Conteo bacteriano El conteo bacteriano seala la magnitud de la poblacin total bacteriana, en ese sentido se puede determinar por muchas

tcnicas que se basan en algunos de los siguientes tipos de medida: cuenta celular (directamente al microscopio o mediante un contador electrnico de partculas o indirectamente con la cuenta de colonias), masa celular (en forma directa pesando el contenido celular del nitrgeno o indirectamente por turbidimetra, proporcional al nmero de clulas) y actividad celular (indirectamente relacionando el grado de actividad bioqumica al tamao de la poblacin bacteriana).Existen muchos medios diferenciales, en la practica rutinaria se usan los siguientes: -----------------------------------------Tipos de conteo bacteriano * Conteo en caja de petri: Mtodo ms usado para contar bacterias. Un caldo con microorganismos es diluido y posteriormente muestras del mismo son distribuidas en la caja de petri contenedora de agar. Es de suponerse que cada clula se dividir en sus mltiples alrededores para producir colonias separadas en el agar. Cada clula es llamada unidad formadora de colonias (UFC). Despus de la incubacin, el nmero de colonias se reflejar en el nmero de clulas UFC originalmente presentes. Es importante considerar un nmero limitado de colonias pues de no ser as, stas pueden sobrepoblarse y dificultar el conteo de las mismas (rango sugerido de acuerdo a FDA 25250 colonias). Este mtodo es deseable porque arroja el total de clulas viables (slo clulas vivas); en contraste con el conteo microscpico y el conteo de peso seco. Una desventaja se encuentra en el tiempo que requiere para producir las colonias, ya que se necesitan como mnimo 24 horas o ms. Por otra parte, no es 100% fiable porque regularme las colonias crecen unidas en cadenas o en grupos. * Conteo por filtracin: Es realizado cuando la cantidad de bacterias es muy pequea, como en casos de lagos y arroyos relativamente puros. En esta tcnica se necesitan al menos 100 ml. de agua que atraviesen una membrana delgada de un filtro, con poros tan pequeos que no permitan el paso de bacterias, de esta forma stas son retenidas en la superficie del filtro. Posteriormente el filtro es transferido a una caja de petri que cuenta con un caldo nutritivo, en la cual las colonias surgen de las bacterias en la superficie del filtro. Las colonias bacterianas formadas por este mtodo son distintivas cuando se ocupan un medio diferencial. Este mtodo es aplicado frecuentemente en la deteccin y enumeracin de bacterias coliformes, las cuales son indicadores de contaminacin fecal en la comida o en el agua. * Mtodo del nmero ms probable (NMP): Es una tcnica de estimacin estadstica basada en el hecho que a mayor nmero de bacterias en una muestra, mayor ser la dilucin necesitada para reducir la densidad hasta el punto en que ninguna bacteria se le permita crecer en la serie de tubos de dilucin. Muestras microbianas son aadidas a tubos con caldos de lactosa y la presencia o ausencia de gas formado en la fermentacin y da un estimado de nmero de clulas. Este mtodo es ms til cuando las bacterias que estn siendo contados no crecern en medios slidos, como en el caso de Chemoautotrof phic nitrifying bacteria. Tambin es til

cuando el crecimiento de la bacteria es en un medio lquido diferencial, usado para identificar microbios, como en bacterias coliformes. El NMP es la nica afirmacin en la cual existe 95% de probabilidad que la poblacin bacteriana sea de rango correcto, siendo el nmero estadstico ms probable. * Determinacin directa por microscopio: Las clulas se pueden contar como un frote teido colocando en la preparacin un volumen conocida de la suspensin de clulas sobre un rea conocida del portaobjetos. Despus de haber fijado y teido el frote, es posible contar con un microscopio las bacterias. Como no es prctico recorrer toda el rea, se cuenta el nmero de clulas en unos cuantos campos microscpicos seleccionados al azar. Si el dimetro del campo microscpico se mide con micrmetro objetivo, se puede calcular fcilmente el rea, entonces el nmero de campos en 1 cm2 se multiplicar por el promedio del nmero de clulas por campo y despus por 100 (si se vierte .01 ml) el resultado ser igual al nmero de clulas por mililitro. Este mtodo es susceptible a muchas crticas debido a su falta de uniformidad al momento de hacer el frote. * Mtodo de turbiedad: Para algunos experimentos, es necesario estimar turbiedad, ya que es una forma prctica de monitorear el crecimiento bacteriano. Como una bacteria se multiplica en un medio lquido, ste se torna turbio o de aspecto nublado por las clulas. El instrumento usado para medir la turbiedad es un espectrofotmetro (colormetro). En el espectrofotmetro, un haz de luz es transmitido a travs de la suspensin bacteriana a un detector sensible a la luz. Mientras incremente el nmero de bacterias, menor ser la luz captada por el detector. Este cambio en la luz se registrar en la escala del instrumento como el porcentaje de transmisin. Tambin se registra una expresin logartmica llamada absorbancia (algunas veces nombrada densidad ptica), un valor derivado del porcentaje de transmisin que puede ser reportado. Ms de un milln de clulas por milmetro deben estar presentes para que la primera seal de turbiedad sea visible. Aproximadamente de 10 millones a 100 millones de clulas por mililitro son necesitadas para hacer una suspensin suficientemente turbia para leer en el espectrofotmetro. La turbiedad no es til para medir contaminacin en lquidos por la pequea cantidad relativa de bacterias. * Determinacin del peso seco en las clulas: Es el mtodo ms directo para las mediciones cuantitativas de la masa celular y probablemente el ms fcilmente realizable y reproducible, aunque se debe aplicar slo en suspensiones celulares muy densas y las clulas deben ser lavadas muy bien para removerles todo material extra. Se utiliza para bacterias filamentosas y mohos. En este proceso, el fungus es removido del medio de crecimiento, filtrado para remover material extrao, drenado en un secador y despus es pesado.