Curva de Crecimiento de Bacterias Filamentosas

RESUMEN: Objetivo: Evaluar el crecimiento de Streptomyces sp. en funcin del tiempo Metodologa: para evaluar el crecimiento de Streptomyces sp se realizaron diluciones 10-1 hasta 10-10, luego de esto fueron inoculadas cajas de petri con agar ISP2, con el propsito de emplear la tcnica de recuento en placa para Streptomyces sp y de esta manera determinar la concentraciones a diferentes horas de la fermentacin. Resultados: Cuando se inici la curva de crecimiento del microorganismo se observ que la bacteria tuvo una fase de adaptacin de 48 horas, en donde el microorganismo se pudo desarrollar con facilidad, adems de esto, se observa un decrecimiento en la grfica lo cual representa la fase de muerte en la hora 72. Conclusin: Se logr evaluar el crecimiento de Streptomyces sp. en funcin del tiempo. Palabras Claves: Streptomyces sp, Recuento en placa, Biomasa. INTRODUCCIN Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso contina hasta que algn nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene. Tambin puede detenerse el crecimiento por acumulacin de alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos, pero se supone por ahora que ste no es el caso y que la primera alternativa es la vlida. Luego hay dos aspectos claramente diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno estequiomtrico, por el cual la concentracin final de microorganismos obtenidos depender de la concentracin y composicin del medio de cultivo, y el otro cintico, el que dir con qu velocidad se lleva a cabo el proceso.1 El crecimiento se puede considerar como el aumento ordenado de todos los constituyentes qumicos de un organismos, lo cual, para los organismos unicelulares, conduce a un aumento en el nmero de individuos en la poblacin [2].

Crecimiento Microbiano. Cap 5.

Para evaluar el crecimiento de bacterias filamentosas se debe disponer inicialmente de una cantidad de cultivo suficiente para inocular el medio del fermentador; adems debe ser metablicamente activo y estar libre de contaminantes [3]. La cintica de crecimiento microbiano constituye una de las operaciones ms utilizadas por la ingeniera alimentaria y la biotecnologa, por lo tanto, es menester conocer los diferentes mecanismos de crecimiento, as como, la forma de cuantificacin de los mismos, sus formas de aplicacin, las ventajas y desventajas de los diferentes mtodos, y sobre todo el monto econmico de cada uno de ellos. los mtodos directos (recuento del numero de clulas, peso celular, determinacin de dna) y mtodos indirectos (consumo de oxigeno, tcnicas colorimtricas, medida de turbidez).[6] Actualmente se estudian los problemas ms complejos y difciles del crecimiento y de la divisin celular utilizando microorganismos, especialmente bacterias. las clulas de muchos de estos seres crecen individualizadas, separndose despus de la divisin celular y por ello resulta difcil cultivar y aislar organismos unicelulares en condiciones bien definida. [4] streptomyces se caracteriza por poseer una morfologa particular en donde se diferencian dos formas de crecimiento, una primaria o asimilatoria y una secundaria o reproductiva. el gnero es de gran importancia biotecnolgica debido a que como metabolitos secundarios produce antibiticos que son de amplio uso en medicina humana y veterinaria, as como compuestos represores de tumores, enzimas y vitaminas (4). a pesar de la importancia de streptomyces como uno de los elementos caractersticos de las poblaciones microbianas edficas, se conoce poco acerca de su comportamiento. siendo reconocida la necesidad actual del estudio de la distribucin del gnero en diferentes regiones climticas y ecolgicas. (4) El objetivo de este trabajo fue realizar una curva de crecimiento para bacterias filamentosas como lo es Streptomyces, determinando biomasa viable mediante la tcnica de dilucin decimal y recuento en placa y observar los cambios morfolgicos en funcin del tiempo [7]. MATERIALES Y MTODOS Recuento de Viales en Funcin del Tiempo. A partir de una alcuota correspondiente a la hora de crecimiento se realizaron diluciones seriadas hasta 10-1-10-10. posteriormente se sembr en superficie en agar isp2 0,1ml de cada una de las diluciones, se homogenizo e incubo por 24 horas a 30c. Al terminar el periodo de incubacin se realiz recuento de colonias [7].

RESULTADOS A partir de las suspensiones obtenidas se realiz la coloracin de Gram para determinar la pureza de la muestra y se determinaron caractersticas microscpicas y macroscpicas las cuales estn consignadas en la tabla 1. Tabla1. Caracteristicas Macro y Microscopicas de las colonias de Streptomyces sp en agar ISP2. CARACTERSTICAS MACROSCPICAS CARACTERSTICAS MICROSCPICAS

TIEMPO (H)

48

Color anverso: blanco grisceo Color reverso: cafe Textura: correosa y pulverulenta

BACTERIA FILAMENTOSA GRAM POSITIVA. MICELIO VEGETATIVO SIN SEPTOS.

Fuente: [7] El crecimiento de Streptomyces sp se evalu en diferentes intervalos de tiempos, determinando en cada uno de los tiempos las unidades formadoras de colonias presentes, el resultado de esto se encuentra representado en la tabla 2. Tabla2. Biomasa en funcin del Tiempo

HORA

RECUENTO N.D.

3x102 UFC/mL

11x104 UFC/mL 24 31x104 UFC/mL

10x104 UFC/mL 48 12x104 UFC/mL

72

30x104 UFC/mL

96
Fuente: [6]

79x104 UFC/mL

La Tabla 3 muestra las unidades formadoras de colonias en funcin del tiempo obtenidos en el control interno. Tabla 3. Biomasa en Funcin del Tiempo (Datos Control Interno) TIEMPO UFC/Ml

0 1,70E+04 24 9,10E+04 48 3,50E+04 72 5,60E+04 96 1,40E+04 Fuente: Blackboard Academic Suite.

