UNIVERSIDAD ANDINA NESTOR CACERES VELASQUEZ

HISTOLOGIA

TINCION DE GRAM
INTRODUCCION:
La tincin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Su nombre se debe al bacterilogo dans Christian Gram, que desarrollo la tcnica en 1884, con el objetivo de diferenciarlas considerndose as: bacterias Gram negativas y positivas.

PROPOSITOS:
1. Conocer la utilidad de la tincin de Gram como herramienta para el diagnstico de algunos procesos bacterianos. 2. Conocer los reactivos usados 3. Conocer el fundamento de la coloracin de Gram 4. Adquirir conocimientos sobre la realizacin de esta tcnica de coloracin. 5. Conocer que tie la coloracin Gram UTILIDAD: La tincin de Gram tiene valor diagnstico y puede ser aplicada a diversos y mltiples tipos de especmenes clnicos como lquidos corporales , excreciones, secreciones tejidos, pero su uso es limitado en muestras de materia fecal. La observacin de esta tincin permite encontrar caractersticas como forma, agrupacin, y tamao de las clulas bacterianas a partir tanto de muestras clnicas como de cultivos bacterianos. REACTIVOS: 1. 2. 3. 4. CRISTAL VIOLETA o violeta de genciana: COLORANTE BASICO LUGOL DE GRAM : MORDIENTE ALCOHOL ACETONA: DECOLORANTE FUSCINA o safranina : COLORANTE DE CONTRASTE

FUNDAMENTO: El cristal violeta sirve como colorante bsico unindose a la pared celular bacteriana, con la ayuda del mordiente que refuerza la unin del colorante. Las bacterias Gram positivas debido a su estructura y composicin bioqumica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun despus del tratamiento con el decolorante conserva el colorante bsico, por lo que se observa de color azul oscuro o violeta una vez concluida la tincin. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante bsico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipdico de la pared celular lo que aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la prdida del complejo cristal violeta- lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante

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de contraste, razn por la cual estas se observan de color rosado una vez concluida la tincin.

TECNICA:
1. Realizar un extendido delgado de la muestra sobre un portaobjetos(placa) y dejar secar. 2. Fijar el material a estudio a la placa pasndola 2 o 3 veces por la llama de un mechero, evitando su excesivo calentamiento. 3. Cubrir la placa con cristal violeta durante un minuto. 4. Lavar con agua corriente. 5. Cubrir la placa con lugol de Gram durante un minuto. 6. Lavar con agua corriente. 7. Cubrir la placa con alcohol-acetona durante 30 segundos. 8. Lavar con agua corriente. 9. Cubrir la placa con fuscina durante un minuto 10. Lavar con agua destilada 11. Dejar secar al aire 12. Observar

TODAS LAS BACTERIAS SON DIFERENCIADAS POR LA TINCION GRAM?

No, por ejemplo las micobacterias no se tien debido a su pared muy rica en lpidos pero se pueden identificar con la tincin de Ziehl-Neelsen, o por ejemplo los microorganismos que no poseen pared como los micoplasmas, no resistiran la coloracin sino que se observan con la tincin de Hoesch.

EJEMPLOS:
BACTERIAS GRAM POSITIVAS COCOS (staphylococcus aureus, streptococcus pyogenes/grupo A ,streptococcus pneumoniae o neumococo, etc) BACILOS (bacillus antracis,listeria monocytogenes, clostridium tetani,etc) BACTERIAS GRAM NEGATIVAS COCOS (neisseria gonorrhoese o gonococo,meningococo,etc) BACILOS (escherichia coli, salmonella typhi,Vibrio cholerae,klebsiella pneumoniae,etc) BIBLIOGRAFIA:

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http://es.slideshare.net/Altajimenez/tabla-de-bacterias-gram-positivas-y-negativas http://www.ceala.cl/joweb/up/down/labqui/terceros/Microbilog%EDa%20%20Tinci%F3n%20Gram.pdf http://www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Tencion_de_gra m.pdf Elaborado por: Alexis Ramos