larnpao d aCGlalO0,1 M contera 0,1 mol d DC tato a Id 0 v ra 0,75 x 0,1 ou 0,075 moles de Ion de acetato pr nt. quantidade de Ion de acetato se encontra em 6,15 9 de acetoto d 6d n on qU ntemente, 0 componente acido sera de 0,25 x 0,1 ou 0,025 mol d fl (10 o ti 0, ou seja, 1,5 9 de acido acetico. Quando se mistura essa quantidad d Id() tico com acetato de s6dio e se complE}ta 0 volume para 1 litro, obteremos urn IIIf sOlu<;ao-tampao com a concentra<;ao e pH desejados. Sem duvida, na pratica, quando essa solUl;:ao e preparada cuidadosamente III pH medido com exatidao com um pH -metro, observa-se que 0 pH nao e 5,22. A prln cipal razao dessa discrepancia e que em nossos calculos usamos a concentra<;aO III lugar das atividades. Como 0 pH -metro mede precisamente a atividade de H"', , discrepancia nao e surpresa. Se necessario, 0 pH do tampao pode ser ajustado 001 acido ou alcali ate se obter 0 pH desejado. FreqUentemente ajustamos 0 pH d unl tampao concentrado, de tal forma que, quando ele e dilufdo 10 a 50 vezes em um xp rimento, 0 pH da mistura final de rea<;ao e conhecido precisamente. E uma pratica comum preparar-se uma mistura-tampao partindo-se de um do componentes do tampao desejado e preparando-se 0 outro componente pela adl 11 de acido ou base. Por exemplo, a amina prima ria tris- (hidroximetil)aminometano, 1111 "Tris", tem sido largamente usada como tampao em bioquimica. Essa amino rt I III com acido tara formar 0 sal de amina correspondente

7 % d 11m Iluo d bin Id ,h

(CH20H)3CNH2

+ H + :;:=:(CH20H)3CNH;.

r rtanto, nos pulm6es, onde a pressao parcial de O2 e alta, HHb02 predominara em r lo<;aoa forma desoxigenada, e 0 sangue tendera a se tomar mais acido. Nos tecidos p rifericos, onde a pressao parcial de O2 e relativamente mais baixa, havera predomi11 ncia de HHb, cujo pKa1 e mais alto (7,7), e 0 pH tendera a aumentar:
HHb:;:=:H++Hb-, pKa=7,7. as efeitos saD compensados pela baixa concentra<;ao de CO2 dos pulm6es em o ados tecidos perifericos, e os do is efeitos, em conjunto, saD os responsaveis 1",11 varia<;ao minima do pH do sangue. I

o pKa para a dissocia<;ao do acido formado e 8,0. Portanto considere-se a preparn<; de 500 ml de tampao "Tris" 0,5 M, pH 7,4. A rela<;ao de base conjugada par 6 IdQ nesse tampao sera encontrada como segue:
pH = pKa

+ log +

base ---;-:--d ' aCI 0

"I'

7,4 = 8,0 -0,6=log

[(CH20H)3CNH2] log [(CH 0H)3CNH 2 [amina livre] [salacido] , [sal acido] . I' ]' amma Ivre

;r
(1.

,10 acetato 0,1 M, pH

Consideremos agora 0 problema prMico da prepara<;ao de um litro de tampao = 5,22. 0 primeiro passo e determinar a rela<;ao de base con!lIgada (ion de acetato) e do acido fraco (acido acetico) nessa solu<;ao-tampao. Ela pode ser calculada por meio da equa<;ao de Henderson-Hasselbalch: [CH3COO -] [CH3COOH] [CH3COO -] [CH3COOH] [CH3COO -] [CH3COOH] [CH3COO -] [CH3COOH] [CH:,COO -] I
= 5,22 - 4,74 = 0,48,

0,6 = log [

4=

[sal acido] [amma livre]

A partir disso, a composi<;ao desejada desse tampao "Tris" sera 4/5 ou 80% do tamp () total como sal acido e 20% como amina livre. Como 500 ml de tampao 0,5 M ont( III 0,25 mol de "Tris" (sal e amina livre), 0 tampao contera 0,8 x 0,25 ou 0,2 m I dll sal acido e 0,05 mol de amina livre. Para preparar 0 tampao, podemos pesar 0,2 111111 (30,2 g) da amina s61ida (P.M. = 121) e adicionamos 0,20 mol de HCI (200 ml (II HCI 1 N) e completa-se 0 volume para 500 ml. Alguns problemas adicionais de solu<;6es tamponantes, podem ser encontr dl no Ap~ndice 1.

II,

111