Curva de crecimiento Streptomyces sp

1.00E+05 9.00E+04 8.00E+04 7.00E+04 6.00E+04 5.00E+04 4.00E+04 3.00E+04 2.00E+04 1.00E+04 0.00E+00 0 20 40 60 Tiempo 80 100 120

Grfico1. Curva de Crecimiento de Streptomyces sp a partir de los datos de Control Interno

UFC/mL

Curva de Crecimiento Streptomyces sp

1.00E+06 8.00E+05 UFC/mL 6.00E+05 4.00E+05 2.00E+05 0.00E+00 0 20 40 60 Tiempo 80 100 120

Grafico2. Representacin de las Unidades formadoras de Colonias en funcin del tiempo a partir de los datos obtenidos de los grupos de Laboratorio DISCUSION al observar el grfico 1 y el grfico 2 presentan ciertas similitudes, sin embargo, en los datos que se encuentran en el control interno hay un crecimiento mucho ms marcado que los datos obtenido por el grupo, sin embargo, los dos tienen un decrecimiento que llega hasta las 48 horas. al comparar estos resultados con los que reporta garcia y colaboradores, se puede considerar que las condiciones de cultivo en ese estudio no fueron las apropiadas, ya que el microorganismo presento un crecimiento hasta las 30 horas de cultivo con una biomasa menor a la obtenida en esta prctica, utilizando en los dos estudios como fuente de carbono la glucosa. [8] Al comparar los resultados presentados en la figura 2 con el estudio realizado por Sastoque et al, se observa que el crecimiento de Streptomyces en el estudio de Sastoque presento ms unidades formadoras de colonias llegando a una poblacin de 1*107 UFC/ml en menor tiempo. Se deduce que este resultado se debe a las condiciones de cultivo, utilizndose como agar el medio de quitina coloidal al 1% con concentraciones establecidas de materia orgnica presente en el suelo. [9] Al analizar el efecto del pH sobre el crecimiento de Streptomyces sp, se compar con el estudio realizado por Corrales et al, donde se obtuvo una poblacin mayor con un pH de 6, mientras en este estudio la biomasa fue de 3*105 UFC/ml, con un pH de 7. De esta manera se considera que el pH utilizada en el estudio de Corrales es el ptimo para el desarrollo de Streptomyces sp.[10] Al relacionar los datos de control interno y datos de grupo con el estudio realizado por Arroyo (10), se observa que el Log UFC/ml durante la fase exponencial es de 6,48 mientras en esta prctica fue menor (tabla 2 y tabla 3). Al evaluar las condiciones de cultivo se afines, por esto se deduce que la cepa empleada en el estudio de Arroyo presento mayor rendimiento por la diferencia en su metabolismo.[11]

CONCLUSION Se logr evaluar el crecimiento de Streptomyces sp en funcin del tiempo mediante la tcnica de recuento en placa. Se hace importante conocer la cinetica de crecimiento de un microorganismo de importancia biotecnolgica, con el fin de conocer en cunto tiempo va a producir un metabolito de importancia, y en cuanto tiempo posiblemente ya no sea viable. REFERENCIAS [1] Crecimiento Microbiano. Cap 5. Documento Disponible: http://docencia.udea.edu.co/bacteriologia/MicrobiologiaAmbiental/microbiologia_2.pdf. Visitado el 25 de Octubre a las 7:35P.M. de 2011 [2] SCRAGG A. Biotecnologa para Ingenieros. Editorial Limusa. Balderas, Mxico. 2002. [3] TREVAN M. BOFFEY S. STANBURY P. GOULDIN K. Biotecnologa: Principios Biolgicos. Editorial Acribia. Zaragoza, Espaa. 1990. [4] Arias E. Lastra J. Cintica de crecimiento. http://www.monografias.com/trabajos10/cincrec/cincrec.shtml Consultado el 25 de Octubre a las 8:10 PM de 2011. [5] Corredor P. Andrade E. Tohme J. Duque M. Flrez C. Abundancia y diversidad de las comunidades de Streptomyces en seis coberturas vegetales de la franja cafetera del Quindo 2000, 5(2): 11p. [6] Guzmn A. Hernndez M. Mendosa S. Determinacin y curva de crecimiento de microorganismos (E. coli y levadura Cndida). http://www.scribd.com/doc/23099813/Curva-de-Crecimiento-de-E-Coli-y-LevaduraCandida Consultado el 25 de octubre de 2011. [7] Pedroza A. Matiz A. Quevedo B. Aguirre A. Manual de introduccin a la biotecnologa. Primera edicin. Pontificia universidad javeriana. Bogot, D.C. Colombia.2007, 116p. [8] Garca Y. Ruiz B. Chvez A. Snchez S. Expresin de la regin SCO 2127 de Streptomyces coelicolor en presencia de diferentes fuentes de carbono. Instituto de investigaciones Biomdicas UNAM. Departamento de Biologia Molecular y Biotecnologa. [9] Sastoque E. Aislamiento y seleccin de microorganismos productores de quitinasas a partir de residuos de concha de camarn con potencial biocontrolador. Tesis doctoral. Facultad de ciencias. Pontificia Universidad Javeriana 2005, 123p. [10] Corrales L. Ciro G. Pptidos con actividad antimicrobiana producidos por microorganismos nativos. Revista de la Facultad de Qumica farmacutica. Universidad de Antioquia, Medelln 2010, 17(2): 181-190.

[11] Arroyo A. Produccin de enzimas pectinasas por Actinomycetos en cultivo sumergido utilizando pectina y cascara de naranja. Tesis doctoral. Facultad de biotecnologa. Per 2002.